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严重发热伴血小板减少综合征病毒培养以及病毒滴度检测方法的建立
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作者 胡南南 鲍倡俊 +6 位作者 金柯 胡建利 刘源 岳明 颜莹莹 韩亚萍 李军 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第9期1607-1610,共4页
目的:建立严重发热伴血小板综合征病毒(SFTSV)培养和病毒滴度检测的方法,为其致病机制研究奠定基础。方法:选取生长良好的Vero细胞铺六孔板接种SFTSV,每隔24 h收集培养病毒上清检测SFTSV病毒复制拷贝数,从而选取最佳时间点收获病毒... 目的:建立严重发热伴血小板综合征病毒(SFTSV)培养和病毒滴度检测的方法,为其致病机制研究奠定基础。方法:选取生长良好的Vero细胞铺六孔板接种SFTSV,每隔24 h收集培养病毒上清检测SFTSV病毒复制拷贝数,从而选取最佳时间点收获病毒液并用浓缩离心管浓缩病毒液,保存备用。将SFTSV病毒液进行10倍比稀释,每梯度200μL接种生长良好的单层Vero细胞,用3 m L高压灭菌的甲基纤维素-DMEM覆盖物覆盖每孔Vero细胞,约9 d后温和去除甲基纤维素-DMEM覆盖物,经预冷的4%甲醛固定细胞后,用结晶紫染色,PBS洗脱3次,计算空斑数。结果:根据病毒繁殖生长情况,病毒在第4 d后达复制高峰并随后进入平台期,第8天病毒复制开始下降。参照甲基纤维素-结晶紫空斑法实验结果,病毒滴度为6×106PFU/m L。结论:SFTSV病毒培养以及滴度检测方法成功建立,选取4天后收获病毒上清最佳,甲基纤维素-结晶紫空斑法形成的空斑清晰可数。 展开更多
关键词 严重发热伴血小板减少综合征病毒 非洲绿猴肾细胞 试验 病毒滴度检测
基于Avicel-结晶紫染色空斑的中东呼吸综合征冠状病毒感染滴定与中和抗体检测方法 被引量:1
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作者 王文玲 黄保英 +5 位作者 王慧娟 赵莉 陆柔剑 朱娜 邓瑶 谭文杰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期62-67,共6页
目的针对中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV),建立安全、操作简易的空斑试验检测方法。方法将MERS-CoV(EMC/2012)感染Vero或Huh7.5细胞,通过研究MERS-CoV感染后镜下细胞病变与染色... 目的针对中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus, MERS-CoV),建立安全、操作简易的空斑试验检测方法。方法将MERS-CoV(EMC/2012)感染Vero或Huh7.5细胞,通过研究MERS-CoV感染后镜下细胞病变与染色后蚀斑,比较染毒时间(2 d和3 d)以及细胞培养覆盖物[琼脂、微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物(Avicel)]对空斑试验的影响,确定MERS-CoV空斑试验适用的细胞类型、染毒时间以及细胞培养覆盖物,并将该方法用于MERS-CoV中和抗体的检测。结果MERS-CoV感染Vero细胞后能形成清晰的病毒空斑;染毒后3 d后能稳定清晰地形成MERS-CoV特异性空斑;微晶纤维素-羧甲基纤维素钠复合物覆盖细胞所产生的病毒空斑较琼脂覆盖物更为清晰,操作简易,更易于在BSL-3实验室进行操作;该方法可用于MERS-CoV中和抗体的检测。结论建立了基于Avicel-结晶紫染色技术的适用于BSL-3实验室操作的MERS-CoV空斑试验方法,为MERS-CoV的滴定、中和抗体检测等提供了实验资料。 展开更多
关键词 中东呼吸综合征冠状病毒 生物安全三级实验室 试验 VERO细胞 微晶纤维素- 羧甲基纤维素钠复合物 中和试验
空斑试验在鼻病毒定量中的应用
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作者 刘运可 陈爱欢 +1 位作者 孙丽红 彭淑梅 《国际病毒学杂志》 2017年第6期380-383,共4页
目的 探讨空斑试验在鼻病毒定量过程中的应用.方法 Hela细胞单层在24孔板中融合达90%以上时,接种RV-1B,用琼脂作为半固体培养基孵育3-5 d后,甲醛固定、结晶紫染色,计算空斑.结果 利用Hela细胞进行空斑试验可以对RV-1B进行准确定量.结论... 目的 探讨空斑试验在鼻病毒定量过程中的应用.方法 Hela细胞单层在24孔板中融合达90%以上时,接种RV-1B,用琼脂作为半固体培养基孵育3-5 d后,甲醛固定、结晶紫染色,计算空斑.结果 利用Hela细胞进行空斑试验可以对RV-1B进行准确定量.结论 空斑试验为RV-1B定量提供一种相对有效方法,其中温度、PH、Mg2+等可能影响实验结果的因素不可忽视. 展开更多
关键词 鼻病毒 试验 HELA细胞
衣原体主要实验技术研究进展 预览 被引量:1
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作者 李育萌 吴移谋 《微生物学免疫学进展》 2017年第3期71-74,共4页
衣原体(chlamydia)是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病。因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注。依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变(fluorescence-reported allelic exchange mu... 衣原体(chlamydia)是人类重要的致病菌之一,不同衣原体感染会引起多种人类疾病。因此,衣原体研究正逐步受到广泛的关注。依据近年来国内外衣原体的研究进展,概述了荧光下等位基因交换突变(fluorescence-reported allelic exchange mutagenesis,FRAEM)技术、分离纯化衣原体的空斑技术、质粒载体的构建及转化技术、蛋白质谱技术在衣原体研究中的应用进展。 展开更多
关键词 衣原体 荧光下等位基因交换突变 试验 质粒载体 蛋白质谱
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流式细胞仪在快速测定鲤春病毒血症病毒滴度中的应用 预览 被引量:1
5
作者 王津津 贾鹏 +7 位作者 史秀杰 于力 阮周曦 郑晓聪 何俊强 兰文升 宋思静 刘荭 《中国动物检疫》 CAS 2015年第9期82-86,共5页
本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)滴度的方法。运用荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系(GCO)的感染情况。用SVC... 本研究建立了流式细胞仪快速检测鲤春病毒血症病毒(spring viraemia of carp virus,SVCV)滴度的方法。运用荧光激活细胞分选(fluorescence-activated cell sorting,FACS)技术检测SVCV A1株对草鱼性腺细胞系(GCO)的感染情况。用SVCV病毒单克隆抗体为一抗,FITC标记的羊抗鼠抗体为二抗,运用FACS来检测感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率。感染第3天时为最佳的病毒滴度测定时间点,测得SVCV的病毒滴度为8.31×105 FIU/m L,最低检测病毒滴度为(1000 FIU/m L),与传统空斑试验(plaque assay,PA)相比,两种方法测得的结果基本一致。实验结果表明,FACS是一种简捷、高效、直接的检测SVCV滴度的方法,是一种新型的病毒滴度测定方法。 展开更多
关键词 鲤春病毒血症 草鱼性腺细胞系 流式细胞术 试验 病毒滴度
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人7型腺病毒的分离与鉴定 预览 被引量:5
6
作者 杨金峰 商蕾 +7 位作者 董妥 齐桂云 王迎晨 高虹 刘振卫 于惠崧 郭微媛 曲章义 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第5期353-357,共5页
目的对哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本进行检测、分离鉴定和分型。方法应用直接免疫荧光法对标本进行初步筛检,将筛检得到的腺病毒阳性标本接种到A549细胞进行病毒培养,并用空斑法进行纯化。采用PCR技术... 目的对哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本进行检测、分离鉴定和分型。方法应用直接免疫荧光法对标本进行初步筛检,将筛检得到的腺病毒阳性标本接种到A549细胞进行病毒培养,并用空斑法进行纯化。采用PCR技术扩增腺病毒五邻体、六邻体基因,将扩增的PCR产物进行基因测序,并将测序结果BLAST比对,初步判断其型别。结果从采集的标本中分离到1株人腺病毒毒株。 BLAST比对五邻体、六邻体测序结果,表明该毒株与人7型腺病毒五邻体、六邻体的同源性为100%,初步判定该毒株为人7型腺病毒。结论从哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本中分离到1株人7型腺病毒。 展开更多
关键词 直接免疫荧光 腺病毒 病毒培养 试验
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巴泰病毒云南株生物学性状研究 预览 被引量:3
7
作者 章域震 张海林 +1 位作者 杨卫红 冯云 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期527-532,共6页
目的掌握巴泰(Batai)病毒生物学特性,为巴泰病毒的监测和调查研究提供科学依据。方法用分离自云南省菲律宾按蚊(Anophelesphilippinensis)的巴泰病毒LC92—4株,采用细胞培养、小白鼠感染、血凝抑制、间接免疫荧光、空斑试验以及... 目的掌握巴泰(Batai)病毒生物学特性,为巴泰病毒的监测和调查研究提供科学依据。方法用分离自云南省菲律宾按蚊(Anophelesphilippinensis)的巴泰病毒LC92—4株,采用细胞培养、小白鼠感染、血凝抑制、间接免疫荧光、空斑试验以及病理检测和电镜观察等方法进行生物学特性试验。结果巴泰病毒可引起〈4周龄小白鼠发病死亡。感染鼠脑病毒颅内、皮下和腹腔接种2周龄小白鼠的LD5。分别为5.6710gLD50/0.025mL、5.310gLD50/0.03mL和4.510gLD50/0.03mL。感染病毒鼠的心、肝、脾、肺、肾病毒悬液颅内接种2周龄小白鼠,LD50分别为3.75、4.25、2.25、3.0、2.25logLD850/0.025mL。感染发病小白鼠脑、心、肝、脾、肺、肾均发现病理改变。感染鼠的脑组织经电镜检测发现圆形有包膜病毒颗粒,大小约82nm。巴泰病毒能在BHK21和Vero细胞产生明显病变,并可产生空斑;在BHK21细胞上,空斑滴度为6.0410gPFU/mL;在C6/36细胞上不产生病变。感染病毒鼠脑接种BHK21和Vero细胞,TCID50分别为5.5010gTCID50/0.025mL和5.00logTCID50/0.025mL。在pH5.75~7.0条件下,巴泰病毒不具有与鸽、鹅、鸡、鸭、人O型和绵羊红血球发生凝集的特性;空斑减少中和试验检测云南省357份人血清,阳性2份,中和抗体滴度均为1:10。结论乳小白鼠和幼年小白鼠对巴泰病毒高度易感。BHK21和Vero细胞对巴泰病毒敏感,可用于病毒分离培养和空斑测定。建立的免疫荧光和空斑减少中和试验具有特异性,可用于巴泰病毒抗体检测。应进一步开展该病毒的分布及其与疾病关系的研究。 展开更多
关键词 巴泰病毒 动物易感性 细胞敏感性 间接免疫荧光试验 试验 减少中和试验
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呼吸道感染人腺病毒的分离培养和型别鉴定 预览 被引量:6
8
作者 王瑞琨 商蕾 +4 位作者 王迎晨 金玉霞 齐桂云 黄冬娟 曲章义 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期385-387,F0004共4页
目的从临床呼吸道感染样品中分离人腺病毒毒株并进行型别鉴定。方法将经免疫荧光检测确认为人腺病毒感染的痰标本经处理后接种宫颈癌HeLa细胞进行培养,用空斑试验进行病毒分离和纯化。从纯化后的毒株中提取DNA作为模板,用PCR法扩增腺... 目的从临床呼吸道感染样品中分离人腺病毒毒株并进行型别鉴定。方法将经免疫荧光检测确认为人腺病毒感染的痰标本经处理后接种宫颈癌HeLa细胞进行培养,用空斑试验进行病毒分离和纯化。从纯化后的毒株中提取DNA作为模板,用PCR法扩增腺病毒六邻体高变区基因,对扩增产物进行核酸序列测定,测序结果运用基本局部比对搜索工具以确定其型别。结果从临床样品中分离到一株人腺病毒毒株,其六邻体基因高变区序列同人3型腺病毒六邻体基因的同源性为100%。结论从哈尔滨地区呼吸道感染患者痰标本中分离到人3型腺病毒一株。 展开更多
关键词 腺病毒 呼吸道感染 病毒培养 试验 PCR
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板蓝根生物碱酸性部位对新城疫病毒吸附和释放的影响 预览 被引量:4
9
作者 徐玉凤 刘家国 +5 位作者 赵彪 王德云 范云鹏 胡元亮 徐树培 廖敬宜 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期90-94,共5页
为研究板蓝根生物碱酸性部位(RIAa)抗新城疫病毒(NDV)的机制,通过细胞病变抑制法和MTT比色法检测了RIAa对NDV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)吸附和释放的影响。结果显示:药毒混合方式中当RIAa质量浓度为31.3μg·mL-1、作用60min时... 为研究板蓝根生物碱酸性部位(RIAa)抗新城疫病毒(NDV)的机制,通过细胞病变抑制法和MTT比色法检测了RIAa对NDV感染鸡胚成纤维细胞(CEF)吸附和释放的影响。结果显示:药毒混合方式中当RIAa质量浓度为31.3μg·mL-1、作用60min时A570值显著高于病毒对照(P〈0.05),在120min时3个浓度均显著高于病毒对照(P〈0.05);先加药物方式中RIAa为62.5和31.3μg·mL^-1在120min时均显著高于病毒对照(P〈0.05);先加毒吸附方式中,各吸附时间的A570值与病毒对照差异均不显著(P〉0.05)。RIAa+NDV的细胞上清液再次作用细胞后其A570值显著高于没有加RIAa的NDV对照(P〈0.05)。空斑试验结果表明:RIAa高、中、低3个药物浓度作用孔的空斑数都显著低于病毒对照(P〈0.05),以中质量浓度(7.8μg·mL^-1)的空斑减少率最高,进一步证实了RIAa的抗NDV作用。结论:吸附时间、加药方式对病毒感染细胞的能力有显著影响,RIAa在一定浓度下对病毒的吸附有阻碍作用,能够保护细胞减少病毒感染,但是不能解除已经吸附的病毒;RIAa在一定浓度下能够显著抑制病毒的释放。 展开更多
关键词 板蓝根生物碱酸性部位 新城疫病毒 吸附 释放 试验
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呼吸道合胞病毒空斑检测方法的建立及应用 被引量:9
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作者 臧娜 王莉佳 +3 位作者 陈伟超 谢晓虹 邓昱 刘恩梅 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期192-195,共4页
目的建立呼吸道合胞病毒(RSV)空斑检测方法,并用于病毒滴度的定量。方法将不同稀释度的RSVA2株病毒液分别接种于Hep-2细胞单层,加0.6%营养琼脂糖覆盖,培养6d后用10%甲醛固定。去除覆盖层,0.05%中性红染色,按文献报道的方法进行空斑计... 目的建立呼吸道合胞病毒(RSV)空斑检测方法,并用于病毒滴度的定量。方法将不同稀释度的RSVA2株病毒液分别接种于Hep-2细胞单层,加0.6%营养琼脂糖覆盖,培养6d后用10%甲醛固定。去除覆盖层,0.05%中性红染色,按文献报道的方法进行空斑计数。建立空斑法测定RSV滴度的标准曲线,并验证空斑法的准确性及精密性,应用建立的空斑法检测RSV感染BALB/c小鼠肺组织中的RSV滴度。结果RSVA2株感染的Hep-2细胞出现典型的空斑,直径约1~3mm,形态呈圆形或类圆形。空斑法的最低检测限为3.4×101PFU/ml,线性关系良好,相关系数r=0.999996,准确性及精密性均良好。RSV感染的BALB/c小鼠肺组织标本均出现数量不等的空斑。结论所建立的RSV空斑测定方法敏感、准确,能稳定地对病毒滴度进行定量测定,为进一步研究RSV的感染性和免疫原性奠定了基础。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 试验 病毒滴度
SARS-CoV细胞空斑试验 预览 被引量:4
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作者 蒋虹 乔红伟 +2 位作者 丛喆 佟巍 魏强 《中国比较医学杂志》 2009年第8期 65-66,F0003,共3页
目的建立适用于生物安全三级实验室操作的SARS.CoV空斑试验方法。方法SARS-CoVl0倍系列稀释接种Vero-E6细胞,用0.6%琼脂糖覆盖中性红着色(琼脂糖.中性红法)或覆盖1%甲基纤维素,4%甲醛固定,结晶紫染色(甲基纤维素-结晶紫... 目的建立适用于生物安全三级实验室操作的SARS.CoV空斑试验方法。方法SARS-CoVl0倍系列稀释接种Vero-E6细胞,用0.6%琼脂糖覆盖中性红着色(琼脂糖.中性红法)或覆盖1%甲基纤维素,4%甲醛固定,结晶紫染色(甲基纤维素-结晶紫法),空斑计数。结果琼脂糖-中性红法病毒滴度为6.14Lg pfu/mL,甲基纤维素-结晶紫法病毒滴度为6.57Lg pfu/mL。结论二种空斑试验方法相比,病毒滴度无明显差异。甲基纤维素-结晶紫空斑试验法形成的空斑比琼脂糖-中性红法清晰、操作简单安全、结果可长期保存。 展开更多
关键词 SARS冠状病毒 试验
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肠病毒71型空斑检测方法的建立 被引量:4
12
作者 郝春生 赵敏 +6 位作者 张晨 何薇薇 王潇潇 杨永娟 张中洋 沈心亮 李秀玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第10期1023-1025,共3页
目的建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段。方法将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Vero细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度。通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对... 目的建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段。方法将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Vero细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度。通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对空斑法与微量细胞病变法检测病毒滴度的结果进行比较。结果采用RD细胞和Vero细胞,通过空斑法对EV71病毒滴度进行检测,96h后均能规律地出现边缘整齐、清晰的空斑,RD细胞和Vero细胞检测的空斑直径分别为1-2mm和0.5-1mm。连续3次重复试验结果显示,试验间变异系数的平均值Vero细胞为2.52%,RD细胞为4.49%。空斑法与微量细胞病变法比较,其检测结果具有良好的线性相关性,相关系数为r=0.972,P=0.006。结论已建立了精密性好、出斑规律的EV71病毒空斑检测方法。 展开更多
关键词 肠病毒71型 试验 病毒滴定
三带喙库蚊胸腔接种乙型脑炎减毒活疫苗病毒的感染动态及致病力观察 预览 被引量:7
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作者 冯云 张海林 +5 位作者 俞永新 章域震 杨卫红 董关木 贾丽丽 姚亚夫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期 278-281,共4页
目的通过蚊虫胸腔接种乙脑病毒减毒活疫苗SAl4-14-2株。了解该疫苗病毒在蚊虫体内的繁殖情况及其毒力稳定性,进一步评价该疫苗的安全性。方法建立三带喙库蚊的实验室种群,用SA14-14-2、SA14和中山株胸腔接种三带喙库蚊,感染后不同时... 目的通过蚊虫胸腔接种乙脑病毒减毒活疫苗SAl4-14-2株。了解该疫苗病毒在蚊虫体内的繁殖情况及其毒力稳定性,进一步评价该疫苗的安全性。方法建立三带喙库蚊的实验室种群,用SA14-14-2、SA14和中山株胸腔接种三带喙库蚊,感染后不同时间取一定数量的蚊虫。研磨制成悬液,用空斑试验检测蚊虫体内的病毒滴度。用感染蚊悬液接种乳鼠和感染蚊虫直接叮咬乳鼠的方法,观察对乳鼠的致病性。结果SAl4-14-2、SAl4和中山株病毒感染蚊虫后,第2~20d蚊虫体内均能检测到病毒,其中SA14-14-2株的滴度为2~3.72logPFU/ml,SAl4株为3~4.85logPFU/ml,中山株为3~5.40log-PFu/ml。中山株的感染滴度最高,其次是SA14株,SAl4-14—2株的感染滴度最低。表明蚊虫对野毒株(中山株和SA14株)更为敏感。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊悬液接种乳鼠,未能引起乳鼠发病或死亡。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊叮咬乳鼠,未见乳鼠发病或死亡,也未从小白鼠血清中检测到乙脑病毒抗体。结论经胸腔接种。SA14-14-2病毒能在三带喙库蚊体内稳定繁殖。动物接种和蚊虫叮咬试验表明,经蚊体内繁殖的SA14-14-2病毒毒力仍保持原有的弱毒特性,表明该减毒活疫苗通过蚊虫体内繁殖后不会造成传播。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 SSA14-14-2疫苗株 三带喙库蚊 胸腔接种 动物感染实验 试验
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实时荧光定量PCR技术在鸭胚鸭瘟病毒检测中的应用 预览 被引量:3
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作者 汤承 岳华 +3 位作者 索化夷 杨发龙 于学辉 高元刚 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期 284-287,共4页
用real-time PCR技术定量检测了鸭瘟标准强毒(DPV F37)和鸡胚化弱毒(C-KEC)疫苗毒在鸭胚中的动态分布.结果表明,F37在接种后3~45h内胚体和绒毛尿囊膜中的病毒荷载量为7.43×10~5.01×10^3拷贝·μL^-1,57-69h达... 用real-time PCR技术定量检测了鸭瘟标准强毒(DPV F37)和鸡胚化弱毒(C-KEC)疫苗毒在鸭胚中的动态分布.结果表明,F37在接种后3~45h内胚体和绒毛尿囊膜中的病毒荷载量为7.43×10~5.01×10^3拷贝·μL^-1,57-69h达到平台期,为1.7×10^4~4.04×10^4拷贝·μL^-1,接种后9~81h尿囊液中的DPV荷载量始终在2.13~5.11×10^2拷贝·μL^-1,胚体和绒毛尿囊膜中病毒荷载量高于尿囊液,病毒收获时间以接种后69~81h为宜;C-KEC接种鸭胚后3h尿囊液中病毒荷载量为7.6×10^3拷贝·μL^-1,9h下降至1.94×10^2拷贝·μL^-1,21h呈阴性.以后快速上升到平台期达9.16×10^3拷贝·μL^-1;而绒毛尿囊膜在21h前、胚体在45h前的检测均为阴性,之后快速上升,均在69h达到平台期,为6.40×10^4·μL^-1及4.14×10^4拷贝·μL^-1,C-KEC在鸭胚绒毛尿囊膜及胚体中的含量同样高于尿囊液,收毒时间以接种后69~81h为佳;对real-time PCR与空斑法两种定量检测结果进行相关性分析,结果显示,两者存在显著的直线相关,说明Real-time PCR技术完全可以替代空斑法定量检测DPV,并可将检测时间由144h缩短至3h. 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 REAL-TIME PCR 鸭胚 试验
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三带喙库蚊和致倦库蚊经口感染乙型脑炎病毒疫苗SA14—14—2株的研究 预览 被引量:10
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作者 章域震 张海林 +5 位作者 俞永新 冯云 董关木 杨卫红 贾丽丽 姚亚夫 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期 584-586,591,共4页
目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时... 目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时间取一定数量的蚊,研磨制成悬液,应用空斑试验方法检测感染后不同时间蚊体内的病毒存在情况和病毒滴度.结果在用6.06logPFU/ml SA14-14-2病毒经口感染的两种库蚊中,没有检测到病毒空斑,即没发现蚊虫的感染;在用较高的6.18logPFU/ml病毒经口感染的三带喙库蚊和致倦库蚊中,分别有一组蚊虫出现低滴度感染,空斑形成单位分别是1.24和1.11log10PFU/ml;在用野毒株经口感染的两种库蚊,共计19组蚊虫中,有14组发生感染,空斑形成单位在3.18~4.79log10PFU/ml.结论作为乙脑主要传播媒介的三带喙库蚊和致倦库蚊对SA14-14-2疫苗株病毒的经口感染和病毒在体内的复制严重受限,当叮咬接种疫苗的人后,不具备发生乙脑病毒感染和传播的能力. 展开更多
关键词 乙型脑炎SA14—14—2疫苗株 三带喙库蚊 致倦库蚊 经口感染 试验
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新分离呼肠病毒的空斑试验及病毒纯化 被引量:3
16
作者 苏裕心 何君 +3 位作者 朱虹 宋立华 黄如统 端青 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2005年第5期418-420,共3页
目的:建立新分离呼肠病毒(reovirus)的空斑技术,进行病毒纯化,为呼肠病毒生物学和分子生物学的研究奠定基础.方法: 4株新分离呼肠病毒的早代毒种经L929细胞连续传代,当产生细胞病变后进行空斑试验,加营养琼脂培养6 d后加中性红,24 h内... 目的:建立新分离呼肠病毒(reovirus)的空斑技术,进行病毒纯化,为呼肠病毒生物学和分子生物学的研究奠定基础.方法: 4株新分离呼肠病毒的早代毒种经L929细胞连续传代,当产生细胞病变后进行空斑试验,加营养琼脂培养6 d后加中性红,24 h内挑取空斑,扩增一次后做PCR鉴定.取呼肠病毒PCR阳性病毒进行第2次克隆纯化.结果:4株新分离呼肠病毒经L929细胞连续传2~4代,均能观察到明显的细胞病变.用10-3和10-4接种L929单层细胞,第6~7天均能产生空斑,空斑呈圆形,直径为0.2~1.0 mm,并分别测定其空斑滴度(PFU/ml).两次纯化后进行PCR检测,呼肠病毒基因扩增阳性、脊髓灰质炎病毒基因扩增阴性.结论:4株呼肠病毒的空斑出斑规律,通过两次克隆,获得纯化的病毒. 展开更多
关键词 呼肠病毒 试验 RT-PCR 病毒纯化
SARS冠状病毒空斑技术的建立和应用 预览 被引量:6
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作者 安祺 董关木 +2 位作者 刘文雪 杨立宏 孔艳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期 400-402,共3页
目的建立SAILS病毒空斑形成试验,用于病毒滴定和中和抗体检测。方法用Vero-E6细胞接种6孔塑料细胞培养板,加两层含琼脂糖培养基,以中性红为染色剂建立空斑试验,以能减少50%的空斑为标准,测定抗SARS中和抗体。结果应用空斑试验能... 目的建立SAILS病毒空斑形成试验,用于病毒滴定和中和抗体检测。方法用Vero-E6细胞接种6孔塑料细胞培养板,加两层含琼脂糖培养基,以中性红为染色剂建立空斑试验,以能减少50%的空斑为标准,测定抗SARS中和抗体。结果应用空斑试验能稳定清晰地形成SARS病毒特异性空斑,可用于病毒滴定、抗SAILS病毒抗体的测定和疫苗效力的检定。结论为正确滴定病毒、检测中和抗体、评价疫苗的有效性提供了依据。 展开更多
关键词 SARS 冠状病毒 技术 中和试验 试验
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人和鼠源性RANTES基因的克隆和腺病毒表达载体的建立 预览 被引量:4
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作者 史业辉 曹水 +2 位作者 刘虹 李慧 任秀宝 《天津医科大学学报》 2004年第1期 1-4,共4页
目的:克隆人和小鼠的活化T细胞表达与分泌调节基因(RANTES基因)并分别构建腺病毒表达载体.方法:利用RT-PCR方法从人的扁桃体组织和小鼠的脾细胞中克隆RANTES基因并将其克隆入T-easy保存载体中,使用Stratagene公司的ADEasy-XL腺病毒载体... 目的:克隆人和小鼠的活化T细胞表达与分泌调节基因(RANTES基因)并分别构建腺病毒表达载体.方法:利用RT-PCR方法从人的扁桃体组织和小鼠的脾细胞中克隆RANTES基因并将其克隆入T-easy保存载体中,使用Stratagene公司的ADEasy-XL腺病毒载体组装试剂盒建立表达该基因的腺病毒表达载体并使用CsCl2密度梯度离心法浓缩病毒悬液.空斑试验显示病毒的滴度为2×1011cfu/ml.结果:该实验成功地克隆了人和小鼠的RANTES基因并分别建立了表达该基因的腺病毒表达载体.结论:表达人和小鼠RANTES基因的腺病毒载体的建立为今后的体内和体外功能试验奠定了基础. 展开更多
关键词 活化T细胞表达与分泌调节基因(RANTES基因) 病毒载体 试验
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文山松毛虫质型多角体病毒在Sf21细胞中离体增殖试验 预览 被引量:2
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作者 马永平 孟小林 徐进平 《中国病毒学》 CSCD 2002年第2期 137-141,共5页
研究了文山松毛虫质型多角体病毒(DpCPV-W)在Sf21细胞中的离体增殖行为,并进行了空斑试验,结果显示DpCPV-W毒株能够在Sf21细胞中增殖,也能在Sf21细胞上形成空斑,并能产生形态正常的病毒多角体.在DpCPV-W中加入基因工程增效蛋白,能显著... 研究了文山松毛虫质型多角体病毒(DpCPV-W)在Sf21细胞中的离体增殖行为,并进行了空斑试验,结果显示DpCPV-W毒株能够在Sf21细胞中增殖,也能在Sf21细胞上形成空斑,并能产生形态正常的病毒多角体.在DpCPV-W中加入基因工程增效蛋白,能显著增加病毒粒子对离体细胞的感染率,增幅达145%.生物测定表明,离体增殖的病毒多角体与虫体增殖的多角体的毒力相当.因此,Sf21细胞可以作为文山松毛虫CPV增殖行为研究的离体细胞系统,也可通过空斑纯化技术对文山松毛虫CPV生产防治的病毒种进行单个病毒粒子的分离纯化. 展开更多
关键词 文山松毛虫质型 多角体病毒 Sf21细胞 离体增殖试验 试验 增效蛋白
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5种虫媒病毒的细胞培养及空斑试验 被引量:2
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作者 彭文明 司炳银 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第2期109-112,共4页
目的:选择一株对5种虫媒病毒:马雅罗病毒(MAY)、西门利克病毒(SFV)、墨累谷脑炎病毒(MVE)、伊利乌斯病毒(ILH)和布尼安姆韦拉病毒(BUN)敏感的细胞用于这5种病毒生物学性状的研究。方法:将不同稀释度的乳鼠脑病毒悬液接种到... 目的:选择一株对5种虫媒病毒:马雅罗病毒(MAY)、西门利克病毒(SFV)、墨累谷脑炎病毒(MVE)、伊利乌斯病毒(ILH)和布尼安姆韦拉病毒(BUN)敏感的细胞用于这5种病毒生物学性状的研究。方法:将不同稀释度的乳鼠脑病毒悬液接种到BHK21,LLC-MK2,A549和C6/36传代细胞上,进行这5种病毒的敏感性试验,选出一株对5种病毒较敏感的细胞株;对敏感细胞株进行三因素三水平正交试验,探索细胞的最佳培养条件;进行5种病毒的空斑试验。结果BHK21细胞对5种病毒细胞病变特性明显,出现时间较早,滴度较高,适用于5种病毒的培养。在合适条件下,BHK21细胞单层可以维持7d以上,5种虫媒病毒在BHK21细胞上出现了大小、形态都不相同的空斑。结论:BHK21细胞在60%DMEM培养液、30%的0.5%I水解乳蛋白、10%小牛血清、常量青、链霉素和50μg/ml卡那霉素,保持pH7.2条件下生长最好,能够满足5种虫媒病毒生物学性状研究的需要。 展开更多
关键词 虫媒病毒 细胞敏感性 细胞培养 试验
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