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野葛特异性PCR检测方法的建立与应用研究 预览
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作者 张丽 刘良科 +3 位作者 郑丽平 刘秤利 刘虹 覃瑞 《中南民族大学学报:自然科学版》 CAS 2019年第2期204-209,共6页
一个物种特有的DNA序列可以开发成能够识别该物种及其加工产品的标记.为寻找野葛(Pueraria lobata)特有的DNA序列,建立野葛特异性PCR检测方法,通过对GenBank中野葛基因信息的检索分析,筛选出了同源序列少特异性强的野葛查耳酮合成酶基... 一个物种特有的DNA序列可以开发成能够识别该物种及其加工产品的标记.为寻找野葛(Pueraria lobata)特有的DNA序列,建立野葛特异性PCR检测方法,通过对GenBank中野葛基因信息的检索分析,筛选出了同源序列少特异性强的野葛查耳酮合成酶基因作为研究对象.对该基因的特定区域设计引物,建立了野葛特异性定性PCR检测方法.利用该方法对野葛14个不同居群的DNA进行PCR扩增,均能扩增出226 bp的片段.而用相同引物分别对20种其他植物的DNA进行扩增均未出现特异性扩增产物.PCR灵敏度实验结果表明该方法的检测灵敏度达到0.02 ng基因组DNA,对市场上的葛根产品进行检测结果表明该方法可以有效鉴定葛根产品中是否含有野葛成分.该野葛特异性PCR检测方法特异性强、灵敏度高,可用于野葛成分的检测与鉴定. 展开更多
关键词 野葛 特异性PCR 查尔酮合成酶基因 成分鉴定
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位点特异性PCR鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无药材
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作者 产清云 蒋露 +5 位作者 程铭恩 储姗姗 于大庆 谢晋 查良平 彭华胜 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期3261-3267,共7页
建立一种鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无的DNA分子标记鉴别方法。通过测序获得延胡索、齿瓣延胡索、夏天无及其近缘种14种共56个样品的mat K,trn G和trn H-psb A序列,利用Bio Edit 7. 2. 2软件比对获得SNP位点,根据变异位点设计AS-PCR... 建立一种鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无的DNA分子标记鉴别方法。通过测序获得延胡索、齿瓣延胡索、夏天无及其近缘种14种共56个样品的mat K,trn G和trn H-psb A序列,利用Bio Edit 7. 2. 2软件比对获得SNP位点,根据变异位点设计AS-PCR鉴别引物,并优化PCR条件,根据特异性条带分别对延胡索、齿瓣延胡索和夏天无进行鉴定。结果显示模板量(0. 6~1 200 ng)和退火温度(42~60℃)对扩增结果影响较小,循环次数对扩增结果影响较大。在循环数为20时,延胡索、齿瓣延胡索和夏天无分别扩出297 bp(mat K)、353 bp(trn G)和544 bp(mat K)的特异性条带。该研究所建立的方法对延胡索的最低检测限为6 ng,对夏天无的最低检测限为60 ng,齿瓣延胡索低于0. 6 ng。该文所建立的位点特异性PCR法能特异性鉴别延胡索、齿瓣延胡索和夏天无。 展开更多
关键词 延胡索 齿瓣延胡索 夏天无 特异性PCR 分子鉴定
药材天葵子的分子生物学鉴别
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作者 陈绍通 刘枫 +1 位作者 赵群 韩邦兴 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期892-894,共3页
目的该研究基于ITS序列对天葵及其混伪品进行准确鉴别。方法通过PCR扩增ITS序列,联合Genebank下载的天葵混伪品及近缘种序列、构建系统发育树(Neghbor-Joining,NJ);并基于ITS序列上的变异位点设计特异性PCR引物和HRM引物、对天葵及其混... 目的该研究基于ITS序列对天葵及其混伪品进行准确鉴别。方法通过PCR扩增ITS序列,联合Genebank下载的天葵混伪品及近缘种序列、构建系统发育树(Neghbor-Joining,NJ);并基于ITS序列上的变异位点设计特异性PCR引物和HRM引物、对天葵及其混伪品进行鉴别。结果在构建的NJ树中、天葵及其混伪品和近缘种各自形成单系分支。且都获得较高的支持;在特异性PCR鉴别中,天葵有条带扩增成功,而混伪品则没有扩出条带;而利用HRM技术鉴别,结果显示,天葵及其混伪品和Tm值均有明显差异。结论 ITS序列能够作为天葵及其混伪品和近缘种的DNA鉴别条形码、此外,基于ITS序列所设计的特异性PCR引物和HRM引物,都能够对天葵及其混伪品进行准确的鉴别。 展开更多
关键词 天葵 ITS序列 特异性PCR HRM DNA条形码
羚羊角塞特异性PCR鉴别方法研究 预览
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作者 蒋超 金艳 +2 位作者 袁媛 黄璐琦 赵玉洋 《世界中医药》 CAS 2018年第2期252-255,共4页
目的:为解决中药羚羊角塞与羚羊角相比因失去"通天眼"等传统鉴别特征而鉴别困难的问题,建立准确鉴别鉴定羚羊角塞的方法。方法:通过比对羚羊角塞基原动物赛加羚羊与其7种常见混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I(Cytochrome coxidase I,... 目的:为解决中药羚羊角塞与羚羊角相比因失去"通天眼"等传统鉴别特征而鉴别困难的问题,建立准确鉴别鉴定羚羊角塞的方法。方法:通过比对羚羊角塞基原动物赛加羚羊与其7种常见混伪品的细胞色素C氧化酶亚基I(Cytochrome coxidase I,COI)序列,根据差异位点设计出仅扩增赛加羚羊DNA的特异性鉴别引物。结果:进行PCR时,当退火温度为64℃,循环数为33个时,仅羚羊角塞正品扩增获得约300 bp大小的条带,混伪品无条带。结论:该方法可作为准确有效检测待检样品是否来源于赛加羚羊的方法,用于羚羊角类样品的DNA鉴别。 展开更多
关键词 特异性PCR 分子鉴定 羚羊角塞 中药鉴定
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多重位点特异性PCR鉴别海龙及其混伪品 被引量:2
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作者 刘富艳 金艳 +3 位作者 袁媛 秦雯 赵玉洋 蒋超 《中国实验方剂学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第15期57-64,共8页
目的:建立一种高效、准确的中药材海龙及其常见混伪品的特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴别方法。方法:通过比较海龙及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(cytochrome C oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因序... 目的:建立一种高效、准确的中药材海龙及其常见混伪品的特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)鉴别方法。方法:通过比较海龙及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(cytochrome C oxidase subunitⅠ,COⅠ)基因序列差异,根据变异位点设计刁海龙、尖海龙及拟海龙的特异性鉴别引物,优化反应体系,并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上,将3对特异性引物组合,构建多重PCR体系。结果:在多重PCR体系中,刁海龙能扩增出485 bp片段,尖海龙可扩增出120 bp片段,拟海龙可以扩增出240 bp片段,其他混伪品均无条带。所设计的特异性鉴别引物具有高度的特异性。结论:该文所建立的位点特异性PCR鉴别方法可实现海龙的准确鉴别。 展开更多
关键词 海龙 特异性PCR 分子鉴别 混伪品
特异性PCR方法鉴别鳖甲药材和饮片 被引量:1
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作者 程素倩 袁媛 +3 位作者 刘富艳 蒋超 金艳 赵玉洋 《中国中药杂志》 CSCD 北大核心 2018年第23期4569-4574,共6页
鳖甲为临床常用的动物药材,炮制加工后鳖甲药材及饮片形态特征丢失,难以鉴别。为建立高效稳定的鳖甲DNA鉴别方法,该研究将SDS法与柱纯化相结合,使用通用引物进行PCR扩增和测序,并根据鳖甲及其混伪品序列差异,寻找特异性SNP位点设计了鉴... 鳖甲为临床常用的动物药材,炮制加工后鳖甲药材及饮片形态特征丢失,难以鉴别。为建立高效稳定的鳖甲DNA鉴别方法,该研究将SDS法与柱纯化相结合,使用通用引物进行PCR扩增和测序,并根据鳖甲及其混伪品序列差异,寻找特异性SNP位点设计了鉴别引物,对PCR反应条件进行优化,并进行适用性及准确性考察。当退火温度为62℃,循环次数为35,使用设计的鳖甲特异性鉴别引物Biejia-272.F/R进行PCR扩增,鳖甲药材、饮片及醋鳖甲均扩增获得约300 bp的特异性鉴别条带,混伪品无条带。该方法可作为一种快速准确鉴别鳖甲正伪品的鉴定方法。 展开更多
关键词 鳖甲 醋鳖甲 特异性PCR 分子鉴定
光慈菇药材的特异性PCR鉴定
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作者 赵群 刘枫 +4 位作者 宋向文 袁媛 黄璐琦 赵玉洋 韩邦兴 《中药材》 北大核心 2017年第7期1540-1546,共7页
目的:研究光慈菇基原植物老鸦瓣及其混伪品特异性PCR鉴定的可行性。方法:基于ITS序列构建光慈菇及其混伪品的系统发育树,并在对ITS序列分析的基础上,为光慈菇设计了一对特异性PCR引物LYB-CP2s/LYB-CP2a,优选扩增条件,用于区别光慈菇... 目的:研究光慈菇基原植物老鸦瓣及其混伪品特异性PCR鉴定的可行性。方法:基于ITS序列构建光慈菇及其混伪品的系统发育树,并在对ITS序列分析的基础上,为光慈菇设计了一对特异性PCR引物LYB-CP2s/LYB-CP2a,优选扩增条件,用于区别光慈菇及其混伪品。结果:在系统发育树中光慈菇聚类为一个单系。通过对PCR反应的退火温度、循环次数和DNA模板用量进行优化,并对不同型号的PCR仪和Taq酶进行考察,分别获得光慈菇的特异性PCR反应程序。在PCR产物中,正品出现目的条带,而混淆品不出现条带。结论:特异性PCR鉴别方法稳定性高,能够有效地区别光慈菇与其混伪品。 展开更多
关键词 老鸦瓣 ITS 特异性PCR 鉴定
基于rbcL序列的半边莲与通泉草的分子鉴别方法 预览 被引量:1
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作者 陈建雄 魏艺聪 +3 位作者 黄泽豪 徐惠龙 卢伟 梁一池 《福建农业学报》 北大核心 2017年第7期730-733,共4页
市场流通中半边莲容易与通泉草相互混淆,拟基于rbcL序列建立半边莲与通泉草的分子鉴别方法。采集不同产地的半边莲样品9份,通泉草样品7份,所有受试样品提取总DNA。对其叶绿体DNA中rbcL片段进行扩增、测序,用ClustalX 2.1软件进行多重序... 市场流通中半边莲容易与通泉草相互混淆,拟基于rbcL序列建立半边莲与通泉草的分子鉴别方法。采集不同产地的半边莲样品9份,通泉草样品7份,所有受试样品提取总DNA。对其叶绿体DNA中rbcL片段进行扩增、测序,用ClustalX 2.1软件进行多重序列比对后,应用Meg 5.0软件构建NJ系统聚类树进行聚类分析,根据二组样品间的SNP位点设计相互鉴别的特异性引物,建立特异PCR鉴别方法,并应用SYBR Green I染料法建立对2种中草药进行快速检测的方法。本研究建立了对半边莲与通泉草2种中草药进行分子鉴别的方法,并建立了荧光快速检测方法。 展开更多
关键词 半边莲 通泉草 特异性PCR 荧光检测
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快速PCR法鉴别鱼腥草与百部还魂的方法研究 被引量:5
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作者 魏艺聪 袁媛 +3 位作者 陈建雄 车苏容 赵玉洋 梁一池 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2163-2166,共4页
目的 建立鉴别鱼腥草Houttuynia cordata与百部还魂Gymnotheca chinensis的特异性PCR方法。方法 采集不同产地的鱼腥草与百部还魂样品各8份,所有样品提取总DNA。通过对其mat K片段进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异... 目的 建立鉴别鱼腥草Houttuynia cordata与百部还魂Gymnotheca chinensis的特异性PCR方法。方法 采集不同产地的鱼腥草与百部还魂样品各8份,所有样品提取总DNA。通过对其mat K片段进行扩增、测序,进行同源比对后根据其变异位点设计特异鉴别引物,建立特异PCR鉴别方法,并通过加入SYBR Green I染料法对2种中药进行快速检测。另外,构建多重PCR体系,只经一个PCR反应,就能对鱼腥草与百部还魂进行快速分子鉴定。结果 所构建特异PCR与多重PCR体系均能产生鱼腥草185 bp的特异鉴别条带,百部还魂389 bp的特异鉴别条带,SYBR Green I染料可进行快速检测方法。结论 建立的鱼腥草与百部还魂2种中药的快速PCR鉴别方法简便、可靠。 展开更多
关键词 鱼腥草 百部还魂 特异性PCR 多重PCR体系 MATK
基于ITS序列位点特异性PCR的酸枣仁及其混伪品的鉴别 预览 被引量:2
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作者 李桂林 宋雅迪 +3 位作者 吕振晖 刘春晖 李佳 张夏楠 《中国现代中药》 CAS 2016年第12期1566-1570,共5页
目的:基于ITS序列建立酸枣仁及其市场混伪品的分子鉴定方法。方法:收集酸枣仁及其常见混伪品理枣仁、枳椇子、紫荆子、兵豆,提取总DNA,基于ITS序列设计引物并进行PCR扩增,对扩增产物进行测序,用Bio Edit分析软件进行序列比对,针对变... 目的:基于ITS序列建立酸枣仁及其市场混伪品的分子鉴定方法。方法:收集酸枣仁及其常见混伪品理枣仁、枳椇子、紫荆子、兵豆,提取总DNA,基于ITS序列设计引物并进行PCR扩增,对扩增产物进行测序,用Bio Edit分析软件进行序列比对,针对变异位点用Primer Premier 5.0设计特异性鉴别引物,进行PCR反应并考察反应条件。结果:ITS序列可以用于酸枣仁及其易混淆品种的鉴别研究,在位点特异性PCR反应条件考察中,DNA模板用量范围应为0.7-2.1 ng·μL^-1,退火温度在59℃时特异性最佳,实验建立的方法对不同Taq酶和PCR仪具有普遍适应性。结论:研究设计的位点特异性引物在一定条件下的PCR反应中,酸枣仁能扩增出66 bp的条带,而其他混伪品不能扩增出条带,从而实现了酸枣仁与其混伪品的快速、准确鉴别。 展开更多
关键词 酸枣仁 ITS 特异性PCR 分子鉴定
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一株新型家兔肠炎沙门氏菌的分离鉴定及防治 预览 被引量:2
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作者 范志宇 魏后军 +7 位作者 仇汝龙 胡波 宋艳华 陈萌萌 徐为中 王辉 薛家宾 王芳 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1367-1371,共5页
针对山东省某兔场发生以仔兔脾脏肿大、母兔流产为特征的传染病,本研究对发病濒死兔进行细菌分离,利用16S rRNA基因扩增技术、特异性PCR技术和生化试验对致病细菌进行鉴定,并进行了药敏试验和自制疫苗效力试验。分离菌株16S rRNA基因序... 针对山东省某兔场发生以仔兔脾脏肿大、母兔流产为特征的传染病,本研究对发病濒死兔进行细菌分离,利用16S rRNA基因扩增技术、特异性PCR技术和生化试验对致病细菌进行鉴定,并进行了药敏试验和自制疫苗效力试验。分离菌株16S rRNA基因序列与肠炎沙门氏菌相似度大于99.0%,培养特性和生化特性符合肠炎沙门氏菌特性。分离菌株特异性PCR产物序列与肠炎沙门氏菌sef A基因的同源性为99.3%~100.0%,因此将其命名为Salmonella SD/2016。动物回归试验成功复制出该病并分离到目的细菌。自制疫苗安全性良好,对断奶幼兔能提供免疫保护。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 16S rRNA基因扩增技术 特异性PCR
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PCR方法快速鉴别绞股蓝与乌蔹莓 预览 被引量:2
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作者 魏艺聪 陈建雄 +2 位作者 黄泽豪 车苏容 梁一池 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2016年第3期265-267,共3页
建立绞股蓝与乌蔹莓2种中药相互鉴别的特异性PCR方法,利用SYBR Green I染料法建立对绞股蓝与乌蔹莓的快速鉴别方法。采集不同产地的绞股蓝与乌蔹莓各9份,通过对其叶绿体DNA中trnL-F片段进行扩增、测序,进行多重序列比对后,根据其变异位... 建立绞股蓝与乌蔹莓2种中药相互鉴别的特异性PCR方法,利用SYBR Green I染料法建立对绞股蓝与乌蔹莓的快速鉴别方法。采集不同产地的绞股蓝与乌蔹莓各9份,通过对其叶绿体DNA中trnL-F片段进行扩增、测序,进行多重序列比对后,根据其变异位点设计相互鉴别的特异性引物,建立特异PCR鉴别方法,并通过加入SYBR Green I染料法建立对2种中药进行快速检测方法,本研究建立了对绞股蓝与乌蔹莓2种中药进行分子鉴别方法,并建立了荧光快速检测方法。 展开更多
关键词 绞股蓝 乌蔹莓 特异性PCR 荧光检测
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hMLH1基因启动子区甲基化在胃癌阶段性发生发展中的作用 被引量:3
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作者 滕玥 戴冬秋 +1 位作者 沈文静 刘红波 《中华胃肠外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期166-170,共5页
目的:通过检测胃癌原发灶及距离原发灶不同距离组织hMLH1基因启动子区甲基化状态,探讨hMLH1基因启动子区甲基化在胃癌阶段性发生发展中的作用。方法选取2006年1月至2006年8月在中国医科大学肿瘤研究所保存的行胃癌根治术治疗的40例胃... 目的:通过检测胃癌原发灶及距离原发灶不同距离组织hMLH1基因启动子区甲基化状态,探讨hMLH1基因启动子区甲基化在胃癌阶段性发生发展中的作用。方法选取2006年1月至2006年8月在中国医科大学肿瘤研究所保存的行胃癌根治术治疗的40例胃癌患者的组织标本,分别在标本距胃癌原发灶边缘5 cm、3 cm、1 cm及胃癌原发灶各取材2份,1份用于组织病理学检查,另1份采用甲基化特异性PCR法检测hMLH1基因启动子区甲基化。结果 hMLH1基因启动子区甲基化阳性率在距胃癌原发灶边缘1 cm、3 cm和5 cm组织中分别为10%(4/40)、12.5%(5/40)及2.5%(1/40),均明显低于胃癌组织原发灶的32.5%(13/40),差异有统计学意义(P<0.05)。病理检查示,癌旁1 cm和3 cm组织中检出23例癌前病变,癌旁5 cm组织中24例为正常胃组织者。hMLH1甲基化阳性率在正常胃组织、癌前病变组织及胃癌原发灶中分别为0(0/24)、8.7%(2/23)和32.5%(13/40),差异具有统计学意义(P<0.01)。 hMLH1基因甲基化阳性率在肿瘤穿透浆膜的胃癌组织中为57.1%(8/14),明显高于未透浆膜组织的19.2%(5/26);在转移淋巴结大于或等于7枚的胃癌组织中其阳性率为61.5%(8/13),明显高于转移淋巴结少于7枚组织的18.5%(5/27);差异均有统计学意义(均P<0.05);而不同年龄、性别、组织学分化程度、大体类型、生长方式及TNM分期的胃癌原发灶hMLH1基因甲基化阳性率间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 hMLH1基因启动子区异常甲基化可能促进胃癌的发生及发展。 展开更多
关键词 胃肿瘤 HMLH1基因 甲基化 特异性PCR
基于特异性PCR和荧光检测技术快速鉴定艾纳香 预览 被引量:1
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作者 赵丹 周涛 +3 位作者 袁媛 肖承鸿 江维克 康传志 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期952-956,共5页
为建立快速准确的艾纳香分子鉴定方法。采取筛选艾纳香及其混伪品基因组DNA的提取方法,针对艾纳香特异性位点设计引物,优化PCR扩增条件,荧光检测扩增产物。结果表明碱裂解法更适于艾纳香基因组DNA的提取;叶绿体基因(tDNA)特异引... 为建立快速准确的艾纳香分子鉴定方法。采取筛选艾纳香及其混伪品基因组DNA的提取方法,针对艾纳香特异性位点设计引物,优化PCR扩增条件,荧光检测扩增产物。结果表明碱裂解法更适于艾纳香基因组DNA的提取;叶绿体基因(tDNA)特异引物能特异性扩增艾纳香DNA,其扩增产物荧光检测呈绿色,混伪品无反应发生。试验结果显示该法简化了分子鉴定过程,省时节力,且结果准确可靠,可作为艾纳香植物和药材的鉴定方法。 展开更多
关键词 艾纳香 特异性PCR 荧光检测
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基于ITS2序列SNP位点鉴定白及药材及其混伪品 被引量:6
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作者 赵丹 周涛 +2 位作者 江维克 肖承鸿 康传志 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第18期3573-3578,共6页
为建立白及药材的分子标记鉴定方法,该文提取白及及其混伪品药材的基因组DNA,利用PCR技术扩增r DNA ITS2片段,片段经双向测序、排序、比对,构建邻接树,查找SNP位点。结果显示,ITS2序列不仅能够有效地区分白及与其混伪品,而且存在可用作... 为建立白及药材的分子标记鉴定方法,该文提取白及及其混伪品药材的基因组DNA,利用PCR技术扩增r DNA ITS2片段,片段经双向测序、排序、比对,构建邻接树,查找SNP位点。结果显示,ITS2序列不仅能够有效地区分白及与其混伪品,而且存在可用作白及、黄花白及与其混伪药材鉴别的SNP位点。针对标记白及药材的SNP位点设计引物,通过筛选引物和优化特异性扩增条件后,获取引物BJ59-412F,BJ59-412R,HHBJ-225R在同一扩增条件下,可有效扩增白及、黄花白及,其产物长度分别约为350,520 bp,而混伪品则无PCR条带产生。该文所述引物和建立的反应条件可成功将白及、黄花白及与其混伪品药材进行同步鉴定,操作快速、简捷,结果可靠,可作为白及药材的快速分子鉴定方法。 展开更多
关键词 白及药材 RDNA ITS2 SNP位点 特异性PCR
浙贝母特异性PCR鉴定方法研究 被引量:10
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作者 李敏 黄龙妹 +1 位作者 赵欣 陈强 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1754-1757,共4页
目的利用特异性引物对浙贝母Fritillaria thunbergii进行特异性PCR鉴定。方法回收RAPD扩增筛选到的浙贝母分子标记ZB1基因,将其连接进入T-载体克隆并测序。根据测序结果设计一对特异性引物P2/P3,以贝母基因组DNA为模板进行特异性PCR扩... 目的利用特异性引物对浙贝母Fritillaria thunbergii进行特异性PCR鉴定。方法回收RAPD扩增筛选到的浙贝母分子标记ZB1基因,将其连接进入T-载体克隆并测序。根据测序结果设计一对特异性引物P2/P3,以贝母基因组DNA为模板进行特异性PCR扩增。结果特异性PCR鉴定结果为浙贝母在约750 bp处出现特异性条带,其他贝母品种则未出现条带。结论浙贝母特异性PCR鉴定方法操作简单,准确、灵敏、重复性好,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 浙贝母 RAPD 分子鉴定 特异性PCR 分子标记
太子参药材的快速分子鉴定 被引量:9
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作者 赵丹 周涛 +3 位作者 江维克 袁媛 肖承鸿 郑伟 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第19期3689-3694,共6页
为建立一种简便快捷的太子参分子鉴定方法,对太子参药材及其混伪品的rDNA—ITS片段进行比对分析,找出特异性片段,设计太子参鉴别引物,并优选扩增条件,扩增产物经100×SYBR GreenI染色后紫外光下观察。结果显示,PCR扩增反应液... 为建立一种简便快捷的太子参分子鉴定方法,对太子参药材及其混伪品的rDNA—ITS片段进行比对分析,找出特异性片段,设计太子参鉴别引物,并优选扩增条件,扩增产物经100×SYBR GreenI染色后紫外光下观察。结果显示,PCR扩增反应液(包括DNATaq聚合酶预混液5.5μ,Tzs-2F,Tzs-2R各10pmol,DNA模板20~80ng,双重灭菌蒸馏水加至25μL)经95℃预变性1min,95℃变性5s,56℃退火延伸15s,30个循环,72℃后延伸30s后,在扩增产物中加入l曲100×SYBRGreenI混匀后于紫外光下呈绿色荧光的为太子参,混伪品无绿色荧光出现。40min内即可完成DNA提取、扩增等整个鉴定过程。该方法能特异性扩增太子参DNA,紫外光下肉眼观察即可鉴定药材的真伪,且操作简捷、结果准确、利于推广,可为快速鉴定中药材的真伪提供参考。 展开更多
关键词 太子参 分子鉴定 特异性PCR SYBR Green I
山羊线粒体cytB基因片段特异性PCR反应条件优化 预览 被引量:1
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作者 王思伟 刘静静 +5 位作者 李芸 张英杰 刘月琴 李雪梅 杨佳栋 李兰会 《中国草食动物科学》 2014年第S1期92-94,共3页
研究建立了一个特异性扩增山羊线粒体cytB基因的PCR方法。根据线粒体cytB基因序列设计引物,对山羊肉进行扩增。结果显示,山羊可扩增出578 bp条带。PCR方法的反应条件优化试验表明,引物浓度和退火温度对反应结果影响不大。推荐的引物浓度... 研究建立了一个特异性扩增山羊线粒体cytB基因的PCR方法。根据线粒体cytB基因序列设计引物,对山羊肉进行扩增。结果显示,山羊可扩增出578 bp条带。PCR方法的反应条件优化试验表明,引物浓度和退火温度对反应结果影响不大。推荐的引物浓度为0.15μmol/L,退火温度为60℃,循环次数为30次。 展开更多
关键词 山羊肉 CYTB基因 特异性PCR
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草珊瑚与金粟兰叶片双位点特异性PCR鉴别方法研究 被引量:1
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作者 魏艺聪 陈莹 +4 位作者 罗林泉 杨群雄 陈艺娟 梁一池 车苏容 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第17期3259-3262,共4页
筛选获得草珊瑚与金粟兰鉴别的特异位点并建立双位点特异性PCR方法,用于鉴别草珊瑚与金粟兰叶片以及两者的混杂品。采集不同产地的草珊瑚18份、金粟兰6份,所有样品提取总DNA,并对草珊瑚与金粟兰干燥叶片进行DNA提取。通过对其ITS片段进... 筛选获得草珊瑚与金粟兰鉴别的特异位点并建立双位点特异性PCR方法,用于鉴别草珊瑚与金粟兰叶片以及两者的混杂品。采集不同产地的草珊瑚18份、金粟兰6份,所有样品提取总DNA,并对草珊瑚与金粟兰干燥叶片进行DNA提取。通过对其ITS片段进行扩增、测序,并搜索GenBank数据库中收录的草珊瑚与金粟兰的ITS序列,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物,构建多重PCR体系,并优化PCR条件,对草珊瑚与金粟兰叶片进行快速分子鉴定。构建了多重PCR鉴别体系,只经一个PCR反应,能扩增出草珊瑚580 bp的特异性鉴别条带及金粟兰470 bp的特异性片段,可快速鉴别草珊瑚与金粟兰叶片,并可判断相互是否混杂。使用双位点特异性PCR技术可以有效快速鉴别草珊瑚与金粟兰叶片,并可判断相互是否混杂。 展开更多
关键词 草珊瑚 金粟兰 叶片 特异性PCR 分子鉴定
断肠草与金银花类药材水提液特异性PCR鉴定方法研究 被引量:6
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作者 崔占虎 蒋超 +4 位作者 黄璐琦 李旻辉 周涛 周立社 袁媛 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第16期2563-2566,共4页
目的:研究断肠草与金银花类药材水提液的DNA分子鉴别方法。方法:采集不同产地的断肠草药材13份、金银花32份、山银花21份和水银花5份,所有样品提取总DNA,并对断肠草、金银花、山银花的水提液进行DNA提取。通过对断肠草ps-bA-trnH片... 目的:研究断肠草与金银花类药材水提液的DNA分子鉴别方法。方法:采集不同产地的断肠草药材13份、金银花32份、山银花21份和水银花5份,所有样品提取总DNA,并对断肠草、金银花、山银花的水提液进行DNA提取。通过对断肠草ps-bA-trnH片段进行扩增、测序,并搜索GenBank数据库中收录的中金银花类药材基原植物psbA—trnH序列,进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物。结果:通过使用特异.性引物对所有样品进行PCR扩增,发现断肠草可扩增出9r7bp片段,而金银花类药材则不能扩增出条带。结论:通过特异性PCR的方法实现了断肠草与金银花类药材水提液的快速、准确鉴别。 展开更多
关键词 断肠草 水提液 特异性PCR 分子鉴定
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