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DADS对DJ-1核定位高表达人白血病HL-60细胞的影响(英文)
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作者 岳海燕 秦晶 +7 位作者 王文松 杨叶宁 易岚 王娟 唐玉娴 何洁 苏琦 谭晖 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2019年第2期201-210,共10页
最近研究表明,DJ-1在许多肿瘤中过表达,而且DJ-1的核表达与肿瘤的生物学行为有关.本文主要研究二烯丙基二硫(DADS)对DJ-1核定位高表达人白血病HL-60细胞生物行为学的影响,阐明DJ-1在细胞核内的功能,为临床诊断及治疗过程提供一个潜在的... 最近研究表明,DJ-1在许多肿瘤中过表达,而且DJ-1的核表达与肿瘤的生物学行为有关.本文主要研究二烯丙基二硫(DADS)对DJ-1核定位高表达人白血病HL-60细胞生物行为学的影响,阐明DJ-1在细胞核内的功能,为临床诊断及治疗过程提供一个潜在的治疗靶点.通过基因转染技术建立核内高表达HL-60细胞株(DJ-1/HL-60),利用软琼脂集落形成实验、 MTT法、间接免疫荧光细胞化学实验、硝基蓝四氮唑(NBT)还原比色实验评估HL-60细胞的增殖与分化,DJ-1核定位过表达促进HL-60细胞的增殖并抑制其分化. Transwell迁移侵袭小室实验表明DJ-1核定位过表达可以促进HL-60的迁移和侵袭能力. Western blot结果表明DADS具有抑制HL-60细胞中核内DJ-1蛋白表达的能力.说明DJ-1核定位高表达具有促进HL-60细胞增殖和迁移侵袭及抑制HL-60细胞分化的作用,DADS可以诱导DJ-1核定位高表达HL-60细胞分化及抑制迁移侵袭, DJ-1核定位高表达可减弱DADS抑制HL-60细胞增殖的作用. 展开更多
关键词 HL-60细胞 二烯丙基二硫 DJ-1 细胞核定位 分化
鸡基质蛋白3核定位信号的预测与鉴定 预览
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作者 邓珊珊 高洪波 +4 位作者 袁超 赵佳福 倪萌萌 段志强 嵇辛勤 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期2486-2495,共10页
本研究旨在预测和鉴定鸡基质蛋白3(matrin 3,MATR3)的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)。通过核定位信号在线预测软件预测鸡MATR3蛋白中存在的假定NLS(putative NLS,pNLS),根据预测结果构建鸡MATR3蛋白pNLS缺失的重... 本研究旨在预测和鉴定鸡基质蛋白3(matrin 3,MATR3)的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)。通过核定位信号在线预测软件预测鸡MATR3蛋白中存在的假定NLS(putative NLS,pNLS),根据预测结果构建鸡MATR3蛋白pNLS缺失的重组真核表达载体,转染细胞后通过观察缺失体重组蛋白的亚细胞定位来确定其NLS。根据鸡MATR3蛋白NLS邻近碱性氨基酸序列特征,构建NLS邻近氨基酸缺失的重组真核表达载体,转染细胞后通过荧光观察和亚细胞定位分析来确定NLS邻近碱性氨基酸是否参与鸡MATR3蛋白的细胞核定位。另外,对鸡MATR3蛋白NLS在不同物种间的保守性以及对外源蛋白的核输入能力进行分析和检测。结果表明,鸡MATR3蛋白中存在4个pNLS,其中pNLS2(596PSDKKSK602)缺失导致鸡MATR3蛋白丧失细胞核定位特征。将构建的鸡MATR3蛋白NLS邻近碱性氨基酸缺失的重组真核表达载体转染细胞,通过荧光观察和亚细胞定位分析,发现鸡MATR3蛋白NLS邻近的碱性氨基酸不参与NLS介导的MATR3蛋白细胞核定位。此外,笔者发现该NLS基序在不同物种的MATR3蛋白中均保守,并且与SV40大T抗原NLS具有相同的核输入能力。鸡MATR3蛋白中存在一个高度保守的NLS(596PSDKKSK602),其邻近的碱性氨基酸位点不参与MATR3蛋白的细胞核定位。 展开更多
关键词 基质蛋白3 定位信号 细胞核定位
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新型环形病毒AGV7VP3基因克隆、表达及其多抗制备
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作者 申秋平 田晓彦 +3 位作者 邹海涛 邵红霞 秦爱建 叶建强 《中国家禽》 北大核心 2018年第1期12-15,共4页
研究对新型环形病毒AGV7忡3基因进行了克隆、表达以及多克隆抗体的制备。利用原核表达系统获得了可溶性重组GST—VP3蛋白,纯化后免疫小鼠制备了抗GST—VP3多克隆抗体。同时构建pcDNA3.1+EGFP—VP3真核表达栽体。通过共聚焦显微镜观... 研究对新型环形病毒AGV7忡3基因进行了克隆、表达以及多克隆抗体的制备。利用原核表达系统获得了可溶性重组GST—VP3蛋白,纯化后免疫小鼠制备了抗GST—VP3多克隆抗体。同时构建pcDNA3.1+EGFP—VP3真核表达栽体。通过共聚焦显微镜观察发现,AGV7VP3与EGFP融合蛋白在HCT116肿瘤细胞中集中表达于细胞核,且呈散在点状分布,类似凋亡小体。研究为进一步研制AGV7血清学诊断方法提供了材料,同时为探究AGV7VP3的生物学功能打下了基础。 展开更多
关键词 AGV7 VP3 表达 多克隆抗体 细胞核定位
鸭源新城疫病毒M蛋白核定位信号突变影响病毒的毒力和复制能力
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作者 段志强 嵇辛勤 +3 位作者 邓珊珊 胡焱 赵佳福 倪萌萌 《微生物学报》 CSCD 北大核心 2018年第10期1786-1797,共12页
【目的】研究鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白核定位信号(nuclear localization signal,NLS)突变对其毒力和复制能力的影响。【方法】利用鸭源NDV SS1株P基因和F基因上的AgeⅠ和Bstz17Ⅰ酶切位点,将overlapPCR方... 【目的】研究鸭源新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)M蛋白核定位信号(nuclear localization signal,NLS)突变对其毒力和复制能力的影响。【方法】利用鸭源NDV SS1株P基因和F基因上的AgeⅠ和Bstz17Ⅰ酶切位点,将overlapPCR方法获得的M蛋白NLS突变的片段替换到p NDV/SS1GFP中获得全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm。通过反向遗传学技术拯救M蛋白NLS突变体病毒,并对拯救的病毒进行血凝(hemagglutination,HA)试验、荧光试验和M基因测序鉴定。另外,对突变体病毒进行M蛋白的亚细胞定位观察,以及病毒的生物学特性、空斑形成能力和体外增殖能力测定。【结果】成功构建M蛋白NLS突变的全长质粒pNDV/SS1GFP-M/NLSm。细胞转染物接种鸡胚后的第1代尿囊液无HA效价,盲传3代才能检测到拯救病毒的HA效价。进一步的荧光试验和M基因测序确定拯救的病毒是突变体病毒r SS1GFP-M/NLSm。与亲本病毒rSS1GFP相比,突变体病毒M蛋白由细胞核定位变为细胞质定位。此外,突变体病毒的毒力、在鸡胚上的复制能力以及在细胞中的空斑形成能力显著降低,并且感染细胞后产生的细胞病变轻微,M蛋白和绿色荧光蛋白的表达量均降低,说明M蛋白NLS突变使病毒的体外增殖能力受到抑制。【结论】NLS突变导致的M蛋白细胞核定位功能丧失可明显降低鸭源NDV的毒力和复制能力。 展开更多
关键词 新城疫病毒 M蛋白 细胞核定位 定位信号 病毒复制
神经母细胞瘤SK-N-SH细胞内DHRS4L2基因一种新选择性剪接亚型S4的克隆和亚细胞定位
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作者 龚慧 李一凡 +6 位作者 祝胜郎 杜冀晖 王磊 周蓓 廉婕 李蓉 麦丽文 《医学分子生物学杂志》 CAS 2017年第4期192-198,共7页
目的 神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系脱氢酶/还原酶(SDR家族)成员4类2[dehydrogenase/reductase(SDR family)member 4 like 2,DHRS4L2]基因的一种新的选择性剪接亚型克隆、生物信息学分析及其亚细胞定位.方法 以SK-N-SH细胞cDNA为模板,... 目的 神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系脱氢酶/还原酶(SDR家族)成员4类2[dehydrogenase/reductase(SDR family)member 4 like 2,DHRS4L2]基因的一种新的选择性剪接亚型克隆、生物信息学分析及其亚细胞定位.方法 以SK-N-SH细胞cDNA为模板,PCR扩增DHRS4基因簇Ea1转录本.将PCR产物A-T克隆至pGEMT-Easy质粒,对质粒进行DNA Sanger测序.将测序所得序列用NCBI ORF finder分析其编码区,用Motif Scan分析预测蛋白氨基酸序列.用Clustal Omega进行蛋白序列比对分析.将新亚型完整编码框cDNA以及删除偶核定位信号的编码框分别插入pEGFP-C1质粒,所得质粒和空质粒分别转染SK-N-SH细胞,在荧光显微镜下观察转染表达蛋白亚细胞定位.结果 用RT-PCR和Sanger测序方法发现,SK-N-SH表达DHRS4L2 Ea1转录本,未检测到其表达脱氢酶/还原酶(SDR家族)成员4类1[dehydrogenase/reductase(SDR family)member 4 like 1,DHRS4L1]的Ea2转录本.DHRS4L2 Ea1表达一个新的选择性剪接亚型DHRS4L2-S4(KU141377),由AY616183基础上在Ea1与E2外显子之间插入新外显子Ej形成,外显子Ej含有新亚型翻译起始密码子ATG.转录本KU141377预测蛋白羧基端具有偶核定位信号(bipartite nuclear localization signal,NLS),提示其可能定位于细胞核.绿色荧光蛋白融合蛋白实验显示,在SK-N-SH细胞该蛋白定位于细胞核.该蛋白还含有一个甘氨酸密集区(glycine-rich region)和阿片样生长因子受体重复(opioid growth factor receptor repeat)序列.结论 研究发现SK-N-SH细胞表达的一种DHRS4L2新选择性剪接亚型KU141377,其预测编码蛋白含有细胞偶核定位信号,融合荧光蛋白实验显示该新亚型定位于细胞核,这为后续研究DHRS4L2在神经母细胞瘤中的潜在功能奠定基础. 展开更多
关键词 DHRS4L2基因 选择性剪接 细胞核定位
KPNB1和Ran蛋白共同介导新城疫病毒基质蛋白的入核转运 被引量:5
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作者 段志强 嵇辛勤 +4 位作者 许厚强 赵佳福 许海旭 胡顺林 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期109-120,共12页
【目的】鉴定与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质蛋白(matrix protein,M)入核相关的细胞蛋白,以阐明NDV M蛋白细胞核定位的分子机制。【方法】从鸡胚成纤维细胞中分别克隆核转运受体蛋白KPNA1–KPNA6和KPNB1基因,将其... 【目的】鉴定与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质蛋白(matrix protein,M)入核相关的细胞蛋白,以阐明NDV M蛋白细胞核定位的分子机制。【方法】从鸡胚成纤维细胞中分别克隆核转运受体蛋白KPNA1–KPNA6和KPNB1基因,将其构建到真核表达载体,并与表达NDV M蛋白的重组真核表达载体分别共转染HEK-293T细胞,通过免疫共沉淀方法鉴定与NDV M蛋白相互作用的核转运受体蛋白。另外,将M蛋白与Ran蛋白突变体或与M蛋白互作的核转运受体蛋白缺失体分别共表达,通过荧光共定位确定M蛋白入核转运相关的细胞蛋白。【结果】构建的重组真核表达载体在HEK-293T细胞中能够正确表达;通过间接免疫荧光观察发现,重组蛋白中除Myc-KPNA2蛋白定位在细胞质外,其它核转运受体蛋白均与M蛋白表现出相同的细胞核定位。免疫共沉淀试验结果表明,M蛋白与KPNA1蛋白和KPNB1蛋白均存在相互作用。进一步通过荧光共定位观察发现,M蛋白与KPNA1蛋白缺失体(DN-KPNA1)共表达不改变M蛋白的细胞核定位,而与KPNB1蛋白缺失体(DN-KPNB1)共表达后导致M蛋白变为细胞质定位,说明M蛋白入核转运需要KPNB1蛋白的参与。另外,将M蛋白与Ran蛋白突变体Ran-Q69L共表达,荧光观察发现M蛋白同样由细胞核定位变为细胞质定位,说明M蛋白入核转运还需要Ran蛋白的辅助。【结论】KPNB1和Ran蛋白共同介导NDV M蛋白的入核转运,其过程是KPNB1蛋白首先和M蛋白发生相互作用并形成复合物,然后通过Ran蛋白的辅助作用完成入核转运。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基质蛋白 转运受体蛋白 细胞核定位
介导BLM解旋酶细胞核定位的关键氨基酸位点鉴定
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作者 段志强 许厚强 +2 位作者 赵佳福 陈祥 罗霂榃 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期775-782,共8页
BLM解旋酶是人Rec Q DNA解旋酶家族重要成员之一,在机体的DNA复制、重组、损伤修复以及维护基因组稳定性等方面发挥重要作用。早期研究表明,BLM解旋酶通过自身携带的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)进入细胞核,但是介导... BLM解旋酶是人Rec Q DNA解旋酶家族重要成员之一,在机体的DNA复制、重组、损伤修复以及维护基因组稳定性等方面发挥重要作用。早期研究表明,BLM解旋酶通过自身携带的核定位信号(nuclear localization signal,NLS)进入细胞核,但是介导其细胞核定位的关键氨基酸位点尚不清楚。本研究构建了BLM解旋酶C端(aa642-1417)截短体克隆,首先通过截短表达的方法确证其NLS结构域。在此基础上,构建重组真核表达载体p EGFP-NLS/BLM-NES/Rev,通过观察BLM NLS碱性氨基酸位点突变对EGFP-NLS/BLM-NES/Rev融合蛋白细胞核定位的影响,以此快速鉴定NLS中介导BLM解旋酶细胞核定位的关键氨基酸位点。结果表明,BLM(aa642-1417)C端截短体具有与全长BLM解旋酶相同的细胞核定位,同时确证1344RSKRRK1349是BLM解旋酶NLS结构域的活性位点,且具有与SV40 NLS相同的核输入能力。氨基酸位点突变试验结果表明,R1344A、K1346A、R1348A和K1349A点突变均减少了EGFP-NLS/BLM-NES/Rev和EGFP-BLM(642-1417)融合蛋白的细胞核定位。因此,这4个位点是介导BLM解旋酶细胞核定位的关键氨基酸位点。此结果为后续研究BLM解旋酶细胞核定位的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 BLM解旋酶 细胞核定位 定位信号 分子机制
小麦黄花叶病毒编码VPg蛋白N端结构是VPg与核仁蛋白 Fibrillarin互作区域 预览 被引量:1
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作者 边靓 向荣 +1 位作者 孙丽英 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期89-94,共6页
小麦黄花叶病毒( Wheat yellow mosaic virus,WYMV)属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员,其基因组是由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。其中,VPg( Viral protein genome-linked)作为病毒末端结合蛋白,与病毒基因组RNA ... 小麦黄花叶病毒( Wheat yellow mosaic virus,WYMV)属于马铃薯Y病毒科大麦黄花叶病毒属成员,其基因组是由两条正义单链RNA组成,共编码10个蛋白。其中,VPg( Viral protein genome-linked)作为病毒末端结合蛋白,与病毒基因组RNA 5’端共价连接。利用软件分析WYMV VPg蛋白氨基酸序列发现其N端具有核定位信号( NLS)序列,C端具有核输出信号( NES)序列。通过激光共聚焦显微镜观察VPg与GFP融合蛋白在烟草细胞中的表达情况发现,GFP-VPg主要定位于细胞核中。利用eYFP( n)标记核仁结构蛋白Fibril-larin与VPg进行双分子荧光互补实验发现,VPg与Fibrillarin互作且定位于细胞核中。根据VPg结构特点构建一系列缺失突变体与Fibrillarin的互作实验验证了它们之间的互作区域发生在N端NLS区域。 展开更多
关键词 小麦黄花叶病毒 VPg蛋白 细胞核定位 Fibrillarin蛋白 蛋白质互作
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Nucleus-targeted Dmpl transgene fails to rescue denta defects in Dmpl null mice 预览
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作者 Shu-Xian Lin Qi Zhang +4 位作者 Hua Zhang Kevin Yan Leanne Ward Yong-Bo Lu Jian-Quan Feng 《国际口腔科学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第3期133-141,共9页
Dentin matrix protein 1(DMP1) is essential to odontogenesis. Its mutations in human subjects lead to dental problems such as dental deformities, hypomineralization and periodontal impairment. Primarily, DMP1 is consid... Dentin matrix protein 1(DMP1) is essential to odontogenesis. Its mutations in human subjects lead to dental problems such as dental deformities, hypomineralization and periodontal impairment. Primarily, DMP1 is considered as an extracellular matrix protein that promotes hydroxyapatite formation and activates intracellular signaling pathway via interacting with avb3 integrin. Recent in vitro studies suggested that DMP1 might also act as a transcription factor. In this study, we examined whether full-length DMP1 could function as a transcription factor in the nucleus and regulate odontogenesis in vivo. We first demonstrated that a patient with the DMP1M1 V mutation, which presumably causes a loss of the secretory DMP1 but does not affect the nuclear translocation of DMP1, shows a typical rachitic tooth defect. Furthermore, we generated transgenic mice expressingNLSDMP1, in which the endoplasmic reticulum(ER) entry signal sequence of DMP1 was replaced by a nuclear localization signal(NLS) sequence, under the control of a 3.6 kb rat type I collagen promoter plus a 1.6 kb intron 1. We then crossbred theNLSDMP1 transgenic mice with Dmp1 null mice to express the NLSDMP1 in Dmp1-deficient genetic background. Although immunohistochemistry demonstrated thatNLSDMP1 was localized in the nuclei of the preodontoblasts and odontoblasts, the histological, morphological and biochemical analyses showed that it failed to rescue the dental and periodontal defects as well as the delayed tooth eruption in Dmp1 null mice. These data suggest that the full-length DMP1 plays no apparent role in the nucleus during odontogenesis. 展开更多
关键词 转基因小鼠 细胞核定位 缺陷 牙本质基质蛋白1 信号传导途径 成牙本质细胞 基因突变 转录因子
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短葶山麦冬皂苷C的细胞内分布研究 被引量:1
10
作者 顾文叶 张靖 刘吉华 《药物生物技术》 CAS 2013年第4期336-339,共4页
制备纯化短葶山麦冬皂苷C(DT-13)单克隆抗体,选用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及人宫颈癌细胞(HeLa)为研究对象,通过MTT法筛选给药浓度,以细胞免疫荧光定位法探索DT-13在细胞内的作用分布和蓄积情况及其特点。结果显示,在对细胞无显... 制备纯化短葶山麦冬皂苷C(DT-13)单克隆抗体,选用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及人宫颈癌细胞(HeLa)为研究对象,通过MTT法筛选给药浓度,以细胞免疫荧光定位法探索DT-13在细胞内的作用分布和蓄积情况及其特点。结果显示,在对细胞无显著毒性作用的DT-13浓度下,DT-13能迅速透过细胞膜进入胞浆,逐渐进入细胞核并长时间蓄积。DT-13(5.0μmol/L)在给药30 min前主要分布于人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞的胞浆,给药12 h后主要蓄积于细胞核内且持续时间可达24 h。而对人宫颈癌细胞(HeLa),与HUVEC细胞相比,DT-13(2.5μmol/L)能更快进入并蓄积于细胞核。提示DT-13可能通过作用于细胞核而发挥其主要的生物活性。该方法能直观、可靠、便捷地观察DT-13在细胞内的定位及动态变化,为中药皂苷类活性成分的药效及作用机理研究提供新的技术方法。 展开更多
关键词 短葶山麦冬皂苷C(DT-13) 单克隆抗体 HUVEC HELA细胞 细胞免疫荧光 药物分布 细胞核定位
冠状病毒核衣壳蛋白细胞核定位特征的研究进展 预览
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作者 吕茂杰 冯力 +1 位作者 陈建飞 时洪艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期 577-580,共4页
冠状病毒属于尼多病毒目(Nidovirales),冠状病毒科(Coronaviridae),冠状病毒属(Coronavirus)成员,为单股正链RNA病毒,根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群:第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenterit... 冠状病毒属于尼多病毒目(Nidovirales),冠状病毒科(Coronaviridae),冠状病毒属(Coronavirus)成员,为单股正链RNA病毒,根据其基凶组和抗原性的特征又分为3个群:第1群主要包括猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、 展开更多
关键词 冠状病毒属 细胞核定位 衣壳蛋白 特征 猪传染性胃肠炎病毒 正链RNA病毒 冠状病毒科 virus
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非晶状体βγ-晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物的细胞核转运及其选择性杀伤肿瘤细胞机制的研究 预览 被引量:2
12
作者 何英英 刘树柏 +2 位作者 钱金桥 李文辉 张云 《动物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 386-398,共13页
非晶状体βγ-晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物([ST-CAT)是从大蹼铃蟾(Bombinamaxima)皮肤分泌物中分离的分子量为72kDa的天然蛋白复合物。本研究通过激光共聚焦显微镜和Westemblot分析βγ-CAT在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的细... 非晶状体βγ-晶状体蛋白与三叶因子蛋白复合物([ST-CAT)是从大蹼铃蟾(Bombinamaxima)皮肤分泌物中分离的分子量为72kDa的天然蛋白复合物。本研究通过激光共聚焦显微镜和Westemblot分析βγ-CAT在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中的细胞核转运机制,以及βγ-CAT对多株肿瘤细胞(HCT116,HT29,A375,Hela,THP—1等)的细胞毒效应。结果表明:βγ-CAT的α亚基中含有典型的GTP/ATPase的保守结构模体WalkerA和walkerB,体外检测到βγ-CAT具有GTP/ATP水解酶和GTP/ATP结合活性。在细胞核转运过程中,βγ-CAT的α亚基和B亚基参与形成约150kDa含有泛素化修饰信号的大分子复合物,且泛素化修饰信号和βγ-CAT的α亚基和β亚基共定位于细胞内和融合于细胞核区域的转运囊泡小体中。βγ-CAT能够选择性的杀伤肿瘤细胞,诱导肿瘤细胞脱落和发生凋亡。上述结果为进一步深入研究βγ-CAT的细胞核转运和调节细胞功能的分子作用机制提供思路和线索。 展开更多
关键词 非晶状体βγ-晶状体蛋白 三叶因子 非晶状体βγ-晶状体蛋白和三叶因子蛋白复合物 GTP/ATP水解酶 肿瘤细胞脱落与凋亡 泛素化修饰 细胞核定位
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水稻OsWrky基因的细胞核定位研究 预览 被引量:1
13
作者 齐高燕 郭泽建 《山东农业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2002年第4期 506-508,共3页
绿色荧光蛋白(GFP)基因是一种被广泛应用的报告基因.为了了解克隆的水稻WRKY(OsWrky)基因的核定位性质,将OsWRKY与GFP基因融合,并构建在U biquitin启动子控制的pCambia1301载体上(pCU-OsWrkyGFP).利用基因枪介导的方法将pC U-OsWrkyGFP... 绿色荧光蛋白(GFP)基因是一种被广泛应用的报告基因.为了了解克隆的水稻WRKY(OsWrky)基因的核定位性质,将OsWRKY与GFP基因融合,并构建在U biquitin启动子控制的pCambia1301载体上(pCU-OsWrkyGFP).利用基因枪介导的方法将pC U-OsWrkyGFP导入洋葱内表皮后,荧光显微镜观察GFP的发光部位仅在细胞核内,而作为对照的没有融合OsWRKY基因的载体(pCU-GFP)轰击后细胞质和细胞核中都有荧光.充分说明OsW RKY能作为一个转录因子在细胞核内起作用. 展开更多
关键词 水稻 OsWrky基因 细胞核定位 绿色荧光蛋白 转录因子
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5—脂氧合酶基因打靶小鼠及细胞核定位研究
14
作者 陈新生 王寅 殷明 《中国科学基金》 CSCD 北大核心 2001年第1期19-22,共4页
简要介绍了5-脂氧合酶基因打靶小鼠模型的性质,在各种疾病模型中的表型,以及5-脂氧合酶细胞核定位研究的新进展.
关键词 5-脂氧合酶 基因打靶 细胞核定位 基因调控 白三烯 生物合成 药物研制
卵母细胞核移植中去核技术的探讨 预览 被引量:4
15
作者 杨红 李厚达 +4 位作者 顾惠心 孙强 陈露 李莉 张静 《江苏临床医学杂志》 2001年第5期 369-371,共3页
目的:了解卵母细胞进行去核手术时其去核方法的可靠性.方法:通过2步法对1 756枚卵母细胞进行去核操作.结果:存活1 246枚,存活率71.1%,将存活卵子进行固定、染色后观察,去核完全的卵母细胞有1 070枚,去核率为85.9%,总去核率为61.0%.结论... 目的:了解卵母细胞进行去核手术时其去核方法的可靠性.方法:通过2步法对1 756枚卵母细胞进行去核操作.结果:存活1 246枚,存活率71.1%,将存活卵子进行固定、染色后观察,去核完全的卵母细胞有1 070枚,去核率为85.9%,总去核率为61.0%.结论:此法去核有一定可靠性.细胞核的定位是手术成功的关键,固定针、去核针、注射针的制备是成功的必备条件. 展开更多
关键词 卵母细胞 细胞核定位
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HIV—1Vpr基因在肿瘤细胞中诱导G2期停滞,细胞致?… 被引量:6
16
作者 杨军 Steve Yi 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期 223-226,共4页
目的 通过研究HIV-1 Vpr基因在宫颈癌细胞HeLa中诱导细胞周期G2停滞、细胞致死效应及其核定位功能,探讨将Vpr用于肿瘤的治疗的可能性。方法 用脂质体转染的方法,将携带Vpr或其突变体VprX基因的质粒转入H... 目的 通过研究HIV-1 Vpr基因在宫颈癌细胞HeLa中诱导细胞周期G2停滞、细胞致死效应及其核定位功能,探讨将Vpr用于肿瘤的治疗的可能性。方法 用脂质体转染的方法,将携带Vpr或其突变体VprX基因的质粒转入HeLa细胞内,用流式细胞仪分析Vpr诱导的G2停滞和细胞致死性;用荧光显微镜观察GFP-Vpr融合蛋白的荧光确定其核定位功能。结果 Vpr具有核定位功能,Vpr和VprX蛋白都具有细胞 展开更多
关键词 HIV-1 VPR基因 细胞死亡 细胞核定位 肿瘤细胞
叶酸偶联表阿霉素脂质体的构建及其增强侵袭性乳腺癌细胞摄取和核定位效应的研究
17
作者 卜英子 沐黎敏 +1 位作者 刘磊 吕万良 《中国药学:英文版》 CAS CSCD 2018年第4期229-240,共12页
侵袭性乳腺癌对蒽环类药物表现出较强的抗药性,其原因与药物在癌细胞摄取减少、难以定位到细胞核相关。本研究旨在构建一种叶酸偶联表阿霉素脂质体,将新合成的叶酸-脂质衍生物修饰到脂质体上,以增强侵袭性乳腺癌细胞的药物摄取和细... 侵袭性乳腺癌对蒽环类药物表现出较强的抗药性,其原因与药物在癌细胞摄取减少、难以定位到细胞核相关。本研究旨在构建一种叶酸偶联表阿霉素脂质体,将新合成的叶酸-脂质衍生物修饰到脂质体上,以增强侵袭性乳腺癌细胞的药物摄取和细胞核共定位,从而达到清除癌细胞的效果。研究以侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-435S细胞为模型展开。本研究合成了新型叶酸-PEG2000-DSPE共聚物,并构建了叶酸偶联表阿霉素脂质体,载药脂质体的平均粒径约为100nm;体外试验表明,同对照组相比,叶酸偶联表阿霉素脂质体表现出最强的癌细胞摄取效应和癌细胞核定位效应;并且,构建的载药脂质体表现最强的杀伤侵袭性乳腺癌细胞效应、抑制侵袭性乳腺癌细胞损伤修复效应和对体外乳腺癌肿瘤球最强的穿透效应。因此,构建的叶酸偶联表阿霉素脂质体可通过增加侵袭性乳腺癌细胞摄取及细胞核共定位效应,达到杀伤侵袭性乳腺癌细胞的效果。通过后续开发,叶酸偶联表阿霉素脂质体可望成为一种治疗侵袭性乳腺癌的新型制剂,该研究也为侵袭性乳腺癌治疗提供了潜在的新策略。 展开更多
关键词 叶酸偶联脂质体 表阿霉素 细胞摄取 细胞核定位 侵袭性乳腺癌
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