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缺氧诱导因子1α对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制
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作者 胡德林 余又新 +8 位作者 梁荣 周舜英 段声梁 蒋智永 孟承颖 蒋薇 王欢 孙业祥 方林森 《中华烧伤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期209-217,共9页
目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字... 目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对大鼠血管内皮细胞通透性的调控作用及相关机制。方法取12只雄性SD大鼠,35~38d龄,分离主动脉培养血管内皮细胞,4d后观察细胞形态,并取第2或3代细胞进行以下实验。(1)取大鼠血管内皮细胞,采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组,每组3孔。阴性对照组和HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒和含HIF-1α干扰序列1、干扰序列2、干扰序列3的GV248重组质粒,空白对照组细胞仅加入脂质体2000。转染24h后,采用实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法(检测方法下同)分别检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白的表达,选取干扰效率最高的序列。(2)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组和HIF-1α低表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组和HIF-1α低表达组细胞经脂质体2000分别转染GV248空质粒及实验(1)中筛选的低表达HIF-1α重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(3)另取大鼠血管内皮细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HIF-1α高表达组,每组3孔。空白对照组细胞仅加入脂质体2000,阴性对照组、HIF-1α高表达组细胞经脂质体2000分别转染GV230空质粒和HIF-1α高表达重组质粒。培养14d,检测各组细胞HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平。(4)取实验(1)中3组、实验(2)中3组细胞,检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)和带状闭合蛋白1(ZO-1)的mRNA和蛋白表达水平。对数据行单因素方差分析、t检验。结果培养4d,细胞呈梭形,成功培养出大鼠血管内皮细胞。(1)HIF-1α干扰序列1组、HIF-1α干扰序列2组和HIF-1α干扰序列3组细胞HIF-1α的干扰效率分别为47.66%、45.79%、62. 展开更多
关键词 缺氧诱导因子 α亚基 血管 通透性 内皮细胞 肌球蛋白轻链激酶 磷酸化肌球蛋白轻链 带状闭合蛋白1
补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的机制研究 被引量:7
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作者 周昕欣 王彩霞 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期92-95,共4页
目的:研究脾气虚证大鼠体重、肛温、耐寒冷存活百分率、游泳时间和骨骼肌磷酸化肌球蛋白轻链表达变化,明确补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的可能机制。方法:清洁级Wistar大鼠,采用饮食不节和劳倦过度结合法建立脾气虚证模型,单日... 目的:研究脾气虚证大鼠体重、肛温、耐寒冷存活百分率、游泳时间和骨骼肌磷酸化肌球蛋白轻链表达变化,明确补中益气汤治疗脾气虚证大鼠肌无力的可能机制。方法:清洁级Wistar大鼠,采用饮食不节和劳倦过度结合法建立脾气虚证模型,单日喂食甘蓝15-20 g/只,双日胃饲猪油脂3 m L/只,共15 d10造模成功后,实验分为正常组、脾气虚组和补中益气汤组(高、中、低3个剂量组,剂量分别为7.10,3.55,1.78 g·kg^-1),灌胃给药10 d10分别检测大鼠体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间,Western blot检测骨骼肌中磷酸化肌球蛋白轻链的表达,比较实验结束前后数值变化。结果:与正常组相比,脾气虚组大鼠的体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间及磷酸化肌球蛋白轻链表达均显著下降(P〈0.05);与脾气虚组相比,中、高剂量补中益气汤组的体重、肛温、耐寒冷存活率、游泳时间及磷酸化肌球蛋白轻链表达均显著上升(P〈0.05)。结论:补中益气汤使磷酸化肌球蛋白轻链均表达升高可能是其治疗脾气虚大鼠肌无力的一个重要机制。 展开更多
关键词 补中益气汤 脾气虚 磷酸化肌球蛋白轻链 无力
磷酸化肌球蛋白轻链在大鼠非酒精性脂肪性肝纤维化中的表达 预览 被引量:1
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作者 路燕 宋育林 +1 位作者 季巍巍 许建明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第4期 370-374,共5页
目的探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl4)复制大鼠肝纤维化模型的特点,以及磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC(Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的作用。方法 70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl4组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl... 目的探讨运用高脂饮食联合小剂量四氯化碳(CCl4)复制大鼠肝纤维化模型的特点,以及磷酸化肌球蛋白轻链[P-MLC(Thr18/Ser19)]在该纤维化模型中的作用。方法 70只SD大鼠随机分为正常对照组(N)、CCl4组(M1)和高脂饮食联合小剂量CCl4组(M2)。N组皮下注射花生油3 ml/kg,2次/周;M1组采用400 ml/L CCl4花生油混合液,3 ml/kg,2次/周皮下注射;M2组采用高脂饮食联合小剂量CCl4造模,其CCl4用量2 ml/kg,浓度和频次同M1组。造模后8周末、10周末分批处死,检测肝功能、血脂、光镜观察大鼠肝脏脂肪变性及肝纤维化程度。免疫组化法检测肝脏P-MLC的表达。结果与N组比较,8周和10周末,M1组血浆球蛋白(GLO)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,P-MLC的表达及肝脂肪变性,纤维化程度均升高,但白球比(A/G)下降。与M1组比较,8周末,M2组ALT、AST下降,但脂肪变性增强;10周末,M2组白蛋白(ALB)、A/G下降,而ALT、AST上升明显;8周和10周末M2组P-MLC的表达及肝纤维化程度均强于M1组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论高脂饮食联合小剂量CCl4皮下注射复制大鼠肝纤维化模型,具有造模时间短,成功率高的优点。P-MLC的表达随着肝纤维化的进展而增加,P-MLC在非酒精性脂肪性肝纤维化中起着一定的作用。 展开更多
关键词 肝纤维化 模型 大鼠 高脂饮食 四氯化碳 磷酸化肌球蛋白轻链
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磷酸化肌球蛋白轻链及其激酶在耐药颞叶癫癎患者脑组织中的表达 预览 被引量:1
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作者 李劲梅 何梅 +7 位作者 曾艳 王学峰 肖飞 林涛 朱丹 郭强 卢涌 李红卫 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期 529-532,共4页
目的探讨耐药性癫癎颞叶和海马脑组织中磷酸化肌球蛋白轻链(phosphorylation of myosin light chain,P-MLC)及其激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的表达在癫癎芽生形成中的作用。方法免疫组化检测32例耐药性颞叶癫癎中P-MLC及... 目的探讨耐药性癫癎颞叶和海马脑组织中磷酸化肌球蛋白轻链(phosphorylation of myosin light chain,P-MLC)及其激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的表达在癫癎芽生形成中的作用。方法免疫组化检测32例耐药性颞叶癫癎中P-MLC及其激酶MLCK的蛋白质表达水平,并与对照组比较。结果P-MLC免疫组化结果显示,耐药性颞叶癫癎组颞叶光密度值(0.35±0.13)高于对照组(0.19±0.027,P〈0.05);耐药组海马光密度值(0.41±0.02)高于对照组(0.10±0.06,P〈0.05)。免疫组化结果显示耐药组的MLCK表达水平在颞叶组织和海马组织中较对照组无统计学差异(P〉0.05)。结论P-MLC及其激酶MLCK的功能与苔藓纤维芽生关系密切,P-MLC蛋白质产物在耐药性癫中明显升高,但其磷酸化激酶MLCK的表达并不升高,提示MLCK和去磷酸化酶间动态平衡被打破是P-MLC升高的原因,而P-MLC的升高可能在苔藓纤维芽生的形成中发挥重要作用。 展开更多
关键词 磷酸化肌球蛋白轻链 肌球蛋白轻链激酶 苔藓纤维 癫癎耐药
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当归芍药散含药血清对ET-1诱导的HSC-T6细胞内p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达的影响
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作者 蒋沙莎 潘永福 +3 位作者 杨沫 王运来 尹丹丹 许钒 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期14-19,共6页
目的:探究内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对大鼠肝星状细胞HSC-T6内磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(phosphorylated myosin light chainⅡ,p-MLCⅡ),肌球蛋白轻链Ⅱ(myosin light chainⅡ,MLCⅡ)蛋白表达的影响及当归芍药散(Danggui Shaoyao San)... 目的:探究内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对大鼠肝星状细胞HSC-T6内磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(phosphorylated myosin light chainⅡ,p-MLCⅡ),肌球蛋白轻链Ⅱ(myosin light chainⅡ,MLCⅡ)蛋白表达的影响及当归芍药散(Danggui Shaoyao San)含药血清对其的干预作用。方法:将HSC-T6细胞种板后,各组每孔加入DMEM和终体积分数分别为2. 5%,5%,10%,15%,20%的空白大鼠血清,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定HSC-T6细胞的活力,筛选出适合的大鼠血清浓度范围;将细胞分为空白血清组(5%,10%,15%)和当归芍药散含药血清组(5%,10%,15%),酶联免疫吸附测定(ELISA)检测基础状态下细胞培养上清液中ET-1的含量;细胞分为空白血清组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测基础状态下细胞培养上清液中ET-1 mRNA的水平;将细胞分为空白血清组(10%),模型组(10%),当归芍药散含药血清低、中、高剂量组(5%,10%,15%),Y-27632抑制剂组(100μmol·L^-1),除空白血清组外,其余各组均加入10 nmol·L^-1ET-1诱导HSC-T6细胞,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ET-1诱导的HSC-T6细胞中p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。结果:选用血清浓度为5%,10%,15%作为含药血清浓度。与空白血清组比较,当归芍药散含药血清组明显降低基础状态下ET-1含量,ET-1 mRNA相对含量(P <0. 05,P <0. 01)。与空白血清组比较,模型组细胞内p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达水平均显著升高(P <0. 01);与模型组比较,当归芍药散含药血清各剂量组及Y-27632抑制剂组均可明显下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达(P <0. 05,P <0. 01)。结论:当归芍药散含药血清可能通过下调ET-1的含量,抑制ET-1的自分泌,从而下调p-MLCⅡ,MLCⅡ蛋白表达。 展开更多
关键词 当归芍药散 含药血清 HSC-T6细胞 内皮素-1(ET-1) 磷酸化肌球蛋白轻链Ⅱ(p-MLCⅡ)
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