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原癌基因PIM-2转录蛋白生物信息学分析 预览
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作者 周小东 郑崛村 《河南师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2016年第1期142-148,179共8页
目的:研究原癌基因PIM-2的抗凋亡、致癌机理,用生物信息学的方法分析转录蛋白,为临床应用提供科学依据和理论基础.方法使用pbil,expasy,RasMol,DNAStar Lasergene等生物信息学在线服务器和相关软件,对PIM-2转录蛋白进行全面分... 目的:研究原癌基因PIM-2的抗凋亡、致癌机理,用生物信息学的方法分析转录蛋白,为临床应用提供科学依据和理论基础.方法使用pbil,expasy,RasMol,DNAStar Lasergene等生物信息学在线服务器和相关软件,对PIM-2转录蛋白进行全面分析预测.结果:成功预测出PIM-2转录蛋白的空间结构,各种理化性质,该蛋白是一种不稳定的酸性蛋白,序列上分布着17段B细胞抗原表位,14段Th细胞抗原表位,3段CTL细胞表位,多段MCH1分子结合肽和MCH11分子结合肽.结论:PIM-2转录蛋白的结构、表位、特性、修饰具有重要意义,可为深入研究原癌基因Pim-2的作用机理提供科学依据和理论帮助。 展开更多
关键词 原癌基因 PIM-2 生物信息学 结合
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Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及结合肽的筛选 被引量:1
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作者 王臣 杨静 +3 位作者 张巫凡 郭香玲 吴庭才 陈溥言 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期473-478,共6页
为鉴定与I型鸭肝炎病毒(DHV-1)特异性结合的多肽,通过基因工程方法获得DHV-1 VP1蛋白,并以DHV-1 VP1蛋白作为靶标,利用噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选。ELISA鉴定结果显示,10个噬菌体克隆与VP1蛋白有较强的体外结合特性;竞争抑制试... 为鉴定与I型鸭肝炎病毒(DHV-1)特异性结合的多肽,通过基因工程方法获得DHV-1 VP1蛋白,并以DHV-1 VP1蛋白作为靶标,利用噬菌体随机12肽库进行3轮亲和筛选。ELISA鉴定结果显示,10个噬菌体克隆与VP1蛋白有较强的体外结合特性;竞争抑制试验结果表明,VP1蛋白对噬菌体克隆P4与P6结合具有阻断作用。对P4和P6克隆的序列测定结果显示,插入的12肽序列分别为P4-12:LLSPGTHHSPWP;P6-12:LLADTTHHRPWT,其保守序列为THHXPW。体外试验结果显示,多肽P4-12和P6-12本身对鸭胚成纤维细胞的增殖无明显影响,多肽P4-12和P6-12在0.02、0.2、2、20 g/m L浓度时均能显著降低DHV-1在鸭胚成纤维细胞中的病毒效价和病毒拷贝数。以上结果表明,多肽P4-12和P6-12均能抑制DHV-1在鸭胚成纤维细胞中的增殖,这一研究结果为进一步探明DHV-1与宿主细胞的相互作用及抗病毒制剂的开发提供了试验线索。 展开更多
关键词 I型鸭肝炎病毒 VP1蛋白 鸭胚成纤维细胞 噬菌体展示 结合
法氏囊活性肽-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能机制 被引量:1
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作者 郭香玲 王臣 +3 位作者 李小康 汪洋 吴庭才 陈溥言 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期22-27,共6页
目的:研究法氏囊活性肽(Bursal-derived pentapeptide,BPP)-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法:采用不同质量浓度(0.02、0.2、2、20μg/ml)的BPP-Ⅱ分别处理小鼠B细胞淋巴瘤细胞WEHI-231、人鼻咽癌细胞CNE、大鼠肝癌... 目的:研究法氏囊活性肽(Bursal-derived pentapeptide,BPP)-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法:采用不同质量浓度(0.02、0.2、2、20μg/ml)的BPP-Ⅱ分别处理小鼠B细胞淋巴瘤细胞WEHI-231、人鼻咽癌细胞CNE、大鼠肝癌细胞RH-35和正常细胞系人胚肾细胞293、猪肾细胞PK15、中国仓鼠卵巢细胞CHO,48 h后采用MTT法检测细胞增殖情况;以双荧光素酶报告系统和Western blotting方法检测BPP-Ⅱ对荧光素酶标记的p53-Luc质粒转染的Vero细胞中p53转录活性和P53蛋白表达的影响;利用噬菌体随机12肽库筛选BPP-Ⅱ特异性结合肽,人工合成BPP-Ⅱ结合肽,采用MTT法检测BPP-Ⅱ结合肽对BPP-Ⅱ抗WEHI-231细胞增殖能力的影响。结果:2和20μg/ml的BPP-Ⅱ对肿瘤细胞WEHI-231、CNE、RH-35的增殖均有抑制作用(均P<0.05),而对正常细胞系293、PK15、CHO的增殖均不表现出抑制作用。BPP-Ⅱ明显激活p53基因的转录,并上调P53蛋白的表达。应用噬菌体展示技术筛选获得3个BPP-Ⅱ结合肽P3-12、P5-12、P6-12,其中2和20μg/ml的P3-12能显著抑制BPP-Ⅱ的抗WEHI-231细胞增殖能力[(97.5±3.4)%、(98.9±3.5)%vs(86.3±1.9)%,P<0.05];20μg/ml的P5-12和P6-12均能显著抑制BPP-Ⅱ的抗WEHI-231细胞增殖能力[(96.7±3.1)%、(95.4±3.8)%vs(86.3±1.9)%,P<0.05]。结论:BPP-Ⅱ可特异性抑制WEHI-231、CNE、RH-35等肿瘤细胞增殖,其机制可能与激动p53信号通路有关。 展开更多
关键词 法氏囊活性-Ⅱ 肿瘤细胞 抗肿瘤 结合 p53信号通路
苏云金芽孢杆菌Vip3Aa10毒素结合肽的筛选及活性测定 预览 被引量:2
4
作者 丁照鑫 王涵祎 +3 位作者 曹利娟 郝艳同 申晓鸿 刘京国 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第18期3627-3634,共8页
【目的】Vip3A是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素,其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术,论文试图从肽库中筛选到能与Vip3A毒素特... 【目的】Vip3A是由苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)在对数生长期产生并分泌到胞外的对鳞翅目昆虫有较广杀虫谱的毒素,其在敏感昆虫中肠上的结合受体尚未得到鉴定。利用噬菌体展示技术,论文试图从肽库中筛选到能与Vip3A毒素特异性结合的多肽,为研究Vip3A毒素的杀虫模式提供线索。【方法】将构建的p ET28a-Vip3Aa10表达质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,用亲和纯化的方法制备Vip3Aa10,并用胰蛋白酶活化和离子交换层析进一步纯化。以活化的Vip3Aa10毒素为诱饵,经“吸附-洗脱-扩繁”4轮条件逐渐严格的淘选,从噬菌体随机肽库中筛选能特异性地与活化的Vip3Aa10结合的噬菌体。以筛选到的噬菌体基因组DNA为模板,经PCR扩增和测序,获得插入到噬菌体上的外源基因的序列,并推导出相应多肽的氨基酸序列。将化学合成的多肽与活化的Vip3Aa10一起与甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)刷状缘膜囊泡共育后,用免疫印迹方法检测多肽对活化的Vip3Aa10与BBMV结合的影响。将合成的多肽与活化的Vip3Aa10一起涂布在饲料表面,晾干后,每孔放1只1龄的甜菜夜蛾幼虫。6 d后统计昆虫死亡情况。【结果】在25℃条件下用IPTG诱导含p ET28a-Vip3Aa10质粒的大肠杆菌BL21(DE3)可以表达出可溶性的Vip3Aa10蛋白。经亲和纯化、胰蛋白酶活化以及离子交换层析后,可得到较纯的活化的Vip3Aa10。以活化的Vip3Aa10为诱饵,经过4轮条件逐渐严格的淘选,从十二肽库中筛选出9条多肽,其中3条多肽的丰度较高,分别命名为P12-1、P12-2和P12-3,从七肽库中筛选出5条多肽,其中1条多肽的丰度较高,命名为P7-1。结合试验和杀虫活性测定试验结果表明,P12-2和P7-1多肽能不同程度地抑制Vip3Aa10与甜菜夜蛾刷状缘膜囊泡的结合,以及抑制Vip3Aa10的杀虫活性。【结论】用噬菌体展示技术筛选的多肽P7-1能显著性地抑制V 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 营养期杀虫蛋白 结合 筛选 活性分析
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法氏囊活性五肽BP5特异性结合肽的筛选及鉴定 预览 被引量:3
5
作者 王臣 郭香玲 +5 位作者 李小康 汪洋 张春杰 吴庭才 李德元 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期966-970,共5页
为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌... 为鉴定与具有免疫调节功能和抗肿瘤潜能的法氏囊活性五肽(BP5)特异性结合的多肽,本研究利用噬菌体展示技术,以BP5-BSA为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行4轮亲和筛选,结合ELISA鉴定和竞争抑制试验,筛选出3个能够特异性与BP5结合的噬菌体阳性克隆.测序结果显示,其编码的12肽序列分别为:PINMQTLNCMAA(P2-12)、GCTLNPMSDLLG(P6-12)和MSSTLNGMLNSL(P7-12),其核心基序为TLNXM.通过人工合成P2-12、P6-12、P7-12多肽,并采用MTT法检测其对BP5抗肿瘤细胞增殖能力的影响,结果显示,P2-12和P7-12肽在0.2 μg/mL~20 μg/mL浓度下,P6-12肽在2μg/mL~20 μg/mL浓度下均能够抑制BP5抗小鼠WEHI-231 B淋巴瘤细胞增殖作用,其中P2-12在20 μg/mL浓度下抑制作用最为显著(p<0.01).此外,p53荧光素酶活性检测结果显示,这3种BP5结合肽在实验浓度下均能够下调BP5促p53基因转录的活性.以上结果表明,这3种BP5特异性结合肽具有下调BP5抗肿瘤活性.本研究为进一步研究BP5抗肿瘤细胞增殖作用的机制提供了相关的实验依据. 展开更多
关键词 法氏囊 活性五 噬菌体随机 抗肿瘤 结合
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乙型肝炎病毒表面抗原特异性结合肽的筛选与鉴定 预览
6
作者 孙鸣 马智勇 +2 位作者 黄朝阳 胡斌 沈关心 《检验医学与临床》 CAS 2014年第5期577-579,582共4页
目的:筛选并鉴定与乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg )特异性结合的多肽。方法将酵母表达的HBsAg包被在微孔板上,加入噬菌体进行随机肽库筛选,经过4轮筛选后,随机挑取15个克隆进行DNA测序,并通过夹心ELISA方法鉴定其亲和力,采用剂量... 目的:筛选并鉴定与乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg )特异性结合的多肽。方法将酵母表达的HBsAg包被在微孔板上,加入噬菌体进行随机肽库筛选,经过4轮筛选后,随机挑取15个克隆进行DNA测序,并通过夹心ELISA方法鉴定其亲和力,采用剂量依赖结合实验和竞争抑制实验检测其与 HBsAg结合的特异性。结果经过4轮筛选,得到一优势克隆No .3,展示肽段为SSYAPYVWQPIA ,与 HBsAg有较强的亲和力,剂量依赖结合实验和竞争抑制实验证明克隆No .3与HBsAg的结合是特异性的。结论利用噬菌体展示肽库技术可以获得HBsAg特异性结合肽,此多肽可以作为靶向分子用于乙型肝炎的基因治疗,为乙型肝炎的靶向基因治疗奠定实验基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒表面抗原 噬菌体展示 结合
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Neuropilin-1高亲和肽的筛选及初步鉴定 预览
7
作者 张璟宏 周辉霞 《海南医学院学报》 CAS 2013年第4期442-445,448共5页
目的:利用合成的重组Neuropilin-1的蛋白分子对噬茵体随机七肽库进行筛选,以期获得能与Neuropilin-1分子具高亲和活性的小肽分子,并对其功能进行初步鉴定。方法:对包被好的rhNeuropi—lin'1蛋白,经过三轮“吸附-洗脱-扩增”后,EL... 目的:利用合成的重组Neuropilin-1的蛋白分子对噬茵体随机七肽库进行筛选,以期获得能与Neuropilin-1分子具高亲和活性的小肽分子,并对其功能进行初步鉴定。方法:对包被好的rhNeuropi—lin'1蛋白,经过三轮“吸附-洗脱-扩增”后,ELlSA鉴定阳性克隆,DNA测序和分析,竞争抑制试验进一步分析其相关化学合成多肽的功能。结果:经3轮亲和筛选后,噬茵体克隆得到有效富集,ELISA鉴定结果显示2个阳性克隆具有较强结合活性。DNA测序显示其具有*FPS***的一致基序。阳性克隆与Neuropilin-1分子的结合能被其相关化学合成多肽FITC-DFPSPLW所抑制。结论:利用噬茵体随机展示肽库技术获得了与Neuropilin-1分子具特异性结合能力的小肽分子,为进一步基于Neuropilin-1的肿瘤血管生成抑制的研究奠定基础。 展开更多
关键词 NEUROPILIN-1 噬菌体 结合 淘选
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补体蛋白C3c与抑制剂Compstatin的结合自由能计算 预览
8
作者 杨威 张峰 +1 位作者 马志 郑俊峰 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期154-159,共6页
采用分子动力学模拟取样,运用MM-PBSA方法计算了人类C3c-Compstatin复合物的结合自由能。通过能量分解方法探究了人类补体蛋白C3c上抑制剂结合域MG4-MG5(巨球蛋白区域)上的主要残基与配体Compstatin纤维蛋白之间的相互作用和识别。... 采用分子动力学模拟取样,运用MM-PBSA方法计算了人类C3c-Compstatin复合物的结合自由能。通过能量分解方法探究了人类补体蛋白C3c上抑制剂结合域MG4-MG5(巨球蛋白区域)上的主要残基与配体Compstatin纤维蛋白之间的相互作用和识别。结果表明:C3c与补体抑制剂Compstatin的理论结合自由能(-8.06kcal/mol)与试验值(-6.72kcal/mol)吻合较好,分子内能总和(-177.24kcal/mol)对补体抵制剂的结合贡献最大,其次为真空静电作用能(-108.74kcal/mol)和范德华作用能(-68.51kcal/mol)。作为对结晶试验的补充,进行了C3c蛋白和小分子抑制剂之间结合的动态过程以及在两者结合的影响下蛋白形态变化的分子动力学模拟,结果发现C3c上的残基ARG459、ASP491、MET457和Compstatin上的残基Ⅱu阿、TRP4、HIS10为结合自由能作出了主要贡献。该结果对进-步研究C3补体抑制剂的机制提供了结构方面的信息。 展开更多
关键词 分子动力学 MM-PBSA GBSA方法 结合自由能 补体蛋白C3c 结合
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牙釉质结合肽的淘选及亲和力分析的实验研究 被引量:2
9
作者 魏蔚 彭周 +3 位作者 邓捷 赵婷 张威 毛靖 《临床口腔医学杂志》 2013年第8期451-453,共3页
目的:利用噬菌体表面随机肽展示技术淘选获得牙釉质结合肽。方法:以经过预处理的牙釉质片为模板,通过四轮淘选获得牙釉质结合肽的富集。从第3轮和第4轮产物中分离出总计20条单克隆进行测序及亲和力分析。结果:产物中噬菌体滴度在第... 目的:利用噬菌体表面随机肽展示技术淘选获得牙釉质结合肽。方法:以经过预处理的牙釉质片为模板,通过四轮淘选获得牙釉质结合肽的富集。从第3轮和第4轮产物中分离出总计20条单克隆进行测序及亲和力分析。结果:产物中噬菌体滴度在第2轮产物中得到最大富集之后逐渐下降。所测序的20个单克隆中没有发现共有序列。其中有4个单克隆具有明显的强于WM13噬菌体的牙釉质结合力。结论:四个序列被认为具有较强的牙釉质结合能力。所测序列中未发现明显的共有序列。 展开更多
关键词 牙釉质 结合 噬菌体展示 亲和力分析
Affinity peptide developed by phage display selection for targeting gastric cancer 预览 被引量:3
10
作者 Wen-Jie Zhang Yan-Xia Sui +5 位作者 Arun Budha Jian-Bao Zheng Xue-Jun Sun Ying-Chun Hou Thomas D Wang Shao-Ying Lu 《世界胃肠病学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2012年第17期 2053-2060,共8页
瞄准:开发绑在为早胃的癌症的察觉使用的胃的癌症的亲密关系肽。方法:一幅肽屏幕被 biopanning 执行 PhD-12 噬菌体显示图书馆,对肿瘤邻近的正常出现胃的 mucosa 的变清的非特定的文件夹和对刚收获的胃的癌症纸巾的获得的选择绑定。... 瞄准:开发绑在为早胃的癌症的察觉使用的胃的癌症的亲密关系肽。方法:一幅肽屏幕被 biopanning 执行 PhD-12 噬菌体显示图书馆,对肿瘤邻近的正常出现胃的 mucosa 的变清的非特定的文件夹和对刚收获的胃的癌症纸巾的获得的选择绑定。选择的肽的指向肿瘤的绑定被界限噬菌体计数,连接酶的 immunosorbent 试金,竞争抑制,荧光显微镜学和半量的分析用癌症纸巾的不同类型在 immunohistochemistry 上证实。结果:约 92.8% 非特定的噬菌体克隆对正常在二轮 biopanning 以后从原来的噬菌体图书馆被减去 -- 出现胃的 mucosa。在以后第三轮积极屏蔽,肽顺序 AADNAKTKSFPV (AAD ) 出现在 25%(12/48 ) 分析噬菌体。为控制肽,这些价值是 6.8 展开更多
关键词 噬菌体展示 结合 亲和力 胃癌 酶联免疫吸附试验 噬菌体抗体库 非特异性 竞争性抑制
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人锌转运蛋白8的HLA-A~*0201限制性CTL表位的预测及初步验证 被引量:1
11
作者 李树法 张敏 陈兵 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期880-883,共4页
目的预测和初步鉴定1型糖尿病(T1DM)主要自身抗原锌转运蛋白8(ZnT8)的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)表位,为基于ZnT8抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选取BIMAS预测工具预测该抗原HLA-... 目的预测和初步鉴定1型糖尿病(T1DM)主要自身抗原锌转运蛋白8(ZnT8)的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)表位,为基于ZnT8抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选取BIMAS预测工具预测该抗原HLA-A*0201限制性结合肽,人工合成待测表位肽,利用T2细胞株测定各肽与HLA-A*0201分子的结合力。利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immunospotassay,ELISPOT)方法检测候选肽刺激T1DM患者外周血单个核细胞分泌IFN-γ和IL-2的能力,利用标准51Cr释放试验检测特异性CTL诱导活性。结果在所筛选的5个候选CTL表位中,ZnT8(107-115)、ZnT8(115-123)及ZnT8(145-153)与HLA-A*0201分子具有较高的结合荧光强度,可在体外有效诱导抗原特异性CTL的产生,刺激T1DM患者PBMC分泌IFN-γ和IL-2,并对抗原肽负载的T2细胞具有明显的杀伤效应。结论 ZnT8(107-115)、ZnT8(115-123)及ZnT8(145-153)可能是HLA-A*0201限制性CTL表位,为基于人ZnT8抗原表位的特异性免疫治疗奠定理论基础。 展开更多
关键词 HLA-A*0201 CTL 结合 表位 限制性
人骨肉瘤细胞特异性结合肽的筛选及验证 预览 被引量:3
12
作者 卢坤 姜勇 +4 位作者 管明强 肖军 王健 李郅涵 史占军 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期 647-650,共4页
目的获得人骨肉瘤细胞MG63特异性结合肽,为骨肉瘤靶向治疗奠定基础。方法应用噬菌体展示技术,以人骨肉瘤细胞作为靶细胞,293T细胞为差减细胞,筛选获得MG-63细胞特异性结合肽。酶联免疫法进行靶向性验证。应用荧光染色技术初步探讨短肽... 目的获得人骨肉瘤细胞MG63特异性结合肽,为骨肉瘤靶向治疗奠定基础。方法应用噬菌体展示技术,以人骨肉瘤细胞作为靶细胞,293T细胞为差减细胞,筛选获得MG-63细胞特异性结合肽。酶联免疫法进行靶向性验证。应用荧光染色技术初步探讨短肽细胞受体位置。制作人骨肉瘤模型,尾静脉注射目标噬菌体,免疫组化检测其靶向性。结果经过四轮一步有机相离心分离方法,获得了与骨肉瘤细胞特异性结合的短肽,并测序获得其中出现次数最多的序列SLTNLSK,靶向验证结果显示该短肽有较强的特异性。结论应用噬菌体展示技术,获得了与人骨肉瘤细胞特异性结合的短肽,序列为SLTNLSK,并验证了其靶向性。可以作为骨肉瘤靶向治疗的导向性化合物。 展开更多
关键词 骨肉瘤 靶向治疗 噬菌体展示技术 结合
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A Novel Hydrolytic Product from Flesh of Mactra veneriformis and Its Bioactivities in Calcium Supplement 预览
13
作者 WANG Lingchong CHEN Shiyong +1 位作者 LIU Rui WU Hao 《中国海洋大学学报:英文版》 SCIE CAS 2012年第3期389-396,共8页
To prepare calcium-binding peptides, the flesh residue of Mactra Veneriformis was subjected to enzymatic hydrolysis. By comparing the capability of combining calcium of the hydrolyzates, pepsin was confirmed to be the... To prepare calcium-binding peptides, the flesh residue of Mactra Veneriformis was subjected to enzymatic hydrolysis. By comparing the capability of combining calcium of the hydrolyzates, pepsin was confirmed to be the most suitable enzyme for hydrolyzing the flesh residue to release calcium-binding peptides among the seven tested proteases. The pepsin hydrolyzate (PHM) was divided into three fractions according to the molecule weight of its composition, which ranged from 0.5 to 15 kDa. The low-molecule-weight fraction named PHM-3 had the highest capability in combining calcium. The peptides existing in the PHM-3 fraction consisted of higher contents of Glu, Ala and Leu, and could produce one type of calcium-peptide complex by powerfully chelating calcium ions. PHM-3 products could effectively increase calcium absorption and retention while they decreased the calcium excretion in animal tests. Additionally, symptoms caused by low calcium bioavailability in ovariectomized rats, such as bone mineral density reduction and mechanical strength loss could be significantly ameliorated by the hydrolytic products addition in diet. 展开更多
关键词 酶水解产物 生物活性钙 四角蛤蜊 胃蛋白酶 分子重量 生物利用度 结合
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Screening of specific binding peptide targeting blood vessel of human esophageal cancer in vivo in mice 被引量:2
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作者 ZHI Min WU Kai-chun +2 位作者 HAO Zhi-ming GUO Chang-cun YAO Jia-yin 《中华医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2011年第4期581-585,共5页
食管和 gastroesophageal 连接的背景癌症与差的预后仍然是剧毒的恶意。快速的进步在化学疗法的代理人被取得,分子的标记的发展允许指向的治疗的候选人的更好的鉴定。试图识别候选人肽的这研究为食道的癌症的 anti-angiogenic 治疗使... 食管和 gastroesophageal 连接的背景癌症与差的预后仍然是剧毒的恶意。快速的进步在化学疗法的代理人被取得,分子的标记的发展允许指向的治疗的候选人的更好的鉴定。试图识别候选人肽的这研究为食道的癌症的 anti-angiogenic 治疗使用了由在明确地为肽绑定屏蔽 C7C 肽图书馆到噬菌体显示了的人的食道的 cancer.Methods 的血容器的 vivo, C7C 肽图书馆静脉内地被注入在肾的囊下面忍受人的食道的肿瘤异种皮移植的鼠标。在5轮屏蔽以后, 13 克隆个别地被拣起并且 sequenced.During 每轮屏蔽,噬菌体恢复的 titers 从肿瘤被计算在每噬菌体被注入老鼠以后,到肿瘤容器的这 9 肽的异种皮移植和控制 tissues.Homing 被精明的噬菌体 titers 在肿瘤异种皮移植和控制纸巾(肺和怒气)检测模型,并且与在由 immunohistochemical 的肿瘤异种皮移植的噬菌体 M13 和相关抗原的分发相比染色。在一些数据之中的比较用变化( ANOVA )的单程的分析被做,由噬菌体的数字从当在控制组减少了时,在肿瘤组逐渐地增加的每个回合的肿瘤织物恢复了的 Bonferroni 多重比较 test.Results 列在后面(在肿瘤和怒气的 P 0.01 ,在肺的 P 0.05 )。染色的 Immunohistochemical 与 M13 抗体或相关抗原抗体显示出类似的染色的模式,建议那噬菌体显示选择的肽能家到人的食道的癌症的血容器。根据他们的 DNA, 9 个相应的肽序列被推出。并且显示选择的肽的噬菌体的血容器的 homing 能力被在肿瘤和控制纸巾与他们的恢复作比较证实。二个主题, YSXNXW 和 PXNXXN,被分析这些肽序列的相同也获得。有 PNPNNST 的顺序的噬菌体的染色的分发类似于标记因素联系了抗原染色的血容器的。在定序以后,有有 1.0 的 PNPNNST 的选择的肽的每噬菌体 展开更多
关键词 小鼠模型 结合 食管癌 免疫组织化学染色 筛选 船只 噬菌体展示 体内
利用噬菌体肽库筛选Survivin结合肽 预览
15
作者 刘思远 许向云 《内蒙古医学杂志》 2010年第5期 524-526,共3页
目的:将纯化的Survivin蛋白作为诱饵,从噬菌体肽库中筛选出结合肽。方法:用纯化的Sur-vivin蛋白包被35 mm的塑料培养皿,加入随机12肽的噬菌体肽库,用靶分子溶液竞争性洗脱结合的噬菌体,通过测定噬菌体滴度检测Survivin蛋白的吸附、富... 目的:将纯化的Survivin蛋白作为诱饵,从噬菌体肽库中筛选出结合肽。方法:用纯化的Sur-vivin蛋白包被35 mm的塑料培养皿,加入随机12肽的噬菌体肽库,用靶分子溶液竞争性洗脱结合的噬菌体,通过测定噬菌体滴度检测Survivin蛋白的吸附、富集效果,筛选阳性噬菌斑,制作DNA测序模板进行测序。结果:经3轮筛选,噬菌体显示有良好的富集效果。从第3轮筛选产物中挑取8个蓝色噬菌斑(阳性克隆)进行测序,DNA测序结果表明,具有一致性序列GIANNFFTLKIS。结论:从噬菌体随机肽库中,筛选到能与Survivin蛋白特异性结合的一段短肽,为Survivin蛋白的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 噬菌体 筛选 SURVIVIN 结合
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从噬菌体展示十二肽库中筛选钠泵α_1亚基M1-M2膜外区特异性结合肽
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作者 刘志文 连易水 +5 位作者 李蝉 张玥 王永利 王伟 赵兴茹 崔京霞 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期875-879,共5页
目的获得人钠泵α1亚基M1-M2膜外区的特异性结合肽,以阻断或拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用,为高血压的治疗提供理论和实验依据。方法以人工合成的钠泵α1亚基M1-M2膜外区多肽(ATEEEPQNDN-LGGGS)为靶分子,从噬菌体随机12肽库淘选能与之... 目的获得人钠泵α1亚基M1-M2膜外区的特异性结合肽,以阻断或拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用,为高血压的治疗提供理论和实验依据。方法以人工合成的钠泵α1亚基M1-M2膜外区多肽(ATEEEPQNDN-LGGGS)为靶分子,从噬菌体随机12肽库淘选能与之特异性结合的多肽,通过双夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和浓度依赖性实验鉴定噬菌体阳性克隆,提取DNA测序,推导其氨基酸序列,并检测其对哇巴因的竞争性拮抗作用。结果从噬菌体12肽库中筛选出4个阳性噬菌体克隆,测序后其氨基酸序列完全一致,均为:WHWRNPDF-WYLK。哇巴因竞争性抑制试验显示,获得的噬菌体展示肽可以与哇巴因竞争钠泵α1亚基M1-M2膜外区结合表位,阻止哇巴因与钠泵结合。结论获得了人钠泵α1亚基M1-M2膜外区的特异性结合肽,它能竞争性抑制哇巴因与钠泵的结合,为进一步探讨钠泵的作用机制及高血压的治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 钠泵 M1-M2膜外区 噬菌体随机 结合 高血压
囊素与杂交瘤细胞的结合及结合肽的鉴定 被引量:1
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作者 王臣 赵战勤 +3 位作者 牛明福 张春杰 程相朝 陈溥言 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期270-277,共8页
【目的】囊素(BS)是禽类和哺乳动物中具有重要免疫调节功能的多肽,能有效促进杂交瘤细胞抗体的分泌,为探讨杂交瘤细胞是否有BS受体分子的表达。【方法和结果】本研究采用荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪分析的方法,... 【目的】囊素(BS)是禽类和哺乳动物中具有重要免疫调节功能的多肽,能有效促进杂交瘤细胞抗体的分泌,为探讨杂交瘤细胞是否有BS受体分子的表达。【方法和结果】本研究采用荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪分析的方法,检测BS与杂交瘤细胞的结合特性。实验结果证实BS与杂交瘤细胞的结合具有特异性、趋饱和性和可逆性。为进一步分析BS与杂交瘤细胞的结合位点,实验中以BS分子作为靶标,对噬菌体随机12肽库进行了4轮亲和筛选,ELISA和竞争抑制试验显示2个噬菌体克隆能特异性与BS结合。对阳性噬菌体克隆进行序列测定分析表明,其插入的12肽分别为:ACTKHLCLLQPL、MSCNDTLCLLPN,保守序列为LCLL。体外实验表明,2个人工合成的12均都能在一定程度上抑制BS与杂交瘤细胞的特异性结合。【结论】本研究表明杂交瘤细胞具有BS结合的受体,这为进一步研究BS促杂交瘤细胞抗体分泌的信号传导通路奠定了基础。 展开更多
关键词 囊素 杂交瘤细胞 受体 结合
运用噬菌体随机七肽库筛选与CRN特异结合的多肽 预览
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作者 李淑珍 赵珩 +1 位作者 生吉萍 曲桂芹 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第24期 75-79,共5页
CORYNE(CRN)对拟南芥(Arabidopsis thaliana)茎尖分生组织干细胞的分裂分化的调控具有重要作用。为了研究与CRN胞内激酶区相互作用的肽,探讨与CRN胞内激酶区相互作用的关键位点。采用了亲和淘选噬菌体随机七肽库的方法,通过4轮亲和... CORYNE(CRN)对拟南芥(Arabidopsis thaliana)茎尖分生组织干细胞的分裂分化的调控具有重要作用。为了研究与CRN胞内激酶区相互作用的肽,探讨与CRN胞内激酶区相互作用的关键位点。采用了亲和淘选噬菌体随机七肽库的方法,通过4轮亲和淘选后随机挑取10个克隆进行DNA测序,经ELISA鉴定后,得到1个与CRN胞内激酶区特异结合的七肽,其序列为TLTELVR。研究结果表明,利用噬菌体展示技术成功淘选到了与CRN胞内激酶区特异结合的七肽,为进一步研究与CRN胞内激酶区相互作用的分子奠定了基础。 展开更多
关键词 CRN 结合 噬菌体随机七
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人Ⅱ型胶原的HLA-A~*0201限制性CTL表位的预测及初步鉴定 被引量:6
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作者 陈晓玲 方勇飞 +4 位作者 尚小云 王书峰 高乐女 王莉 吴玉章 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期755-758,763共5页
目的预测和初步鉴定类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)主要自身抗原Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,CⅡ)的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)表位,为基于CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选... 目的预测和初步鉴定类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)主要自身抗原Ⅱ型胶原(CollagenⅡ,CⅡ)的HLA-A*0201限制性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)表位,为基于CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法选取BIMAS、SYFTEPITHI、IEDB、SVMHC、AntiJen预测工具预测该抗原HLA-A*0201限制性结合肽;人工合成待测表位肽,利用T2细胞株通过直接免疫荧光法测定各肽与HLA-A*0201分子的结合力。利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immunospotassay,ELISPOT)方法检测候选肽刺激关节滑液单个核细胞(synovial fluid mononuclear cell,SFMC)分泌IFN-γ的能力。结果综合BIMAS、SYFTEPITHI、IEDB、SVMHC、AntiJen预测结果筛选出来可能与HLA-A*0201结合的5条肽。MHC亲和力实验表明,在候选的5条肽中,P1261、P1365及P1399具有与HLA-A*0201分子结合的能力,平均荧光强度分别为:1.35、2.53、1.78。ELISPOT试验结果表明,P1365具有刺激SFMC分泌IFN-γ的能力。结论表位预测结果与初步鉴定结果具有一致性,两者联合应用初步认为P1365是HLA-A*0201限制性CTL表位的可能性最大,为下一步表位鉴定及基于人CⅡ抗原表位的特异性免疫治疗奠定理论基础。 展开更多
关键词 HLA-A*0201 CTL 结合 表位 限制性
层黏连蛋白α4链中αvβ3整合素结合肽的精细鉴定与功能分析
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作者 连继勤 戴旭芳 +2 位作者 黄刚 王喆 何凤田 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第22期2370-2373,共4页
目的利用点突变、缺失突变及功能实验确定αvβ3整合素在已鉴定人层黏连蛋白α4链(human laminin alpha4,LNα4)G19肽段中的最小结合位点及关键氨基酸残基。方法采用同源序列比较确定G19肽中的保守氨基酸残基,点突变确定其中的关键氨... 目的利用点突变、缺失突变及功能实验确定αvβ3整合素在已鉴定人层黏连蛋白α4链(human laminin alpha4,LNα4)G19肽段中的最小结合位点及关键氨基酸残基。方法采用同源序列比较确定G19肽中的保守氨基酸残基,点突变确定其中的关键氨基酸残基,缺失突变确定αvβ3整合素结合的最小肽段,并通过人脐静脉内皮细胞(humanumbilical vein endothelial cells,HUVEC)管样结构形成实验及鸡胚尿囊膜(chick chorioallantoic membrane,CAM)实验验证鉴定肽的生物学功能。结果同源性比较分析发现,G19肽中共存在10个保守性氨基酸残基位点。点突变分析发现第4位的I、第10位的H及第16位的Y是αvβ3整合素结合的关键位点,缺失突变分析确定G1124-1137肽段(G14肽)是αvβ3整合素结合的最小肽段,合成的G14肽可以浓度依赖性地促进HUVEC管样结构的形成及CAM的血管生成。结论成功鉴定了αvβ3整合素在LNα4中的最小结合位点及关键氨基酸残基。所鉴定的肽段具有促HUVEC成管样结构及促CAM血管生成的生物学功能。 展开更多
关键词 LNα4 αvβ3整合素 结合 鉴定
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