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木犀草素对黑素瘤B16细胞系生长、转移及血管生成拟态形成的抑制作用研究
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作者 平晓芳 崔锡梅 +1 位作者 陈伟 邢卫斌 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期401-407,共7页
目的观察木犀草素对黑素瘤B16细胞系生长、转移及血管生成拟态形成能力的影响。方法体外培养黑素瘤B16细胞系,按培养基中木犀草素浓度分为低、中、高剂量组(2.5、5、1Oμmol/L)以及对照组(0.1%二甲基亚砜处理),分别通过划痕实验,Transw... 目的观察木犀草素对黑素瘤B16细胞系生长、转移及血管生成拟态形成能力的影响。方法体外培养黑素瘤B16细胞系,按培养基中木犀草素浓度分为低、中、高剂量组(2.5、5、1Oμmol/L)以及对照组(0.1%二甲基亚砜处理),分别通过划痕实验,Transwell侵袭实验、管道形成实验观察各组黑素瘤细胞迁移、侵袭及管道形成能力。建立C57小鼠B16黑素瘤皮下移植瘤模型,随机分为对照组(超纯水灌胃)及木犀草素低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组海组3只.木犀草素组按上述剂量每天给予灌胃,给药至荷瘤第28天处死小鼠,解剖取小鼠肺及肿瘤组织,观察各组移植黑素瘤生长、转移及血管生成拟态情况;通过免疫荧光、免疫组化实验观察木犀草素对移植黑素瘤血管内皮钙黏蛋白(VE-Cad)、血管内皮生长因子受体1 (VEGFR1)、VEGFR2、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9表达的影响。多组间均数比较采用单因素方差分析或秩和检验。结果体外实验结果显示,对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组B16细胞在48 h时相对划痕宽度分别为0.47 ±0.04,0.64 ± 0.04,0.73 ± 0.03.0.84 ± 0.04,差异有统计学意义(F = 34.51 ,P < 0.001),木犀草素低冲、高剂量组细胞迁移能力均低于对照组(均P < 0.05)。4组细胞在培养24 h时穿过小室膜的细胞数量分别为 281.00 ±8.79、169.00 ± 15.35,92.00 ± 14.79,57.00 ± 13.72,差异有统计学意义(F = 275.30,P< 0.001),木犀草素低、中、高剂量组侵袭能力均低于对照组(P<0.01);管道形成数量分别为20.00 ± 2.77、11.00± 1.28,7.00 ± 1.86,2.00 ± 1.32,差异有统计学意义(F = 48.61,P < 0.001),低、中、高剂量组均低于对照组(P < 0.01)。体内实验结果显示,对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组肿瘤终体积分别为(5.10± 1.72),(4.02 ± 2.13) 、(2.98 ±0.92)、 (1.49 ± 1.13) cm^3,差异有统计学意义(F =28.76,P <0.001);低、中、高剂量木犀草素组均� 展开更多
关键词 黑色素瘤 实验性 木犀草素 肿瘤转移 受体 血管内皮生长因子 胶原酶 血管拟态
比较两种酶消化法对真皮成纤维细胞的影响 预览 被引量:2
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作者 郭吉安 余丕军 +3 位作者 王露萍 石莹莹 柳逸 陈炜 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第8期1205-1210,共6页
背景:目前真皮成纤维细胞研究应用广泛、需求量大、分离方法多,但是用于细胞分离培养的酶消化法尚未有对比研究。目的:比较两种酶消化方法分离的真皮成纤维细胞的细胞产量、形态、迁移、增殖4个方面的差异。方法:分别使用中性蛋白酶+胶... 背景:目前真皮成纤维细胞研究应用广泛、需求量大、分离方法多,但是用于细胞分离培养的酶消化法尚未有对比研究。目的:比较两种酶消化方法分离的真皮成纤维细胞的细胞产量、形态、迁移、增殖4个方面的差异。方法:分别使用中性蛋白酶+胶原酶或胰蛋白酶分离消化真皮成纤维细胞,并进行细胞计数,原代培养并观察细胞形态学差异,采用细胞划痕实验观察细胞迁移能力并使用CCK-8检测细胞增殖活力。结果与结论:①采用中性蛋白酶+胶原酶消化的成纤维细胞在接种后六七天后融合,通过胰蛋白酶消化分离的成纤维细胞在八九天后融合,两种酶消化法都可获得真皮成纤维细胞;②与胰蛋白酶消化组相比,中性蛋白酶+胶原酶消化组的细胞产量显著增加;③划痕实验结果显示,胰蛋白酶消化的真皮成纤维细胞迁移速度较中性蛋白酶+胶原酶消化的细胞显著减慢;④两种酶消化方法分离的真皮成纤维细胞生长曲线均显示细胞数与培养时间呈正相关关系,在第3,4和5天,中性蛋白酶+胶原酶组的成纤维细胞的吸光度均显着高于胰蛋白酶组细胞的吸光度;⑤结果表明,与胰蛋白酶消化相比,用中性蛋白酶+胶原酶消化的细胞产量、迁移、增殖能力均更高;提示中性蛋白酶+胶原酶消化法优于胰蛋白酶消化法。 展开更多
关键词 成纤维细胞 真皮 胶原酶 组织工程
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比较单独消化法及分步消化法培养新生大鼠原代软骨细胞的生物学特性 预览 被引量:2
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作者 邓林峡 余慕雪 +3 位作者 潘思年 郭楚怡 丘小汕 曹志毓 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第25期4047-4052,共6页
背景:原代软骨细胞体外培养是研究骨骼生长的重要方法之一。目前原代软骨细胞的分离方法主要有单独消化法和分步消化法,但两种方法对软骨细胞生物学性能的影响尚不清楚。目的:比较两种方法对新生大鼠软骨细胞生物学性能的影响,为软骨发... 背景:原代软骨细胞体外培养是研究骨骼生长的重要方法之一。目前原代软骨细胞的分离方法主要有单独消化法和分步消化法,但两种方法对软骨细胞生物学性能的影响尚不清楚。目的:比较两种方法对新生大鼠软骨细胞生物学性能的影响,为软骨发育的程序化研究提供实验基础。方法:无菌条件下取出新生SD大鼠关节软骨,分别采用Ⅱ型胶原蛋白酶单独消化法、胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶分步消化法分离软骨细胞,并进行体外培养。光学显微镜下观察软骨细的形态,CCK-8法检测软骨细胞的增殖活性,半定量免疫荧光分析软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白表达。结果与结论:①单独消化法和分步消化法都可以得到大量软骨细胞,但分步消化法较单独消化法所得软骨细胞的纯度更高;②光学显微镜下观察,两种方法消化所得细胞在形态学上无明显差异;③单独消化法所得细胞生长速度更快;④免疫荧光半定量分析显示两种方法所得软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白表达一致;⑤以上结果表明,分步消化法更适于新生大鼠原代软骨细胞的分离培养。 展开更多
关键词 原代软骨细胞 细胞培养 Ⅱ型胶原蛋白 胰蛋白 半定量免疫荧光 细胞增殖 生长曲线 Ⅱ型胶原蛋白 干细胞 广东省自然科学基金 软骨细胞 细胞 培养的 胰蛋白 胶原酶 胶原Ⅱ型 组织工程
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临床级脐带间充质细胞制备及鉴定方法研究 预览
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作者 袁艳鹏 王淑艳 +3 位作者 唐玺和 刘仲凤 张愚 陈志国 《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》 2017年第2期65-70,共6页
目的在GLP实验室中制备并鉴定足月顺产新生儿临床级脐带间充质细胞(UC-MSC)。方法新鲜获取的脐带去除血管并进行充分清洗,获得的华通胶(Wharton’s jelly)机械分离后分别进行直接贴壁法和不同的酶消化法,比较获取UC-MSC的数量差... 目的在GLP实验室中制备并鉴定足月顺产新生儿临床级脐带间充质细胞(UC-MSC)。方法新鲜获取的脐带去除血管并进行充分清洗,获得的华通胶(Wharton’s jelly)机械分离后分别进行直接贴壁法和不同的酶消化法,比较获取UC-MSC的数量差别;用不同的无血清培养基进行培养比较细胞形态是否良好,得到最佳形态的UC-MSC。体外培养第3代后进行UC-MSC质检,包括细胞活性,生长曲线,无菌检测,人类相关病毒、支原体、内毒素检测,染色体核型分析,FACS免疫表型检测及分化能力检测。不同消化方法获取细胞数之间比较采用两样本配对t检验。结果胶原酶Ⅱ消化获得的UC-MSC数(5.3×10^6±0.58个/ml)与胶原酶Ⅰ+ 0.25﹪胰酶消化法(2.53×10^5±0.03个/ml)及直接贴壁法(2.6×10^5±0.05个/ml)之间差异有统计学意义(P 〈 0.05),与胶原酶Ⅰ消化法获取细胞数(5.1×10^6±0.57个/ml)之间差异无统计学意义(P = 0.07),但培养视野最干净;MesenCult-ACF Medium培养获得的UC-MSC形态最佳;UC-MSC质检细胞活性冻存前达99.8﹪,冻存复苏后达99﹪;无细菌、支原体、乙肝病毒、丙肝病毒、梅毒螺旋体、艾滋病毒、肺炎支原体、EB病毒、巨细胞病毒污染;内毒素检测结果均〈 1 EU;CD73/CD90/CD10^5阳性率达98﹪,CD34/CD45/HLA-DR呈阴性,阳性率〈 2﹪;染色体核型分析无突变或缺失;UC-MSC具有成脂、成骨或成软骨方向分化的能力。结论通过优化分离和培养条件,采用无血清及无动物来源的培养系统,在GLP实验室内可获得临床级UC-MSC。 展开更多
关键词 脐带 间质细胞 胶原酶 培养基、无血清 细胞分化
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重组人源胶原蛋白Ⅲ对肛周术后创口愈合的影响和意义 预览 被引量:2
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作者 王永刚 翟春宝 +2 位作者 田利军 史珍珍 徐可 《中国药物与临床》 CAS 2017年第8期1109-1111,共3页
目的研究重组人源胶原蛋白Ⅲ对肛周术后创口愈合的影响和意义。方法采用随机对照试验(RCT)分两组研究,研究组采用重组人源胶原蛋白Ⅲ对肛周创口进行换药,对照组采用紫草膏换药。分别观察创口缩小效率、最大瘢痕厚度、瘢痕指数、创口... 目的研究重组人源胶原蛋白Ⅲ对肛周术后创口愈合的影响和意义。方法采用随机对照试验(RCT)分两组研究,研究组采用重组人源胶原蛋白Ⅲ对肛周创口进行换药,对照组采用紫草膏换药。分别观察创口缩小效率、最大瘢痕厚度、瘢痕指数、创口愈合时间,并通过创口组织学、蛋白免疫印迹法半定量及m RNA定量等方法,分析创口组织转化生长因子β1、Smad3信号蛋白、胶原蛋白Ⅰ和Ⅲ的变化情况。结果研究组平均在术后5 d后开始出现肉芽,7-14 d间可见中心上皮化,最快愈合期发生在11-16 d,愈合后最大瘢痕厚度平均为2.7 mm,肛门括约功能正常;4-7 d时,创口组织明显出现胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ,14 d时其比例接近3∶1,28 d时,胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ含量接近正常皮肤组织,其比例为4∶1。对照组最快愈合期发生在18-23 d,愈合后最大瘢痕厚度平均为4.3 mm,影响肛门括约功能;7 d时,创口内胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达量仍较少,14 d时其比例接近8∶1,28 d时胶原蛋白Ⅰ表达量超过正常皮肤,胶原蛋白Ⅲ表达量明显低于正常皮肤,其比例仍高达6∶1。创口内转化生长因子β1和Smad3信号蛋白m RNA在研究组及对照组早期表达逐渐增高,中、后期下降,但研究组在创口愈合早期,表达量更多,后期表达量更少,P均〈0.05。结论重组人源胶原蛋白Ⅲ可促进肛周术后创口愈合,其机制可能与其双向调控创口组织转化生长因子β1和Smad3信号蛋白相关。 展开更多
关键词 胶原酶 伤口愈合 肛周腺
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兔骨膜细胞分离培养的方法改进 预览 被引量:2
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作者 张峻玮 陆海涛 +1 位作者 袁峰 杨宇明 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第24期3523-3528,共6页
背景:近年来,骨膜作为细胞治疗的种子细胞来源,因其自身的优越性而备受关注。目的:探讨兔骨膜细胞分离培养的最佳方法及其生物学特性。方法:无菌条件下取出兔胫骨内侧面骨膜,以Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法分离培养兔骨膜细胞,置... 背景:近年来,骨膜作为细胞治疗的种子细胞来源,因其自身的优越性而备受关注。目的:探讨兔骨膜细胞分离培养的最佳方法及其生物学特性。方法:无菌条件下取出兔胫骨内侧面骨膜,以Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法分离培养兔骨膜细胞,置于DMEM/F12完全培养基培养。倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测骨膜细胞增殖活性,绘制细胞生长曲线图;流式细胞仪检测细胞表型CD90、CD105;成骨诱导培养基诱导骨膜细胞成骨分化,2周后茜素红染色检测钙结节沉积;成脂诱导培养基诱导骨膜细胞成脂分化,2周后油红O染色检测脂滴颗粒。结果与结论:(1)Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法原代培养耗时短,提高了组织块成活率;Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法获得的骨膜细胞纯度较高,增殖能力强,呈梭形旋涡状或平形状生长,茜素红染色、油红O染色证实骨膜细胞具有多向分化潜能;(2)结果表明,Ⅱ型胶原酶消化结合组织块贴壁法能够在较短时间内获得高纯度的骨膜细胞,且增殖能力强,细胞具有多向分化能力。 展开更多
关键词 骨膜 细胞分离 胶原酶 细胞分化 组织工程 组织构建 骨细胞 骨膜细胞 分离培养 Ⅱ型胶原酶
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牙龈缺损修复中钙结合蛋白和胶原酶-1的浓度变化 预览 被引量:1
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作者 董露 杨琴秋 +3 位作者 肖琼 尹晓桦 陈红亮 孙勇 《现代医药卫生》 2016年第10期1441-1442,1445共3页
目的检测富血小板纤维蛋白(PRF)膜与胶原膜修复拔牙术后牙龈缺损各时间节点的分泌物中钙结合蛋白和胶原酶-1的水平,评价PRF对牙龈缺损的修复和调节局部炎性反应的能力。方法选取2013年8月至2014年12月到成都军区机关医院种植修复临床... 目的检测富血小板纤维蛋白(PRF)膜与胶原膜修复拔牙术后牙龈缺损各时间节点的分泌物中钙结合蛋白和胶原酶-1的水平,评价PRF对牙龈缺损的修复和调节局部炎性反应的能力。方法选取2013年8月至2014年12月到成都军区机关医院种植修复临床专科中心就诊,需拔除磨牙并同期进行位点保存的患牙16例,随机分为PRF膜组和胶原膜组,各8例。拔牙后,牙槽窝内植入Bio-Oss骨替代材料,表面分别覆盖PRF膜或胶原膜。通过ELISA检测术区在术后3、7、14、21、28 d创面分泌物中胶原酶-1和钙结合蛋白的水平,动态评价PRF对牙龈缺损的修复和调节局部炎性反应的能力。结果钙结合蛋白水平在术后3、7 d胶原膜组均明显高于PRF膜组,差异均有统计学意义(P〈0.05);术后14、21、28 d胶原膜组稍高于PRF膜组,但差异无统计学意义(P〉0.05)。胶原酶-1水平在术后3、7 d PRF膜组均明显高于胶原膜组,差异均有统计学意义(P〈0.05);术后14、21、28 d PRF组稍高于胶原膜组,差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论PRF能促进牙龈缺损的修复,减轻术区局部炎性反应。PRF膜是一种有一定抗感染能力的生物活性再生平台材料,有一定的临床价值。 展开更多
关键词 牙龈疾病 钙结合蛋白质 富血小板纤维蛋白 胶原酶 牙修复体 口腔
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不同月龄兔膝关节软骨单位原位及体外酶解消化形态学分析
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作者 段王平 孙振伟 +2 位作者 李琦 赵昱 卫小春 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期292-297,共6页
目的分析不同月龄兔膝关节软骨单位原位及体外酶解消化的形态学变化特点,探索软骨单位及细胞周基质在关节软骨退变机制中的作用。方法取新西兰白兔30只,按月龄分为3组:幼年组(2月龄)、中年组(8月龄)及老年组(31月龄),每组各1... 目的分析不同月龄兔膝关节软骨单位原位及体外酶解消化的形态学变化特点,探索软骨单位及细胞周基质在关节软骨退变机制中的作用。方法取新西兰白兔30只,按月龄分为3组:幼年组(2月龄)、中年组(8月龄)及老年组(31月龄),每组各10只。每组选5只兔,取其双侧膝关节股骨髁软骨进行原位组织切片形态学观察,包括HE、甲苯胺蓝及Ⅱ、Ⅵ型胶原免疫荧光染色。每组余下的5只兔,采用浓度为0.3g/L的Dispase酶和0.2g/L的Ⅱ型胶原酶联合搅拌消化3h的方法获取各组兔膝关节软骨单位,采用倒置显微镜及HE、VI型胶原免疫荧光染色等方法观察各组软骨单位体外组织形态学特点。结果随月龄增长,兔膝关节软骨组织中软骨细胞周基质界限逐渐清楚,软骨深层出现大量由细胞周基质包裹纵向排列2~4个软骨细胞的软骨单位形态。与单纯软骨细胞相比,体外酶解消化软骨单位细胞周基质成分明显、完整,保留了不同月龄软骨单位原位组织形态学特点,中、老年组软骨单位细胞周基质明显增厚,老年组由多个软骨细胞构成的软骨单位比例可达47%。结论随月龄增长,软骨单位及细胞周基质形态发生明显变化,提示细胞周基质在关节软骨成熟退变过程中维持软骨细胞微环境的作用。 展开更多
关键词 膝关节 软骨细胞 胶原酶
表没食子儿茶素没食子酸酯对脱矿牙本质粘接面改性的研究
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作者 孙秋榕 古丽莎 +2 位作者 武诗语 黄紫华 麦穗 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期148-153,共6页
目的 探讨经天然交联剂表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)改性后脱矿牙本质粘接面的渗透率、亲水性、耐酶解能力及粘接耐久性的变化,寻找可用于牙本质粘接面预处理的理想天然交联剂.方法 2%牛血清白蛋白溶... 目的 探讨经天然交联剂表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)改性后脱矿牙本质粘接面的渗透率、亲水性、耐酶解能力及粘接耐久性的变化,寻找可用于牙本质粘接面预处理的理想天然交联剂.方法 2%牛血清白蛋白溶液模拟髓压,测定在模拟龋病条件下0.02%、0.1%EGCG对牙本质表面渗透率的影响,空白对照组牛血清白蛋白溶液中不含EGCG,阳性对照组为脱敏剂处理组(每组15个试件).检测近髓和远髓牙本质经0.1%EGCG预处理60和120 s、0.5和1h后表面接触角的变化,空白对照组不经EGCG预处理(每组10个试件).扫描电镜观察空白对照组,0.02%、0.1%及0.5%EGCG预处理组(均预处理120 s)经100 mg/L Ⅰ型胶原酶处理后牙本质粘接界面形态的改变;检测4组牙本质粘接试件冷热循环前后微拉伸强度(即粘接强度,每组每种处理方式30个试件).结果 与空白对照组相对渗透率[(151.3±22.3)%]相比;0.1%EGCG牙本质表面相对渗透率[(23.7±6.3)%]显著减少(P<0.05).与空白对照组相比,0.1%EGCG预处理120 s、0.5和1h后,近髓牙本质表面接触角分别提高31.0%、53.5%、57.8%;远髓牙本质表面接触角分别提高37.4%、59.3%、62.4%.0.1%和0.5%EGCG预处理120 s后牙本质粘接试件冷热循环前粘接强度分别为(29.4±4.8)和(19.8±4.9) MPa,冷热循环后粘接强度分别为(19.9±5.1)和(15.3±6.3) MPa.结论 模拟龋病条件下,0.1%EGCG可使牙本质表面渗透性降低;0.1%EGCG预处理使牙本质粘接基底疏水性提高,耐酶解能力增强,从而提高粘接耐久性. 展开更多
关键词 牙本质通透性 牙本质粘结剂 胶原酶 表没食子儿茶素没食子酸酯
两种外源性酶对牙本质粘接界面的老化作用初探 被引量:1
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作者 邓东来 杨宏业 +3 位作者 郭景梅 黄翠 甘靖 宋芳芳 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期230-234,共5页
目的 比较两种外源性酶对牙本质粘接界面的老化效果,探讨酶解作为牙本质粘接耐久性实验方法的可行性.方法 选取完整无龋离体第三磨牙40颗,用随机数字表法分为两组(每组20颗),去除冠部釉质,暴露中部牙本质,分别用全酸蚀粘接剂(A组)... 目的 比较两种外源性酶对牙本质粘接界面的老化效果,探讨酶解作为牙本质粘接耐久性实验方法的可行性.方法 选取完整无龋离体第三磨牙40颗,用随机数字表法分为两组(每组20颗),去除冠部釉质,暴露中部牙本质,分别用全酸蚀粘接剂(A组)和自酸蚀粘接剂(B组)粘接,树脂塑形,切割为横截面积为0.9 mm×0.9 mm的牙本质-树脂粘接试件.每组再分为4个亚组(每亚组20个试件):即刻亚组(水储存24 h后即刻实验)、水储存老化亚组(水储存6个月)、胶原酶老化亚组(溶组织梭菌胶原酶老化12周)、酯酶老化亚组(胆固醇酯酶老化12周).各亚组相应处理后,分别测试微拉伸强度(即粘接强度,每亚组15个试件);采用体式显微镜和背散射扫描电镜观察试件断面断裂模式,并观察粘接界面纳米渗漏情况(每亚组5个试件).结果 全酸蚀粘接剂组和自酸蚀粘接剂组3个老化亚组的粘接强度均显著低于即刻亚组(P<0.05);使用全酸蚀粘接剂的胶原酶老化亚组粘接强度[(19.6±3.5) MPa]显著低于水储存老化亚组[(23.4±4.2)MPa]和酯酶老化亚组[(24.2±4.2)MPa](P<0.05);使用自酸蚀粘接剂的3个老化亚组粘接强度差异无统计学意义(P>0.05).扫描电镜显示,相对于即刻亚组,使用两种粘接剂的3个老化亚组粘接界面银颗粒沉积明显增多.体式显微镜显示,两种粘接剂各亚组均以粘接界面断裂为主要断裂模式.结论 溶组织梭菌胶原酶和胆固醇酯酶均能降低牙本质粘接界面的粘接强度,达到老化的目的;模拟口腔生物环境的外源性酶老化可作为新的粘接界面老化方式. 展开更多
关键词 胶原酶 固醇酯 牙粘合 粘接耐久性
新生大鼠心肌细胞的分离与培养 预览 被引量:2
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作者 王现涛 李浪 +2 位作者 苏强 孙羽涵 杨华锋 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2015年第7期745-747,共3页
目的探讨新生大鼠心肌细胞分离与培养的条件和方法,建立简单、可靠的原代心肌细胞培养方法。方法新生SD乳鼠10只,开胸取心剪碎后,胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化心肌组织,差速贴壁法纯化心肌细胞。倒置荧光相差显微镜下连续观察15 d心肌... 目的探讨新生大鼠心肌细胞分离与培养的条件和方法,建立简单、可靠的原代心肌细胞培养方法。方法新生SD乳鼠10只,开胸取心剪碎后,胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化心肌组织,差速贴壁法纯化心肌细胞。倒置荧光相差显微镜下连续观察15 d心肌细胞形态特征及变化。用0.4%锥虫蓝染色测心肌细胞存活率,记录心肌细胞搏动次数。结果心肌细胞24 h基本贴壁并伸出伪足,出现自发性搏动,72 h后心肌细胞逐渐形成细胞簇,并呈现部分同步搏动,之后心肌细胞连接成片生长。心肌细胞存活率为96.5%,培养72 h至第15天内心肌细胞搏动次数无差异(P〉0.05)。结论用该法分离与培养新生大鼠心肌细胞,操作简单且稳定可靠,心肌细胞存活率较高。 展开更多
关键词 肌细胞 心脏 胰蛋白 胶原酶 存活率 细胞 培养的 模型 动物
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人脐带沃顿胶间充质干细胞体外分离条件的优化及传代效应的流式细胞学检测 预览
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作者 洪敬欣 李茜 韩俊领 《天津医药》 CAS 2015年第2期142-146,共5页
目的观察不同胶原酶消化方法对人脐带沃顿胶间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)分离和培养结果的影响,并鉴定其分化潜能;探讨传代效应对其免疫表型的影响。方法将制备好的脐带标本分别加入Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅳ型胶原酶,持续消化4-18... 目的观察不同胶原酶消化方法对人脐带沃顿胶间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)分离和培养结果的影响,并鉴定其分化潜能;探讨传代效应对其免疫表型的影响。方法将制备好的脐带标本分别加入Ⅰ型、Ⅱ型及Ⅳ型胶原酶,持续消化4-18 h,筛网过滤,离心收集细胞,用DMEM/F12培养基重悬细胞,调整细胞密度4.8×10^3-1×10^4/cm^2,接种培养,比较不同消化法分离人脐带沃顿胶MSC的效果。Von kossa钙结节染色、四环素荧光标记鉴定人脐带沃顿胶MSC向成骨方向分化的能力,RT-PCR鉴定其向心肌细胞分化的能力。应用流式细胞仪检测连续传代后MSC的免疫表型变化。结果Ⅰ型胶原酶消化法能够从人脐带沃顿胶获取了数量较多、活力较高的MSC,而且细胞出现伸展的时间及原代培养时间均短于Ⅱ型胶原酶及Ⅳ型胶原酶消化法。表面标记分析显示:随着传代次数的增加,阳性标记CD29、CD44、CD73、CD90、CD105的表达百分率没有变化,而阴性标记CD31、CD34和HLA-DR的表达率增加明显。体外诱导实验表明:来源于人脐带沃顿胶的MSC具有体外成骨和成心肌样细胞分化的能力。结论Ⅰ型胶原酶消化法简单易行,对细胞损伤小,能稳定、高效地从人脐带沃顿胶中分离出MSC。 展开更多
关键词 脐带 间质干细胞 胶原酶 传代效应 沃顿胶
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Ⅱ型胶原酶消化时间对兔软骨细胞生物学特性的影响 预览
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作者 袁德超 陈竹 +1 位作者 邓尚 冯刚 《重庆医学》 CAS 北大核心 2015年第32期4553-4555,4559共4页
目的探索Ⅱ型胶原酶消化法分离兔肋软骨细胞的最佳消化时间。方法取3月龄新西兰大白兔肋软骨组织,采用0.2%Ⅱ型胶原酶分别消化4、8、12、16、20h,对应为A、B、C、D、E组,获取细胞后进行培养。通过比较5组P2代软骨细胞在形态、增殖速度... 目的探索Ⅱ型胶原酶消化法分离兔肋软骨细胞的最佳消化时间。方法取3月龄新西兰大白兔肋软骨组织,采用0.2%Ⅱ型胶原酶分别消化4、8、12、16、20h,对应为A、B、C、D、E组,获取细胞后进行培养。通过比较5组P2代软骨细胞在形态、增殖速度、细胞内基质分泌等方面的差异,选择合适的消化时间。结果 C、D、E组获取的原代软骨细胞数量比A、B组多;C、D组P2代软骨细胞增殖能力强于其他3组;C、D组P2代细胞内基质分泌情况最佳。结论Ⅱ型胶原酶最佳消化时间为12-16h,获取的原代软骨细胞数量多,活性率较高,增殖能力强,P2代软骨细胞表型良好。 展开更多
关键词 胶原酶 软骨细胞 生物学特性 细胞培养技术
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经皮激光盘内减压术联合胶原酶溶盘术治疗腰椎间盘突出症的疗效 被引量:2
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作者 宋德伟 吴玉东 +1 位作者 李凤磊 崔新霞 《实用疼痛学杂志》 2014年第4期283-285,共3页
目的 探讨经皮激光盘内减压术(PLDD)联合胶原酶溶盘术治疗腰椎间盘突出症的疗效.方法 采用经皮激光盘内减压术联合胶原酶溶盘术治疗腰椎间盘突出症80例,术后6个月时采用VAS和MacNab评价标准进行疗效评价.结果 所有患者均获得随访,术后... 目的 探讨经皮激光盘内减压术(PLDD)联合胶原酶溶盘术治疗腰椎间盘突出症的疗效.方法 采用经皮激光盘内减压术联合胶原酶溶盘术治疗腰椎间盘突出症80例,术后6个月时采用VAS和MacNab评价标准进行疗效评价.结果 所有患者均获得随访,术后6个月时优良率为93.7%(75/80例).结论 经皮激光盘内减压术联合胶原酶溶盘术治疗腰椎间盘突出症疗效确切. 展开更多
关键词 腰椎间盘突出症 经皮激光盘内减压术 胶原酶
老年豚鼠喉部细胞外基质成分的改变和意义
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作者 李翠娥 周涛 +1 位作者 陶泽璋 詹娜 《中华老年医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期807-809,共3页
目的 探讨老年豚鼠喉部透明质酸和胶原蛋白的变化及意义. 方法 选取健康4月龄(对照组)豚鼠和2年龄豚鼠(老年组)各6只,分别用Alcian blue和Masson三色染色法观察两组豚鼠喉部透明质酸和胶原蛋白的表达情况,用Image-Pro Plus 6.0 For ... 目的 探讨老年豚鼠喉部透明质酸和胶原蛋白的变化及意义. 方法 选取健康4月龄(对照组)豚鼠和2年龄豚鼠(老年组)各6只,分别用Alcian blue和Masson三色染色法观察两组豚鼠喉部透明质酸和胶原蛋白的表达情况,用Image-Pro Plus 6.0 For Window图像分析软件处理,对两组结果进行比较. 结果 对照组透明质酸和胶原蛋白表达的吸光度值分别为0.80和0.63,而老年组分别为0.69和0.71,老年组透明质酸的含量较对照组降低,胶原蛋白含量较对照组升高,差异均有统计学意义(F均分别为13.45、9.56,均P<0.05). 结论 老年豚鼠喉部透明质酸降低,胶原蛋白增加,可能通过改变声带的黏弹性能导致嗓音发生年龄相关性改变. 展开更多
关键词 透明质酸 胶原酶 声音
人脐带间充质干细胞不同分离方法的效果比较 被引量:5
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作者 刘玲英 柴家科 +8 位作者 段红杰 侯玉森 尹会男 郁永辉 胡泉 郝岱峰 冯光 李涛 杜俊东 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第32期2592-2596,共5页
目的对比分析分离人脐带间充质干细胞(MSCs)常用方法的效果,筛选比较高效的分离方法。方法采集足月剖宫产手术胎儿的脐带组织(n=15),充分洗涤后去除3条脐血管及脐带外膜,将其剪碎至1mm^3的组织块,洗涤离心确定组织块的总体积,... 目的对比分析分离人脐带间充质干细胞(MSCs)常用方法的效果,筛选比较高效的分离方法。方法采集足月剖宫产手术胎儿的脐带组织(n=15),充分洗涤后去除3条脐血管及脐带外膜,将其剪碎至1mm^3的组织块,洗涤离心确定组织块的总体积,平均分为4组,分别采用组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法,分离获得人脐带MSCs,行锥虫蓝染色计数细胞;倒置相差显微镜观察细胞形态;使用免疫荧光染色检测细胞表面标志物CDl05、CD90、CD73、CD31、CD44、CD45、人类白细胞抗原Ⅰ(HLA—Ⅰ)和人类白细胞抗原Ⅱ类分子(HLA—DR)的表达情况,进行细胞鉴定;噻唑蓝(MTY)法检测细胞的增殖曲线。结果组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法4种方法均可分离获得干细胞,但获得细胞的数量和增殖能力不同。4种方法获得的细胞数量分别为(5.44±0.21)×10^5、(4.03±0.24)×10^5、(4.91±0.33)×10^5和(5.94±0.40)×10^5,胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著多于其他3种方法,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。组织块法种植后第9~11天观察到细胞在组织块周围生长,而其他3种方法种植后第2天即可见贴壁生长的细胞。4种方法细胞达到90%-95%融合的时间分别为(18.5±3.5)、(8.0±1.0)、(7.5±1.5)、(3.5±0.5)d,胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著短于其他3组,差异均有统计学意义(均P〈0.05)。组织块法原代细胞的形态多为多角形,不规则,细胞的体积较大,单纯胶原酶Ⅱ消化法和胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法原代细胞的形态均较短小,而胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法细胞形态呈细长的梭形。4种方法得到的细胞均阳性表达CDl 展开更多
关键词 间质干细胞 脐带 胶原酶 胰蛋白 细胞分离
不同胶原酶消化对原代成骨细胞获得率及活性的比较 预览 被引量:5
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作者 李玲慧 丁道芳 +2 位作者 杜国庆 王辉昊 詹红生 《中国骨伤》 CAS 2013年第4期328-331,共4页
目的:比较I、Ⅱ型胶原酶对新生大鼠颅盖骨的消化效果,选择效率较高的胶原酶,为日后从细胞水平研究中药治疗骨质疏松症的机制提供大量种子细胞。方法:新生24hSD大鼠10只,雌雄不限,脱颈处死后取出颅盖骨,剪成约1mmX1mm的碎片,采... 目的:比较I、Ⅱ型胶原酶对新生大鼠颅盖骨的消化效果,选择效率较高的胶原酶,为日后从细胞水平研究中药治疗骨质疏松症的机制提供大量种子细胞。方法:新生24hSD大鼠10只,雌雄不限,脱颈处死后取出颅盖骨,剪成约1mmX1mm的碎片,采用胰酶预消化15min后将骨片按重量平分成两等份,随机分为I型组、Ⅱ型组,分别用0.1%I型、0.1%Ⅱ型胶原酶37℃消化1hX2次,所得细胞置于5%C02培养箱中37℃恒温培养。原代细胞分别于培养0h、72h时采用血球计数板进行计数,第2代细胞于培养48h后采用NBT/BCIP染色液进行染色,并通过对硝基苯磷酸盐法(PNPP)进行ALP定量检测。结果:镜下观察所获得的细胞形态不规则,细胞计数显示I型组细胞数量大于Ⅱ型组;AIP染色为阳性;PNPP法测得两组吸光度均值分别为0.427和0.262,I型组显著高于Ⅱ型组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论:两种胶原酶均适用于成骨细胞的原代消化,但采用I型胶原酶获得的细胞数量更多、活性更好,可为日后骨质疏松症的机制研究提供优质的种子细胞。 展开更多
关键词 成骨细胞 原代培养 胶原酶 大鼠
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I型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中消化效果的对比研究 预览 被引量:5
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作者 汤小康 应航 +2 位作者 李敏 包洁 童培建 《中医正骨》 2013年第6期6-9,共4页
目的:比较I型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中的消化效果。方法:取6只新生24h内的SD大鼠,处死后取出颅盖骨并制成碎骨片。将碎骨片等分成2份,标记为I组和Ⅱ组,分别用0.1%I型胶原酶和0.1%Ⅱ型胶原酶在37℃消化2次,每次1h。将... 目的:比较I型与Ⅱ型胶原酶在原代成骨细胞培养中的消化效果。方法:取6只新生24h内的SD大鼠,处死后取出颅盖骨并制成碎骨片。将碎骨片等分成2份,标记为I组和Ⅱ组,分别用0.1%I型胶原酶和0.1%Ⅱ型胶原酶在37℃消化2次,每次1h。将2次消化所得到的细胞悬液混匀后进行细胞培养,并对2组细胞分别进行细胞计数,观察细胞形态、细胞增殖情况及碱性磷酸酶染色情况,并测定碱性磷酸酶含量。结果:①细胞计数。I组细胞3次细胞计数结果分别为6.20×10^5个·mL^-1、6.00X10^5个·mL^-1、5.90X10’个·mL^-1;Ⅱ组细胞3次细胞计数结果分别为3.20X10’个·mL^-1、3.40X10’个·mL^-1、2.90×10^5个·mL^-1。I组细胞总量为Ⅱ组细胞总量的2倍左右。②细胞形态。2组细胞多呈梭形,表面有2~3个突触与周围细胞相联系,2组细胞形态无明显差异。③细胞增殖。I组光密度(0.492±0.001)与Ⅱ组光密度(0.491±0.002)比较,差异无统计学意义(t=0.379,P:0.713)。④碱性磷酸酶染色。2组细胞用苏木素染色后,胞浆内均可见明显的咖啡色和红棕色颗粒。⑤碱性磷酸酶含量。I组碱性磷酸酶含量[(2.929±0.024)金氏单位]与Ⅱ组[(2.933±0.024)金氏单位]比较,差异无统计学意义(t:0.389,P=0.706)。结论:I型胶原酶和Ⅱ型胶原酶均适用于成骨细胞的原代消化,但在消化1hX2次条件下用I型胶原酶容易获得更多的成骨细胞。 展开更多
关键词 成骨细胞 细胞培养技术 胶原酶 动物实验
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胶原酶溶核术联合硬膜外注药治疗颈、腰椎间盘突出症的疗效 被引量:2
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作者 卞署晓 胡雯 王建军 《实用疼痛学杂志》 2012年第5期343-345,共3页
目的观察胶原酶溶核术联合硬膜外注药术治疗颈、腰椎间盘突出症的效果。方法颈、腰椎间盘突出症患者406例,采用胶原酶溶核术联合硬膜外注药进行治疗。于治疗前和治疗后3、12个月时采用疼痛强度评分(VAS)评估疼痛程度,并观察治疗前... 目的观察胶原酶溶核术联合硬膜外注药术治疗颈、腰椎间盘突出症的效果。方法颈、腰椎间盘突出症患者406例,采用胶原酶溶核术联合硬膜外注药进行治疗。于治疗前和治疗后3、12个月时采用疼痛强度评分(VAS)评估疼痛程度,并观察治疗前后临床体征变化。结果显效、有效、好转、无效率依次为82.0%(333/406例)、9.4%(38/406例)、5.7%(23/406例)、3.0%(12/406例);与治疗结束,PN相比,治疗后3、12个月时VAS评分下降;51岁以上年龄组疗效较其他年龄组差,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论胶原酶溶核术联合硬膜外注药术是治疗颈、腰椎间盘突出症的有效疗法。 展开更多
关键词 椎间盘突出症 胶原酶 溶核术 注射 硬膜外
胶原酶软化CTO中纤维瘢块的实验研究进展 预览
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作者 强北平 Bradley Strauss 《实用心脑肺血管病杂志》 2012年第8期1267-1269,共3页
冠状动脉慢性全梗阻(CTO)是指梗阻3个月以上,冠状动脉造影时TIMI分级为0或1级的病变。胶原酶的主要作用是降解基质中的胶原纤维。CTO瘢块的主要组成成分之一是胶原纤维,是导引钢丝通过CTO病变的主要障碍。本实验室在过去的10年中,利... 冠状动脉慢性全梗阻(CTO)是指梗阻3个月以上,冠状动脉造影时TIMI分级为0或1级的病变。胶原酶的主要作用是降解基质中的胶原纤维。CTO瘢块的主要组成成分之一是胶原纤维,是导引钢丝通过CTO病变的主要障碍。本实验室在过去的10年中,利用实验性CTO动物模型进行了大量的实验研究,试图利用胶原酶软化纤维瘢块,促进CTO的介入再通治疗,本文对这些实验研究予以综述。 展开更多
关键词 胶原酶 纤维蛋白 冠状血管
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