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敲低钙调磷酸酶结合蛋白1引起肾小管上皮细胞线粒体损伤 预览
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作者 吴汪丽 温跃强 《广州医药》 2019年第3期11-13,共3页
目的 探讨钙调磷酸酶结合蛋白1(calcineurin binding protein1,Cabin1)在肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)线粒体损伤中的作用机制。方法 采用siRNA干预体外培养RTECs,敲低Cabin1的表达,继而以电镜观察其对RTECs... 目的 探讨钙调磷酸酶结合蛋白1(calcineurin binding protein1,Cabin1)在肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)线粒体损伤中的作用机制。方法 采用siRNA干预体外培养RTECs,敲低Cabin1的表达,继而以电镜观察其对RTECs线粒体形态的影响。结果 在对照组和阴性对照组中Cabin1蛋白在RTECs中有高表达,采用siRNA干预RTECs后,Cabin1蛋白的表达量较对照组和阴性对照组降低50%以上(P<0.05)。对照组与阴性对照组中,线粒体形态规则,呈圆形或椭圆形,线粒体膜完整,线粒体嵴清晰可见。敲低组中,线粒体肿胀,呈长条形或不规则形,线粒体膜、线粒体嵴结构模糊甚至消失。结论 敲低Cabin1引起RTECs的线粒体形态学异常,提示Cabin1是维持RTECs线粒体正常功能的重要分子。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 线粒体损伤 钙调磷酸酶结合蛋白1
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TSP1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响研究 预览
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作者 周才芳 曾秀琴 曾庆义 《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》 2019年第2期65-71,共7页
目的探讨血小板反应蛋白1(TSP1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法以肾小管上皮细胞为研究对象,通过转染TSP-1 shRNA(shTSP-1),沉默TSP-1 基因,探讨下调TSP1 对高糖条件下肾小管上皮细胞损伤的影响。肾小管上... 目的探讨血小板反应蛋白1(TSP1)对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤及炎症因子分泌的影响。方法以肾小管上皮细胞为研究对象,通过转染TSP-1 shRNA(shTSP-1),沉默TSP-1 基因,探讨下调TSP1 对高糖条件下肾小管上皮细胞损伤的影响。肾小管上皮细胞依次分为:对照组(以5.6 mmol/L 葡萄糖培养)、高糖组(以30 mmol/L 葡萄糖培养)、NC +高糖组(对照慢病毒转染,以30 mmol/L 葡萄糖培养)、干扰+高糖组(TSP1 shRNA 慢病毒转染以30mmol/L 葡萄糖培养)。 Realtime PCR 和Western Blot 检测高糖对细胞中TSP1 表达影响,同时检测TSP1 shRNA 干扰效果。DCFH-DA 法检测细胞中活性氧(ROS)水平,硫代巴比妥酸法检测培养液中丙二醛(MDA)含量,ELISA 法检测培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)含量,Annexin V-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡,Western Blot 法检测细胞中活化的Caspase-3(c-caspase-3)蛋白水平。两组均数差异比较采用独立样本t 检验,多组均数间差异比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q 检验。结果高糖组细胞中TSP1mRNA 和蛋白水平高于对照组(P < 0.05)。干扰+高糖组细胞中TSP1 mRNA 和蛋白水平低于高糖组(P < 0.05)。与对照组比较,高糖组细胞中ROS 水平升高,培养液中MDA、TNF-α、IL-8 含量升高[(2.36±0.21)nmol/ml、(45.91±2.87)ng/ml、(25.42±3.26) ng/ ml :(1.05±0.13)nmol/ ml、(20.14±1.36)ng/ml、(12.98±1.63)ng/ml],差异有统计学意义(F = 18.595,F =43.825,F = 21.155,P < 0.05);细胞凋亡率升高(P < 0.05),细胞中c-caspase-3 蛋白水平升高(P <0.05)。与高糖组和NC +高糖组比较,干扰+高糖组细胞中ROS 水平降低,培养液中MDA、TNF-α、IL-8 含量降低[(1.63±0.10)nmol/ml、(34.20±2.06)ng/ml、(18.75±1.62)ng/ ml :(2.36 ± 0.21) nmol/ ml、(45.91±2.87)ng/ml、(25.42±3.26)ng/ml 和(2.30±0.42)nmol/ ml、(46.32±5.24) ng/ml、(26.91±2.74)ng/ml],差异具有统计学意义(F = 18.595,F = 43.825,F =21.155,P < 0 展开更多
关键词 TSP1 肾小管上皮细胞 高糖 炎症因子 损伤
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紫苏叶水提物对阿霉素致HK-2细胞氧化损伤的保护及机制
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作者 祝一叶 周恩超 +3 位作者 高坤 黄国顺 李蔚 夏平 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期50-57,共8页
目的:探讨阿霉素(ADR)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生氧化损伤后,紫苏叶水提取物(PFAE)对其细胞活性、氧化损伤标记物及细胞凋亡等关键因子的影响。方法:ADR刺激HK-2细胞建立损伤模型,使用N-乙酰半胱氨酸(NAC)或不同浓度PFAE(5,15,45 g... 目的:探讨阿霉素(ADR)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)发生氧化损伤后,紫苏叶水提取物(PFAE)对其细胞活性、氧化损伤标记物及细胞凋亡等关键因子的影响。方法:ADR刺激HK-2细胞建立损伤模型,使用N-乙酰半胱氨酸(NAC)或不同浓度PFAE(5,15,45 g·L^-1)干预后,采用细胞增殖/毒性检测(CCK-8)法检测细胞存活率,结合光镜下细胞形态变化,筛选出PFAE保护细胞的最佳浓度。后续实验分为6组:空白组,ADR(0.05 g·L^-1)组,PFAE(15 g·L^-1)组,ADR+PFAE(0.05+15)g·L^-1组,NAC(0.81 g·L^-1)组,ADR+NAC(0.05+81)g·L^-1组。检测细胞匀浆中的丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和细胞总抗氧化能力,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞术及脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TUNEL)染色法检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞线粒体凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9和3(Caspase-9,Caspase-3),聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)包括其剪切体的表达,及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路中p38丝裂素活化蛋白激酶(p38 MAPK),细胞外信号调节激酶(ERK),c-Jun氨基端激酶(JNK)及其磷酸化蛋白的表达。结果:与空白组比较,ADR组的细胞活性显著降低(P<0.01),与ADR组比较,5,15 g·L^-1的PFAE和NAC能促进细胞的增殖(P<0.01)。与空白组比较,ADR组抗氧化能力和SOD水平显著降低(P<0.01),MDA和ROS的水平显著增高(P<0.01),与ADR组比较,ADR+PFAE组和ADR+NAC组抗氧化能力和SOD水平显著升高(P<0.01),MDA和ROS的水平显著下降(P<0.01)。与空白组比较,ADR组细胞凋亡率上升(P<0.01),凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2,cleaved Caspase-9/Caspase-9,cleaved Caspase-3/Caspase-3,cleaved PARP/PARP水平显著上升(P<0.01),MAPKs通路中的p38 MAPK,ERK和JNK的磷酸化蛋白表达明显增高(P<0.05,P<0.01);与ADR组比较,PFAE或NAC干预后减轻了细胞凋亡� 展开更多
关键词 紫苏叶水提物 肾小管上皮细胞 阿霉素 氧化应激 线粒体凋亡 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路
阻断pannexin-1可减轻肾脏组织炎症细胞浸润和缓解顺铂诱导的急性肾损伤 预览
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作者 刘崇斌 黄柳维 +2 位作者 李彩珍 沈燕婷 王骏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期508-514,共7页
目的探讨阻断pannexin-1在顺铂致急性肾损伤中的作用。方法将26只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、顺铂模型组、顺铂+Carbenoxolone处理组。顺铂模型组、顺铂+Carbenoxolone处理组予顺铂20 mg/kg腹腔注射1次,顺铂+Carbenoxolone... 目的探讨阻断pannexin-1在顺铂致急性肾损伤中的作用。方法将26只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、顺铂模型组、顺铂+Carbenoxolone处理组。顺铂模型组、顺铂+Carbenoxolone处理组予顺铂20 mg/kg腹腔注射1次,顺铂+Carbenoxolone处理组于顺铂处理前30 min、处理后24、48 h分别腹腔注射Carbenoxolone 20 mg/kg,所有组于顺铂处理72 h处死小鼠,留取血浆及肾组织样品进行下一步检测。RT-qPCR及Western blot检测肾组织内pannexin-1的表达水平;检测血浆BUN、Scr水平评估肾功能;PAS染色评估肾组织病理学改变;免疫组化检测肾损伤分子1(KIM-1)表达水平及RT-qPCR检测肾损伤分子1与中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)mRNA水平评估肾小管损伤情况;免疫荧光检测肾组织F4/80+巨噬细胞及CD4~+T细胞浸润水平;RT-qPCR及Western blot检测肾组织pannexin-1的mRNA及蛋白表达水平;用终浓度50μmol/L顺铂刺激人近端小管上皮细胞株HK-2细胞4、6、12、18、24 h构建体外顺铂致急性肾损伤模型;RT-qPCR及Western blot检测HK-2细胞pannexin-1的表达水平。结果与对照组相比,顺铂模型组肾组织pannexin-1蛋白水平及mRNA水平表达上调(P<0.005);体外实验结果显示,与对照组相比,顺铂模型组的pannexin-1蛋白水平及mRNA水平表达水平上调(P<0.005);与顺铂模型组相比,体内应用pannexin-1抑制剂Carbenoxolone处理后,可减轻顺铂所致的肾脏损伤,肾小管损伤程度明显减轻,顺铂+Carbenoxolone处理组的血浆BUN、Scr水平回降(P<0.01),肾组织KIM-1、NGAL表达减少(P<0.05),肾组织浸润的F4/80+巨噬细胞(P<0.01)及CD4~+T细胞(P<0.05)减少。结论在顺铂所致急性肾损伤小鼠模型中,Pannexin-1表达显著上调,阻断pannexin-1减少炎症细胞浸润,可减轻肾损伤。 展开更多
关键词 急性肾损伤 顺铂 肾小管上皮细胞 pannexin-1
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特异性小干扰RNA沉默CHOP对肾小管上皮细胞凋亡的影响 预览
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作者 祝高红 王筱雯 +1 位作者 戚畅 栾江威 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期698-702,共5页
目的:研究C/EBP同源蛋白(CHOP)对肾小管上皮HK2细胞凋亡的影响。方法:采用qPCR法检测急性肾损伤患者及健康对照者血清中CHOP的mRNA水平。体外培养肾小管上皮HK2细胞,随机分为对照组、阴性组和si-CHOP组,si-CHOP组和阴性组分别转染CHOP... 目的:研究C/EBP同源蛋白(CHOP)对肾小管上皮HK2细胞凋亡的影响。方法:采用qPCR法检测急性肾损伤患者及健康对照者血清中CHOP的mRNA水平。体外培养肾小管上皮HK2细胞,随机分为对照组、阴性组和si-CHOP组,si-CHOP组和阴性组分别转染CHOP小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,通过转化生长因子β1(TGF-β1)诱导细胞损伤。MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率, Western blot检测细胞中细胞核抗原Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与健康对照者相比,急性肾损伤患者血清中CHOP的表达量显著增加(P<0.05);转染CHOP siRNA显著降低肾小管上皮细胞HK2中CHOP的水平,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。敲减CHOP的表达显著增加肾小管上皮HK2细胞的活力(P<0.05),降低其凋亡率(P<0.05),增加Ki-67和PCNA的表达量(P<0.05),下调cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05)。结论:在急性肾损伤患者血清中CHOP的水平增加。敲减CHOP表达通过调节增殖和凋亡相关蛋白的表达抑制肾小管上皮HK2细胞的凋亡。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 细胞凋亡 C/EBP同源蛋白 增殖细胞核抗原
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TAK1通过调控p38 MAPK信号通路影响肾小管上皮细胞纤维化 预览
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作者 丁文飞 宋磊 +5 位作者 刘海芸 秦建华 曹灵 高利超 欧三桃 吴蔚桦 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1248-1253,共6页
目的:探讨转化生长因子β激活激酶1(TAK1)对肾小管上皮细胞纤维化的影响及机制。方法:以肾小管上皮细胞HK-2作为研究对象,用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞纤维化,以real-time PCR和Western blot检测细胞中TAK1表达的变化... 目的:探讨转化生长因子β激活激酶1(TAK1)对肾小管上皮细胞纤维化的影响及机制。方法:以肾小管上皮细胞HK-2作为研究对象,用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞纤维化,以real-time PCR和Western blot检测细胞中TAK1表达的变化。用TAK1 shRNA慢病毒感染肾小管上皮细胞,以real-time PCR和Western blot检测其对TGF-β1刺激下肾小管上皮细胞中TAK1表达的影响以检测干扰效果。ELISA法检测细胞分泌的I型胶原和Ⅲ型胶原水平,Western blot法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)和磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPKThr 180/Tyr 182)的蛋白水平。用p38 MAPK激活剂处理已敲减TAK1表达的肾小管上皮细胞,检测其对细胞分泌I型胶原和Ⅲ型胶原的影响及对细胞中α-SMA、CTGF和p-p38 MAPKThr 180/Tyr 182蛋白水平的影响。结果:TGF-β1可以明显上调肾小管上皮细胞中TAK1的表达水平。TAK1 shRNA可明显下调TGF-β1刺激下的肾小管上皮细胞中TAK1的表达水平。TGF-β1处理后的肾小管上皮细胞分泌I型胶原和Ⅲ型胶原增多,细胞中α-SMA、CTGF和p-p38 MAPKThr 180/Tyr 182蛋白水平升高。敲减TAK1表达可以明显抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞分泌I型胶原和Ⅲ型胶原,减少细胞中α-SMA、CTGF和p-p38 MAPKThr 180/Tyr 182的蛋白水平(P<0.05)。p38 MAPK激活剂处理可以逆转敲减TAK1表达对肾小管上皮细胞分泌Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原及α-SMA、CTGF和p-p38 MAPKThr 180/Tyr 182蛋白水平的抑制作用。结论:敲减TAK1表达能够通过抑制p38 MAPK信号通路而降低TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化水平。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 转化生长因子β激活激酶1 P38 MAPK信号通路 纤维化
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miR-10b通过下调KLF10促进高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT 预览
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作者 张黎黎 吕军 +5 位作者 杨荟 付莎 李劲高 黄蓉 宛霞 徐安平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1254-1260,共7页
目的:探讨微小RNA-10b(miR-10b)在高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用及相关机制。方法:通过RT-qPCR法分析2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达量;利用高糖刺激人肾小管上皮细胞HK-2建立EMT模型,RT-qPC... 目的:探讨微小RNA-10b(miR-10b)在高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用及相关机制。方法:通过RT-qPCR法分析2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达量;利用高糖刺激人肾小管上皮细胞HK-2建立EMT模型,RT-qPCR法检测miR-10b在EMT不同阶段的表达水平。在HK2细胞中分别转染miR-10b模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor) 24 h后,再给予高糖刺激,相差显微镜观察细胞形态学改变,Western blot法检测纤连蛋白(fibronectin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)等EMT标志蛋白的表达。通过在线数据库miRBase对miR-10b的作用靶点进行预测,并利用双萤光素酶报告基因实验进行验证。结果:与癌旁正常肾组织相比,2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达明显增加(P<0.01)。在高糖刺激诱导的HK-2细胞EMT中,miR-10b的表达呈现时间依赖性上调(P<0.01)。转染miR-10b inhibitor可抑制高糖诱导的HK-2细胞形态学改变以及EMT标志蛋白fibronectin、SLUG、N-cadherin和SNAI1表达的上调。在线数据库预测KLF10的3’-UTR可以与miR-10b结合,该结果被双萤光素酶报告基因实验证实。同时,KLF10过表达可以逆转高糖诱导的肾小管上皮细胞的形态学改变以及fibronectin和N-cadherin等EMT标志蛋白。进一步研究显示,miR-10b是通过抑制KLF10表达,从而激活TGF-β/Smad3通路发挥作用。结论:miR-10b可通过下调KLF10表达促进高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT。 展开更多
关键词 微小RNA-10b 上皮-间充质转化 KLF10 肾小管上皮细胞 TGF-β/Smad3信号通路
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HMGA2基因调控Notch信号通路对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响 预览
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作者 方晓琳 杨海波 +3 位作者 李宪 胡涛 张一诺 孙广平 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1261-1267,共7页
目的:探讨下调HMGA2基因表达对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞凋亡及Notch信号的影响。方法:分别用5、10、20和30 mmol/L的D-葡萄糖刺激人肾小管上皮HK-2细胞2 h及30 mmol/L的D-葡萄糖刺激HK-2细胞10 min、60 min和120 min,通过Western b... 目的:探讨下调HMGA2基因表达对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞凋亡及Notch信号的影响。方法:分别用5、10、20和30 mmol/L的D-葡萄糖刺激人肾小管上皮HK-2细胞2 h及30 mmol/L的D-葡萄糖刺激HK-2细胞10 min、60 min和120 min,通过Western blot检测HMGA2蛋白的表达。将HK-2细胞分为4个处理组,即正常葡萄糖(NG)组、HG组、HG+si-HMGA2组和HG+NC组,其中siRNA转染参照LipofectamineTM 2000说明。处理细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率;活性氧簇(ROS)检测试剂盒测定细胞ROS含量;Western blot检测Notch1、Hes1、Bcl-2和Bax的蛋白表达。使用Notch信号通路抑制剂DAPT处理HK-2细胞,将细胞分为HG组、HG+DAPT组和HG+si-HMGA2+DAPT组,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:不同浓度D-葡萄糖处理HK-2细胞及D-葡萄糖处理HK-2细胞不同时间均可明显上调HMGA2蛋白的表达,与5 mmol/L D-葡萄糖或0 min比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。与NG组比较,HG组HMGA2、Notch1和Hes1蛋白的表达明显升高,Bcl-2/Bax表达明显降低,细胞凋亡率明显升高,ROS含量明显升高(P<0.05);和HG组比较,HG+si-HMGA2组HMGA2、Notch1和Hes1蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax表达明显升高,细胞凋亡率降低,ROS含量明显降低(P<0.05)。HG+DAPT组的细胞凋亡率明显低于HG组,而HG+si-HMGA2+DAPT组的细胞凋亡率明显低于HG+DAPT组(P<0.05)。结论:下调HMGA2基因表达可通过调控Notch信号通路、降低细胞内ROS产生而抑制肾小管上皮细胞凋亡。 展开更多
关键词 HMGA2基因 糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 细胞凋亡 NOTCH信号通路
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柠檬酸对纳米细菌致人肾小管上皮细胞损伤的保护作用
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作者 董安涛 谷江 +4 位作者 张永春 杨锦春 张国庆 刘淼 夏剑锋 《临床泌尿外科杂志》 2019年第1期52-56,共5页
目的:体外观察柠檬酸对纳米细菌(NB)致人肾小管上皮细胞损伤的影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长期人肾小管上皮细胞并随机分为五组:对照组、损伤组、干预组A、干预组B及干预组C。检测各组细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(... 目的:体外观察柠檬酸对纳米细菌(NB)致人肾小管上皮细胞损伤的影响,并探讨其可能机制。方法:取对数生长期人肾小管上皮细胞并随机分为五组:对照组、损伤组、干预组A、干预组B及干预组C。检测各组细胞中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(NO)水平,实时荧光定量PCR检测ICAM-1mRNA相对表达量,Western blot检测ICAM-1、NF-κB p65、p-IκBα蛋白的表达。结果:与对照组比较,损伤组MDA含量、NO水平显著增加,SOD活性显著下降,柠檬酸干预后,MDA含量、NO水平降低,SOD活性升高,而且上述改变随柠檬酸浓度增加而明显,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR法检测结果显示对照组、损伤组、干预组A、干预组B和干预组C ICAM-1mRNA相对表达量分别为1、36.56±2.65、17.36±1.51、6.76±0.95和2.77±0.46;Western blot法检测结果显示各组细胞ICAM-1蛋白相对表达量分别为0.35±0.05、0.93±0.03、0.86±0.04、0.81±0.04和0.70±0.03;NF-κB p65蛋白相对表达量分别为0.41±0.03、0.99±0.02、0.91±0.03、0.82±0.03和0.55±0.05;p-IκBα蛋白表达量分别为0.21±0.04、0.61±0.05、0.52±0.03、0.44±0.03和0.32±0.02。结论:NB作用于体外培养的人肾小管上皮细胞后可通过激活NF-κB通路来刺激细胞表达ICAM-1,而柠檬酸可显著抑制此过程,且具有剂量依赖性。 展开更多
关键词 柠檬酸 纳米细菌 肾小管上皮细胞 损伤
SIRT1减轻缺氧复氧肾小管上皮细胞炎性损伤的实验研究 预览
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作者 俞济荣 刘璘 +1 位作者 琛许圣淳 王凤梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1036-1041,共6页
目的:研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对缺氧复氧肾小管上皮细胞炎性损伤的影响。方法:构建缺氧复氧肾小管上皮细胞损伤模型,用qRT-PCR和Westernblot方法检测细胞中SIRT1的表达变化。在肾小管上皮细胞中转染pcDNA3.1-SIRT1,qRT-PCR和Weste... 目的:研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对缺氧复氧肾小管上皮细胞炎性损伤的影响。方法:构建缺氧复氧肾小管上皮细胞损伤模型,用qRT-PCR和Westernblot方法检测细胞中SIRT1的表达变化。在肾小管上皮细胞中转染pcDNA3.1-SIRT1,qRT-PCR和Westernblot检测过表达效率。ELISA法检测细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平。Westernblot检测CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、Caspase-11蛋白水平。全自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果:缺氧复氧肾小管上皮细胞中SIRT1mRNA和蛋白水平均降低。pcDNA3.1-SIRT1转染后的肾小管上皮细胞中SIRT1mRNA和蛋白水平均明显升高。缺氧复氧肾小管上皮细胞分泌的TNF-α、IL-1β水平升高,细胞中CHOP、Caspase-11蛋白水平升高,细胞培养液中LDH水平升高。过表达SIRT1的肾小管上皮细胞经缺氧复氧处理以后,细胞分泌的TNF-α、IL-1β水平降低,细胞中CHOP、Caspase-11蛋白水平降低,细胞培养液中LDH水平降低。结论:SIRT1具有减轻缺氧复氧肾小管上皮细胞炎性损伤的作用,其可减少细胞分泌炎性因子,作用机制与内质网应激介导的Caspase-11途径有关。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 炎症因子 SIRT1 缺氧复氧
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凋亡相关蛋白、信号通路在肾小管上皮细胞凋亡中的作用机制研究进展 预览
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作者 王城 何平 彭沁雪 《山东医药》 CAS 2019年第21期96-99,共4页
凋亡是细胞在内外微环境改变时,以半胱氨酸蛋白酶(caspase)激活为主要特征,多种途径、多个细胞器共同参与的一种调控性细胞死亡。凋亡可分为内源性凋亡和外源性凋亡。肾小管上皮细胞凋亡相关的主要蛋白有Bcl-2蛋白家族、死亡受体、casp... 凋亡是细胞在内外微环境改变时,以半胱氨酸蛋白酶(caspase)激活为主要特征,多种途径、多个细胞器共同参与的一种调控性细胞死亡。凋亡可分为内源性凋亡和外源性凋亡。肾小管上皮细胞凋亡相关的主要蛋白有Bcl-2蛋白家族、死亡受体、caspase。Bcl-2蛋白家族主要参与肾小管上皮细胞内源性凋亡,死亡受体主要参与肾小管上皮细胞外源性凋亡,caspase激活是肾小管上皮细胞凋亡的核心机制。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、酪氨酸激酶(JAK)-转导和转录激活因子(STAT)、3-磷酸肌醇激酶(PI3K)-丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)等多种信号通路也参与肾小管上皮细胞凋亡。MAPK信号通路广泛参与肾脏缺血再灌注损伤导致的肾小管上皮细胞凋亡;JAKSTAT信号通路中与肾小管上皮细胞凋亡最相关的是JAK2和STAT3;PI3K-Akt信号通路可发挥抗凋亡作用。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 细胞凋亡 BCL-2蛋白 死亡受体 半胱氨酸蛋白酶 信号通路
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Netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响 预览
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作者 赵静 翟铁 梁宏霞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期231-236,共6页
目的:研究netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:用高糖培养人肾小管上皮HK-2细胞,real-timePCR和Western blot测定细胞中netrin-1的表达水平。用过表达netrin-1慢病毒感染HK-2细胞,检测其对高糖环境下HK-2细胞中netrin-... 目的:研究netrin-1对高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的影响。方法:用高糖培养人肾小管上皮HK-2细胞,real-timePCR和Western blot测定细胞中netrin-1的表达水平。用过表达netrin-1慢病毒感染HK-2细胞,检测其对高糖环境下HK-2细胞中netrin-1表达的影响。流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定cleaved caspase-3蛋白水平,2,4-二硝基苯肼法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,硫代巴比妥酸法检测培养液中丙二醛(MDA)含量,ELISA法测定培养液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。结果:高糖处理后的HK-2细胞中netrin-1的mRNA和蛋白水平均明显下调(P<0.05)。过表达netrin-1慢病毒能够上调高糖环境下HK-2细胞中netrin-1的表达水平(P<0.05)。高糖可促进肾小管上皮细胞分泌IL-1β和TNF-α,提高细胞培养液中LDH和MDA的水平(P<0.05),使肾小管上皮细胞的caspase-3活化并诱导细胞凋亡;上调netrin-1的HK-2细胞经高糖诱导后,细胞分泌的IL-1β和TNF-α减少,细胞中活化的caspase-3蛋白水平降低,培养液中LDH和MDA水平降低,细胞凋亡减少(P<0.05)。结论:上调netrin-1减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞氧化损伤和炎性损伤,减少细胞凋亡。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 NETRIN-1 糖尿病肾病 氧化损伤 细胞凋亡
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KIM-1在TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用 预览
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作者 刘波 王萍 +2 位作者 李霞 张杰 李丽 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期923-926,共4页
目的探讨肾脏损伤因子(KIM)-1在转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用。方法用TGF-β1刺激处理大鼠肾小管上皮细胞NRK52E,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平。在NRK52E中转染KIM-1... 目的探讨肾脏损伤因子(KIM)-1在转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用。方法用TGF-β1刺激处理大鼠肾小管上皮细胞NRK52E,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平。在NRK52E中转染KIM-1 siRNA,给予TGF-β1刺激后,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mR-NA和蛋白水平。Western印迹法检测细胞中上皮间质转化(EMT)标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和纤维化因子结缔组织生长因子(CTGF)、1型胶原酶(Col1)、3型胶原酶(Col3)的表达。结果对照组+TGF-β1细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。干扰组+TGF-β1细胞中KIM-1表达水平显著低于对照组+TGF-β1,差异具有统计学意义(P<0.05)。干扰组+TGF-β1细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,α-SMA表达水平降低,纤维化因子CTGF、Col1、Col3的表达也降低,与对照组+TGF-β1比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论敲低KIM-1可以减少TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达,抑制肾小管上皮细胞EMT。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 纤维化 转化生长因子Β1 肾脏损伤因子
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黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 刘新辉 《广州中医药大学学报》 CAS 2019年第2期251-255,共5页
【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。【方法】将大鼠近端肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:正常对照组、高糖刺激组(给予葡萄糖30 mmol/L,作用48 h)及黄芪甲苷干预组(给予葡萄糖30 mmol/L... 【目的】探讨黄芪甲苷对高糖诱导肾小管上皮细胞凋亡及线粒体自噬相关蛋白表达的影响。【方法】将大鼠近端肾小管上皮细胞NRK-52E分为3组:正常对照组、高糖刺激组(给予葡萄糖30 mmol/L,作用48 h)及黄芪甲苷干预组(给予葡萄糖30 mmol/L刺激的同时加用黄芪甲苷100μmol/L,48 h)。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞增殖能力;采用Westernblot法检测促凋亡蛋白cleaved-caspase-3及同源性磷酸酶张力蛋白诱导的激酶1(PINK1)/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ的表达。【结果】黄芪甲苷可有效缓解高糖对细胞增殖的抑制作用(P <0.01)。高糖可上调NRK-52E细胞促凋亡蛋白cleaved-caspase-3,线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin的表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(均P <0.01);而黄芪甲苷干预可显著下调上述促凋亡蛋白及线粒体自噬相关蛋白的表达(P <0.05或P <0.01)。【结论】黄芪甲苷可抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞NRK-52E的凋亡,减轻其由PINK1/Parkin介导的线粒体自噬。 展开更多
关键词 黄芪甲苷 高糖 凋亡 线粒体自噬 肾小管上皮细胞 细胞培养
急性肾损伤肾小管上皮细胞修复的分子机制
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作者 姜雪(综述) 李世军(审校) 《肾脏病与透析肾移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期83-87,共5页
近端小管上皮细胞凋亡或坏死是急性肾损伤(AKI)最常见的原因。各种损伤可诱导激活上皮细胞关键转录因子和上皮内再生因子,促进肾小管上皮细胞-间充质转化。肾小管上皮细胞与免疫细胞、间质细胞和内皮细胞之间复杂的分子交互作用可调节... 近端小管上皮细胞凋亡或坏死是急性肾损伤(AKI)最常见的原因。各种损伤可诱导激活上皮细胞关键转录因子和上皮内再生因子,促进肾小管上皮细胞-间充质转化。肾小管上皮细胞与免疫细胞、间质细胞和内皮细胞之间复杂的分子交互作用可调节肾脏的修复。与公认的促炎、促纤维化机制不同,越来越多的研究表明存在促进损伤后肾脏修复的巨噬细胞、T细胞、B细胞亚群。在轻中度急性肾单位损伤区域,受损的肾小管上皮细胞可完全再生修复。重度损伤区域,再生过程受损失调,引起广泛的组织重塑和纤维化。 展开更多
关键词 急性肾损伤 肾脏修复 肾小管上皮细胞 分子机制
苦参碱对顺铂诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用 预览
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作者 胡欣梦 宋雅珊 +3 位作者 麻锐 潘玲 廖蕴华 伍巧源 《广西医科大学学报》 CAS 2019年第5期706-710,共5页
目的:研究苦参碱对顺铂所致大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E损伤的保护作用。方法:将培养的肾小管上皮细胞分为3组:对照组(不干预)、顺铂组(加入50μmol/L顺铂处理24h)、顺铂+苦参碱组(加入顺铂50μmol/L和苦参碱0.5mg/mL处理24h)。显微镜下... 目的:研究苦参碱对顺铂所致大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E损伤的保护作用。方法:将培养的肾小管上皮细胞分为3组:对照组(不干预)、顺铂组(加入50μmol/L顺铂处理24h)、顺铂+苦参碱组(加入顺铂50μmol/L和苦参碱0.5mg/mL处理24h)。显微镜下观察NRK-52E细胞形态;采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性实验检测细胞生长及损伤情况;实时荧光定量PCR(qPCR)法和Western blotting法分别检测NRK-52E细胞自噬相关标志蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)基因和蛋白表达水平。结果:与对照组比较,顺铂诱导NRK-52E细胞出现形态学改变,细胞存活力下降,细胞损伤增加,LC3 mRNA水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P<0.05)。与顺铂组比较,苦参碱干预能够改善顺铂诱导的细胞形态变化,提高细胞存活力,降低细胞损伤,并进一步升高LC3mRNA水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(P<0.05)。结论:苦参碱能够改善顺铂诱导的肾小管上皮细胞毒性损伤,其可能通过增强细胞自噬水平来发挥肾保护作用。 展开更多
关键词 苦参碱 顺铂 自噬 肾小管上皮细胞
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雷公藤甲素通过调节TGF-β1信号通路和Hippo信号通路影响肾小管上皮细胞的上皮-间充质转化 预览
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作者 臧勇 田园 李卫东 《天津医科大学学报》 2019年第3期205-209,224共6页
目的:研究雷公藤甲素(TP)对肾小管纤维化抑制作用的机制。方法:将HK-2分成3组,阴性对照组不做处理,TGF-β1组用 TGF-β1处理,TGF-β1+TP组用TGF-β1和TP处理,培养48 h观察细胞的形态,利用RNA 测序技术检测各组中mRNA的表达,通过KEGG基... 目的:研究雷公藤甲素(TP)对肾小管纤维化抑制作用的机制。方法:将HK-2分成3组,阴性对照组不做处理,TGF-β1组用 TGF-β1处理,TGF-β1+TP组用TGF-β1和TP处理,培养48 h观察细胞的形态,利用RNA 测序技术检测各组中mRNA的表达,通过KEGG基因富集筛选相关通路,用Western blot检测EMT相关蛋白及富集所得信号通路中重要蛋白的表达。结果:TP处理可致HK-2形态改变。RNA测序和KEGG富集分析显示,TP显著影响TGF-β信号通路和Hippo信号通路相关基因的表达。Western blot结果表明TP可影响HK-2细胞EMT相关蛋白、TGF-β1信号通路和Hippo信号通路中的重要指标蛋白的表达。结论:TP可通过调节TGF-β1信号通路和Hippo信号通路抑制肾小管上皮细胞发生上皮-间充质转化。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 上皮间充质转化 纤维化 肾小管上皮细胞
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补体C3a及其受体在马兜铃酸Ⅰ致人源性肾小管上皮细胞损伤中的表达分析
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作者 叶晶 钱知知 +4 位作者 朱思睿 李玉 刘笑利 蔡丹红 张良 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期313-318,共6页
目的研究补体C3a(Complement 3a)及其受体C3aR(Complement 3a receptor)在马兜铃酸Ⅰ(Aristolochic acid Ⅰ,AAⅠ)诱导的人源性肾小管上皮细胞(HK-2)损伤中的作用。方法将不同浓度的AAⅠ作用于HK-2细胞后,收集细胞上清以酶联免疫吸附法(... 目的研究补体C3a(Complement 3a)及其受体C3aR(Complement 3a receptor)在马兜铃酸Ⅰ(Aristolochic acid Ⅰ,AAⅠ)诱导的人源性肾小管上皮细胞(HK-2)损伤中的作用。方法将不同浓度的AAⅠ作用于HK-2细胞后,收集细胞上清以酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清中白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和C3a含量;免疫荧光观察AAⅠ作用后HK-2细胞C3aR蛋白表达变化;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测AAⅠ作用后HK-2细胞中C3aR表达情况;RT-PCR法检测细胞内C3a、C3aR mRNA的表达。结果AAⅠ可致HK-2细胞上清中IL-6、TNF-α、C3a含量显著升高,且呈剂量依赖性;AAⅠ可增加HK-2细胞中C3aR蛋白表达及C3a、C3aR mRNA表达。结论补体C3a及其受体C3aR参与了AAⅠ致人源性肾小管上皮细胞的损伤过程,补体系统可能通过诱导炎症损伤促进马兜铃酸肾病的发生发展。 展开更多
关键词 马兜铃酸Ⅰ 马兜铃酸肾病 C3A C3aR 肾小管上皮细胞
黄芪多糖通过失活Wnt信号通路抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡
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作者 鲍芳 宋杰 +1 位作者 代喆 刘坚 《中药材》 CAS 北大核心 2019年第2期414-417,共4页
目的:研究黄芪多糖对高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:建立高糖诱导下肾小管上皮细胞损伤;运用MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中Caspase-3、Axin-1、β-catenin蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中Axin-... 目的:研究黄芪多糖对高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:建立高糖诱导下肾小管上皮细胞损伤;运用MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中Caspase-3、Axin-1、β-catenin蛋白表达;qRT-PCR法检测细胞中Axin-1、β-catenin mRNA表达。结果:与空白对照组比较,高糖(25、30、40 mmol/L)处理组细胞活力均显著降低(P<0.05),且最适浓度为40 mmol/L,在该浓度下细胞凋亡率显著升高,Caspase-3、β-catenin蛋白表达显著升高、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著降低,β-catenin mRNA显著升高(P<0.05)。与模型组比较,黄芪多糖300、400 mg/L组细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,Caspase-3、β-catenin蛋白表达及β-catenin mRNA表达显著降低、Axin-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:黄芪多糖可抑制高糖诱导下肾小管上皮细胞凋亡,其机制可能与失活Wnt信号通路有关。 展开更多
关键词 黄芪多糖 WNT信号通路 凋亡 高糖 肾小管上皮细胞
虫草菌丝抑制自噬相关AMPK/ULK1信号活性改善肾小管上皮细胞衰老的分子机制
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作者 刘不悔 何伟明 +7 位作者 万毅刚 高坤 涂玥 吴薇 陶佳音 朱婧婧 陆映丹 孙伟 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1258-1265,共8页
为了探讨虫草菌丝(mycelium of Cordyceps sinensis,MCs)改善D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的肾小管上皮细胞衰老的作用和分子机制,将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为正常组(normal group,N),模型组(D-gal model grou... 为了探讨虫草菌丝(mycelium of Cordyceps sinensis,MCs)改善D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的肾小管上皮细胞衰老的作用和分子机制,将体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为正常组(normal group,N),模型组(D-gal model group,D),低剂量MCs组(low dose of MCs,L-MCs),中剂量MCs组(medium dose of MCs,M-MCs),高剂量MCs组(high dose of MCs,H-MCs),分别进行不同的干预。具体而言,N组加入1%胎牛血清(fetal bovine ser-um,FBS)1 m L;D组加入100 mmol·L^-1 D-gal;L-MCs组加入100 mmol·L^-1 D-gal+20 mg·L^-1 MCs;M-MCs组加入100 mmol·L^-1 D-gal+40 mg·L^-1 MCs;H-MCs组加入100mmol·L^-1 D-gal+80 mg·L^-1 MCs。在干预后的24或48 h,首先,观察D-gal对NRK-52E细胞klotho,P27,P16蛋白表达水平,β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)染色以及腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)/不协调的51类激酶1(uncoordinated 51-like kinase 1,ULK1)信号活性的影响;其次,观察MCs对NRK-52E细胞增殖活性的影响;最后,观察MCs对D-gal诱导的NRK-52E细胞klotho,P27,P16蛋白表达水平,SA-β-gal染色以及哺乳动物同族物微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和AMPK/ULK1信号活性的影响。结果表明,对于NRK-52E细胞,D-gal能引起衰老,并诱导磷酸化AMPK(phosphorylated-AMPK,p-AMPK)和磷酸化ULK1(phosphorylated-ULK1,p-ULK1)蛋白高表达,激活AMPK/ULK1信号通路;中、高剂量MCs与D-gal联合干预能明显改善klotho,P27,P16蛋白表达水平和SA-β-gal染色程度,具有抗细胞衰老的作用;此外,中、高剂量MCs与D-gal联合干预能明显改善LC3,p-AMPK,p-ULK1蛋白表达水平,抑制AMPK/ULK1信号活性,提高自噬水平。总之,对于D-gal诱导的肾小管上皮细胞衰老模型,MCs在体外有抗衰老的作用,并且,通过抑制自噬相关AMPK/ULK1信号活性而干预其衰老进程。这可能是MCs抗肾小管上皮细胞衰老的新的分子机制。 展开更多
关键词 衰老 虫草菌丝 肾小管上皮细胞 自噬 AMPK/ULK1信号通路
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