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腺苷对肺癌脑转移的影响及其可能机制 预览
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作者 唐明科 魏殿芳 +2 位作者 刘洋 张超越 秦丽娟 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期19-22,共4页
目的探讨腺苷对肺癌脑转移的影响及其可能机制。方法采用Western blot法检测肺癌细胞内缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)和血脑屏障脑微血管内皮细胞上的紧密连接蛋白ZO-1的表达水平;应用ELISA法测定肺癌细胞培养液内... 目的探讨腺苷对肺癌脑转移的影响及其可能机制。方法采用Western blot法检测肺癌细胞内缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)和血脑屏障脑微血管内皮细胞上的紧密连接蛋白ZO-1的表达水平;应用ELISA法测定肺癌细胞培养液内腺苷的含量。采用荧光分析法检测体外血脑屏障模型的通透性改变;用Hemocytometer计数Transwell下室的A549肺癌细胞数。结果肺癌细胞中HIF-1的表达和肺癌细胞培养液内腺苷含量均于肺癌细胞缺氧12 h时达最高水平。与此同时,血脑屏障ZO-1蛋白的表达最低,血脑屏障通透性最大(7.11),透过血脑屏障模型的肺癌细胞数最多(84.6)。腺苷引起血脑屏障通透性增加,其变化趋势与缺氧肺癌细胞培养液的作用一致。结论缺氧可引起肺癌细胞释放腺苷增多,增多的腺苷导致血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达减少,导致血脑屏障通透性增大,最终引起肺癌脑转移。 展开更多
关键词 肺肿瘤 转移 腺苷 HIF-1 微血管内皮细胞 ZO-1蛋白
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丹蒌片对Aβ1-40致脑微血管内皮细胞损伤模型活性的影响 预览
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作者 高爱社 杨洒 +2 位作者 刘亚美 陈芳 张妍 《中医学报》 CAS 2019年第9期1936-1938,1963共4页
目的:观察丹蒌片对β淀粉样蛋白(β-Amyloid protein,Aβ)致脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)损伤模型活性的影响。方法:培养BMEC,用Aβ1-40造成BMEC损伤,加入不同剂量的丹蒌片含药血清,6 h、12 h、24 h后... 目的:观察丹蒌片对β淀粉样蛋白(β-Amyloid protein,Aβ)致脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)损伤模型活性的影响。方法:培养BMEC,用Aβ1-40造成BMEC损伤,加入不同剂量的丹蒌片含药血清,6 h、12 h、24 h后用CCK8染色法检测细胞活性,并检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的漏出量。结果:与正常对照组比较,模型组细胞活性降低,细胞培养上清液中LDH释放量增加(P<0.01)。与模型组比较,12 h后各剂量丹蒌片含药血清组细胞活性显著升高,12 h细胞活性高于24 h的细胞活性(P<0.05);丹蒌片含药血清各组细胞培养上清液中LDH水平降低,12 h上清液中LDH水平显著低于6 h、24 h(P<0.05);高剂量、中剂量含药血清组细胞上清液LDH水平显著降低(P<0.05)。结论:丹蒌片能提高Aβ1-40致BMEC损伤后细胞的活性,减少细胞LDH的漏出量,起到保护脑微血管内皮的作用。 展开更多
关键词 丹蒌片 微血管内皮细胞 Β淀粉样蛋白 乳酸脱氢酶
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2种方法测定氧化铜纳米颗粒对新生大鼠脑微血管内皮细胞毒性的比较研究 预览
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作者 张丽霞 顾雯 +1 位作者 张宏伟 段链 《癌变.畸变.突变》 CAS 2019年第2期133-137,共5页
目的:比较实时细胞分析技术(RTCA)和刃天青法测定氧化铜纳米颗粒(CuO-NPs)对新生大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的细胞毒性的异同。方法:采用RTCA法确定BMECs细胞毒性实验的最佳细胞接种数量及染毒时间。分别用1.5、0.75、0.38、0.19、0.0... 目的:比较实时细胞分析技术(RTCA)和刃天青法测定氧化铜纳米颗粒(CuO-NPs)对新生大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的细胞毒性的异同。方法:采用RTCA法确定BMECs细胞毒性实验的最佳细胞接种数量及染毒时间。分别用1.5、0.75、0.38、0.19、0.09mg/mL的CuO-NPs染毒BMECs,以无细胞的培养液为对照组(0mg/mL),分别以RTCA法及刃天青法比较其细胞毒性。通过比较2种方法所获得的IC50值判断2种毒性测试方法的相关性。结果:每孔2.5×10^3个细胞为BMECs最佳接种浓度,接种后40h为最佳染毒时间。RTCA检测结果表明1.5、0.75mg/mL的CuO-NPs染毒BMECs后约2h开始细胞活性降低,并在染毒4h内全部死亡。通过刃天青法分别在染毒3、12、24、36、48h进行测定,得到与RTCA相似的结果,即1.5和0.75mg/mL组的细胞毒性最大,且CuO-NPs对BMECs的细胞毒性呈剂量依赖性趋势。相关性分析结果显示2种方法所获得IC50值相关系数为0.999,P=0.000,具相关性。配对t检验结果显示,差异无统计学意义(t=1.125,P=0.323)。从计算IC50的R2值来看,RTCA拟合曲线法R2值高于刃天青法R2值。结论:CuO-NPs体外作用于BMECs具有剂量依赖性的细胞毒性,RTCA方法与刃天青法测定BMECs细胞毒性结果具有相关性,RTCA方法所得结果可能更为准确,更适合于CuO-NPs的细胞毒性研究。 展开更多
关键词 氧化铜纳米颗粒 微血管内皮细胞 RTCA实时监测 刃天青法 细胞毒性
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丁苯酞对S-亚硝基化谷胱甘肽诱导脑微血管内皮细胞损伤的保护作用及机制研究 预览
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作者 严洁萍 章水均 +4 位作者 张国兵 胡颖 罗丹 江红娟 李敏静 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2019年第5期517-522,共6页
目的:构建S-亚硝基化谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)诱导脑微血管内皮细胞的损伤模型,探讨丁苯酞(Butylphthalide,dL-NBP)对脑微血管内皮细胞的保护作用与可能的分子调控机制。方法:建立损伤bEnd.3细胞模型,以MTT法检测细胞存活率... 目的:构建S-亚硝基化谷胱甘肽(S-nitrosoglutathione,GSNO)诱导脑微血管内皮细胞的损伤模型,探讨丁苯酞(Butylphthalide,dL-NBP)对脑微血管内皮细胞的保护作用与可能的分子调控机制。方法:建立损伤bEnd.3细胞模型,以MTT法检测细胞存活率。DCFH染色检测细胞活性氧水平。Western blot法检测p-ERK,ERK,cleaved caspase 9,pro-caspase 9,cleaved caspase 3,pro-caspase 3蛋白表达。RT-PCR法检测糖皮质激素受体(GR)、SGK、MKP-1基因表达水平。结果:dL-NBP(5,10,20 μmol/L)可减少GSNO引起的脑微血管内皮细胞损伤,提高细胞存活率,减少ROS发生。此外,dL-NBP可激活SGK和MKP-1转录水平的增加,上调ERK磷酸化,抑制cleaved caspase 9,cleaved caspase 3蛋白上调。结论:dL-NBP对GSNO诱导的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制与激活PR活性下游基因SGK和MKP-1,上调ERK磷酸化水平,抑制caspase级联反应密切相关。 展开更多
关键词 丁苯酞 微血管内皮细胞 S-亚硝基化谷胱甘肽 ERK磷酸化 活性氧
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桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用 预览
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作者 陈芳芳 韩岚 +3 位作者 彭代银 汪蒙蒙 胡寿山 夏文文 《安徽中医药大学学报》 2019年第3期61-67,共7页
目的观察桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用。方法采用氧-葡萄糖剥夺再恢复的方法诱导脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)和PC12细胞共培养体系的缺糖缺... 目的观察桃红四物汤对脑微血管内皮细胞-PC12细胞共培养体系缺糖缺氧再灌注损伤模型的保护作用。方法采用氧-葡萄糖剥夺再恢复的方法诱导脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)和PC12细胞共培养体系的缺糖缺氧再灌注损伤模型,并通过流式细胞仪检测PC12细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,酶联免疫吸附法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性,采用Western Blot法检测Bcl-2、Bax和缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达水平。结果桃红四物汤促进PC12细胞的活力,抑制细胞凋亡和ROS的产生,抑制MDA的活性,增强SOD和GSH-Px的活性,上调HIF-1α和Bcl-2的表达并下调Bax的表达。结论桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与抗氧化作用有关。 展开更多
关键词 桃红四物汤 缺糖缺氧 再灌注损伤 微血管内皮细胞 PC12细胞 共培养 抗氧化作用
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p115RhoGEF/RhoA信号通路在高糖致脑微血管内皮细胞通透性异常中的作用
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作者 蔡倩 郭慕真 +1 位作者 朱晨笛 黄敏 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期154-162,共9页
目的探讨p115RhoGEF/RhoA信号通路在高浓度葡萄糖(Glucose)致小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3通透性异常中的作用。方法体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),构建单层血脑屏障体外模型。通过ESR电阻仪测定跨内皮细胞间电阻(TEER),分光光... 目的探讨p115RhoGEF/RhoA信号通路在高浓度葡萄糖(Glucose)致小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3通透性异常中的作用。方法体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),构建单层血脑屏障体外模型。通过ESR电阻仪测定跨内皮细胞间电阻(TEER),分光光度法检测碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷胺酞胺转移酶(γ-GT)活性以评估其屏障功能;对照组(5.6mmol/L葡萄糖)、高糖诱导组(15.6、25.6、35.6、45.6mmol/L葡萄糖)处理细胞48h,MTT检测细胞相对存活率,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平,评估高糖对脑微血管内皮细胞通透性的影响;Western blot检测不同浓度葡萄糖处理细胞后p115RhoGEF蛋白表达水平,体外蛋白与蛋白结合试验(Pull-Down)检测RhoA活性。转染p115RhoGEF-siRNA建立p115RhoGEF基因沉默的bEnd.3细胞模型,检测不同处理组RhoA活性及p115RhoGEF、TJ蛋白表达水平。结果细胞TEER值随培养时间延长逐渐升高,ALP、γ-GT活力均随时间延长逐渐升高;与对照组比较,35.6、45.6mmo/L葡萄糖诱导组的细胞活力出现明显下降作用,且诱导时间越长,细胞存活率越低(P<0.05);35.6mmol/L葡萄糖诱导组的LDH水平明显升高(P<0.05);随着葡萄糖浓度升高,ZO-1、Occludin蛋白表达下降而p115RhoGEF蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);Pull-down结果显示,25.6、35.6mmol/L葡萄糖组的RhoA活性较对照组明显升高(P<0.05)。细胞转染p115RhoGEF-siRNA后,p115RhoGEF蛋白表达较对照组明显下降;高糖诱导48h后,与NCsiRNA组比较,p115RhoGEF-siRNA组的GTP-RhoA活性下降、 ZO-1、 Occludin表达水平明显上调(P<0.05)。结论高糖通过诱导p115RhoGEF/RhoA信号通路活化,下调紧密连接蛋白表达,引起脑微血管内皮细胞通透性增加。 展开更多
关键词 糖尿病血管病变 屏障 微血管内皮细胞 P115RhoGEF/RhoA信号通路
艾灸督脉组穴对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和RAGE、LRP-1表达的影响 预览
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作者 王婧吉 吴生兵 +2 位作者 王堃 杨超 程红亮 《安徽中医药大学学报》 2019年第5期48-52,共5页
目的观察艾灸督脉组穴对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-... 目的观察艾灸督脉组穴对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LDL-receptor related protein-1,LRP-1)表达的影响,探讨艾灸督脉组穴治疗VD的作用机制。方法采用Morris水迷宫筛选后,将SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组,每组12只。采用颈总动脉结扎反复缺血再灌注法复制模型,艾灸组取“百会”“大椎”“风府”温和灸30 min,每日1次,7次为1个疗程,共治疗4个疗程。采用Morris水迷宫法对大鼠进行行为学检测,采用免疫组织化学法检测皮质和海马组织中RAGE和LRP-1表达水平,并分析行为学检测结果与RAGE和LRP-1之间的相关性。结果各时间点模型组逃避潜伏期均较正常组明显延长(P<0.05),艾灸组逃避潜伏期均较模型组明显缩短(P<0.05);模型组大鼠穿越平台次数明显少于正常组(P<0.05),艾灸组大鼠穿越平台次数明显多于模型组(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠海马和皮质中RAGE表达增多,LRP-1表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,艾灸组大鼠海马和皮质中RAGE表达减少、LRP-1表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05)。大鼠穿越平台次数与海马和皮质内RAGE存在显著负相关关系,与海马和皮质内LRP-1存在显著正相关关系。结论艾灸督脉组穴可明显改善VD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与下调大鼠BMECs的RAGE表达和上调LRP-1表达有关。 展开更多
关键词 艾灸 血管性痴呆 学习记忆能力 微血管内皮细胞 晚期糖基化终产物受体 低密度脂蛋白受体相关蛋白-1
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左归降糖通脉方含药血清对晚期糖基化终末产物诱导脑微血管内皮细胞损伤的影响
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作者 李钰佳 李定祥 +2 位作者 马钟丹妮 周韩 邓奕辉 《中医杂志》 CSCD 北大核心 2019年第3期237-241,共5页
目的探讨左归降糖通脉方治疗糖尿病血管并发症的可能作用机制。方法将30只大鼠随机分为空白组、中药组和西药组,每组10只。中药组给予左归降糖通脉方36 g/(kg·d)灌胃,西药组给予尼莫地平片18. 35 mg/(kg·d)及格列齐特缓释片27... 目的探讨左归降糖通脉方治疗糖尿病血管并发症的可能作用机制。方法将30只大鼠随机分为空白组、中药组和西药组,每组10只。中药组给予左归降糖通脉方36 g/(kg·d)灌胃,西药组给予尼莫地平片18. 35 mg/(kg·d)及格列齐特缓释片27. 5 mg/(kg·d)灌胃,空白组予以4 ml蒸馏水灌胃,均每日1次,连续5天,制备含药血清。将晚期糖基化终末产物(AGEs)设为50、100、200、400 mg/L 4个浓度组,分别作用12、24、48 h 3个时间点,观察AGEs对大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)形态结构改变的影响来筛选最佳干预浓度和时间。将左归降糖通脉方含药血清分为2. 5%、5%、10%3个浓度组,作用于BMECs 24 h后,测定BMECs增殖率来确定左归降糖通脉方中药含药血清的最佳作用浓度。再将BMECs分为空白组、模型组、中药组、西药组,中药组和西药组分别加入相应含药血清进行干预。检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1 (ICAM-1)、血管细胞黏附分子1 (VCAM-1)的含量。结果AGEs的最佳干预浓度和时间点为200 mg/L作用24 h,中药含药血清的最佳作用浓度为5%。与空白组比较,模型组上清液中IL-1β、ICAM-1、VCAM-1含量明显升高(P <0. 05);与模型组比较,中药组和西药组IL-1β、ICAM-1、VCAM-1明显下调(P <0. 05)。结论左归降糖通脉方能下调IL-1β、ICAM-1、VCAM-1表达,从而抑制炎症反应,可能是其治疗糖尿病血管并发症的作用机制之一。 展开更多
关键词 糖尿病血管并发症 左归降糖通脉方 晚期糖基化终末产物 微血管内皮细胞 炎症因子
细胞自噬对缺血性脑卒中转归中的作用研究进展
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作者 敖路遥 李运曼 《药学进展》 CAS 2019年第8期584-592,共9页
自噬是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质,维持内环境稳态的过程。缺血性脑卒中是一类由于大脑区域的血流供应中断而发生的疾病,由于其发病率较高,寻找治疗窗宽、疗效好的缺血性脑卒中治疗药物成为研究热点。缺血性脑卒... 自噬是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质,维持内环境稳态的过程。缺血性脑卒中是一类由于大脑区域的血流供应中断而发生的疾病,由于其发病率较高,寻找治疗窗宽、疗效好的缺血性脑卒中治疗药物成为研究热点。缺血性脑卒中发生后,自噬在大脑许多细胞中被激活,但自噬在脑卒中发病中的作用和机制尚不明确。综述细胞自噬对缺血性脑卒中转归中的作用研究进展,旨在为开发以自噬为靶点的缺血性脑卒中治疗药物提供依据。 展开更多
关键词 自噬 缺血性卒中 神经元 胶质细胞 微血管内皮细胞
微小RNA-126联合薯蓣总皂苷对缺血再灌注模型神经干细胞-血管内皮细胞血管形成的作用机制研究
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作者 许琼冠 李强 +1 位作者 徐鹏翔 付宙锋 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期2563-2566,共4页
目的探讨miR-126联合薯蓣总皂苷(TD)诱导缺血再灌注(I/R)模型神经干细胞(NSCs)-血管内皮细胞血管形成的调控机制。方法提取新生SD小鼠的NSCs和脑微血管内皮细胞(BMECs)。体外复制NSCs-BMECs共培养的I/R模型。将NSCs-BMECs共培养体系分为... 目的探讨miR-126联合薯蓣总皂苷(TD)诱导缺血再灌注(I/R)模型神经干细胞(NSCs)-血管内皮细胞血管形成的调控机制。方法提取新生SD小鼠的NSCs和脑微血管内皮细胞(BMECs)。体外复制NSCs-BMECs共培养的I/R模型。将NSCs-BMECs共培养体系分为5组:对照组(正常培养组)和模型组(进行I/R诱导)、TD组(TD处理+I/R诱导)、mimic-NC+TD组(BMECs转染mimic-NC质粒+TD处理+I/R诱导)、miR-126mimic+TD组(BMECs转染miR-126mimic质粒+TD处理+I/R诱导),TD剂量均为8μg·mL^-1,16h后收集BMECs。基质胶用于检测血管形成能力,实时定量-聚合酶链反应用于检测miR-126表达,免疫印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达。结果对照组、模型组、TD组、mimic-NC+TD组和miR-126mimic+TD组的管腔长度分别为(4.42±0.67),(1.51±0.58),(2.74±0.84),(2.81±0.89)和(6.38±1.15)mm·mm^-2;模型组与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),说明I/R损伤抑制BEMCs血管新生;miR-126mimic+TD组与mimic-NC+TD组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。TD组、mimic-NC+TD组、和miR-126mimic+TD组p-PI3K/PI3K的蛋白表达水平(OD比值)分别为0.66±0.03,0.62±0.03和1.33±0.08;这3组p-AKT/AKT的蛋白表达水平(OD比值)分别为0.71±0.03,0.76±0.03和1.55±0.06,miR-126mimic+TD组与mimic-NC+TD组相比,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-126联合TD能显著促进I/R诱导后NSCs-BMECs系统血管新生,其作用机制可能与miR-126激活PI3K/AKT信号通路有关。 展开更多
关键词 薯蓣总皂苷 神经干细胞 微血管内皮细胞 血管形成 缺血再灌注 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路
脑髓康保护糖氧剥夺诱导损伤脑微血管内皮细胞的机制研究
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作者 蔡浩斌 林松俊 +8 位作者 郑浩涛 华骏 王建军 周流畅 刘立瑾 庞喜乐 李薇 潘华峰 虢周科 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1984-1988,共5页
目的:探讨脑髓康对糖氧剥夺(OGD)诱导损伤大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)保护作用的机制原理。方法:构建RBMEC损伤模型,按实验分组给予含相应血清的培养液处理,应用CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,分光光度法检测细胞中... 目的:探讨脑髓康对糖氧剥夺(OGD)诱导损伤大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)保护作用的机制原理。方法:构建RBMEC损伤模型,按实验分组给予含相应血清的培养液处理,应用CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,分光光度法检测细胞中氧化应激相关因子超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量,Western Blot法检测细胞中内质网应激相关因子CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和半胱胺酸蛋白酶蛋白-12(Caspase 12)的表达情况。结果:与糖氧剥夺组比较,脑髓康能够显著提高OGD诱导损伤RBMEC的存活率(P<0.01),并且显著抑制其凋亡率(P<0.01);能够缓解OGD诱导损伤RBMEC中的氧化应激,显著提高细胞中SOD和GSH-Px的活性(P<0.01,P<0.05),同时降低细胞中MDA的含量(P<0.01);此外,脑髓康显著降低了内质网应激相关因子CHOP和Caspase 12的表达水平(P<0.01)。结论:脑髓康可能通过缓解氧化应激以及抑制内质网应激介导的细胞调亡途径,对OGD诱导损伤RBMEC发挥保护作用。 展开更多
关键词 髓康 糖氧剥夺 微血管内皮细胞 氧化应激 内质网应激 中药药理
星形胶质细胞及淋巴细胞在多发性硬化血脑屏障中作用机制研究 被引量:1
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作者 闫晓波 李晨晔 +2 位作者 邱晓恬 赵延峰 杨永梅 《国际免疫学杂志》 CAS 2018年第6期620-624,共5页
目的 本研究旨在探索星形胶质细胞(astrocyte,AS)和淋巴细胞(lymphocytes,LCs)在多发性硬化(multiple sclerosis,MS)血脑屏障(blood brain barrier,BBB)受损中的作用.方法 分离初代大鼠脑微血管内皮细胞(rat brain microvascular endoth... 目的 本研究旨在探索星形胶质细胞(astrocyte,AS)和淋巴细胞(lymphocytes,LCs)在多发性硬化(multiple sclerosis,MS)血脑屏障(blood brain barrier,BBB)受损中的作用.方法 分离初代大鼠脑微血管内皮细胞(rat brain microvascular endothelial cell,rBMECs)和鼠AS并建立体外BBB模型.通过比较rBMECs单培养和其与AS混合培养组的跨内皮细胞电阻(transendothelial cell resistance,TEER)和渗透性来评估正常BBB的细胞模式.在rBMECs和LCs共培养组和rBMECs、AS、LCs共培养组中通过对神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、白细胞介素(interleukin,IL)-17、干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、FoxP3的mRNA表达水平的检测进一步研究MS的炎症反应特点.结果rBMECs和AS共培养组比rBMECs单培养组的TEER高(>300Ωcm2),而其LCs渗透率却更低(<200000).与rBMECs单培养组相比,rBMECs、AS、LCs共培养组的NGF、IL-17、IFN-γ的表达降低,而MMP-2和Foxp3表达增高,差异均有统计学意义(P=0.036,0.022).与rBMECs和AS的共培养相比,rBMECs、AS、LCs共培养组MMP-2的表达增加,NGF,IL-17和IFN-γ的表达降低.结论AS和LCs之间相互作用的可能会增加MMP-2的表达,降低IL-17、IFN-γ的表达.提示AS与LCs的协同作用可能参与了MS的发病. 展开更多
关键词 屏障 微血管内皮细胞 内皮细胞电阻
建立体外血脑脊液屏障模型方法学研究 预览
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作者 张海威 张丹参 +3 位作者 苏晓梅 赵凯燕 武春阳 张力 《神经药理学报》 2018年第3期1-8,共8页
目的:采用原代分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)和星形胶质细胞(astrocyte,As)建立相对简单可靠、重复性好、接近在体状态的体外血脑脊液屏障(blood-cerebrospinal fluid ... 目的:采用原代分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)和星形胶质细胞(astrocyte,As)建立相对简单可靠、重复性好、接近在体状态的体外血脑脊液屏障(blood-cerebrospinal fluid barrier,blood-CSF barrier)模型。方法:原代分离、纯化和培养BMECs和As,通过细胞形态学和免疫细胞化学染色方法鉴定原代培养的细胞;通过培养在具有特殊质材和孔径的Transwell小室上建立体外血脑脊液屏障实验模型,采用倒置显微镜观察细胞形态结构,经跨内皮电阻值(trans endothelial electrical resistance,TEER)、4h液面试漏实验、两种特征性酶检测、荧光素钠通透性(sodium fluorescent,Na-FLU)评价模型的屏障功能。结果:原代培养的BMECs具有典型的“铺路石”样外观,Ⅷ因子鉴定细胞纯度在95%以上;As有细长突触,胞质较浅,胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic portein,GFAP)鉴定细胞纯度在95%以上。通过测定TEER值共培养模型组显示高电阻值(378.97±11.38)Ω·cm^2;4h液面试漏试验阳性;γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达分别为(30.88±2.87)μmol·min^-1·mL^-1和(2.51±0.88)金氏单位·100mL^-1;Na-FLU跨膜渗透系数(2.228±0.85)×10^6cm·s^-1。结论:建立的体外血脑脊液屏障模型在形态学、电阻和通透性方面具备了血脑脊液屏障的基本特性。 展开更多
关键词 脊液屏障 体外模型 微血管内皮细胞 内皮细胞电阻值
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布鲁菌S2株感染脑微血管内皮细胞体外模型的构建 预览 被引量:1
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作者 徐婷 李海宁 +3 位作者 张吉 杨娟 王国玮 王振海 《宁夏医科大学学报》 2018年第2期181-185,共5页
目的构建布鲁菌S2株感染脑微血管内皮细胞的体外模型。方法布鲁菌S2株采用大豆酪蛋白培养基培养4d,通过革兰染色及柯兹罗夫斯基染色进行细菌鉴定;布鲁菌S2株感染脑微血管内皮细胞后,通过透射电镜和胞内菌落计数观察布鲁菌进入胞内的情况... 目的构建布鲁菌S2株感染脑微血管内皮细胞的体外模型。方法布鲁菌S2株采用大豆酪蛋白培养基培养4d,通过革兰染色及柯兹罗夫斯基染色进行细菌鉴定;布鲁菌S2株感染脑微血管内皮细胞后,通过透射电镜和胞内菌落计数观察布鲁菌进入胞内的情况;通过细胞存活率和乳酸脱氢酶活性观察布鲁菌S2株对细胞膜的影响,外设空白对照组;采用流式细胞仪观察布鲁菌S2株感染脑微血管内皮细胞凋亡的情况,外设空白对照组。结果透射电镜显示布鲁菌S2株能够感染脑微血管内皮细胞并存在于内吞泡内,胞内菌落计数法统计细胞内菌量发现,胞内活菌量随转染时间的延长而增加(P〈0.05),感染48h胞内菌落数高于12h和24h(P〈0.05),感染12h和24h胞内菌落数差异无统计学意义(P〉0.05);台盼蓝染色结果显示空白组与处理组间细胞存活率差异无统计学意义(P〉0.05);在感染初期(12h前)细胞内的乳酸脱氢酶活性会增高,会对细胞膜造成损伤,在24h到48h的时候,细胞内的乳酸脱氢酶活活性较低,对细胞膜的损伤较小;流式细胞仪检测显示空白组与处理组间细胞凋亡率差异无统计学意义(P〉0.05)。结论本实验成功构建布鲁菌S2株感染脑微血管内皮细胞体外模型,明确了布鲁菌S2株能够进入脑微血管内皮细胞并在胞内存活。 展开更多
关键词 布鲁菌S2株 微血管内皮细胞 体外模型
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高表达miR-132-3p间充质干细胞外泌体对缺氧/复氧受损脑微血管内皮细胞功能的改善作用 预览
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作者 杜东辉 王艳 +7 位作者 许小冰 郑杰怡 张惠婷 邝晓丽 马晓瑭 赵斌 陈颜芳 潘群文 《中国脑血管病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第11期584-591,共8页
目的研究高表达miR-132-3p间充质干细胞(MSCs)释放的外泌体(EXs)对缺氧/复氧(H/R)受损内皮细胞功能的作用。方法原代培养从C57BL/6小鼠骨髓中提取的MSCs,采用装载miR-132-3p载体的慢病毒感染MSCs获得MSC~(miR-132-3p),同时采用... 目的研究高表达miR-132-3p间充质干细胞(MSCs)释放的外泌体(EXs)对缺氧/复氧(H/R)受损内皮细胞功能的作用。方法原代培养从C57BL/6小鼠骨髓中提取的MSCs,采用装载miR-132-3p载体的慢病毒感染MSCs获得MSC~(miR-132-3p),同时采用装载有scramble序列的对照慢病毒感染MSCs获得MSC~(NC)。分离提取MSC~(NC)及MSC~(miR-132-3p)释放的EXs,分别获得MSC-EXs及MSC-EXs~(miR-132-3p)。将所得EXs与H/R受损小鼠脑微血管内皮细胞(bend3)共培养,根据培养条件将细胞分为正常培养组(细胞正常培养)、H/R组(制作H/R模型)、MSC-EXs处理组(MSC-EXs共培养)、MSC-EXs~(miR-132-3p)处理组(MSC-EXs~(miR-132-3p)共培养)、MSC-EXs~(miR-132-3p)+LY294002组[细胞与MSC-EXs~(miR-132-3p)共培养前加入磷脂酰肌醇(-3)激酶(PI3K)信号通路阻断剂LY294002(20μmol/L)处理]。实时荧光定量聚合酶链反应检测MSCs、MSC-EXs及bend3细胞中miR-132-3p的表达。血管形成试剂盒检测bend3细胞血管形成能力,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测bend3细胞增殖能力,划痕实验检测bend3细胞迁移能力,hochest33258染色显示细胞的凋亡,Western blot检测蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果与H/R组相比,MSC-EXs处理组显著改善H/R诱导下bend3细胞受损的血管形成、增殖、迁移能力及Akt磷酸化水平[H/R组分别为(3±1)条、0. 275±0. 020、(147±8)μm和0. 89±0. 12; MSC-EXs处理组分别为(8±3)条、0. 358±0. 030、(218±10)μm和1. 37±0. 25,均P 〈0. 01],细胞凋亡明显减少[(47±2)%比(63±2)%,均P 〈0. 01]。与MSC-EXs处理组比较,MSC-EXs~(miR-132-3p)处理组bend3细胞的血管形成、增殖、迁移能力及Akt磷酸化水平增加[分别为(14±3)条、0. 444±0. 050、(357±10)μm和1. 67±0. 23,均P 〈0. 01],细胞凋亡明显减少[(34±1)%,P 〈0. 01]。与MSC-EXs~(miR-132-3p� 展开更多
关键词 miR-132-3p 间充质干细胞 外泌体 微血管内皮细胞 细胞功能
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瑞舒伐他汀改善缺氧/复氧引起的脑微血管内皮细胞损伤的作用 预览
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作者 王圆圆 白雅 +3 位作者 马晨超 郭超 秦娜 魏东 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2018年第10期1796-1804,共9页
目的:探讨瑞舒伐他汀改善缺氧/复氧引起的小鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)损伤的作用及其可能机制。方法:原代分离培养BALB/c小鼠BMECs,利用氧糖剥夺/复氧模拟体外缺血再灌注损伤,以瑞舒伐... 目的:探讨瑞舒伐他汀改善缺氧/复氧引起的小鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)损伤的作用及其可能机制。方法:原代分离培养BALB/c小鼠BMECs,利用氧糖剥夺/复氧模拟体外缺血再灌注损伤,以瑞舒伐他汀处理干预。观察细胞形态,通过MTT实验测定BMECs细胞的活力,荧光染料羧基荧光素二乙酸酯琥珀酰亚胺脂(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFDA-SE)细胞增殖检测试剂盒观察造模及用药后细胞数目百分比的变化;免疫荧光染色检测细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的水平;Western blot法检测Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)2、MMP9、磷酸化核因子κB(phosphorylated nuclear factor kappa B,p-NF-κB)、磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated P38 mitogen-activated protein kinase,p-P38)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)的蛋白水平。结果:浓度为10μmol/L的瑞舒伐他汀可抑制氧糖剥夺/复氧诱导的BMECs存活率减低现象,同时维持BMECs结构。此外,瑞舒伐他汀能够显著抑制cleaved caspase-3、MMP2、MMP9、p-NF-κB、p-P38及p-JNK的蛋白水平(P<0.05),上调氧糖剥夺/复氧导致的Bcl-2/Bax降低(P<0.05)。结论:瑞舒伐他汀可通过降低凋亡相关蛋白及基质金属蛋白酶的表达,对抗缺氧/复氧引起的BMECs损伤,提示其在缺血再灌注损伤时维持血脑屏障完整性方面具有潜在应用价值。 展开更多
关键词 瑞舒伐他汀 屏障 氧糖剥夺 微血管内皮细胞 细胞凋亡
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下调孕烷X受体表达对谷氨酸诱导的小鼠脑微血管内皮细胞P-糖蛋白表达和功能的影响 预览
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作者 程永菲 余年 狄晴 《临床神经病学杂志》 2018年第6期450-455,共6页
目的 探索下调孕烷X受体(PXR)表达对谷氨酸(GLU)模拟癫痫发作环境下小鼠脑微血管内皮细胞(m BMEC) P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的影响。方法 体外培养小鼠脑微血管内皮b End. 3细胞,分为不同浓度GLU处理组(以0μmol/L、10μmol/L、50μmo... 目的 探索下调孕烷X受体(PXR)表达对谷氨酸(GLU)模拟癫痫发作环境下小鼠脑微血管内皮细胞(m BMEC) P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的影响。方法 体外培养小鼠脑微血管内皮b End. 3细胞,分为不同浓度GLU处理组(以0μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L GLU处理细胞30 min),GLU不同时间处理组(以100μmol/L GLU处理细胞0 min、15 min、30 min);使用siRNA-PXR特异性抑制PXR表达,分为对照siRNA(NC siRNA)+GLU组、siRNA-PXR+GLU组。Western blotting检测细胞PXR和P-gp蛋白表达,细胞免疫荧光法检测细胞核内PXR蛋白表达,RT-qPCR检测细胞P-gp mRNA表达,罗丹明123(Rh123)细胞蓄积实验检测P-gp外排功能。结果 与空白组相比,50μmol/L和100μmol/L GLU组PXR和P-gp蛋白表达均增高(均P <0. 05),尤以100μmol/L组PXR和P-gp蛋白表达最明显。与空白组相比,15 min和30 min组PXR蛋白表达均增加(均P <0. 05),30 min组P-gp蛋白表达增加(P <0. 05)。与空白组相比,100μmol/L GLU组胞核内PXR表达增加(P <0. 05)。与NC siRNA+GLU组相比,siRNA-PXR+GLU组PXR蛋白表达下调了37%[(1. 00±0. 00) vs (0. 63±0. 18); t=3. 41,P=0. 02],P-gp蛋白表达下调了43%[(1. 00±0. 00) vs(0. 57±0. 09); t=7. 94,P=0. 00],P-gp mRNA表达下调了52%[(1. 00±0. 04) vs (0. 48±0. 08); t=10. 98,P=0. 00]。GLU组细胞内Rh123荧光强度(0. 72±0. 01)较空白组降低[(1. 00±0. 03); t=9. 66,P=0. 00];GLU+维拉帕米(P-gp抑制剂)组(1. 07±0. 04)较GLU组增高(t=-11. 93,P=0. 00); siRNA-PXR+GLU组(0. 91±0. 03)较NC siRNA+GLU组增高[(0. 69±0. 05); t=-7. 52,P=0. 00]。结论 下调PXR表达能够抑制m BMEC在GLU模拟癫痫发作环境下的P-gp表达及其功能,提示PXR参与调控癫痫发作诱导血-脑屏障P-gp表达及其功能。 展开更多
关键词 孕烷X受体 P-糖蛋白 谷氨酸 微血管内皮细胞 耐药性癫痫
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脑心通胶囊对缺糖缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用及其机制 被引量:5
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作者 王海燕 周惠芬 +4 位作者 何昱 杨洁红 虞立 李畅 万海同 《中草药》 CSCD 北大核心 2018年第14期3318-3325,共8页
目的探讨脑心通胶囊(NXT)对乳鼠缺糖缺氧损伤脑微血管内皮细胞(rBMECs)的体外保护作用及其机制。方法原代培养rBMECs,进行兔抗鼠VⅢ因子鉴定,MTT筛选出NXT肠吸收液体外保护rBMECs的质量浓度范围,优选出3个质量浓度进行实验。实验设... 目的探讨脑心通胶囊(NXT)对乳鼠缺糖缺氧损伤脑微血管内皮细胞(rBMECs)的体外保护作用及其机制。方法原代培养rBMECs,进行兔抗鼠VⅢ因子鉴定,MTT筛选出NXT肠吸收液体外保护rBMECs的质量浓度范围,优选出3个质量浓度进行实验。实验设对照组、模型组、尼莫地平(200μg/mL)组、不同质量浓度(62.50、125.00、250.00 mg/L)NXT肠吸收液组、NXT肠吸收液(250.00 mg/L)和LY294002(20μmol/L,PI3K/Akt通路抑制剂)共作用组。倒置显微镜下观察rBMECs形态,按照ELISA试剂盒方法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平,Hoechst33342染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测各组rBMECs的早期凋亡率,Western blotting法检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达情况。结果与模型组相比,NXT不同质量浓度给药组均能显著改善rBMECs的形态,降低细胞上清液中LDH、MMP-9的量,显著降低rBMECs的凋亡数和早期凋亡率,可显著抑制PI3K/Akt通路中p-Akt、Bcl-2的表达上调及Bax的表达下降,抑制Caspase-3活性。PI3K/Akt信号通路的特异性抑制剂LY294002的加入,阻断了该通路信号的传导,显著降低了NXT的保护作用。结论 NXT对缺糖缺氧致rBMECs损伤具有抗凋亡保护作用,其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多
关键词 心通胶囊 微血管内皮细胞 缺糖缺氧损伤 凋亡 PI3K/AKT
不同浓度氯化钴对原代脑微血管内皮细胞增殖与缺氧诱导因子HIF-1α表达的研究 预览
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作者 李建明 施琛 张英 《新疆医学》 2018年第12期1278-1281,1267共5页
目的研究不同浓度的氯化钴(CoCl2)对原代脑微血管内皮细胞(BMECs)细胞增殖和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法利用不同浓度的(0、50、100、200、400、800μmol/L)CoCl2建立原代脑微血管内皮细胞缺氧模型。通过MTT法检测CoCl2... 目的研究不同浓度的氯化钴(CoCl2)对原代脑微血管内皮细胞(BMECs)细胞增殖和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法利用不同浓度的(0、50、100、200、400、800μmol/L)CoCl2建立原代脑微血管内皮细胞缺氧模型。通过MTT法检测CoCl2对原代脑微血管内皮细胞的体外生长增殖活性的影响。定量PCR(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法检测BMECs中HIF-1α的mRNA及蛋白表达情况。结果 MTT显示CoCl2对BMECs细胞增殖抑制作用表现出浓度依赖性抑制作用。免疫印迹法显示HIF-1α的蛋白表达水平在(50、100、400、800)μmol/L,HIF-1α在细胞中的表达与CoCl2浓度0μmol/L没有差异改变(P> 0.05),浓度为200μmol/L时,HIF-1α蛋白表达与对照组CoCl2浓度为0μmol/L相比有显著差异(P <0.01)。RT-PCR显示BMECs细胞HIF-1α的mRNA表达随CoCl2浓度升高无明显变化(P>0.05)。结论 CoCl2可抑制细胞的增殖,同时CoCl2化学缺氧模型可较好的模拟缺氧引起的BMECs细胞HIF-1α上调;通过上调HIF-1α可增加对脑微血管内皮细胞的损害,为下一步耐缺氧脑损伤药物实验奠定基础。 展开更多
关键词 氯化钴 缺氧 微血管内皮细胞 缺氧诱导因子-1
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银杏蜜环口服溶液对缺氧缺糖再灌注诱导脑微血管内皮细胞和SH-SY5Y细胞炎性损伤的保护作用与机制 预览 被引量:1
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作者 郑咏秋 张业昊 +5 位作者 刘建勋 徐立 李磊 王益民 王勇 王光蕊 《世界中医药》 CAS 2018年第1期12-16,共5页
目的:探讨银杏蜜环口服溶液对缺氧缺糖再灌注诱导脑微血管内皮细胞和神经胶质瘤细胞SH-HY5Y损伤的保护机制,以及其对e NOs介导的Beclin-1依赖的自噬通路的影响。方法:本研究采用缺氧缺糖再灌注诱导大鼠脑微血管内皮细胞和神经胶质瘤细... 目的:探讨银杏蜜环口服溶液对缺氧缺糖再灌注诱导脑微血管内皮细胞和神经胶质瘤细胞SH-HY5Y损伤的保护机制,以及其对e NOs介导的Beclin-1依赖的自噬通路的影响。方法:本研究采用缺氧缺糖再灌注诱导大鼠脑微血管内皮细胞和神经胶质瘤细胞SH-HY5Y构建糖氧剥离+复糖复氧模型,同时给予不同浓度的银杏蜜环口服溶液(5.15 mg/mL、2.575 mg/mL和1.545 mg/mL)及有效组分进行干预,通过观察细胞培养上清炎性因子IL-1β、TNF-α和IL-6的浓度和自噬通路的活化,并采用PI/Annexin V双染色分析细胞凋亡率,探讨银杏蜜环有效成份的脑保护机制。结果:银杏蜜环口服溶液5.15 mg/mL、2.575 mg/mL和1.545 mg/mL3个剂量组均可抑制脑微血管内皮细胞上清液TNF-α、IL-1β和IL-6含量,银杏蜜环口服溶液2.575 mg/mL和1.545 mg/mL可抑制Caspase3、LC3II和Beclin-1表达。同时,银杏蜜环口服溶液2.575 mg/mL明显促进e NOs的磷酸化。其中对L-1β和IL-6的作用明显优于银杏叶提取物和天麻蜜环菌。银杏蜜环口服溶液2.575 mg/mL和1.545 mg/mL还可降低SH-SY5Y细胞的凋亡率(Annexin V+/PI-细胞),差异有统计学意义。结论:银杏蜜环口服溶液可通过促进一氧化氮合酶e NOs的磷酸化来抑制缺糖缺氧再灌引发的细胞凋亡和自噬。 展开更多
关键词 银杏蜜环 缺氧缺糖再灌注 微血管内皮细胞 SH-SY5Y 自噬
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