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泰妙菌素人工完全抗原的制备及其单克隆抗体的研制
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作者 祁艳华 孙国苹 +5 位作者 张改平 陈玉梅 刘燕凯 张静 周景明 王爱萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期174-179,共6页
目的研制灵敏度高、特异性好的抗泰妙菌素(TML)单克隆抗体。方法用肟化法和碳二亚胺法将TML分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫原TML-BSA和包被原TML-OVA,用TML-BSA免疫BALB/c小鼠,经细胞融合并采用间接ELISA筛选抗TM... 目的研制灵敏度高、特异性好的抗泰妙菌素(TML)单克隆抗体。方法用肟化法和碳二亚胺法将TML分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫原TML-BSA和包被原TML-OVA,用TML-BSA免疫BALB/c小鼠,经细胞融合并采用间接ELISA筛选抗TML杂交瘤细胞株,用体内诱生法制备腹水和辛酸-硫酸铵法纯化获得单克隆抗体,并用SDS-PAGE鉴定。结果成功筛选出2株杂交瘤细胞株3B3和4A7,其细胞上清效价分别为1∶1600和1∶6400。纯化后单克隆抗体4A7的效价为5.12×105,半数抑制剂量(IC50)为0.049 ng/mL,亲和力常数Kaff为1.47×10^9 L/mol,与类似物瑞他帕林有2.7%的交叉反应率,与沃尼妙林、氟罗沙星等其他抗生素均无交叉反应。结论成功研制了抗TML单克隆抗体。 展开更多
关键词 泰妙菌素 细胞融合 酶联免疫吸附实验 单克隆抗体
稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞可自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化 预览
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作者 韩辉 代兴亮 +1 位作者 程宏伟 兰青 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期3944-3950,共7页
背景:异种移植瘤中宿主来源间质细胞恶性转化已有报道,但是对恶变的机制知之甚少。目的:旨在使用双色荧光示踪的体内模型研究宿主来源肿瘤间质细胞的恶性转化,并探讨可能的机制。方法:将稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞(g... 背景:异种移植瘤中宿主来源间质细胞恶性转化已有报道,但是对恶变的机制知之甚少。目的:旨在使用双色荧光示踪的体内模型研究宿主来源肿瘤间质细胞的恶性转化,并探讨可能的机制。方法:将稳定转染红色荧光蛋白基因的人脑胶质瘤起始细胞(glioma-initiatingcellstransfectedwithred fluorescent protein gene,GICs-RFP)接种到表达绿光荧光蛋白的裸鼠体内,建立具有2种荧光的动物模型;通过激光共聚焦观察移植瘤的荧光表达;流式细胞仪检测和分选各种荧光细胞,包括绿色荧光蛋白细胞、红色荧光蛋白细胞和表达这2种荧光的融合细胞;体外亚克隆得到具有恶性肿瘤细胞特征的同时表达绿色荧光蛋白/红色荧光蛋白两种荧光的融合细胞;体外鉴定细胞来源、表面标记物和恶性特征,裸鼠皮下移植验证融合细胞致瘤特性。实验经苏州大学动物实验伦理委员会批准,批准号为ECSU-201800090。结果与结论:GICs-RFP在绿色荧光蛋白裸小鼠的体内致瘤率均为100%(14/14);动物移植瘤模型中均可观察到融合细胞,分选、克隆到的融合细胞不仅共表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白,而且共表达GICs-RFP标记物Nestin和骨髓间充质干细胞标记物CD44、CD105和CD29;融合细胞在体外表现出高度增殖活性,较GICs-RFP更具侵袭和迁移特征;融合细胞(1×105个/只)在无胸腺裸小鼠的致瘤率为100%(4/4)。提示GICs-RFP自发融合宿主骨髓间充质干细胞并诱导恶性转化,为肿瘤异质性的细胞来源提供了新的双色荧光示踪的证据。 展开更多
关键词 荧光蛋白示踪 细胞融合 恶性转化 胶质瘤起始细胞 荧光裸小鼠 肿瘤微环境 动物模型 间充质干细胞 肿瘤干细胞
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人降钙素原的原核表达及其单克隆抗体的制备 预览
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作者 刘卿 汪慧 +3 位作者 卢叶 吴亮 陈盛霞 姜旭淦 《江苏大学学报:医学版》 CAS 2019年第3期242-247,共6页
目的:原核表达人降钙素原(procalcitonin,PCT)重组蛋白,制备高纯度的PCT单克隆抗体。方法:将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化,用蛋白质印迹法和胶体金法对其进行鉴定。获得的PCT... 目的:原核表达人降钙素原(procalcitonin,PCT)重组蛋白,制备高纯度的PCT单克隆抗体。方法:将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化,用蛋白质印迹法和胶体金法对其进行鉴定。获得的PCT重组蛋白采用长程免疫法皮下多点注射Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选阳性杂交瘤细胞株并进行亚克隆4次。将细胞株注入小鼠腹腔收集腹腔积液获得单克隆抗体,经辛酸硫酸铵法和Protein G亲和层析法进行纯化。结果:SDS-PAGE电泳结果显示在相对分子质量约14 k Da处有一明显条带,与目的蛋白大小相符。蛋白质印迹法和胶体金法证明该可溶性蛋白为PCT。采用细胞融合技术成功筛选出7株阳性杂交瘤细胞,将其命名为B3,C4,C7,E9,F8,F10,G2。选B3和C4细胞株通过体内诱生法制备单克隆抗体,经纯化后纯度可达95%以上。间接ELISA法检测B3、C4抗体效价均可达10~7,亲和常数分别为5.06×10^8,7.3×10^8。结论:获得高纯度的PCT重组蛋白及其单克隆抗体,为PCT检测试剂盒的进一步研究提供了支持。 展开更多
关键词 降钙素原 细胞融合 单克隆抗体
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一株PRRSV N蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定 预览
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作者 李敏华 王倩 +1 位作者 田志军 金涛 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期279-283,共5页
为了制备具有阻断能力的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb),本研究以PRRSV SD53株感染Marc-145细胞后的上清作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得一株稳定分泌抗PRRSV MAb的杂交瘤细胞株(1H4)。鉴定结果显示,1H4 MAb是Ig... 为了制备具有阻断能力的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的单克隆抗体(MAb),本研究以PRRSV SD53株感染Marc-145细胞后的上清作为免疫原免疫BALB/c雌鼠,筛选获得一株稳定分泌抗PRRSV MAb的杂交瘤细胞株(1H4)。鉴定结果显示,1H4 MAb是Ig G1亚类,轻链为κ链。1H4细胞上清经间接免疫荧光(IFA)检测其效价是1∶40,腹水的IFA效价是1∶3 200。阻断ELISA试验显示1H4 MAb与病毒的结合能够被PRRSV阳性血清阻断。Western blot试验显示1H4 MAb可以特异性识别PRRSV的N蛋白,经截短表达N蛋白鉴定该MAb的抗原识别序列为N蛋白末端aa 107~aa 123。该抗原表位在美洲型PRRSV中高度保守,该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的PRRSV阻断ELISA检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 单克隆抗体 细胞融合 N蛋白 表位鉴定
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抗人釉原蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 预览
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作者 程岚 束蓉 +1 位作者 夏一如 宁航 《口腔生物医学》 2019年第1期17-21,共5页
目的:制备针对人釉原蛋白的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法:用原核表达系统表达纯化的重组人全长釉原蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,采用有限稀释法和间接酶联免疫吸附测定... 目的:制备针对人釉原蛋白的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。方法:用原核表达系统表达纯化的重组人全长釉原蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术融合免疫后小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤SP2/0细胞,采用有限稀释法和间接酶联免疫吸附测定法筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。小鼠体内诱导制备腹水,通过饱和硫酸铵沉淀法和蛋白G亲和层析柱纯化抗体。结果:筛选到3株能稳定分泌抗人釉原蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为H10G1、H3G1、G5H3。腹水单克隆抗体效价分别为1∶243000、1∶729000、1∶729000,纯化后单克隆抗体效价为1∶81000、1∶243000、1∶729000。3株单克隆抗体抗原表位分析显示均识别人釉原蛋白45~149位的氨基酸序列。结论:成功制备出针对人釉原蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究探讨釉原蛋白在牙根发育及牙周再生中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 釉原蛋白 融合蛋白 单克隆抗体 细胞融合
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小鼠抗猪生长抑素单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 黄新喜 吕葆真 +2 位作者 范永红 赵峰 李丹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期362-366,共5页
目的制备生长抑素(SS)单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性进行鉴定。方法用偶联方法制备SS免疫原复合物,用免疫原复合物免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备SS mAb。用间接ELISA检测mAb的亚型及效价,用定量ELISA检测mAb 2E7的含量,用间接E... 目的制备生长抑素(SS)单克隆抗体(mAb),并对其生物学特性进行鉴定。方法用偶联方法制备SS免疫原复合物,用免疫原复合物免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备SS mAb。用间接ELISA检测mAb的亚型及效价,用定量ELISA检测mAb 2E7的含量,用间接ELISA检测mAb的特异性和mAb在体外、体内对SS的中和作用。结果获得两株能稳定分泌SS mAb的杂交瘤细胞株2A5、 2E7,两株抗体的亚型均为IgG1,2A5效价为1∶100000,2E7效价为1∶1 000000, 2E7含量为5.4mg/mL。SS mAb只特异性地和SS纯品及SS免疫原复合物发生免疫反应,不和单纯载体蛋白(牛血清白蛋白)发生免疫反应,也不和其他肽类物质如生长激素、胰岛素、胃泌素发生交叉反应。SS mAb在体外能抑制SS和兔抗SS抗体的免疫反应,注射到体内能中和机体内的SS,从而促进生长激素的分泌。使循环血中生长激素的含量显著增加。结论成功制备了SS mAb,该mAb浓度大、效价高、特异性强,对SS功能具有较强的免疫中和作用。 展开更多
关键词 生长抑素 单克隆抗体 细胞融合 ELISA
黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及基于该抗体的黄曲霉毒素B1免疫学检测方法的建立 预览
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作者 姚静静 胡骁飞 +6 位作者 韩俊岭 徐帆 滕蔓 邢云瑞 孙亚宁 邓瑞广 张改平 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期1405-1414,共10页
为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B1(AFB1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB1单克隆抗体,并将其应用于AFB1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB1完全抗原[AFB1-牛血清白蛋白(BSA)和AFB1-... 为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B1(AFB1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB1单克隆抗体,并将其应用于AFB1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB1完全抗原[AFB1-牛血清白蛋白(BSA)和AFB1-鸡卵白蛋白(OVA)],并免疫BALB/c小鼠。经细胞融合,筛选出能够分泌高灵敏度AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法,大量制备AFB1单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。基于制备的AFB1单克隆抗体,建立AFB1间接竞争ELISA检测方法。结果显示:通过筛选,获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞株9H1F5,经间接ELISA方法测定,获得的AFB1单克隆抗体的效价高达5.12×105,亲和力常数(Ka)=6.72×107L/mol,抗体亚型为免疫球蛋白G2(IgG2)。采用间接竞争ELISA方法测得AFB1的半数抑制浓度(IC50)为0. 232 ng/mL,检测范围为0.014~1.920 ng/mL,最低检测限为0.014 ng/mL。同时,该AFB1单克隆抗体与黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)的交叉反应率分别为40.21%、33.19%、31.96%、4.40%,与其他霉菌毒素无交叉反应。由上述结果可知,本试验成功制备了灵敏度高、特异性强的AFB1单克隆抗体,并基于该抗体建立了检测AFB1的间接竞争ELISA方法,为粮食与饲料中AFB1快速免疫学检测奠定了基础。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 细胞融合 单克隆抗体 ELISA
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例谈高中生物新情境试题的命制与分析
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作者 张慧玲 于伟东 《中学生理科应试》 2019年第3期53-54,共2页
纵观近几年全国高考理综生物试题,不难发现,单纯记忆性知识的考题越来越少,考查能力的试题比重增加.这类试题往往以'新情境'的形式出现,然而考查的知识点却落脚在教材中.体现了生物试题的'高起点、低落点;情在书外、理在书... 纵观近几年全国高考理综生物试题,不难发现,单纯记忆性知识的考题越来越少,考查能力的试题比重增加.这类试题往往以'新情境'的形式出现,然而考查的知识点却落脚在教材中.体现了生物试题的'高起点、低落点;情在书外、理在书中'的命制原则.一、生物试题的命制依据1.从课程标准出发《普通高中生物课程标准(实验)》中确定的课程理念是:提高生物科学素养,面向全体学生,倡导探究性学习,注重与现实生活的联系. 展开更多
关键词 质壁分离 原生质层 果汁生产 神舟四号 细胞融合 纤维素粉 新情境
建立雌酮硫酸钠胶体金免疫层析快速限量检测方法
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作者 巩月红 段新宇 +4 位作者 王建华 赵军 罗俊 温浩 高晓黎 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期352-360,共9页
目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫... 目的:建立一种快速检测孕马尿中雌酮硫酸钠的胶体金免疫层析试纸方法。方法:采用化学合成法将雌酮制备为ESS-17-肟(半抗原),应用混合酸酐法将ESS-17-肟与牛血清白蛋白(BSA)偶联制备为ESS-17-肟-BSA(免疫原),对所得偶联物溶液进行紫外扫描鉴定并计算偶联率。ESS-17-肟-BSA免疫BALB/C小鼠,取血清高滴度小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用ELISA法进行阳性筛选。获得阳性克隆细胞株后于BALB/C小鼠体内诱生腹水制备单克隆抗体,抗体纯化后用胶体金标记,通过正交设计确定最佳实验参数,研制出雌酮硫酸钠胶体金免疫层析试纸条。结果:获得经化学结构修饰后的目标抗原ESS-17-肟-BSA,融合克隆后得到4株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株2D1、7G4、5F3、2A7,其中2D1抗体纯化后特异强,效价达1.0×106。该抗体制备的胶体金层析试纸条的检测限为1μg·L-1,与结构类似物均无交叉反应,此法检测样品结果与高效液相色谱法测定结果比对阳性符合率为85.45%(45/52),阴性符合率为89.58%(43/48),总符合率为88.00%(88/100),结果一致性较好。结论:本研究制备了雌酮硫酸钠免疫原,融合制得抗雌酮硫酸钠特异性单克隆抗体,并研制出以雌酮硫酸钠单克隆抗体为基础的胶体金免疫层析试纸条,能够快速、灵敏地检测孕马尿中的雌酮硫酸钠。 展开更多
关键词 雌酮硫酸钠 半抗原 免疫原 偶联率 细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体 胶体金免疫层析法
犬布鲁氏菌免疫程序设计
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作者 封伟杰 连世存 +5 位作者 宋杰 李明瑶 徐三思 赵初恒 张英 夏青娟 《饲料与畜牧》 2019年第6期71-74,共4页
本研究旨在制定出灭活犬种布鲁氏菌的免疫BALb/C小鼠的最佳免疫程序。选用40只6~8周BALb/C雌性小鼠,随机分为试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,每组10只。制定3种不同的免疫程序,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组三免7 d后尾部采血测血清效价,Ⅲ组四免后小鼠尾... 本研究旨在制定出灭活犬种布鲁氏菌的免疫BALb/C小鼠的最佳免疫程序。选用40只6~8周BALb/C雌性小鼠,随机分为试验组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照组,每组10只。制定3种不同的免疫程序,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组三免7 d后尾部采血测血清效价,Ⅲ组四免后小鼠尾部采血测定血清效价。结果表明,3种免疫程序均可行,其中Ⅱ组免疫程序最佳。即首次免疫剂量为1×10~9 CFU/只,抗原与佐剂等比例乳化;两周后进行二免,剂量为2×10~9 CFU/只,抗原与佐剂等比例乳化;两周后进行三免,剂量为3×10~9 CFU/只,抗原与佐剂等比例乳化,融合前3 d不加佐剂加强免疫,剂量为4×10~9 CFU/只。 展开更多
关键词 犬布鲁氏菌 免疫程序 细胞融合
精子与肿瘤细胞融合模型的建立 预览 被引量:1
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作者 陈强 靳广毅 +3 位作者 林桂淼 刘好 许改霞 王晓梅 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2018年第2期144-149,共6页
目的:构建一种稳定的精子与肿瘤细胞融合体系,为精子与肿瘤细胞融合研究提供生物模型。方法:采用体外共培养的方式进行精子与HeLa细胞等多种肿瘤细胞的融合实验;采用共聚焦显微镜三维重建成像的方法对精子与肿瘤细胞融合现象进行确证;... 目的:构建一种稳定的精子与肿瘤细胞融合体系,为精子与肿瘤细胞融合研究提供生物模型。方法:采用体外共培养的方式进行精子与HeLa细胞等多种肿瘤细胞的融合实验;采用共聚焦显微镜三维重建成像的方法对精子与肿瘤细胞融合现象进行确证;采用嵌套式培养体系作为融合实验的对照研究;采用自主合成的精子与肿瘤细胞共培养基(STCM)对精子与肿瘤细胞融合模型进行优化。结果:精子与肿瘤细胞在体外可以发生融合,融合事件多发生于共培养后的1.5~2h,精子与肿瘤细胞融合形成的嵌合型肿瘤细胞呈明显的球形改变,其贴附能力明显下降,通常漂浮于培养中。与RPMI1640培养基相比较,STCM能够在不影响肿瘤细胞生长的情况下,显著提高精子与肿瘤细胞的融合率(P<0.05),并且能够加速精子与肿瘤细胞地融合。结论:采用体外共培养的方法,我们建立了精子与肿瘤细胞融合的生物模型。 展开更多
关键词 精子 肿瘤细胞 细胞融合 嵌合细胞
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蚊细胞融合病毒研究进展 预览
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作者 郝嘉男 秦成峰 《新发传染病电子杂志》 2018年第2期88-90,共3页
细胞融合病毒最早由Stollar和Thomas和在埃及伊蚊细胞系(源自Peleg的蚊子胚胎)当中发现^[1]。他们将埃及伊蚊细胞的培养液低速离心,然后在上清液加入未稀释的白纹伊蚊单层细胞液。在室温孵育60分钟后,去除残留白纹伊蚊细胞液,培养液继续... 细胞融合病毒最早由Stollar和Thomas和在埃及伊蚊细胞系(源自Peleg的蚊子胚胎)当中发现^[1]。他们将埃及伊蚊细胞的培养液低速离心,然后在上清液加入未稀释的白纹伊蚊单层细胞液。在室温孵育60分钟后,去除残留白纹伊蚊细胞液,培养液继续在28℃环境下用MM培养基培养。当细胞融合已经变得充分(约72小时后),低速离心培养液,获得的上清液即为细胞融合病毒的病毒液。通过梯度沉降速率实验对比Sindbis病毒^[2]发现,细胞融合病毒类似B类披膜病毒。经过脱氧胆酸盐和乙醚处理的细胞融合病毒在感染白纹伊蚊细胞后的细胞病变效应消失,提示细胞融合病毒具有包膜必需的脂类物质。在细胞融合病毒感染白纹伊蚊细胞后60小时,可以观察到明显的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),到76小时后90%以上的细胞出现CPE。通过观察细胞融合病毒的生长曲线,发现其在12小时之内有一段潜伏期类似B类披膜病毒,而通过电镜观察到病毒颗粒大小约为50nm,与B类披膜病毒类似^[3]。 展开更多
关键词 Sindbis病毒 细胞融合 蚊子 细胞病变效应 白纹伊蚊 Thomas effect 埃及伊蚊
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添加RGD短肽的新型培养基对细胞生长、融合及外源基因表达的影响
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作者 王佩佩 魏大鹏 朱彤波 《四川大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第2期200-204,共5页
目的 在普通培养基中添加RGD短肽制备新型培养基,观察新型培养基对细胞生长状态、杂交瘤细胞融合和外源基因表达的影响。方法 以普通培养基为对照,在普通培养基中添加不同质量浓度的RGD制备新型培养基,通过观察人胰腺上皮细胞株HPDE6-C... 目的 在普通培养基中添加RGD短肽制备新型培养基,观察新型培养基对细胞生长状态、杂交瘤细胞融合和外源基因表达的影响。方法 以普通培养基为对照,在普通培养基中添加不同质量浓度的RGD制备新型培养基,通过观察人胰腺上皮细胞株HPDE6-C7的生长增殖情况确定RGD的最佳质量浓度,然后,在培养基中接种不同浓度(5×10~4、10~5、5×10~5 mL~(-1))的HPDE6-C7细胞,通过倒置显微镜观察细胞的形态、贴壁、长势和密度情况;再分别用普通培养基和添加RGD短肽的新型培养基进行杂交瘤细胞的融合,比较两种培养基融合后克隆形成率和克隆阳性率的差异;通过转染含绿色荧光蛋白(GFP)的质粒观察其荧光强度的方法和转染过表达KRAS质粒观察其蛋白表达的方法,观察添加RGD短肽的新型培养基相比普通培养基在转染外源基因表达水平方面的优势。结果 RGD短肽使用的最佳质量浓度为10~ng/mL;添加RGD短肽的新型培养基所培养的细胞相比普通培养基形态更佳、贴壁更好、增殖更快。同时,添加RGD短肽的新型培养基应用于细胞融合所形成克隆的百分率和克隆阳性率均高于普通培养基(P〈0.05);与普通培养基比较,此新型培养基在转染外源基因GFP后荧光强度更高(P〈0.05),表达外源基因KRAS的蛋白水平也更高(P〈0.05)。结论 添加RGD短肽的新型培养基在细胞生长状态、杂交瘤细胞融合及外源基因表达方面有突出优势,RGD短肽应用于细胞培养可能具有广泛前景和潜在的价值。 展开更多
关键词 新型培养基 RGD 细胞融合 外源基因
多层螺旋CT对腮腺基底细胞腺瘤的诊断价值 预览
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作者 曾晔 刘芬 《现代医药卫生》 2018年第20期3212-3214,共3页
目的 探讨多层螺旋CT(MSCT)对腮腺基底细胞腺瘤(BCA)的诊断价值。方法 回顾性分析2012—2017年在南华大学附属第一医院及南华大学附属第二医院经手术病理确诊的14例腮腺BCA患者的MSCT影像表现,并复习相关国内外文献资料。结果 14例... 目的 探讨多层螺旋CT(MSCT)对腮腺基底细胞腺瘤(BCA)的诊断价值。方法 回顾性分析2012—2017年在南华大学附属第一医院及南华大学附属第二医院经手术病理确诊的14例腮腺BCA患者的MSCT影像表现,并复习相关国内外文献资料。结果 14例患者中男5例,女9例;中位年龄53.5岁。病灶均单侧单发,右侧10例,左侧4例;其中10例病灶位于腮腺浅叶,4例病灶跨深浅叶生长,病灶边界清晰;13例病灶呈圆形或椭圆形,1例病灶形态不规则,见浅分叶征;11例病灶最大径小于30 mm,3例病灶最大径超过30 mm;5例病灶密度均匀或较均匀,1例病灶边缘见点状钙化,8例病灶见囊变坏死,其中3例病灶囊变坏死区超过50%。所有病例均进行了增强扫描,13例病灶实性部分呈渐进性强化,1例病灶动脉期强化明显(CT值约为107 HU),静脉期强化程度稍减弱(CT值约为97 HU);12例病灶增强扫描动脉期及静脉期CT值均为100 HU,2例病灶动脉期及静脉期CT值均小于100 HU。结论 腮腺BCA的影像表现具有一定特征性,MSCT增强扫描有助于反映腮腺BCA的影像学特点,具有一定的诊断价值。 展开更多
关键词 腮腺 腺瘤 细胞融合 基底细胞腺瘤 多排螺旋CT
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PEG诱导鸡血细胞融合实验方法比较 预览
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作者 黄伟伟 颜华 +1 位作者 高梅 李绍军 《生物化工》 2018年第2期112-114,共3页
细胞融合技术是细胞生物学的一项核心技术,在科学研究、医药开发、农业育种等方面有着广泛应用。PEG法诱导鸡血细胞融合实验也被作为细胞生物学本科实验的一项重要内容,但在实验课程中的融合效果不佳。笔者查阅相关细胞生物学实验指导... 细胞融合技术是细胞生物学的一项核心技术,在科学研究、医药开发、农业育种等方面有着广泛应用。PEG法诱导鸡血细胞融合实验也被作为细胞生物学本科实验的一项重要内容,但在实验课程中的融合效果不佳。笔者查阅相关细胞生物学实验指导教材和文献,发现存在两种截然不同的PEG法诱导鸡血细胞融合操作方法。因此,本文对两种方法进行了比较,并进一步讨论了影响PEG法诱导鸡血细胞融合效率的重要因素和改进方法。 展开更多
关键词 细胞融合 PEG 鸡血细胞 实验优化
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基于生物学核心素养的同课异构评析与思考——以“动物细胞融合与单克隆抗体”为例
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作者 夏涛 朱娅楠 李雪峰 《中学生物教学》 2018年第11期69-71,共3页
《普通高中生物学课程标准(2017年版)》提出了生物学学科核心素养。生物学学科核心素养主要包括生命观念、科学探究、科学思维和社会责任四个方面,是学生在面对真实情境中的生物学问题时所表现出来的必备品格和关键能力。核心素养所... 《普通高中生物学课程标准(2017年版)》提出了生物学学科核心素养。生物学学科核心素养主要包括生命观念、科学探究、科学思维和社会责任四个方面,是学生在面对真实情境中的生物学问题时所表现出来的必备品格和关键能力。核心素养所包含的四个关键词是相互融合、相辅相成的,能够更好地涵盖生物学科本身的特点。 展开更多
关键词 高中生物学 单克隆抗体 素养 细胞融合 同课异构 动物 课程标准 生命观念
精子与肿瘤细胞融合模型的生物学特性研究 预览
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作者 陈强 靳广毅 +3 位作者 林桂淼 刘好 许改霞 王晓梅 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2018年第3期221-225,共5页
目的:探讨精子与肿瘤细胞融合模型的生物学特性.方法:采用体外共培养对精子与肿瘤细胞融合模型的时效性、细胞接种密度依赖性及细胞类型特异性进行分析.采用显微操作及单克隆培养法获得小鼠精子与HeLa细胞融合的嵌合型单克隆细胞株,... 目的:探讨精子与肿瘤细胞融合模型的生物学特性.方法:采用体外共培养对精子与肿瘤细胞融合模型的时效性、细胞接种密度依赖性及细胞类型特异性进行分析.采用显微操作及单克隆培养法获得小鼠精子与HeLa细胞融合的嵌合型单克隆细胞株,并对其进行生物学鉴定.采用体外扩增Y染色体特异基因TSPy的方法鉴别宫颈癌石蜡组织中的嵌合型肿瘤细胞.结果:精子与肿瘤细胞在体外的融合通常发生于共培养后的1.5 h,精子与肿瘤细胞融合率随细胞接种密度的升高而降低,精子与腺癌来源的肿瘤细胞具有更高的细胞融合率.在20例宫颈癌蜡块标本中我们发现1例存在嵌合型肿瘤细胞,而且其TSPY基因存在1处有义突变.结论:精子与肿瘤细胞融合存在时效性、细胞接种密度依赖性及细胞类型特异性特征.在宫颈癌标本中存在嵌合型肿瘤细胞. 展开更多
关键词 精子 肿瘤细胞 细胞融合 嵌合细胞
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肿瘤干细胞的研究进展 预览 被引量:1
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作者 詹晓勇 朱庆义 《中华临床实验室管理电子杂志》 2018年第2期74-79,共6页
目前,越来越多的证据表明肿瘤干细胞对肿瘤发生和发展起着至关重要的作用。肿瘤干细胞理论也被广泛接受,并对肿瘤发生、侵袭性生长、复发和转移以及治疗新策略发展提供了新观点。随着对肿瘤干细胞生物学研究的深入,必将为肿瘤的诊治提... 目前,越来越多的证据表明肿瘤干细胞对肿瘤发生和发展起着至关重要的作用。肿瘤干细胞理论也被广泛接受,并对肿瘤发生、侵袭性生长、复发和转移以及治疗新策略发展提供了新观点。随着对肿瘤干细胞生物学研究的深入,必将为肿瘤的诊治提供帮助。现将肿瘤干细胞的理论与模型、肿瘤干细胞的起源和分类的最新研究进展阐述如下。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 起源 分类 细胞融合
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线粒体的奥秘:细胞繁殖发育中的重要角色
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作者 陶诗秀 《飞碟探索》 2018年第6期64-65,共2页
近期研究发现,性细胞的融合及发育不仅取决于双亲细胞基因,还受到一种细胞器的影响,这就是线粒体。在长期的进化中,生物体逐步将生殖功能局限于特殊器官,以减小性细胞融合时的不稳定性。
关键词 细胞基因 繁殖发育 线粒体 生殖功能 不稳定性 细胞融合 细胞 生物体
伪狂犬病毒被膜蛋白VP22单克隆抗体的制备及免疫电镜方法的建立
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作者 刘慧敏 陈利红 +3 位作者 史智宾 刘春国 仇铮 王靖飞 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第11期37-40,252共5页
为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫... 为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫后进行细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆,抗体亚类试剂盒鉴别抗体亚类,收集第5,10,20代次的杂交瘤细胞上清液用ELISA法检测其效价,Western-blot法鉴定其特异性,将该抗体分别稀释50,100,200倍并作为一抗,免疫电镜检测VP22蛋白的表达效果。结果表明:获得1株稳定分泌VP22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞(3D6),该单克隆抗体的亚类为IgM,能与VP22蛋白发生特异性反应,100倍稀释的单克隆抗体可达到利用免疫电镜技术检测细胞内该蛋白表达的最佳效果。说明筛选得到的PRV被膜蛋白VP22单克隆抗体和建立的免疫电镜方法可用于该病毒的致病性及装配机制研究。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 被膜蛋白 单克隆抗体 细胞融合 杂交瘤细胞 免疫电镜
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