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冠突曲霉Fig基因敲除菌株的构建及表型分析
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作者 刘逸梅 谭玉梅 +1 位作者 王亚萍 刘作易 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2055-2061,共7页
为了研究冠突曲霉(Aspergillus cristatus) Fig基因的功能,本研究采用同源重组的方法获得敲除株。并对敲除株进行功能验证。结果显示对Fig基因敲除株培养观察并与野生型菌株相比发现,在含有不同浓度NaCl的MYA培养基中,仍能产生成熟的子... 为了研究冠突曲霉(Aspergillus cristatus) Fig基因的功能,本研究采用同源重组的方法获得敲除株。并对敲除株进行功能验证。结果显示对Fig基因敲除株培养观察并与野生型菌株相比发现,在含有不同浓度NaCl的MYA培养基中,仍能产生成熟的子囊孢子和分生孢子,但分生孢子数量是野生型的1/4,子囊孢子数量是野生型的1/5,且敲除株菌落几乎没有渗出液,无皱褶,菌落表面干燥,色素产生量急剧下降,这些结果表明Fig基因对冠突曲霉产孢起正调控,本实验为冠突曲霉发育调控机制的研究提供了一定的技术基础。 展开更多
关键词 Fig基因 基因敲除 荧光定量
拟穴青蟹不同发育时期胚胎基因表达的内参基因的筛选 预览
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作者 吕梁 张子平 +2 位作者 万海付 孙玉龙 王艺磊 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期457-464,共8页
为获得适用于研究拟穴青蟹(Scylla paramamosain)不同发育时期胚胎基因表达的内参基因,本研究采用 3 个内参基因筛选软件 geNorm、NormFinder 及 BestKeeper 对微管蛋白α1A(Tuba1a)、核糖体蛋白 L13(Rpl13)、泛素(UBQ)、核糖体蛋白 S6... 为获得适用于研究拟穴青蟹(Scylla paramamosain)不同发育时期胚胎基因表达的内参基因,本研究采用 3 个内参基因筛选软件 geNorm、NormFinder 及 BestKeeper 对微管蛋白α1A(Tuba1a)、核糖体蛋白 L13(Rpl13)、泛素(UBQ)、核糖体蛋白 S6 激酶(Rps6)、精氨酸激酶(Ak)、3-磷酸甘油脱氢酶(gapdh)、28S 核糖体 RNA(28S)、18S 核糖体 RNA(18S)和延伸因子 1A基因(EF-1α)等 9个常用候选内参基因在拟穴青蟹不同发育时期胚胎的表达稳定性进行分析。geNorm 分析表明, EF-1α和 Rpl13 的表达稳定性最高,并且采用 2 个内参基因同时校正目标基因的定量结果可以达到最优效果;NormFinder分析表明, gapdh和 EF-1α是 9个候选内参基因中表达最稳定的;BestKeeper分析表明, gapdh 的标准偏差和变异系数是 9 个候选基因中最低的。综合 3 个内参基因筛选软件,可以选用 EF-1α,或选用 EF-1α和 gapdh 双内参同时校正拟穴青蟹不同胚胎发育时期各基因的表达情况。 展开更多
关键词 拟穴青蟹 荧光定量 PCR 内参基因 稳定性
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蓝莓鲨烯合酶基因的克隆与表达分析 预览
3
作者 陈新 徐丽 +7 位作者 张力思 魏海蓉 宗晓娟 王甲威 谭钺 朱东姿 洪坡 刘庆忠 《山东农业科学》 2019年第5期1-6,共6页
鲨烯合酶基因(SQS)在植物三萜类化合物合成途径中起着重要作用,是上游代谢通路中的关键基因。本研究采用RT-PCR技术从‘喜来’蓝莓根中克隆得到VcSQS基因,序列全长1489bp,序列分析结果表明,其含有1242bp的开放阅读框,编码413个氨基酸。... 鲨烯合酶基因(SQS)在植物三萜类化合物合成途径中起着重要作用,是上游代谢通路中的关键基因。本研究采用RT-PCR技术从‘喜来’蓝莓根中克隆得到VcSQS基因,序列全长1489bp,序列分析结果表明,其含有1242bp的开放阅读框,编码413个氨基酸。氨基酸同源序列分析表明,蓝莓与其它物种SQS蛋白氨基酸序列相似性很高,与山茶科的茶相似性最高,达90.58%,与葡萄相似性达87.92%。荧光定量试验结果表明,SQS基因在蓝莓叶中的表达量最高,芽中的最低。 展开更多
关键词 蓝莓 角鲨烯合酶基因 同源序列分析 荧光定量
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鸡传染性支气管炎病毒Real-Time PCR检测方法的建立 预览
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作者 张会 赵鲁 +4 位作者 连锐锐 张子越 赵晓月 潘力 李智勇 《家禽科学》 2019年第2期20-23,共4页
本试验针对肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV-QX)保守基因N基因设计并合成引物,构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-QXSYBRGreenⅠReal-TimePCR标准曲线。结果显示,本次所建立的检测方法重复性好,特异性高,最低可检测到39.7co... 本试验针对肾型鸡传染性支气管炎病毒(IBV-QX)保守基因N基因设计并合成引物,构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-QXSYBRGreenⅠReal-TimePCR标准曲线。结果显示,本次所建立的检测方法重复性好,特异性高,最低可检测到39.7copies/μl的病毒核酸,对常见禽源病毒无交叉反应。本次建立的方法不仅可以用于各基因型IBV病原检测,也可用于病毒的定量研究。因此,本实验室所建立的IBV检测方法在鸡传染性支气管炎病毒的快速检测上具有重要意义。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 REAL-TIMEPCR 病毒检测 荧光定量
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黄瓜蜡质合成基因CsCER10的表达模式及生物学信息分析 预览
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作者 王世峰 郭烨 +2 位作者 李梅兰 侯雷平 王文娇 《山西农业科学》 2019年第5期719-722,729共5页
前人应用荧光定量技术在黄瓜中筛选出了可能与蜡质合成相关的基因CsCER10。在前人研究的基础上,利用荧光定量技术分析CsCER10在黄瓜不同组织及盐胁迫、干旱、低温等非生物胁迫下的表达模式,利用DNAMAN,MEGA5及SPDBV等软件对CsCER10的生... 前人应用荧光定量技术在黄瓜中筛选出了可能与蜡质合成相关的基因CsCER10。在前人研究的基础上,利用荧光定量技术分析CsCER10在黄瓜不同组织及盐胁迫、干旱、低温等非生物胁迫下的表达模式,利用DNAMAN,MEGA5及SPDBV等软件对CsCER10的生物学信息进行分析,为黄瓜表皮蜡质合成的分子机制提供理论基础。结果表明,CsCER10在黄瓜的各个器官均有表达,在叶片和果皮中的表达量较高;CsCER10受非生物胁迫的诱导,在遭受干旱、低温及盐胁迫时表达量均呈上升趋势。研究结果与前人对蜡质合成基因的研究结果一致,可推断CsCER10是与蜡质合成相关的基因。 展开更多
关键词 黄瓜 CsCER10 蜡质 荧光定量
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稻虾共作对稻田土壤反硝化细菌nosZ基因数量、多样性及群落结构的影响 预览
6
作者 王蓉 龚世飞 +1 位作者 金涛 刘章勇 《江苏农业科学》 2019年第4期246-251,共6页
对稻虾共作模式下水稻土壤反硝化细菌群落进行研究,以期揭示稻虾复合种养模式下土壤反硝化细菌丰度、群落多样性及组成,为科学研究稻虾共作模式的土壤微生物多样性,维持土壤地力提供理论依据。依托长江大学农学院基地设置常规中稻种植模... 对稻虾共作模式下水稻土壤反硝化细菌群落进行研究,以期揭示稻虾复合种养模式下土壤反硝化细菌丰度、群落多样性及组成,为科学研究稻虾共作模式的土壤微生物多样性,维持土壤地力提供理论依据。依托长江大学农学院基地设置常规中稻种植模式(MR)、稻虾共作模式(CR)等2种模式,利用荧光定量PCR和高通量测序平台比较2种模式下水稻土壤反硝化细菌nosZ基因的数量、群落多样性及群落组成。结果表明,稻虾共作显著提高水稻土壤硝态氮、全碳、全氮含量,对碱解氮含量、pH值、碳氮比及铵态氮含量无显著影响。nosZ基因在MR、CR处理中的基因丰度分别为1g干土1.51×10^6、2.23×10^6拷贝数,CR处理中nosZ基因丰度是MR的1.48倍。CR处理显著提高了土壤nosZ基因的丰度。通过对α群落多样性指数进行方差分析可知,CR处理与MR处理间微生物群落多样性差异不显著。经韦恩(Venn)分析,在目和科水平上,MR处理与CR处理的微生物群落组成显示出较高的相似度,在属与种水平上,2个处理下的土壤微生物群落结构存在差异性,CR处理下的土壤缺失沼泽红假单胞菌。经冗余分析,土壤总碳(TC)含量对nosZ基因群落结构的影响最为显著,其次是pH值、碱解氮含量、硝态氮含量与铵态氮含量。综合分析,稻虾共作可显著提高水稻土壤nosZ基因丰度,稻虾轮作对群落多样性的影响较小,其在种水平上缺失了沼泽红假单胞菌。常规中稻种植模式与稻虾共作模式下的土壤微生物群落结构虽保有一定的相似度,但仍存在差异,土壤总碳含量是影响群落结构差异的主要原因。 展开更多
关键词 稻虾共作 反硝化作用 荧光定量 高通量测序技术 α群落多样性 nosZ基因
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杉木实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择 预览
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作者 张颖 陈婉婷 +2 位作者 陈冉红 帅鹏 李明 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2019年第2期65-72,共8页
[目的]筛选适用于杉木不同组织荧光定量PCR分析的稳定内参基因,提高杉木实时荧光定量PCR试验准确性,为杉木体内各个基因表达分析提供合适内参基因。[方法]通过实时荧光定量PCR获取GAPDH、EF1α、18S rRNA、28S rRNA、UBQ、UBC与Actin 7... [目的]筛选适用于杉木不同组织荧光定量PCR分析的稳定内参基因,提高杉木实时荧光定量PCR试验准确性,为杉木体内各个基因表达分析提供合适内参基因。[方法]通过实时荧光定量PCR获取GAPDH、EF1α、18S rRNA、28S rRNA、UBQ、UBC与Actin 7个候选内参基因在杉木无性系的根、茎和叶中的溶解曲线与Ct值;利用软件geNorm、Normfinder和BestKeeper对候选内参基因的表达稳定性进行评价;通过分析2个纤维素合酶基因ClCesA1和ClCesA2在杉木不同组织部位的相对表达情况,对候选内参基因的稳定性进行验证。[结果]geNorm、Normfinder和BestKeeper分析结果均表明:在杉木根和茎中最稳定的内参基因是EF1α和Actin;geNorm、Normfinder结果显示杉木叶中稳定的内参基因是UBQ和EF1α,BestKeeper显示杉木叶中最稳定合适内参基因是<EF1α和Actin。以Actin与EF1α作为内参基因,荧光定量PCR分析表明,ClCesA1和ClCesA2基因的相对表达量在杉木不同组织中均有所不同,ClCesA2的相对表达量在各个组织中均高于ClCesA1。以不同内参基因作为试验内参基因分析ClCesA1和ClCesA2的表达情况得到,ClCesA1和ClCesA2在各个组织中的相对表达量排序主要为茎>叶>根。[结论]7个候选内参基因中,杉木不同组织中稳定表达的为Actin与EF1α,适合作为表达分析的内参基因;28S rRNA的表达稳定性低,不适合作为杉木定量PCR分析的理想内参基因。 展开更多
关键词 杉木 荧光定量 内参基因 BestKeeper
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水稻锌指蛋白基因OsBBX13的克隆、表达及生物信息学分析
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作者 黎妮 张超 王伟平 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1393-1400,共8页
锌指蛋白作为植物中重要的转录因子,在调控植物生长发育以及响应逆境过程中发挥着重要作用。水稻OsBBX13基因属于B-Box (BBX)锌指基因家族成员之一,生物信息学分析表明:OsBBX13基因启动子含有高温应答元件(HSE)、干旱应答元件(MBS)、低... 锌指蛋白作为植物中重要的转录因子,在调控植物生长发育以及响应逆境过程中发挥着重要作用。水稻OsBBX13基因属于B-Box (BBX)锌指基因家族成员之一,生物信息学分析表明:OsBBX13基因启动子含有高温应答元件(HSE)、干旱应答元件(MBS)、低温应答元件(LTR)及防御应答元件(TC-rich repeats)等逆境相关元件。本研究意在挖掘逆境响应基因,探讨OsBBX13在非生物逆境中的功能,通过组织特异性荧光定量PCR研究发现,OsBBX13在叶片中表达最高,在根中表达其次,在茎、幼穗中表达较低。通过不同逆境胁迫处理后的荧光定量PCR研究发现,OsBBX13受多种逆境胁迫抑制,表达下调,表明其可能负调控响应非生物逆境。此外,本研究对基因OsBBX13进行了克隆,并对其进行了系统进化、蛋白跨膜、蛋白亚细胞定位等研究,为今后深入了解其在水稻中的生物学功能提供指导。 展开更多
关键词 水稻 OsBBX13 非生物胁迫 荧光定量
利用荧光定量技术检测生鲜乳中黄曲霉毒素M1 预览
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作者 郑君杰 方芳 +3 位作者 孙志伟 贾涛 李征 何月新 《中国奶牛》 2019年第3期56-58,共3页
本试验利用荧光定量检测技术检测生鲜乳中黄曲霉毒素M1,最低检出限为0.047μg/L;取空白生鲜乳样品按0.05μg/L、0.1μg/L黄曲霉毒素M1标准品进行添加,回收率均在90.00%~110.00%之间。各添加浓度批内、批间变异系数均低于15%;用该黄曲霉... 本试验利用荧光定量检测技术检测生鲜乳中黄曲霉毒素M1,最低检出限为0.047μg/L;取空白生鲜乳样品按0.05μg/L、0.1μg/L黄曲霉毒素M1标准品进行添加,回收率均在90.00%~110.00%之间。各添加浓度批内、批间变异系数均低于15%;用该黄曲霉毒素M1荧光定量检测卡和仪器法分别对50份生鲜乳盲样进行测定,结果全部相符,提示该法简便快捷、检测结果可靠,可用于黄曲霉毒素M1的快速检测。 展开更多
关键词 荧光定量 生鲜乳 黄曲霉毒素M1
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类乌齐牦牛EGLN1基因克隆、生物信息学分析及差异表达
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作者 管春燕 王吉坤 +4 位作者 柴志欣 王会 信金伟 姬秋梅 钟金城 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期6-12,17,163共9页
为了对牦牛 egl-9 家族缺氧诱导因子 1 ( EGLN1)基因的 CDS 区核苷酸序列进行克隆,预测其编码的蛋白结构和功能,并分析其在牦牛和黄牛心脏、肺脏、肝脏及大脑等器官中的表达差异,试验根据 GenBank 中公布的黄牛 EGLN1 基因 mRNA 序列设... 为了对牦牛 egl-9 家族缺氧诱导因子 1 ( EGLN1)基因的 CDS 区核苷酸序列进行克隆,预测其编码的蛋白结构和功能,并分析其在牦牛和黄牛心脏、肺脏、肝脏及大脑等器官中的表达差异,试验根据 GenBank 中公布的黄牛 EGLN1 基因 mRNA 序列设计特异性引物,运用RT-PCR技术获取牦牛EGLN1 基因的 cDNA 序列,对牦牛 EGLN1 基因 CDS 区核苷酸序列与蛋白质结构进行生物信息学分析,并构建系统进化树,利用荧光定量 PCR技术检测黄牛和牦牛心脏、肺脏、肝脏、大脑中 EGLN1 基因的相对表达水平。结果表明:牦牛 EGLN1 基因 CDS 区序列长度为 1 263 bp,编码 420 个氨基酸;EGLN1 的半衰期为 30 h,属于碱性蛋白,表现为亲水性,无信号肽及跨膜结构;磷酸化位点共 30 个,存在 3 个低复杂区域和 1 个 P4Hc 结构功能域;二级结构以无规则卷曲为主,三级结构由无规则卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角构成。牦牛和其他 9 种动物 EGLN1 基因序列构建系统进化树中,牦牛与水牛亲缘关系最近,同源性高达 99. 3%,与褐家鼠亲缘关系较远。EGLN1 基因在黄牛和牦牛肝脏、大脑、心脏、肺脏 4 个器官中均有表达,表达量依次递减;EGLN1 基因在牦牛各器官中的相对表达量均显著高于黄牛( P<0. 05),其中牦牛肝脏中的相对表达量约为黄牛的 5. 5 倍。说明 EGLN1 基因可作为牦牛低氧适应性研究的重要基因之一。 展开更多
关键词 牦牛 黄牛 egl-9 家族缺氧诱导因子 1 基因 基因克隆 组织表达 生物信息学分析 荧光定量 PCR
狂犬病病毒G蛋白在水稻中的表达及遗传稳定性鉴定
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作者 申雪静 张二芹 +8 位作者 许倩茹 刘林科 万博 刘运超 孙亚宁 赵东 牛香香 邓瑞广 张改平 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期204-211,共8页
狂犬病病毒(Rabies virus, RV) G蛋白是唯一能激发机体产生细胞免疫,并诱导产生中和抗体的结构蛋白,也是狂犬病病毒中唯一糖基化的结构蛋白,此外还介导细胞融合、受体结合以及参与病毒的致病等。本研究将优化的狂犬病G基因(GenBank登录... 狂犬病病毒(Rabies virus, RV) G蛋白是唯一能激发机体产生细胞免疫,并诱导产生中和抗体的结构蛋白,也是狂犬病病毒中唯一糖基化的结构蛋白,此外还介导细胞融合、受体结合以及参与病毒的致病等。本研究将优化的狂犬病G基因(GenBank登录号:ABI53869.1)序列插入到中间载体pMP3上,成功构建中间载体pMP3-G,然后将中间载体pMP3-G和植物载体pCAMBIA1300通过双酶切、连接,成功地构建了植物表达载体pCAMBIA1300-G。挑选空白未转基因水稻(Oryza sativa)种子TP309消毒,在愈伤诱导培养基上31℃光照3 d,使其长出愈伤组织,用已经转入狂犬病G基因的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105去侵染愈伤组织,并与愈伤组织共培养3 d,将狂犬病G基因导入水稻愈伤组织中。愈伤组织再经过潮霉素抗性筛选、分化、出芽、生根,获得313株植株,取313株植株的叶片通过十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)法提取叶片基因组DNA,对其进行PCR扩增,经核酸胶进行初步鉴定,有79株为阳性,经过炼苗、种植共获得50株阳性表达植株。分别随机挑选50株阳性植株的种子,切半,标记,将不含胚乳的一半研磨,用提取液提取蛋白后通过抗原检测试纸条和Western blot检测,结果表明,G蛋白在转基因水稻种子中成功表达,且具有良好的反应原性。从50株阳性表达植株中挑选出高表达、反应原性最好的4个株系,将这4个株系T1代中与检测阳性结果相对应的含有胚乳的另一半种子进行组织培养种植,在植株移栽大田前后,再次用CTAB法提取T1代植株叶片基因组DNA,并以水稻的内源基因水稻淀粉分支酶基因(rice starch branching enzyme,RBE4)为内参基因,通过相对荧光定量PCR(relative fluorescence quantitative PCR)方法筛选阳性植株中的纯合植株,通过绝对荧光定量PCR(absolute real-time PCR)计算纯合植株的拷贝数,结果显示,132株植株中35株为� 展开更多
关键词 狂犬病病毒 G基因 转基因水稻 荧光定量 纯合子 拷贝数
FSH和LH及其受体基因在梅山猪公猪HPT轴的表达 预览 被引量:1
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作者 产舒恒 陈子璇 +2 位作者 张戌园 陈青 王宵燕 《江苏农业科学》 2018年第1期23-26,共4页
为了研究卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)及其受体在梅山猪公猪各组织中的表达特征以及在下丘脑-腺垂体-性腺轴(HPT轴)中的表达规律,采用荧光定量PCR(RT-PCR)方法对6头150日龄梅山猪公猪的生殖组织、脑组织及内脏组织中FSHβ、FSHR、L... 为了研究卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)及其受体在梅山猪公猪各组织中的表达特征以及在下丘脑-腺垂体-性腺轴(HPT轴)中的表达规律,采用荧光定量PCR(RT-PCR)方法对6头150日龄梅山猪公猪的生殖组织、脑组织及内脏组织中FSHβ、FSHR、LHβ和LHR基因的表达情况进行分析。结果显示,FSHβ基因在梅山猪公猪的下丘脑和垂体中表达;FSHR基因在梅山猪公猪的睾丸、附体、附尾和尿道球腺中表达;LHβ基因在梅山猪公猪的睾丸、附头、附体、垂体、大脑、小脑和海马中表达;LHR基因在梅山猪公猪的睾丸和下丘脑中表达。采用荧光定量方法对各日龄(2、30、60、90及150日龄)梅山猪公猪下丘脑、垂体和睾丸中FSH和LH及其受体的表达进行研究。结果表明,FSHβ在下丘脑和垂体中的表达量随日龄的增加而增加;FSHR在睾丸中的表达量在2、30、60日龄段中较稳定,90日龄时表达量开始降低,150日龄的表达量达到最低值;LHβ在垂体中的表达、LHR在下丘脑中的表达和LHR在睾丸组织中的表达趋势都呈现起伏状态,30日龄时出现表达高峰,60日龄时表达量降低,90日龄时又达到表达高峰,以后降低;LHβ在睾丸中的表达量在2、30、60日龄段无显著差异(P<0.05),90日龄时达到表达最高峰,150日龄时表达量有所降低。 展开更多
关键词 梅山猪公猪 FSH LH 定量 荧光定量
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灰毡毛忍冬Lm-XL-AP1基因克隆、生物信息学和时空表达分析 被引量:1
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作者 彭美晨 刘湘丹 +4 位作者 徐玉琴 王珊 刘畅宇 陈勋 周日宝 《中草药》 CSCD 北大核心 2018年第7期1652-1660,共9页
目的克隆灰毡毛忍冬突变型品种AP1基因(Lm-XL-AP1),并对其进行生物信息学和时空表达分析。方法通过RACE技术克隆Lm-XL-AP1基因全长,运用生物信息学的方法进行基因同源性和相似性比较分析,预测其编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析... 目的克隆灰毡毛忍冬突变型品种AP1基因(Lm-XL-AP1),并对其进行生物信息学和时空表达分析。方法通过RACE技术克隆Lm-XL-AP1基因全长,运用生物信息学的方法进行基因同源性和相似性比较分析,预测其编码蛋白,并对其进行各种理化性质分析。运用荧光定量PCR(q RT-PCR)检测该基因在灰毡毛忍冬突变型植株不同花期和不同器官的相对表达量。结果获得AP1基因,开放阅读框(ORF)长729 bp,编码242个氨基酸,与甘菊中MADS-box基因家族AP1基因相似性达80%,且包含MADS和K-box的保守序列。AP1蛋白无跨膜区域,定位于细胞核中;在灰毡毛忍冬突变型植株第6花期相对表达量最高,同时茎、叶中也有表达。结论成功从灰毡毛忍冬突变型植株总RNA中克隆到可能参与控制花器官表达的AP1基因。 展开更多
关键词 灰毡毛忍冬 Lm-XL-AP1基因 生物信息学 荧光定量 克隆
F1代苏香杂交猪GAS7、JHDM1A基因组织表达水平研究
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作者 阮涌 嵇辛勤 +4 位作者 苟维胜 卢贤君 赵佳福 段志强 倪萌萌 《生物技术》 2018年第2期196-199,共4页
[目的]研究GAS7、JHDM1A基因在组织中的表达分布情况。[方法]试验采用荧光定量PCR技术,测定了苏香杂交猪的心、肝、脾、胃、肾、脑、小肠和背最长肌在各组织的分布表达情况。[结果]GAS7基因在脑表达含量最高(5.23±2.14),在心脏... [目的]研究GAS7、JHDM1A基因在组织中的表达分布情况。[方法]试验采用荧光定量PCR技术,测定了苏香杂交猪的心、肝、脾、胃、肾、脑、小肠和背最长肌在各组织的分布表达情况。[结果]GAS7基因在脑表达含量最高(5.23±2.14),在心脏中表达量最低(0.07±0.03),且与脑中的表达量呈极显著差异(P〈0.01),JHDM1A基因在脑部表达含量最高(32.79±12.76),在心脏(0.18±0.08)和肝脏(0.18±0.09)中表达量最低,且与脑中的表达量呈极显著差异(P〈0.01)。[结论]GAS7基因主要在脑、肝脏组织表达并发挥其生理作用,而JHDM1A基因主要在脑组织表达并发挥其生理作用,此研究结果为进一步分析GAS7基因、JHDM1A基因在肉质或生长性能方面具体的分子作用机理奠定基础。 展开更多
关键词 苏香杂交猪 GAS7基因 JHDM1A基因 荧光定量
马氏珠母贝Pm-CTSC基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 刘雅 郑哲 +2 位作者 王庆恒 焦钰 杜晓东 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第11期4723-4729,共7页
组织蛋白酶C在无脊椎动物中具有重要的非特异性免疫防御功能。为了研究马氏珠母贝组织蛋白酶C(Pm-CTSC)的功能,本实验利用RACE技术克隆获得了Pm-CTSC,并对其结构和组织表达模式进行了分析。结果表明:Pm-CTSC基因cDNA序列全长为191... 组织蛋白酶C在无脊椎动物中具有重要的非特异性免疫防御功能。为了研究马氏珠母贝组织蛋白酶C(Pm-CTSC)的功能,本实验利用RACE技术克隆获得了Pm-CTSC,并对其结构和组织表达模式进行了分析。结果表明:Pm-CTSC基因cDNA序列全长为1914bp,其中开放式阅读框1413bp,5′UTR25bp,3′UTR476bp,共编码470个氨基酸,该蛋白理论分子量为53.41kD,理论等电点为6.03。结构域分析发现Pm-CTSC具有组织蛋白酶C两个典型的结构域Cathepsin Cexclusion和Peptidas_C1A_CathepsinC。多序列比对结果表明Pm-CTSC与太平洋牡蛎的同源性最高,为68.8%;系统进化分析发现,Pm-CTSC与无脊椎动物聚为一支。qRT—PCR表达分析发现,Pm-CTSC在肝胰腺中显著高表达(p〈0.05),表明Pm-CTSC可能参与马氏珠母贝的免疫应答。本研究为进一步探讨组织蛋白酶C在马氏珠母贝天然免疫应答中的作用提供了基础资料。 展开更多
关键词 马氏珠母贝 Pm-CTSC 基因克隆 荧光定量
超敏荧光定量PCR法核酸检测与乙肝两对半联用在乙肝防控中的临床应用 预览
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作者 陈建仁 李驰 关惠恒 《中国实用医药》 2018年第9期83-85,共3页
目的探讨超敏荧光定量聚合酶链反应(PCR)法核酸检测与乙型肝炎(乙肝)两对半联用在乙肝防控中的临床应用。方法 155例乙肝患者分别采集血清样本,利用化学发光法和基于磁珠法自动化核酸提取的超敏荧光定量PCR法分别进行乙肝两对半和... 目的探讨超敏荧光定量聚合酶链反应(PCR)法核酸检测与乙型肝炎(乙肝)两对半联用在乙肝防控中的临床应用。方法 155例乙肝患者分别采集血清样本,利用化学发光法和基于磁珠法自动化核酸提取的超敏荧光定量PCR法分别进行乙肝两对半和乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)检测。结果 155例样本中乙肝两对半共检出12种血清类型,其中小三阳占58.06%,大三阳占20.00%。155例样本超敏荧光定量PCR总阳性率为62.58%,检测下限低至10 IU/ml,其中小三阳阳性率为66.67%,HBVDNA平均含量(6.17±0.91)lg IU/ml;大三阳阳性率为90.32%,HBV-DNA平均含量(6.98±1.02)lg IU/ml。小三阳和大三阳组超敏荧光定量PCR阳性率及HBV-DNA平均含量比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论基于磁珠法自动化核酸提取的超敏荧光定量PCR法可准确测定病毒载量,检测下限低至10 IU/ml,与传统乙肝两对半联用有助于乙肝的临床诊断、用药指导及疗效监测。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 磁珠法 核酸提取 超敏 荧光定量 聚合酶链反应
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河源地区无偿献血人群HCV感染的基因型分布特征
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作者 黄璐 叶登凰 +3 位作者 欧小懂 刘丽华 黄仕云 聂湘辉 《中国热带医学》 CAS 2018年第7期708-711,共4页
目的 了解河源地区无偿献血人群HCV感染的基因型分布情况。方法 收集2007年1月1日—2016年12月31日河源市中心血站抗-HCV ELISA双试剂均阳性的无偿献血者样本,经HCV RNA定量检测,HCV RNA定量结果〉1×10^3IU/m L的样本,进行HCV基因... 目的 了解河源地区无偿献血人群HCV感染的基因型分布情况。方法 收集2007年1月1日—2016年12月31日河源市中心血站抗-HCV ELISA双试剂均阳性的无偿献血者样本,经HCV RNA定量检测,HCV RNA定量结果〉1×10^3IU/m L的样本,进行HCV基因分型。结果 141例抗-HCV双试剂阳性样本中,123例病毒载量大于1×10^3IU/m L,108例获得基因分型结果。HCV基因分型为:6a(45例,41.67%)、3型(27例,25.00%)、1b(12例,11.11%)、1a(12例,11.11%)、1a+1b(6例,5.56%)和3型+6a(6例,5.56%)。HCV各基因型无偿献血者病毒载量及丙氨酸氨基转移酶差异无统计学意义(P〉0.05)。不同年龄、职业无偿献血者HCV各基因型分布差异无统计学意义(P〉0.05);不同性别、文化程度无偿献血者间HCV各基因型分布差异有统计学意义(P〈0.01)。结论 河源地区无偿献血者HCV感染的基因型(亚型)包括1a、1b、3型和6a,其中6a亚型成为本地区无偿献血者中第一流行株。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 酶联免疫吸附试验 荧光定量 基因分型
免核酸提取荧光定量PCR方法应用研究 预览
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作者 魏园园 《新农业》 2018年第21期44-46,共3页
分子检测方法由于具有的高敏感性、高通量和适合的价格,越来越频繁的应用在兽医诊断中.在检测过程中,常需要对检测样本进行核酸提取纯化,需要投入大量的时间,其复杂的提取步骤容易造成交叉污染.为能更加快速准确的进行疫病检测,免核酸... 分子检测方法由于具有的高敏感性、高通量和适合的价格,越来越频繁的应用在兽医诊断中.在检测过程中,常需要对检测样本进行核酸提取纯化,需要投入大量的时间,其复杂的提取步骤容易造成交叉污染.为能更加快速准确的进行疫病检测,免核酸提取产品成为了疫病检测的最佳选项.本文通过对禽流感病毒培养物、临床样本中的病毒核酸进行研究,用以评价免核酸提取与常规核酸提取两者在阳性符合率、病毒复制、检测效果等方面的差异,为临床疫病检测监控提供参考。 展开更多
关键词 核酸提取 PCR方法 荧光定量 应用 分子检测 疫病检测 禽流感病毒 检测过程
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室内粪土模型中土霉素对主要反硝化基因转录水平和菌群结构特征的影响 预览
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作者 林曼霞 邹勇 孙永学 《生态毒理学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期182-189,共8页
反硝化作用在土壤氮素循环中扮演着重要角色,而国内研究抗生素残留对反硝化作用的报道仍然较少。本实验通过构建室内抗生素-粪便-土壤模型,以研究空白组(0μg·kg^-1)、低浓度组(20μg·kg^-1)、中浓度组(200μg·kg^-... 反硝化作用在土壤氮素循环中扮演着重要角色,而国内研究抗生素残留对反硝化作用的报道仍然较少。本实验通过构建室内抗生素-粪便-土壤模型,以研究空白组(0μg·kg^-1)、低浓度组(20μg·kg^-1)、中浓度组(200μg·kg^-1)和高浓度组(2000μg·kg^-1)土霉素对施加鸡粪后土壤中反硝化作用的影响。利用荧光定量PCR(qPCR)和限制性末端片段长度多态性(TRFLP)方法分析反硝化基因(nirS、nirK、narG和nosZ)的响应特征及反硝化菌群结构特点。qPCR定量结果表明低、中浓度土霉素对携带nirS、nirK基因的菌群有促进作用,而高浓度组则表现为抑制作用,而携带nosZ基因的菌群对土霉素的胁迫反应较迟钝。T-RFLP结果显示不同浓度土霉素并没有改变携带nirS基因和nosZ基因的优势菌群结构,而随着暴露时间的延长,携带nirS基因的反硝化优势片段在第30-60天之间发生了变化。这些结果表明不同浓度土霉素可以影响反硝化菌群丰度,但是却无法影响优势菌群,而土壤中其他因素可能对优势菌群的影响更大。 展开更多
关键词 土霉素 反硝化作用 荧光定量 T-RFLP
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地黄糖基转移酶基因克隆表达及表达分析
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作者 朱畇昊 董诚明 +1 位作者 李璐 赵乐 《中药材》 北大核心 2018年第6期1297-1301,共5页
目的:从地黄中克隆尿苷二磷酸糖基转移酶(uridine diphosphate glycosyltransferase,UGT)基因,构建其原核表达体系,为后续分析验证其功能奠定基础。方法:在转录组测序的基础上,通过RT-PCR克隆全长cDNA序列。运用生物信息学的方法对该序... 目的:从地黄中克隆尿苷二磷酸糖基转移酶(uridine diphosphate glycosyltransferase,UGT)基因,构建其原核表达体系,为后续分析验证其功能奠定基础。方法:在转录组测序的基础上,通过RT-PCR克隆全长cDNA序列。运用生物信息学的方法对该序列进行分析。通过荧光定量PCR检测该基因在不同品种地黄不同部位中的表达情况。构建重组表达载体pET-32a-RgUGT,并转化大肠杆菌BL21,获得重组蛋白。结果:克隆得到RgUGT基因长度为1 374 bp,编码457个氨基酸,RgUGT基因具有尿嘧啶二磷酸-糖基转移酶PSPG盒子,荧光定量PCR结果显示RgUGT基因在根和叶中的表达水平较高。该基因成功在大肠杆菌BL21细胞中表达。结论:该研究从地黄中克隆获得了糖基转移酶基因,可为进一步研究其在地黄次生代谢生物合成中的功能奠定基础。 展开更多
关键词 基因克隆 原核表达 荧光定量 糖基转移酶
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