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poly(A)聚合酶加尾实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清miR-103方法学建立和初步临床应用 预览
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作者 臧素纲 陈曦 +2 位作者 陈鑫 周玉贵 韩霜 《实用医技杂志》 2019年第2期143-145,共3页
目的建立ploy(A)聚合酶加尾SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血标本中miR-103的检测方法,并进行初步的临床应用研究。方法使用Trizols溶解试剂提取待检标本总RNA,逆转录反应获得cDNA,通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR法测... 目的建立ploy(A)聚合酶加尾SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法测定血标本中miR-103的检测方法,并进行初步的临床应用研究。方法使用Trizols溶解试剂提取待检标本总RNA,逆转录反应获得cDNA,通过SYBR GreenⅠ实时定量PCR法测定血清标本mi R-103。结果本方法可以用于定量检测血清miR-103的浓度,其PCR反应熔解曲线表现为单峰状,PCR产物具有特异性,在10~3~10~6 copies/μL线性范围间检测重复性好,有良好的线性关系(R~2=0.999)。2型糖尿病患者标本中mi R-103表达水平明显低于健康对照人群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究所创立的用于检测血清mi R-103的poly(A)加尾实时荧光定量PCR法具有很好的灵敏度和特异性,为进一步应用研究提供方法学保证。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 荧光免疫测定 miR-103 糖尿病 2型
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武汉地区314例消化系统疾病患者CYP2C19基因多态性分析 预览
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作者 盛碧 陈永刚 +2 位作者 王慧娟 纪刚剑 邹吉利 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第2期92-96,共5页
目的分析武汉地区消化系统疾病患者CYP2C19基因的多态性。方法选取2016年1月—2017年12月于湖北省武汉市第三医院行CYP2C19基因多态性检测的无血缘关系汉族消化系统疾病患者314例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测质子泵抑制剂代谢相... 目的分析武汉地区消化系统疾病患者CYP2C19基因的多态性。方法选取2016年1月—2017年12月于湖北省武汉市第三医院行CYP2C19基因多态性检测的无血缘关系汉族消化系统疾病患者314例。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测质子泵抑制剂代谢相关酶CYP2C19基因型,根据基因型判断代谢表型,并分析性别、年龄及消化系统疾病临床分型与CYP2C19基因多态性的相关性。结果该研究共检测到8种基因型:CYP2C19*1*17、*1*1、*1*2、*1*3、*2*17、*3*17、*2*2及*2*3;4种代谢表型:超快代谢型为0.96%,快代谢型型为36.94%,中间代谢型型为45.54%,慢代谢型型为16.56%。不同年龄、性别及消化系统疾病临床分型患者CYP2C19基因型比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同性别、消化系统疾病临床分型患者代谢表型比较,差异无统计学意义(P>0.05);不同年龄患者代谢表型比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论武汉地区消化系统疾病患者CYP2C19基因具有多态性,其等位基因频率和代谢表型分布情况与亚洲人群接近,与欧洲等其他国家人群存在明显差异。 展开更多
关键词 消化系统疾病 CYP2C19/基因 多态性 单核苷酸 聚合酶链反应 基因型
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流行性感冒暴发疫情实验室检测与分析 预览
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作者 罗亮 《现代医药卫生》 2019年第3期477-479,共3页
人流行性感冒(流感),是由甲(A)、乙(B)、丙(C)3种流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒属正粘病毒科,流感病毒属,是具有包膜和分节段的单链负股RNA病毒。流感病毒经呼吸道传播,由于其传播速度极快,且极易发生抗原漂移和转变等变异... 人流行性感冒(流感),是由甲(A)、乙(B)、丙(C)3种流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒属正粘病毒科,流感病毒属,是具有包膜和分节段的单链负股RNA病毒。流感病毒经呼吸道传播,由于其传播速度极快,且极易发生抗原漂移和转变等变异,因此,每年流感都会发生不同规模的暴发和流行,给人类造成不同程度的伤害[1-2]。本文通过对深圳市坪山区某学校流感暴发疫情进行实验室检测和结果分析,旨在通过本次疫情了解流感病毒的型别及变异情况,从而了解流感发病规律,对易感人群开展病原学监测。 展开更多
关键词 流感 人/流行病学 暴发 核酸类/分析 聚合酶链反应 标本 实时荧光定量PCR
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某羊场和田羊与策勒黑羊无浆体季节性感染PCR检测 预览
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作者 严勇 赵爱云 +5 位作者 李姚旭 蒋维东 石长青 张宽宽 关贵全 齐萌 《动物医学进展》 北大核心 2019年第1期141-144,共4页
为了解和田羊和策勒黑羊无浆体季节动态感染情况,分别于2015年冬至、2016年春分、夏至和秋分,在策勒县某牧业合作社采集和田羊和策勒黑羊血液样本共120份,应用PCR对无浆体的MSP4基因和16SrRNA基因进行扩增。结果发现,检测绵羊的无浆体... 为了解和田羊和策勒黑羊无浆体季节动态感染情况,分别于2015年冬至、2016年春分、夏至和秋分,在策勒县某牧业合作社采集和田羊和策勒黑羊血液样本共120份,应用PCR对无浆体的MSP4基因和16SrRNA基因进行扩增。结果发现,检测绵羊的无浆体总阳性率为99.2%(119/120),以绵羊无浆体(Anaplasmaovis)和嗜吞噬无浆体(A.phagocytophilum)混合感染为主,占阳性样本比例为61.3%(73/119),A.ovis和A.phagocytophilum占阳性样本比例分别为31.1%(37/119)和7.6%(9/119)。在不同季节,和田羊和策勒黑羊无浆体均普遍感染,差异不显著(P>0.05)。结果显示,新疆策勒县某羊场绵羊的无浆体病全年均可流行,应引起人们重视。 展开更多
关键词 无浆体 绵羊 感染 聚合酶链反应
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建立检测血液中EC、KP、SA和MRSA的多重PCR方法 预览
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作者 吴许文 温旺荣 +2 位作者 李沛樟 倪金良 简仕铭 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第1期19-24,28共7页
目的建立快速检测血液中常见致病菌包括大肠埃希菌(EC)、肺炎克雷伯菌(KP)、金黄色葡萄球菌(SA)及耐甲氧西林SA(MRSA)的多重聚合酶链反应(PCR)方法,有利于败血症的及时治疗。方法建立多重PCR方法对ECphoA基因、KPmdh基因、SAfemA基因和M... 目的建立快速检测血液中常见致病菌包括大肠埃希菌(EC)、肺炎克雷伯菌(KP)、金黄色葡萄球菌(SA)及耐甲氧西林SA(MRSA)的多重聚合酶链反应(PCR)方法,有利于败血症的及时治疗。方法建立多重PCR方法对ECphoA基因、KPmdh基因、SAfemA基因和MRSAmecA基因进行检测,并将16SrDNA作为致病菌感染对照。结果采用建立的多重PCR方法进行检测的特异性为100%,EC检测限为2.75×10^2CFU/mL,KP为2.43×10^3CFU/mL,SA为3.13×10^2CFU/mL,MRSA为3.03×10^2CFU/mL;用多重PCR方法和传统血培养方法对300个血标本进行检测,传统血培养方法检测出187个血标本内阳性,多重PCR方法有4个血标本为假阴性,未能被检出。结论建立的多重PCR方法可简便、及时地检测血流感染中的EC、KP、SA和MRSA。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 脓毒症 大肠杆菌 克雷伯菌 肺炎 葡萄球菌 金黄色 甲氧西林抗药性
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HBV-DNA实时荧光定量检测程序的测量不确定度评估及分析 预览
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作者 刘伟平 杨新春 殷明刚 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第1期59-61,共3页
目的根据国际标准化组织(ISO)15189实验室认可要求,评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测程序的测量不确定度。方法采用室内质控获得的中间精密度计算HBV-DNA测量重复性引入的测量不确定度,采用卫生部室间质量评价结果计算HBV-DNA偏倚引入... 目的根据国际标准化组织(ISO)15189实验室认可要求,评估乙型肝炎病毒(HBV)DNA定量检测程序的测量不确定度。方法采用室内质控获得的中间精密度计算HBV-DNA测量重复性引入的测量不确定度,采用卫生部室间质量评价结果计算HBV-DNA偏倚引入的测量不确定度,将二者合成计算出合成标准不确定度和扩展不确定度。结果HBV-DNA在室内质控水平为4.03(对数的倒数)时实验室内测量重复性引入的相对测量不确定度为3.45%,HBV-DNA偏倚引入的相对测量不确定度为5.27%。相对合成标准不确定度为6.30%;相对扩展不确定度为12.60%;而HBV-DNA在该水平的相对测量不确定度可表示为(4.03±12.60)%。结论HBV-DNA实时荧光定量检测程序的测量不确定度可作为检验结果质量持续改进的依据,并用于解释临床结果。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 DNA 病毒 聚合酶链反应 荧光
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解脲支原体生物亚群及抗子宫内膜抗体与女性不孕的相关性研究 预览
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作者 曾文军 王柳均 +3 位作者 梅艳娟 邓珍良 皮红泉 陈群 《中国医学创新》 CAS 2019年第1期131-134,共4页
目的:探讨解脲支原体(UU)不同生物亚群、抗子宫内膜抗体(AEMAb)与女性不孕患者的关系。方法:选取本院2017年2月-2018年2月100例不孕女性为不孕组,同期选取100例健康孕妇为对照组,两组均行UU培养,通过聚合酶链反应并以多条带抗原基因为... 目的:探讨解脲支原体(UU)不同生物亚群、抗子宫内膜抗体(AEMAb)与女性不孕患者的关系。方法:选取本院2017年2月-2018年2月100例不孕女性为不孕组,同期选取100例健康孕妇为对照组,两组均行UU培养,通过聚合酶链反应并以多条带抗原基因为靶位设计引物将检测到的UU进行分群,应用ELISA方法检测AEMAb,同时进行相关分析。结果:不孕组UU及其UU2生物亚群与AEMAb阳性率均明显高于对照组(P<0.01),不孕组以UU2生物亚群为主,对照组以UU1生物亚群为主,而两组UU1生物亚群比较差异无统计学意义(P>0.05)。不孕组AEMAb阳性者UU及UU2生物亚群感染率明显高于AEMAb阴性者(P<0.01),两者UU1生物亚群比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:女性不孕的发生与UU及AEMAb有关,UU1生物亚群可能是定植菌群,而UU2生物亚群则更易导致机体产生AEMAb引起不育。 展开更多
关键词 解脲支原体 生物亚群 抗子宫内膜抗体 聚合酶链反应 不孕
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PCR-RFLP法检测DDAH2基因rs805304多态性的实验条件研究 预览
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作者 石柔 董荣静 +1 位作者 刘华 李会芳 《中国医药导报》 CAS 2019年第2期4-7,共4页
目的探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)rs805304多态性的最适实验条件。方法运用PCR-RFLP技术分别对2016年1月~2017年3月昆明医科大学第一附属医院收治的182例2型糖尿病患者和... 目的探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)rs805304多态性的最适实验条件。方法运用PCR-RFLP技术分别对2016年1月~2017年3月昆明医科大学第一附属医院收治的182例2型糖尿病患者和147名健康体检者DDAH2基因rs805304的多态性进行检测,对影响PCR-RFLP方法的主要因素进行研究。结果最适实验条件:退火温度为58℃,变性温度为95℃,2×Power Taq PCR Master Mix浓度为12.5μL,引物浓度为0.8μmo/L,酶切体系为15μL体系中加8.0μL产物,用5 U的限制性内切酶BstUI消化。结论最适实验条件的摸索为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 二甲基精氨酸二甲胺水解2 实验条件
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PCR技术检测致病真菌感染的研究 预览
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作者 王宇 郑秋冬 +2 位作者 邓琴 刘宁远 潘婷 《攀枝花学院学报:综合版》 2019年第2期6-8,共3页
目的建立适合临床实践的常见致病真菌的PCR检测方法。方法根据真菌的保守基因设计不同的特异性引物,对152例临床标本进行PCR检测,与传统检验方法的结果进行比较。结果真菌培养阳性46例;真菌PCR检测阳性57例,分别为白色念珠菌感染30份、... 目的建立适合临床实践的常见致病真菌的PCR检测方法。方法根据真菌的保守基因设计不同的特异性引物,对152例临床标本进行PCR检测,与传统检验方法的结果进行比较。结果真菌培养阳性46例;真菌PCR检测阳性57例,分别为白色念珠菌感染30份、烟曲霉感染9份、黄曲菌感染8份,其他真菌感染10份。两种方法比较,检出率差异无统计学意义。结论PCR法可快速、特异、灵敏地检测致病真菌,适合临床实验室的快速诊断。 展开更多
关键词 真菌 聚合酶链反应 白色念珠菌
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海洋来源褐藻胶裂解酶及其基因B1SM的克隆和表达
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作者 吴晨烁 李晓月 +1 位作者 秦明珍 严芬 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期77-82,共6页
从海洋来源的假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)B1基因组中克隆1个褐藻胶裂解酶基因,并在大肠杆菌中实现异源表达,分离纯化重组酶并研究其酶学性质。通过Touch down PCR与热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-P... 从海洋来源的假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)B1基因组中克隆1个褐藻胶裂解酶基因,并在大肠杆菌中实现异源表达,分离纯化重组酶并研究其酶学性质。通过Touch down PCR与热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)从假交替单胞菌B1基因组中扩增到1个褐藻胶裂解酶基因(B 1SM),将目的基因插入到pGEX-4T-1载体,转化到宿主大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21(DE3)。结果显示,从菌株B1克隆得到褐藻胶裂解酶基因B1SM,序列长度为1 005 bp,编码334个氨基酸,理论等电点为8.51,编码蛋白质的理论分子质量为37.13 kDa。重组褐藻胶裂解酶B1SM的最适pH和温度分别为8.0和25℃。该褐藻胶裂解酶在pH 7.0~9.0范围内,25℃下保温1 h,仍剩余60%以上活力,pH稳定性较好。在最适pH 8.0和30℃下保温1 h重组酶仍剩余60%以上活力。该研究为褐藻胶裂解酶基因B1SM在E.coli BL21(DE3)中实现了异源表达,为褐藻胶裂解酶的制备和研究奠定基础。 展开更多
关键词 褐藻胶裂解 假交替单胞菌 聚合酶链反应
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肺炎克雷伯杆菌临床分离株对5种常用消毒剂的抗性研究
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作者 金虹 帖金凤 +2 位作者 李海帅 韩杰 苏裕心 《中国消毒学杂志》 CAS 2019年第1期12-15,共4页
目的观察临床分离肺炎克雷伯杆菌对常用消毒剂的抗性及消毒剂抗性基因携带情况,分析消毒剂与抗菌药物间的交叉耐药性、消毒剂抗性基因和抗菌药物耐药的相关性。方法采用微量肉汤稀释法和PCR技术,测定5种消毒剂对44株肺炎克雷伯杆菌的MIC... 目的观察临床分离肺炎克雷伯杆菌对常用消毒剂的抗性及消毒剂抗性基因携带情况,分析消毒剂与抗菌药物间的交叉耐药性、消毒剂抗性基因和抗菌药物耐药的相关性。方法采用微量肉汤稀释法和PCR技术,测定5种消毒剂对44株肺炎克雷伯杆菌的MIC值,并对qac E△1基因携带情况进行筛查。结果 44株肺炎克雷伯杆菌对醋酸氯己定和三氯生的MIC值均高于质控菌大肠杆菌(ATCC 25922),对抗菌药物交叉耐药率分别为55. 6%和77. 8%,对季铵盐类消毒剂抗性升高不明显。共筛查出22株携带qac E△1基因,不同医院检出率存在差异。qac E△1在抗菌药物耐药菌株中的检出率要高于敏感菌株,且抗菌药物耐药株与敏感株的qac E△1基因检出率存在地区差异。结论肺炎克雷伯杆菌临床株对醋酸氯己定和三氯生具有更高的抗性,qac E△1基因的检出率存在地区差异性。长期不合理暴露于此两种消毒剂的菌株在持续的选择压力下可能增强消毒剂抗性和抗菌药物交叉耐药性。 展开更多
关键词 肺炎克雷伯杆菌 微量肉汤稀释法 聚合酶链反应 消毒剂抗性基因
荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对五种抗结核药物耐药性的研究
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作者 曹志华 赵悦竹 胡双双 《中国防痨杂志》 CAS CSCD 2019年第2期156-161,共6页
目的运用荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氟喹诺酮类共5种抗结核药物的耐药性,并评价其临床应用价值。方法收集2018年1—8月分离自抚顺市第四人民医院门诊患者的153株MTB临床分离株... 目的运用荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氟喹诺酮类共5种抗结核药物的耐药性,并评价其临床应用价值。方法收集2018年1—8月分离自抚顺市第四人民医院门诊患者的153株MTB临床分离株,采用荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素和氟喹诺酮类药物的耐药性。以比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)为金标准,评价荧光PCR探针熔解曲线法的敏感度、特异度和一致率。结果以比例法药敏试验为金标准,荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平耐药性的敏感度为95.56%(43/45),特异度为94.44%(102/108),一致率为94.77%(145/153),Kappa值为0.88;对异烟肼耐药性的敏感度为90.57%(48/53),特异度为96.00%(96/100),一致率为94.12%(144/153),Kappa值为0.87;对乙胺丁醇耐药性的敏感度为85.71%(18/21),特异度为92.42%(122/132),一致率为91.50%(140/153),Kappa值为0.69;对链霉素耐药性的敏感度为89.66%(26/29),特异度为92.74%(115/124),一致率为92.16%(141/153),Kappa值为0.76;对氟喹诺酮类药物耐药性的敏感度为93.75%(15/16),特异度为96.35%(132/137),一致率为96.08%(147/153),Kappa值为0.81。结论荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素和氟喹诺酮类药物的耐药性具有良好的效能,可为医生制定用药方案提供重要依据。 展开更多
关键词 结核 抗多种药物性 聚合酶链反应 分子探针技术 微生物敏感性试验 评价研究
微RNA在心血管疾病中的研究进展 预览
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作者 徐娜 庄宇鑫 +2 位作者 全东令 张国华 周磊 《医学综述》 2019年第5期883-887,共5页
随着社会经济的发展,人口老龄化进程的加快,居民生活方式的改变等因素导致心血管疾病的患病率持续升高。微RNA(miRNA)在心血管疾病的发展进程中起着至关重要的作用。许多心肌miRNA的表达在心血管疾病的进展中发生了改变,这些改变加深了... 随着社会经济的发展,人口老龄化进程的加快,居民生活方式的改变等因素导致心血管疾病的患病率持续升高。微RNA(miRNA)在心血管疾病的发展进程中起着至关重要的作用。许多心肌miRNA的表达在心血管疾病的进展中发生了改变,这些改变加深了人们对心血管疾病的发生机制、诊断标志物和治疗靶点的认识。心血管功能障碍中发生的miRNA的诱导或抑制以细胞特有的方式触发下游的心脏事件。此外,内源性miRNA的干扰可以通过外源性过表达或中和策略进行修饰,以缓和心肌受损功能。 展开更多
关键词 心血管疾病 微RNA 聚合酶链反应
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Effects of TRPA1 activation and inhibition on TRPA1 md CGRP expression in dorsal root ganglion neurons 预览
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作者 Xiao-Lei Wang Li-Wei Cui +5 位作者 Zhen Liu Yue-Ming Gao Sheng Wang Hao Li Hu-Xiang Liu Ling-Jia Yu 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期140-148,共9页
关键词 CGRP 神经原 PD98059 背面 激活 MD ERK1/2 聚合酶链反应
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病毒性脑炎的诊治研究进展 预览
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作者 冯绵烨 娄燕 《中华诊断学电子杂志》 2019年第1期66-70,共5页
病毒性脑炎是病毒影响中枢神经系统的结果,可涉及从儿童至老年的任何年龄组,而疾病的严重程度取决于病毒的种类和宿主的免疫系统。引起病毒性脑炎的病原体种类繁多,临床表现不尽相同,实验室检查、影像学和脑脊液分析对脑炎诊断起着至关... 病毒性脑炎是病毒影响中枢神经系统的结果,可涉及从儿童至老年的任何年龄组,而疾病的严重程度取决于病毒的种类和宿主的免疫系统。引起病毒性脑炎的病原体种类繁多,临床表现不尽相同,实验室检查、影像学和脑脊液分析对脑炎诊断起着至关重要的作用。过去酶联免疫吸附测定是诊断病毒性脑炎最常用的方法,但由于检测试剂种类少,价格昂贵,故大部分病毒性脑炎不能得到病原学诊断。随着聚合酶链反应等分子生物学技术不断改进并用于脑脊液病原体检测,其已成为诊断病毒性脑炎的利器。笔者主要从病毒性脑炎病原学、发病机制、诊断技术及治疗进展做一综述。 展开更多
关键词 脑炎 病毒性 病原 发病机制 诊断 聚合酶链反应
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mNGS在肺部感染患者病原体诊断中的应用 预览
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作者 王国安 吴宏成 《现代实用医学》 2019年第1期9-10,79共3页
肺部感染是临床常见的一种呼吸道感染性疾病,发病率高,为主要死亡原因之一,尤其是重症肺炎,近年有增多趋势,虽然治疗手段较前有较大进步,但其致死率仍高达30%~50%,严重威胁人类生命健康。诊断呼吸道感染后应尽早予以抗微生物治疗,而精... 肺部感染是临床常见的一种呼吸道感染性疾病,发病率高,为主要死亡原因之一,尤其是重症肺炎,近年有增多趋势,虽然治疗手段较前有较大进步,但其致死率仍高达30%~50%,严重威胁人类生命健康。诊断呼吸道感染后应尽早予以抗微生物治疗,而精准快速的病原学诊断可帮助临床医师及时优化抗菌药物使用,从而加速康复,提高治愈率,改善预后。目前常用的微生物检测方法如涂片、培养及聚合酶链反应等方法已不能有效满足临床需求。 展开更多
关键词 肺部感染患者 病原学诊断 呼吸道感染性疾病 病原体 抗微生物治疗 抗菌药物使用 临床医师 聚合酶链反应
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乙型肝炎病毒YMDD突变室间质量评价调查品制备及应用 预览
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作者 蒋玲丽 肖艳群 +3 位作者 王雪亮 鲍芸 杨依绡 王华梁 《检验医学》 CAS 2019年第2期176-179,共4页
目的制备乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变室间质量评价(EQA)调查品,评估上海地区临床实验室检测HBVYMDD突变的能力。方法筛选HBVDNA >5×10^4 IU/ML的临床样本,经稀释制成含HBVYMDD不同突变类型的样本盘。采用实时荧光聚合酶链反应(P... 目的制备乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变室间质量评价(EQA)调查品,评估上海地区临床实验室检测HBVYMDD突变的能力。方法筛选HBVDNA >5×10^4 IU/ML的临床样本,经稀释制成含HBVYMDD不同突变类型的样本盘。采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)、高温连接酶反应(LDR)和测序法筛选EQA候选样本,并采用PCR评估样本均匀性和稳定性。2017年2次EQA各制备5份样本,要求参评实验室在规定时间内检测样本并上报检测结果。对回报结果进行分析。结果2017年2次EQA分别收到12份和10份有效回报结果,66.67%的实验室检测结果完全正确。HBVYIDD、YVDD、YIDD+YVDD和YMDD不同突变样本的检测符合率分别为90.63%、86.36%、77.27%和88.24%。结论制备的调查品均匀、稳定,可用于EQA;部分临床实验室HBVYMDD突变检测能力尚需提高,应加强质量控制以保证检测结果的准确性。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 高温连接反应 测序法 聚合酶链反应
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深圳地区乙型肝炎病毒携带者人白细胞抗原C等位基因多态性分布特点 预览
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作者 全湛柔 何柳媚 +2 位作者 陈浩 洪文旭 高素青 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第3期482-486,共5页
背景:目前,较多文献是研究乙型肝炎病毒与人白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)A、B、DR之间的关系,较少文献报道乙型肝炎病毒与HLA-C的相关性,可能与HLA基因型检测方法的发展有关系。目的:研究深圳地区乙型肝炎病毒携带者HLA-C... 背景:目前,较多文献是研究乙型肝炎病毒与人白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)A、B、DR之间的关系,较少文献报道乙型肝炎病毒与HLA-C的相关性,可能与HLA基因型检测方法的发展有关系。目的:研究深圳地区乙型肝炎病毒携带者HLA-C等位基因多态性分布特征。方法:应用聚合酶链反应-直接测序分型法分别对186名深圳地区健康人群(对照组)和122名乙型肝炎病毒携带者HLA-C基因进行基因分型。结果与结论:在对照组中检出的HLA-C等位基因有24种,其中HLA-C*01:02、07:02、03:04以及08:01最为常见;携带组检出HLA-C等位基因有18种,常见等位基因有HLA-C*07:02、01:02、03:04、08:01。携带组中未检出基因HLA-C*12:02,对照组HLA-C*12:02检出率显著高于携带组,提示深圳地区乙型肝炎病毒携带者HLA-C等位基因频率分布与对照组比较同样具有高度的遗传多态性。HLA-C*12:02基因可能与深圳地区感染乙型肝炎病毒的机会呈负相关性。 展开更多
关键词 人类白细胞抗原 乙肝病毒携带者 深圳地区 等位基因 多态性 聚合酶链反应 测序反应 基因频率 遗传 HLA抗原 等位基因 组织工程
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中国南方汉族造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1高分辨等位基因多态性分析
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作者 全湛柔 邓志辉 +4 位作者 周丹 钟艳平 陈浩 洪文旭 邹红岩 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2018年第6期497-505,共9页
目的探讨中国南方汉族造血干细胞捐献者人类白细胞抗原(HLA)-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点高分辨等位基因的多态性分布。方法选择2016年1月至2017年12月于中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)深圳分库登记的4 262例中国南方汉族造血干细... 目的探讨中国南方汉族造血干细胞捐献者人类白细胞抗原(HLA)-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点高分辨等位基因的多态性分布。方法选择2016年1月至2017年12月于中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)深圳分库登记的4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者为研究对象。采用PCR-序列特异性寡核苷酸探针(SSO)和二代测序(NGS)技术对本研究4 262例造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点进行高分辨等位基因分型检测。采用直接计数法分别计算上述5个HLA位点的常见、确认及罕见等位基因频率。采用χ2检验判断研究对象的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1各位点等位基因的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。结果①本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点等位基因观察值与期望值分别比较,差异均无统计学意义(χ^2=295.068、572.482、355.205、362.584、312.150,P>0.05)。本研究4 262例造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQBl位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。②本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者中,检出的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点的等位基因分别为49、97、37、48和22种,其中等位基因频率>0.05的常见等位基因包括:HLA-A*11∶01、24∶02、02∶07、02∶01、33∶03和02∶03,累计等位基因频率为0.767 1;HLA-B*40∶01、46∶01、58∶01、13∶01和51∶01,累计等位基因频率为0.471 6;HLA-C*01∶02、07∶02、03∶04、08∶01、03∶02、06∶02和03∶03,累计等位基因频率为0.782 5;HLA-DRB1*09∶01、15∶01、12∶02、07∶01、08∶03、03∶01、11∶01和04∶05,累计等位基因频率为0.656 4;以及HLA-DQB1*03∶01、03∶03、06∶01、05∶02、03∶02、02∶01、05∶03、06∶02和02∶02,累计等位基因频率为0.877 6。③本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者中,HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点的确认及罕见� 展开更多
关键词 HLA抗原 等位基因 基因频率 聚合酶链反应 高分辨基因分型 常见等位基因 确认等位基因 罕见等位基因 聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针 二代测序
修饰的pfu酶与T7ssb蛋白在聚合酶链式反应中的应用
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作者 刘明珠 秦中强 +3 位作者 杨天华 陈勇 李永海 李正红 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第5期2220-2227,共8页
表达、纯化pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并优化PCR反应体系。分别将pfu、pfu-sso7d及T7ssb基因构建于p ET28载体上,转化至原核细胞中,诱导表达出pfu、pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并通过His-Nickle亲和层析纯化柱纯化蛋白。从A549细胞中提取人的基因... 表达、纯化pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并优化PCR反应体系。分别将pfu、pfu-sso7d及T7ssb基因构建于p ET28载体上,转化至原核细胞中,诱导表达出pfu、pfu-sso7d及T7ssb蛋白,并通过His-Nickle亲和层析纯化柱纯化蛋白。从A549细胞中提取人的基因组DNA,以该基因组DNA为模板,利用pfu酶扩增c-met基因;同时从A549中提取总RNA,经过逆转录反应后,以逆转录产物c DNA为模板,分别利用pfu酶和pfu-sso7d酶扩增PD-L1基因,对比两种酶的DNA扩增效率;从MC38细胞中提取鼠的基因组DNA,以此基因组DNA为模板,分别用pfu-sso7d和pfu-sso7d联合T7ssb蛋白扩增Trp53基因,对比两种PCR反应体系的扩增效率。我们成功的将pfu、pfu-sso7d及T7ssb基因构建于p ET28载体上,并成功的诱导表达并纯化了这三种蛋白;用pfu酶成功的扩增出c-met基因;对比pfu酶,pfu-sso7d表现出较高的DNA扩增效率;在扩增Trp53基因的PCR反应体系中,同单独使用pfu-sso7d酶相比,pfu-sso7d联合T7ssb蛋白在PCR反应体系中可以提高PCR产物的量,约1.7倍。本次研究表明,利用纯化的pfu-sso7d蛋白和T7ssb蛋白,我们构建了优化的PCR反应体系。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 PFU DNA聚合酶 T7单结合蛋白 重组蛋白诱导表达 蛋白纯化
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