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富马酸氯马斯汀对大鼠心肌细胞缺氧复氧时TLR4/PI3K/Akt信号通路的影响
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作者 延茹 岳峰 +6 位作者 刘永新 袁晓晓 孙美艳 张蕊 隽兆东 黄亚茹 沈吉喆 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期610-612,共3页
目的评价富马酸氯马斯汀对大鼠心肌细胞缺氧复氧时Toll样受体4/磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(TLR4/PI3K/Akt)信号通路的影响。方法体外培养大鼠H9C2心肌细胞,以1×10^5个/ml接种于培养孔或培养瓶,采用随机数字表法分为3组(n... 目的评价富马酸氯马斯汀对大鼠心肌细胞缺氧复氧时Toll样受体4/磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸激酶(TLR4/PI3K/Akt)信号通路的影响。方法体外培养大鼠H9C2心肌细胞,以1×10^5个/ml接种于培养孔或培养瓶,采用随机数字表法分为3组(n=11):对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)和富马酸氯马斯汀组(CF组)。在低糖DMEM培养基-5%CO2-95%N2中缺氧4 h,复氧4 h制备心肌细胞缺氧复氧损伤模型。于复氧4 h时采用CCK-8法检测细胞活力;透射电镜观察超微结构;Western blot法检测TLR4、PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)和caspase-3的表达,免疫荧光法检测TLR4、PI3K和caspase-3的表达。结果与C组比较,H/R组细胞活力降低,TLR4和caspase-3表达上调,PI3K和p-Akt表达下调(P<0.05);与H/R组比较,CF组细胞活力升高,TLR4和caspase-3表达下调,PI3K和p-Akt表达上调(P<0.05),线粒体损伤减轻。结论富马酸氯马斯汀减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的机制可能与抑制TLR4表达,激活PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多
关键词 组胺H1拮抗剂 心肌再灌注损伤 Toll样受体4 磷酸肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶
姜黄素对利多卡因诱导大鼠神经损伤的影响:Akt和ERK 1/2信号通路在其中的作用
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作者 丁玉美 王莹 +1 位作者 李亚婷 邱颐 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期309-313,共5页
目的评价姜黄素对利多卡因诱发大鼠神经损伤的影响及蛋白激酶B(Akt)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在其中的作用.方法SPF级雄性SD大鼠80只,8~10周龄,体重220~250g,采用随机数字表法分为8组(n=10):对照组(C组)、假手术组(S组)... 目的评价姜黄素对利多卡因诱发大鼠神经损伤的影响及蛋白激酶B(Akt)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在其中的作用.方法SPF级雄性SD大鼠80只,8~10周龄,体重220~250g,采用随机数字表法分为8组(n=10):对照组(C组)、假手术组(S组)、利多卡因组(L组)、二甲基亚砜(DMSO)组(D组)、姜黄素低剂量组(CL组)、姜黄素高剂量组(CH组)、姜黄素+ERK抑制剂PD98059组(P组)和姜黄素+Akt抑制剂MK-2206组(M组).除C组和S组外,其余6组行鞘内置管,注射2%利多卡因10μl制备利多卡因诱发神经损伤模型.于鞘内置管后第3天开始,连续14d,采用微导管注射给药:D组、CL组和CH组分别注射DMSO10μl、姜黄素100μg∕10μl及姜黄素500μg∕10μl,1次∕d;P组和M组注射姜黄素500μg∕10μl,1次∕d,分别腹腔注射D9805910μg和MK-220612μg,均溶于5μlDMSO溶液,每周给药1次.于鞘内置管前1d、鞘内置管后第3天给药前、给药第14天时测定术侧后肢机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).给药结束后第1天,取脊髓组织,采用Westernblot法检测脊髓ERK1∕2、磷酸化ERK1∕2(p-ERK1∕2)、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、c-fos、Bcl-2、Bax表达水平;采用Real-timePCR法检测脊髓ERK1∕2和Akt的mRNA表达水平.结果与C组比较,L组MWT降低,TWL缩短,ERK1∕2及其mRNA、p-ERK1∕2、c-fos、Akt及其mRNA、p-Akt、Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05);与L组比较,CL组、CH组、P组和M组MWT升高,TWL延长,CL组和CH组p-ERK1∕2、c-fos、p-Akt、Bcl-2表达上调,Bax表达下调,P组p-Akt、Bcl-2表达上调,Bax表达下调,M组p-ERK1∕2、c-fos表达上调(P<0.05);与CH组比较,P组和M组MWT降低,TWL缩短,P组脊髓p-ERK1∕2、c-fos表达下调,M组脊髓p-Akt和Bcl-2表达下调,Bax表达上调(P<0.05).结论姜黄素可减轻利多卡因诱发的大鼠神经损伤,部分机制可能与增强Akt和ERK1∕2信号通路活性有关. 展开更多
关键词 姜黄素 利多卡因 药物相关性副作用和不良反应 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 MAP激酶信号系统
ROCK1基因在鼻咽癌组织中的表达及其与细胞侵袭的关系 预览
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作者 田双双 王俊美 +1 位作者 崔云东 张礼涛 《安徽医药》 CAS 2019年第8期1663-1666,I0005共5页
目的观察干扰ROCK1基因对鼻咽癌的细胞侵袭影响。方法收集2016年1-12月临沂市河东区人民医院30例鼻咽癌病人临床鼻咽癌标本及同期鼻咽癌的癌旁组织,通过免疫组织化学法(免疫组化)检测ROCK1的表达;培养鼻咽癌细胞株6-10B和永生化的鼻咽... 目的观察干扰ROCK1基因对鼻咽癌的细胞侵袭影响。方法收集2016年1-12月临沂市河东区人民医院30例鼻咽癌病人临床鼻咽癌标本及同期鼻咽癌的癌旁组织,通过免疫组织化学法(免疫组化)检测ROCK1的表达;培养鼻咽癌细胞株6-10B和永生化的鼻咽上皮细胞NP69,蛋白质印迹法(Western Blot)方法检测ROCK1的表达;使用ROCK1的抑制剂Y-27632处理6-10B细胞株,通过Transwell小室实验,检测鼻咽癌的细胞侵袭。结果免疫组化结果显示,30例鼻咽癌组织中,ROCK1有18例阳性,12例阴性;而对照组中只有2例阳性,鼻咽癌组的ROCK1明显高表达,与对照组相比差异有统计学意义(χ^2=19.20,P<0.000 1);Western Blot检测结果显示,6-10B组的ROCK1表达明显高于NP69细胞组;侵袭实验结果显示,未处理组为(171.67±17.89),明显高于10μM组(120±19.07)和30μM组(67.33±13.58),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ROCK1基因与鼻咽癌的细胞侵袭有关。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 肿瘤侵润 印迹法 蛋白质 免疫组织化学
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异丙安替比林通过抑制蛋白激酶B通路诱导人肾癌细胞凋亡和自噬 预览
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作者 李明俊 赵冬 《安徽医药》 CAS 2019年第8期1501-1504,I0003共5页
目的探究异丙安替比林(Propyphenazone)对人肾癌细胞Caki-1增殖抑制和凋亡的影响及其分子机制。方法使用MTT(四甲基偶氮唑盐)法和克隆形成抑制实验检测异丙安替比林在不同时间和浓度下对Caki-1细胞增殖能力的影响;Annexin V-FITC/PI双... 目的探究异丙安替比林(Propyphenazone)对人肾癌细胞Caki-1增殖抑制和凋亡的影响及其分子机制。方法使用MTT(四甲基偶氮唑盐)法和克隆形成抑制实验检测异丙安替比林在不同时间和浓度下对Caki-1细胞增殖能力的影响;Annexin V-FITC/PI双染色检测对Caki-1细胞凋亡的影响;Hoechst 33342染色法检测Caki-1细胞染色质固缩状态;蛋白质印迹法(Western Blot)检测Caki-1细胞的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT(蛋白激酶B)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶p-AKT以及DNA修复酶PARP蛋白表达变化;激光共聚焦显微镜检测LC3蛋白在细胞中的点状聚集。结果 MTT实验结果表明异丙安替比林可抑制人肾癌细胞Caki-1的增殖(P<0.05),同时,异丙安替比林分别处理24 h、48 h、72 h后,所对应的半抑制浓度(IC50)分别为105μM、83μM、56μM;同时,克隆形成抑制实验表明20μM和40μM的异丙安替比林处理Caki-1细胞后,克隆形成率分别降为38%(P<0.05)和20%(P<0.01);流式结果表明,当使用0μM、40μM、80μM和100μM的异丙安替林处理Caki-1细胞后,细胞凋亡率分别为7.4%、13.5%、34.5%和50.9%;Western Blot结果表明,随着异丙安替比林浓度的增加,p-AKT蛋白表达降低,并伴随DNA修复酶PARP失活。免疫荧光实验结果表明异丙安替比林可能诱导细胞发生自噬。结论异丙安替比林显著抑制人肾癌Caki-1细胞增殖,并通过抑制AKT通路诱导肾癌细胞发生凋亡和自噬。 展开更多
关键词 肾肿瘤 异丙安替比林 Caki-1细胞 细胞凋亡 自噬 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 流式细胞术
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激活AMPK对老龄小鼠脓毒症的影响及其与自噬的关系
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作者 张钰 路佳 熊君宇 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期617-620,共4页
目的评价激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对老龄小鼠脓毒症的影响及其与自噬的关系。方法实验Ⅰ雌性SPF级C57BL/6小鼠28只,16~19月龄,体重25~35 g,采用随机数字表法分为2组(n=14):脓毒症(S组)和脓毒症+AMPK激动剂AICAR组(S+A组)。S+A组给... 目的评价激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对老龄小鼠脓毒症的影响及其与自噬的关系。方法实验Ⅰ雌性SPF级C57BL/6小鼠28只,16~19月龄,体重25~35 g,采用随机数字表法分为2组(n=14):脓毒症(S组)和脓毒症+AMPK激动剂AICAR组(S+A组)。S+A组给予0.5 ml AICAR灌胃,用5%二甲基亚砜溶解,S组给予5%二甲基亚砜0.5 ml灌胃,连续灌胃7 d,1次/d。记录给药前后体重。给药结束后腹腔注射小鼠盲肠内容物浆液200μl建立脓毒症模型。每组取9只小鼠,造模后观察7 d,记录生存情况。于造模后24 h时,每组处死5只小鼠,取脾脏组织,采用Western blot法检测AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)和LC3Ⅱ的表达水平,计算p-AMPK/AMPK比值和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。实验Ⅱ雌性SPF级C57BL/6小鼠10只,16~19月龄,体重25~35 g。取5只小鼠,提取并培养原代腹腔巨噬细胞,采用随机数字表法分为2组(n=5):对照组(C组)和EGFP E.Coli组(E组)。余下5只小鼠给予0.5 ml AICAR灌胃7 d,1次/d。灌胃结束后提取并培养原代腹腔巨噬细胞,采用随机数字表法分为2组(n=5):AICAR+EGFPE.Coli组(A+E组)和AICAR+自噬抑制剂3-甲基腺苷(3-MA)+EGFP E.Coli组(A+M+E组)。A+M+E组先加入5 mmol/L 3-MA 100μl孵育1 h;然后E组、A+E组和A+E+M组加入表达EGFP的E.Coli.50μl孵育1 h。采用流式细胞术测定巨噬细胞吞噬能力。结果实验Ⅰ与给药前比较,给药结束后S+A组体重降低(P<0.05);与S组比较,S+A组给药结束后体重降低,造模后7 d生存率提高,脾脏组织LC3Ⅱ表达上调,p-AMPK/AMPK比值和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P<0.05)。实验Ⅱ与C组比较,其余3组巨噬细胞吞噬能力增强(P<0.05);与E组比较,A+E组巨噬细胞吞噬能力增强(P<0.05),A+M+E组巨噬细胞吞噬能力差异无统计学意义(P>0.05);与A+E组比较,A+M+E组巨噬细胞吞噬能力减弱(P<0.05)。结论激活AMPK可提高脓毒症老龄小鼠的生存率,其机制与增强巨噬细胞自噬水平有关。 展开更多
关键词 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 脓毒症 自噬 老年人
酪醇对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及SIRT1/AMPK/eNOS信号通路在其中的作用
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作者 施思 雷少青 +2 位作者 刘慧敏 赵博 夏中元 《中华麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期552-555,共4页
目的探讨酪醇对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及沉默调节蛋白1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路在其中的作用。方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重200~220 g,采用腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg... 目的探讨酪醇对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及沉默调节蛋白1(SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路在其中的作用。方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重200~220 g,采用腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg制备糖尿病模型。取糖尿病模型制备成功的大鼠56只,采用随机数字表法分为4组(n=14):假手术组(S组)、心肌缺血再灌注组(I/R组)、心肌缺血再灌注+酪醇组(I/R+T组)和心肌缺血再灌注+酪醇+SIRT1抑制剂EX527组(I/R+T+E组)。I/R+T组和I/R+T+E组灌胃法连续45 d给予酪醇20 mg·kg^-1·d^-1,其他2组给予等体积生理盐水。I/R+T+E组于缺血前连续3 d腹腔注射EX527 5 mg·kg^-1·d^-1,并于再灌注前20 min时腹腔注射EX527 5 mg/kg。采用结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注2 h的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型。采用TTC法测量心肌梗死体积,ELISA法检测血清CK-MB、LDH、15-F2t-isoprostane和心肌组织SOD水平,Western blot法检测心肌组织SIRT1、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、eNOS和磷酸化eNOS(p-eNOS)的表达水平。结果与S组比较,I/R组血清CK-MB、LDH和15-F2t-Isoprostane的水平升高,心肌梗死体积增加,心肌组织SOD活性和SIRT1表达水平降低,I/R+T组和I/R+T+E组血清CK-MB、LDH和15-F2t-Isoprostane的水平升高,心肌梗死体积增加,心肌组织SOD活性和SIRT1表达水平降低,p-AMPK和p-eNOS表达上调(P<0.05);与I/R组比较,I/R+T组血清CK-MB、LDH和15-F2t-Isoprostane的水平降低,心肌梗死体积减少,心肌组织SOD活性和SIRT1、p-AMPK、p-eNOS的表达水平升高(P<0.05),I/R+T+E组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与I/R+T组比较,I/R+T+E组血清CK-MB、LDH和15-F2t-Isoprostane的水平升高,心肌梗死体积增加,心肌组织SOD活性和SIRT1、p-AMPK、p-eNOS表达水平降低(P<0.05)。结论酪醇可减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与激活SIRT1/AMPK/eNOS信号通路,抑制氧化应激反应有关。 展开更多
关键词 抗氧化剂 糖尿病 心肌再灌注损伤 抗衰老酶1 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 一氧化氮合酶
蛋白激酶CK2β在肝细胞癌中的表达及临床意义 预览
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作者 梁润威 范正军 +2 位作者 黄娟 孙涛 余祖启 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期547-552,共6页
目的 研究蛋白激酶CK2β在肝细胞癌组织中的表达及临床意义,并探讨其表达与患者预后的关系。方法 收集2012年1月-2013年6月于郑州大学第一附属医院肝胆胰外科确诊的127例肝细胞癌患者癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法检测其CK2β的表达... 目的 研究蛋白激酶CK2β在肝细胞癌组织中的表达及临床意义,并探讨其表达与患者预后的关系。方法 收集2012年1月-2013年6月于郑州大学第一附属医院肝胆胰外科确诊的127例肝细胞癌患者癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法检测其CK2β的表达,分析癌组织中CK2β表达强度与肝癌患者临床特征的关系。另收集本院2018年3-6月期间手术切除的20例肝细胞癌癌组织、癌旁组织、肝硬化组织、正常肝组织标本并提取蛋白和mRNA,运用WestenBlot和real-timePCR检测其CK2β表达情况。多组间均数比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Bonferroni检验,计数资料组间比较采用χ2检验。CK2β在肝细胞癌的表达差异与临床特征参数的关系采用Mann-WhitneyU检验或Kruskal-WallisH检验。生存分析采用Kaplan-Meier法,组间比较采用log-rank检验。结果 WestenBlot和real-timePCR结果证实CK2β在癌组织中表达率显著高于癌旁组织、肝硬化组织和正常肝组织(P值均<0.05);癌旁及肝硬化组织中CK2β表达无差异(P值均>0.05),且均高于正常组织表达(P值均<0.05)。免疫组化染色结果发现127例肝细胞癌患者的癌组织和癌旁组织中CK2β阳性表达率分别为85.8%和63.0%,差异有统计学意义(P<0.001)。肝癌组织中CK2β的表达分布在不同年龄(Z=-2.277,P=0.023)、肝硬化有无(Z=-2.144,P=0.032)、不同肿瘤大小(Z=-2.289,P=0.004)、不同Edmondson-Steiner病理分级(χ2=8.210,P=0.016)的肝细胞癌患者中差异均有统计学意义。Kaplan-Meier生存曲线发现,CK2β表达强阳性组术后生存期均明显低于中阳性组、弱阳性组及阴性组(P值均<0.001)。结论 CK2β蛋白可能参与肝细胞癌的发生发展,其阳性表达与肝细胞癌患者预后有关。 展开更多
关键词 肝细胞 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 预后
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Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与AMPK∕mTOR信号通路的关系
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作者 李维 冷燕 +4 位作者 孟庆涛 吴洋 陈榕 刘慧敏 夏中元 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期808-812,共5页
目的 评价Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶( HDAC)在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与AMP依赖的蛋白激酶∕哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK∕mTOR)信号通路的关系.方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重210~220 g,腹腔注射柠檬酸盐-链脲佐菌素... 目的 评价Ⅰ型组蛋白去乙酰化酶( HDAC)在糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其与AMP依赖的蛋白激酶∕哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK∕mTOR)信号通路的关系.方法SPF级健康成年雄性SD大鼠,体重210~220 g,腹腔注射柠檬酸盐-链脲佐菌素60 mg∕kg,建立Ⅰ型糖尿病模型,8周后用于实验.取糖尿病大鼠48只,采用随机数字表法分为4组( n=12):假手术组(S组) 、心肌缺血再灌注组(I∕R组)、心肌缺血再灌注+I型HDAC抑制剂MS-275组( I∕R+MS组)和心肌缺血再灌注+MS-275+AMPK抑制剂Compound C组( I∕R+MS+CC组).采用结扎冠状动脉左前降支45 min,再灌注180 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型. I∕R+MS组腹腔注射MS-275 10 mg∕kg,连续7 d,1次∕d,给药结束后制备心肌缺血再灌注损伤模型;I∕R+MS+CC组于缺血前30 min静脉注射AMPK抑制剂Compound C 0.5 mg∕kg.于再灌注结束时,处死6只大鼠,测定心肌梗死体积;另取6只大鼠,右颈内动脉采血后处死,采用ELISA法检测血清CK-MB和LDH的水平,West-ern blot法测定心肌组织磷酸化AMPK (p-AMPK)、AMPK、磷酸化mTOR(p-mTOR)、mTOR、泛素结合蛋白(P62)和微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、LC3Ⅱ的表达水平,计算 p-AMPK∕AMPK 比值、p-mTOR∕mTOR比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值.结果 与SH组比较,I∕R组、I∕R+MS组和I∕R+M+CC组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH水平升高,I∕R+MS组心肌组织p-AMPK∕AMPK比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值升高,p-mTOR∕mTOR比值降低,P62表达下调(P<0. 05),I∕R组和 I∕R+ M+CC组心肌组织 p-AMPK∕AMPK比值、p-mTOR∕mTOR比值、LC3Ⅱ∕Ⅰ比值和P62表达差异无统计学意义( P>0. 05);与I∕R组比较,I∕R+MS组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH水平降低,心肌组织p-AMPK∕AMPK比值和LC3Ⅱ∕Ⅰ比值升高,p-mTOR∕mTOR比值降低,P62表达下调(P<0. 05),I∕R+M+CC组上述指标差异无统计学意义(P>0. 05);与I∕R+MS组比较,I∕R+M+CC组心肌梗死体积、血清CK-MB和LDH� 展开更多
关键词 蛋白脱乙酰基酶类 糖尿病 心肌再灌注损伤 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 受体作用蛋白丝氨酸苏氨酸激酶
海马PI3K/Akt/GSK-3β信号通路在右美托咪定减轻异丙酚致新生大鼠远期认知功能减退中的作用 被引量:2
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作者 涂友兵 周丽芳 +2 位作者 韦祎 陈静 谢玉波 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期407-412,共6页
目的 评价海马磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/糖原合成酶激酶-3β(PI3K/Akt/GSK-3β)信号通路在右美托咪定减轻异丙酚致新生大鼠远期认知功能减退中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠110只,7日龄,体重10~15 g,采用随机数... 目的 评价海马磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/糖原合成酶激酶-3β(PI3K/Akt/GSK-3β)信号通路在右美托咪定减轻异丙酚致新生大鼠远期认知功能减退中的作用.方法 清洁级健康雄性SD大鼠110只,7日龄,体重10~15 g,采用随机数字表法分为11组(n=10):生理盐水组(NS组)、脂肪乳剂组(F组)、10%二甲基亚砜(DMSO)2组(D2组)、右美托咪定组(DEX组)和TDZD-8组(TDZD组)分别腹腔注射生理盐水、脂肪乳剂、10%DMSO 100μl、右美托咪定75μg/kg和TDZD-8 1 mg/kg;10%DMSO1组(D1组)和LY294002组(LY组)分别经侧脑室注射10%DM-SO 5μl和LY294002 25 μg/5 μl;异丙酚组(P组)腹腔注射异丙酚50 mg/kg,待翻正反射恢复后追加50 mg/kg;右美托咪定+异丙酚组(PD组)腹腔注射右美托咪定75 μg/kg,30 min后注射异丙酚;LY294002+右美托咪定+异丙酚组(LYPD组)注射LY294002,30 min后注射右美托咪定,30 min后注射异丙酚;TDZD-8+右美托咪定+异丙酚组(TDPD组)注射TDZD-8,余处理同LYPD组.苏醒后继续饲养至9周龄.采用Morris水迷宫实验评价认知功能;随后处死大鼠取海马,采用RT-PCR法检测PI3K、Akt、GSK-3β、PSD95的mRNA表达;采用Western blot法检测Akt、pAkt(ser473)、GSK-3β、pG-SK-3β (ser9)、PSD95的表达.结果 与NS组比较,P组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,PI3K、Akt和PSD95的mRNA表达下调,GSK-3β mRNA表达上调,p-Akt(ser473)/Akt比值降低,PSD95表达下调,pGSK-3β (ser9)/GSK-3β比值升高(P<0.05);与P组比较,PD组、LYPD组和TDPD组逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,PD组PI3K、Akt和PSD95的mRNA表达上调,GSK-3βmRNA表达下调,PD组和TDPD组pAkt(ser473)/Akt比值升高,PSD95表达上调,pGSK-3β(ser9)/GSK-3β比值降低(P<0.05);与PD组比较,LYPD组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,GSK-3βmRNA表达上调,PSD95 mRNA表达下调,pAkt(ser473)/Ak 展开更多
关键词 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 糖原合成酶激酶3 右美托咪啶 二异丙酚 海马 认知障碍 婴儿 新生
PI3K/Akt信号通路在内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时一氧化碳上调线粒体融合蛋白中的作用
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作者 黄漫迎 史佳 +4 位作者 张圆 吴丽丽 宫丽荣 董树安 余剑波 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期728-731,共4页
目的 评价1-磷酯酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时一氧化碳(CO)上调线粒体融合蛋白表达中的作用.方法 将肺泡上皮细胞用含10%胎牛血清的1%青链双抗F12K完全培养基于37℃、5%CO2的培养箱... 目的 评价1-磷酯酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在内毒素攻击大鼠肺泡上皮细胞时一氧化碳(CO)上调线粒体融合蛋白表达中的作用.方法 将肺泡上皮细胞用含10%胎牛血清的1%青链双抗F12K完全培养基于37℃、5%CO2的培养箱中培养,采用随机数字表法分为10组(n=5):对照组(C组);内毒素组(L组)向培养基中加入10 μg/ml脂多糖(LPS);LPS+外源性CO释放剂CORM-2组(L+CO组)向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+PI3K抑制剂LY294002组(L+ LY组)向培养基中加入25 μmol/LLY294002,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+外源性CO释放剂CORM-2+ PI3K抑制剂LY294002组(L+CO+LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002,1h后向培养基中加入CORM-2 100μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+无活性的CO释放剂iCORM-2组(L+iCO组)向培养基中加入iCORM 100 μmol/L,1h后向培养基中加入10 μg/ml LPS;LPS+二甲基亚砜(DM-SO)组(L+D组)向培养基中加入等浓度DMSO,1h后加入1μg/ml LPS;外源性CO释放剂CORM-2组(CO组)向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L;PI3K抑制剂LY294002组(LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002;外源性CO释放剂CORM-2+PI3K抑制剂LY294002组(CO+LY组)向培养基中加入25 μmol/L LY294002,1 h后向培养基中加入CORM-2 100 μmol/L.孵化24h后收集细胞,检测MDA含量和SOD活性,采用Western blot法检测血红素氧合酶-1(HO-1)、磷酸化Akt(p-Akt)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、Mfn2和视神经萎缩蛋白1(OPA1)的表达.结果 与C组比较,L组、L+CO组、L+LY组、L+CO+LY组、L+iCO组、L+D组MDA含量升高,SOD活性降低,L组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达上调(P<0.05);与L组比较,L+CO组MDA含量降低,SOD活性升高,L+LY组MDA含量升高,SOD活性降低,L+CO组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达上调,L+LY组HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1、p-Akt表达下调(P<0.05);与L+CO组比较,L+CO+LY组MDA含量升高,SOD活性降低,HO-1、Mfn1、Mfn2、OP 展开更多
关键词 1-磷酯酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 内毒素类 一氧化碳 肺泡 上皮细胞 线粒体蛋白质
海马PI3K/Akt信号通路在外源性食欲素A改善异氟醚致小鼠记忆功能减退中的作用
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作者 赵广超 刘洪 +2 位作者 董海龙 巩固 熊利泽 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期300-303,共4页
目的评价海马磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在外源性食欲素A改善异氟醚致小鼠记忆功能减退中的作用。方法清洁级健康成年雄性C57BL/6小鼠100只,体重20-25 g,侧脑室置管成功后,采用随机数字表法分为5... 目的评价海马磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在外源性食欲素A改善异氟醚致小鼠记忆功能减退中的作用。方法清洁级健康成年雄性C57BL/6小鼠100只,体重20-25 g,侧脑室置管成功后,采用随机数字表法分为5组(n=20):对照组(C组)和异氟醚组(I组)给予生理盐水,食欲素A组(OA组)给予1.5 mmol/L食欲素A,食欲素A+二甲基亚砜组(OA+D组)给予1.5 mmol/L食欲素A(溶于二甲基亚砜),食欲素A+PI3K抑制剂LY294002组(OA+LY组)给予1.5 mmol/L食欲素A +10 mmol/L LY294002。除C组仅吸入纯氧2 h(氧流量2 L/min)外,其余各组小鼠均吸入1.4%异氟醚2 h,并于麻醉结束前15 min依上述浓度侧脑室注射相应药物2 μl。每组随机取12只小鼠于麻醉结束后2 h时行条件恐惧刺激实验,并于24 h后进行记忆提取。各组剩余8只小鼠于麻醉结束后2 h时处死取海马组织,采用Western blot法检测PI3K、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)的表达。结果与C组比较,I组小鼠恐惧箱内僵直时间缩短,PI3K、Akt和p-Akt表达下调,p-Akt/Akt比值降低(P〈0.05);与I组比较,OA组小鼠恐惧箱内僵直时间延长,PI3K和p-Akt表达上调,p-Akt/Akt比值升高(P〈0.05);OA组和OA+D组各指标比较差异无统计学意义(P〉0.05);与OA+D组比较,OA+LY组小鼠恐惧箱内僵直时间缩短,PI3K、Akt、p-Akt表达下调,p-Akt/Akt比值降低(P〈0.05)。结论海马PI3K/Akt信号通路参与了外源性食欲素A改善异氟醚致小鼠记忆功能减退的过程。 展开更多
关键词 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 异氟醚 记忆障碍 食欲素A
Akt∕GSK-3β信号通路在曲古霉素A减轻小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用
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作者 刘恋 赵博 +3 位作者 冷燕 吴洋 高文蔚 夏中元 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期1137-1140,共4页
目的 评价蛋白激酶B∕糖原合成酶激酶-3β(Akt∕GSK-3β)信号通路在曲古霉素A(TSA)减轻小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 清洁级健康成年雄性Balb∕c小鼠40只,体重18~22 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注... 目的 评价蛋白激酶B∕糖原合成酶激酶-3β(Akt∕GSK-3β)信号通路在曲古霉素A(TSA)减轻小鼠脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 清洁级健康成年雄性Balb∕c小鼠40只,体重18~22 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I∕R组)、TSA组和TSA+Akt抑制剂LY294002组(TL组).采用大脑中动脉闭塞法(缺血1 h再灌注24 h)建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型.TSA组于模型建立前连续3 d腹腔注射TSA 5 mg∕kg,TL组于模型建立前连续3 d腹腔注射TSA 5 mg∕kg,并于模型建立前30 min尾静脉注射LY29400215 nmol∕kg.再灌注24 h时取脑组织,采用TTC法测定脑梗死体积,采用比色法测定SOD、ROS活性和MDA含量,采用TUNEL法确定细胞凋亡指数,采用Western blot法测定Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、GSK-3β和磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)的表达,计算p-Akt∕Akt比值和p-GSK-3β∕GSK-3β比值.结果 与S组比较,I∕R组脑梗死体积增加,脑组织SOD活性降低,MDA含量、ROS活性和细胞凋亡指数升高,p-Akt∕Akt比值和p-GSK-3β∕GSK-3β比值降低(P<0.05);与I∕R组比较,TSA组脑梗死体积减小,脑组织SOD活性升高,MDA含量、ROS活性和细胞凋亡指数降低,p-Akt∕Akt比值和p-GSK-3β∕GSK-3β 比值升高(P<0.05);与TSA组比较,TL组脑梗死体积增加,脑组织SOD活性降低,MDA含量、ROS活性和细胞凋亡指数升高,p-Akt∕Akt和p-GSK-3β∕GSK-3β比值降低(P<0.05).结论 TSA减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的机制与激活Akt∕GSK-3β信号通路有关. 展开更多
关键词 蛋白脱乙酰基酶抑制剂 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 糖原合成酶激酶3 再灌注损伤
PI3K/Akt介导TRPV1表达上调参与CCI大鼠神经病理性疼痛
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作者 丁惠娟 程智刚 《中国医师杂志》 CAS 2018年第9期1392-1394,共3页
目的通过观察磷脂酰肌醇(-3)激酶(P13K)抑制剂LY294002对坐骨神经慢性结扎损伤模型(CCI)大鼠痛阈以及脊髓背角的磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、辣椒碱受体(TRPV1)表达的影响,研究P13K/Akt通路在神经病理性疼痛中的... 目的通过观察磷脂酰肌醇(-3)激酶(P13K)抑制剂LY294002对坐骨神经慢性结扎损伤模型(CCI)大鼠痛阈以及脊髓背角的磷酸化丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)、辣椒碱受体(TRPV1)表达的影响,研究P13K/Akt通路在神经病理性疼痛中的作用。方法24只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(S组)、CCI组(C组)、LY294002组(L组)、DMSO(二甲基亚砜,LY294002的溶媒)组(D组),S组只缠绕丝线不结扎,其余组均结扎左侧坐骨神经。L组、D组鞘内置管,分别给予LY294002和DMSO,C组、s组不予鞘内置管。分别测定各组大鼠的机械痛阈(PWMT)和热痛阈(PWTL),取腰段脊髓腰膨大处做免疫组化检测脊髓背角P-Akt和TRPV1的表达。结果与S组比较,L组在术后各时间点PWMT显著下降(P〈0.05),PWTL第1-3天显著下降(P〈0.05),在第5-7天差异无统计学意义(P〉0.05),p-Akt和TRPV1表达上调。与D组和c组比较,L组在术后各时间点PWMT和PWTL均显著上升(P〈0.05),p-Akt和TRPV1表达下降(P〈0.05)。结论P13K/Akt通过上调TRPVI的表达,参与CCI致神经病理性疼痛的形成。 展开更多
关键词 坐骨系统/外科学 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 疼痛 模型 动物 大鼠
内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时P13K/Akt信号通路在线粒体分裂中的作用
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作者 曹涵冰 史佳 +3 位作者 宫丽荣 张圆 董树安 余剑波 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期618-621,共4页
目的评价内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)信号通路在线粒体分裂中的作用。方法将肺泡Ⅱ型上皮细胞以密度2×10^5/ml接种于6孔板,采用随机数字表法将其分为6组(n=10):空白对照组(C... 目的评价内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)信号通路在线粒体分裂中的作用。方法将肺泡Ⅱ型上皮细胞以密度2×10^5/ml接种于6孔板,采用随机数字表法将其分为6组(n=10):空白对照组(C组)、LPS组(L组)、LPS+CORM一2组(L+CO组)、LPS+I|Y294002组(L+LY组)、LPS+无活性的CORM-2(iCORM-2)组(L+iCO组)、LPS+甲基亚砜组(L+D组)。L组、L+CO组、L+LY组、L+iCO组和L+D组采用10Ixg/mlLPS孵育24h;于LPS孵育前1h时,L+CO组、L+LY组、LPS+iCO组分别加入CORM-2100μmol、LY29400225I-Lg、iCORM-2100μmol:L+D组于LPS孵育前1h加入0.1%二甲基亚砜100Ixmol。细胞孵育结束后,采用ELISA法测定培养液TNF-a和IL-6浓度。采用Westernbolt法测定细胞磷酸化Akt(p-Akt)、血红素加氧酶-1(HO-1)、线粒体动力相关蛋白1(Drpl)、线粒体分裂相关蛋白1(Fisl)的表达。结果与C组比较,L组、L+CO组、L+LY组、L+iCO组和L+D组培养液TNF-a和IL-6浓度升高,p-Akt、HO-1、Drpl和Fisl表达上调(P〈0.05)。与L组比较,L+C0组TNF-a和IL-6浓度降低,p-Akt和HO-1表达上调。Drpl和Fisl表达下调.L+LY组TNF-a和IL-6浓度升高,p-Akt和HO.1表达下调,Drpl和Fisl表达上调(P〈0.05)。结论内毒素攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞时P13K/Akt信号通路激活可抑制线粒体分裂。 展开更多
关键词 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 内毒素类 线粒体 上皮 细胞 肺泡
PI3K/Akt/eNOS信号通路在七氟醚后处理减轻失血性休克复苏大鼠脑损伤中的作用
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作者 张慕春 胡宪文 +4 位作者 黄丽 汪静娴 段晓雯 张启权 张野 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期92-96,共5页
目的评价磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路在七氟醚后处理减轻失血性休克复苏大鼠脑损伤中的作用。 方法清洁级健康成年雄性SD大鼠72只,体重300~350 g,采用随机数字表... 目的评价磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路在七氟醚后处理减轻失血性休克复苏大鼠脑损伤中的作用。 方法清洁级健康成年雄性SD大鼠72只,体重300~350 g,采用随机数字表法分为4组(n=18):假手术组(S组)、失血性休克复苏组(HSR组)、七氟醚后处理组(SP组)和七氟醚后处理+PI3K/Akt通路特异性抑制剂渥曼青霉素组(SP+WT组)。经右颈总动脉放血30 min,放血量为总血容量的40%,1 h后经左颈静脉于30 min内回输全部自体血,制备大鼠失血性休克复苏模型。SP+WT组造模前30 min时颈静脉注射渥曼青霉素0.6 mg/kg。SP组和SP+WT组于血液回输即刻吸入2.4%七氟醚30 min。于放血前10 min(T0)、放血结束即刻(T1)、放血结束后30 min(T2)、放血结束后1 h(T3)和血液回输结束即刻(T4),采集颈总动脉血样行血气分析,记录乳酸浓度,同时记录MAP。于血液回输结束24 h时,每组随机取6只大鼠,取全脑,采用TTC染色法测定脑梗死体积,采用免疫组化法检测海马caspase-3表达,采用Western blot法测定Akt、磷酸化Akt(p-Akt)和eNOS的表达,计算p-Akt/Akt比值。 结果与S组比较,其余3组T1-3时MAP降低,血乳酸浓度升高,脑梗死体积升高,海马caspase-3表达上调,SP组脑组织p-Akt/Akt比值升高,eNOS表达上调(P〈0.05);与HSR组比较,SP组脑梗死体积降低,海马caspase-3表达下调,脑组织p-Akt/Akt比值升高,eNOS表达上调(P〈0.05);与SP组比较,SP+WT组脑梗死体积升高,海马caspase-3表达上调,脑组织p-Akt/Akt比值降低,eNOS表达下调(P〈0.05)。 结论PI3K/Akt/eNOS信号通路激活介导了七氟醚后处理减轻失血性休克复苏大鼠脑损伤的作用。 展开更多
关键词 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 一氧化氮合酶 麻醉药 吸入 缺血后处理 休克 出血性 脑损伤
PI3K/Akt信号通路在异丙酚抑制人肝癌细胞侵袭中的作用
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作者 周桥灵 刘洪珍 +5 位作者 杨敏清 刘远英 赖晓红 梁桦 杨承祥 古妙宁 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期110-113,共4页
目的评价磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路在异丙酚抑制人肝癌细胞侵袭中的作用。 方法将HepG2细胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基于37 ℃、5%CO2的培养箱中培养,当细胞稳定进入对数生长期时,采... 目的评价磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)信号通路在异丙酚抑制人肝癌细胞侵袭中的作用。 方法将HepG2细胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基于37 ℃、5%CO2的培养箱中培养,当细胞稳定进入对数生长期时,采用随机数字表法分为6组(n=18):对照组(C组);异丙酚组(P组)加入120 μg/ml异丙酚;PI3K/Akt信号通路激动剂IGF-1组(IGF组)加入10 nmol/L IGF-1;PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002组(LY组)加入10 μmol LY294002;IGF-1 +异丙酚组(IGF+P组)先加入10 nmol/L IGF-1孵育24 h,再加入120 μg/ml异丙酚;LY294002 +异丙酚组(LY + P组)先加入10 μmol LY294002孵育24 h,再加入120 μg/ml异丙酚。于孵育24 h时,采用Transwell法检测细胞的侵袭力,采用RT-PCR法检测PI3K和Akt的mRNA表达,采用Western blot法检测Akt、PI3K及磷酸化Akt(p-Akt)的表达。 结果与C组比较,P组、P+IGF组、LY组和P+LY组侵袭细胞计数减少,细胞PI3K及其mRNA表达下调,p-Akt/Akt比值下降,Akt mRNA表达下调,IGF组侵袭细胞计数增加,细胞PI3K及其mRNA表达上调,p-Akt/Akt比值升高,Akt mRNA表达上调(P〈0.05);与P组比较,P+IGF组侵袭细胞计数增多,细胞PI3K及其mRNA表达上调,p-Akt/Akt比值升高,Akt mRNA表达上调,P+LY组侵袭细胞计数减少,细胞PI3K及其mRNA表达下调,p-Akt/Akt比值下降,Akt mRNA表达下调(P〈0.05);与IGF组比较,P+IGF组侵袭细胞数减少,细胞PI3K及其mRNA表达下调,p-Akt/Akt比值下降,Akt mRNA表达下调(P〈0.05);与LY组比较,P+LY组侵袭细胞数减少,细胞PI3K及其mRNA表达下调,p-Akt/Akt比值下降,Akt mRNA表达下调(P〈0.05)。 结论异丙酚抑制人肝癌HepG2细胞侵袭的机制与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 二异丙酚 细胞系 肿瘤 肿瘤侵润 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶
脓毒症小鼠急性肺损伤时PI3K/Akt信号通路与细胞自噬的关系 被引量:1
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作者 田婧 陈亚军 +5 位作者 张鹏 王桂平 白广 陈红光 毛幸 于泳浩 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期114-117,共4页
目的评价脓毒症小鼠急性肺损伤时磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路与细胞自噬的关系。 方法雄性C57BL/6小鼠36只,6~8周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(SH组)、脓毒症... 目的评价脓毒症小鼠急性肺损伤时磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路与细胞自噬的关系。 方法雄性C57BL/6小鼠36只,6~8周龄,体重20~25 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):假手术组(SH组)、脓毒症组(S组)和PI3K抑制剂LY294002+脓毒症组(LY+S组)。S组和LY+S组采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型。LY+S组于术前2 h时腹腔注射LY294002 30 mg/kg。术后24 h时颈动脉取血样,行血气分析,记录PaO2,计算氧合指数;取肺组织,光镜下行肺损伤评分,透射电镜下计数自噬小体,测定湿重/干重比值(W/D比值),采用Western blot法测定Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ型(LC3Ⅱ)的表达水平,计算p-Akt/Akt比值。 结果与SH组比较,S组和LY+S组氧合指数降低,肺组织W/D比值和肺损伤评分升高,S组自噬小体计数升高,肺组织p-Akt/Akt比值升高,Beclin-1和LC3Ⅱ的表达上调(P〈0.05);与S组比较,LY+S组氧合指数降低,肺组织W/D比值升高,自噬小体计数下降,肺损伤评分升高,p-Akt/Akt比值降低,Beclin-1和LC3Ⅱ的表达下调(P〈0.05)。 结论PI3K/Akt信号通路激活可介导自噬,参与了脓毒症小鼠急性肺损伤时的内源性保护机制。 展开更多
关键词 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 自噬 脓毒症 呼吸窘迫 综合征 成人
WNK3激酶对肾脏大电导钙激活钾通道的调节作用及机制
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作者 胡小涵 毕叶 +5 位作者 陈新新 陈丽虹 张玉桦 陈敏广 蔡晖 庄捷秋 《中华肾脏病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第8期616-621,共6页
目的探讨WNK3激酶对肾脏大电导钙激活钾通道(Maxi K通道)的调节作用及其机制。方法(1)在非洲绿猴肾成纤维细胞(Cos-7细胞)中转染0.5μg Maxi K质粒的同时分别转染0、0.6、1.2、1.8μg WNK3质粒,Western印迹检测细胞总蛋白中M... 目的探讨WNK3激酶对肾脏大电导钙激活钾通道(Maxi K通道)的调节作用及其机制。方法(1)在非洲绿猴肾成纤维细胞(Cos-7细胞)中转染0.5μg Maxi K质粒的同时分别转染0、0.6、1.2、1.8μg WNK3质粒,Western印迹检测细胞总蛋白中Maxi K通道的表达及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的磷酸化水平。(2)Cos-7细胞分为转染2.5μg Maxi K质粒组(对照组)和转染2.5μg Maxi K质粒+2.5μg WNK3质粒组(实验组),细胞表面生物素化方法检测细胞表面膜蛋白中Maxi K通道的表达,免疫沉淀和Westem印迹检测Maxi K通道蛋白泛素化水平。(3)用WNK 3siRNA沉默WNK3激酶基因,用质子泵抑制剂(Baf—A1)阻断溶酶体降解途径,Cos-7细胞分为Maxi K+阴性对照siRNA组、Maxi K+WNK3 siRNA组和Maxi K+WNK3 siRNA+Baf-A1组。Western印迹检测细胞中Maxi K通道蛋白的表达。结果(1)与0μg WNK3质粒组比较,转染0.6、1.2、1.8μg WNK3质粒组细胞总蛋白中Maxi K通道的表达均升高,MAPKERKl/2的磷酸化水平均降低(均P〈0.01),且呈剂量依赖性。(2)与对照组比较,同时转染WNK3和Maxi K的实验组细胞总蛋白和膜蛋白中Maxi K通道的表达均增加,Maxi K通道蛋白的泛素化水平降低(均P〈0.01)。(3)与Maxi K+阴性对照siRNA组比较,Maxi K+WNK 3siRNA组Maxi K蛋白表达降低(P〈0.01),Maxi K+WNK 3siRNA+Bar-A1组的Maxi K蛋白表达无明显变化(P〉0.05);与Maxi K+WNK 3siRNA组比较,Maxi K+WNK 3siRNA+Baf—A1组的Maxi K蛋白表达升高(P〈0.01)。结论WNK3激酶通过减少Maxi K通道蛋白的泛素化来抑制Maxi K通道的溶酶体降解途径,从而促进Maxi K通道在细胞内和细胞膜上的表达量。其机制可能与MAPK ERK1/2转导通路有关。 展开更多
关键词 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 大电导钙激活钾通道 泛素化 MAP激酶信号系统 溶酶体降解途径
PI3K∕Akt信号通路在右美托咪定减轻体外循环大鼠肺缺血再灌注损伤的作用
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作者 李倩 窦雪娇 +4 位作者 韩明 李健 谢菲 何苗 张红 《中华麻醉学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期803-807,共5页
目的 评价磷脂酰肌醇3激酶∕蛋白激酶B( PI3K∕Akt)信号通路在右美托咪定减轻体外循环(CPB)致大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体重350~450 g,采用随机数字表法分为3组(n=8):缺血再灌注组(I∕R组)、右美托咪... 目的 评价磷脂酰肌醇3激酶∕蛋白激酶B( PI3K∕Akt)信号通路在右美托咪定减轻体外循环(CPB)致大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠24只,体重350~450 g,采用随机数字表法分为3组(n=8):缺血再灌注组(I∕R组)、右美托咪定组(D组)和右美托咪定+渥曼青霉素组(D+W组).建立CPB并循环10 min时开胸,阻断左肺门45 min后恢复灌注. D组于阻断左肺门前10 min时尾静脉注射右美托咪定3 μg∕kg,之后以1. 5 μg·kg-1·h-1的速率静脉输注至CPB结束;D+W组于阻断左肺门前10 min时尾静脉注射右美托咪定3 μg∕kg,之后以1. 5 μg·kg-1·h-1的速率静脉输注至 CPB 结束,同时股静脉注射渥曼青霉素 15 μg∕kg,之后以 2. 0 μg·kg-1·min-1的速率静脉输注至CPB结束.分别于CPB前即刻( T1)、开放左肺门即刻( T2)和CPB结束后1. 5 h时(T3)采集动脉血样行血气分析,计算氧合指数( OI)和呼吸指数( RI).于T3时处死大鼠留取左肺组织,光镜下观察病理学结果,并行肺损伤评分,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用Western blot法测肺组织 Akt、Bad、活化的 caspase-3和磷酸化 Akt(p-Akt)、磷酸化 Bad(p-Bad)的表达水平.结果 与T1时比较,3组T2和T3时点OI降低,RI升高( P<0. 05);与T2时比较,3组T3时OI降低,RI升高(P<0. 05);与I∕R组比较,D组T3时OI升高,RI降低,肺损伤评分及细胞凋亡率降低,肺组织p-Akt∕Akt比值和p-Bad∕Bad比值升高,活化的caspase-3表达下调,D+W组T2时点OI降低,RI升高(P<0. 05);与D组比较,D+W组T2和T3时点OI降低,RI升高,肺损伤评分及细胞凋亡率升高,肺组织p-Akt∕Akt比值和p-Bad∕Bad比值降低,活化的caspase-3表达上调(P<0. 05).结论 右美托咪定可通过激活PI3K∕Akt信号通路,抑制细胞凋亡,减轻CPB大鼠肺缺血再灌注损伤. 展开更多
关键词 右美托咪啶 1-磷脂酰肌醇3-激酶 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 心肺转流术 再灌注损伤
PI3K/AKT信号通路对神经母细胞瘤细胞增殖的作用及抑癌机制分析
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作者 杜海松 康康 《实用肿瘤杂志》 CAS 2018年第4期329-333,共5页
目的探讨PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖中的作用以及其抑癌机制。方法选取神经母细胞瘤患者143例,提取其神经母细胞瘤细胞,选取对数期细胞接种,24 h后添加PI3K/AKT抑制剂LY294002进行处理,处理后24 h和48 h用四甲基偶氮唑蓝(... 目的探讨PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖中的作用以及其抑癌机制。方法选取神经母细胞瘤患者143例,提取其神经母细胞瘤细胞,选取对数期细胞接种,24 h后添加PI3K/AKT抑制剂LY294002进行处理,处理后24 h和48 h用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyl tetrazolium bromide,MTT)法测量其吸光度(absorbance value,A)值;更换培养液继续培养12 h后添加PI3K/AKT促进剂类胰岛素生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)再次处理,处理后12 h和24 h测量A值。同期选择不添加抑制剂、促进剂细胞培养液作为对照组,并在抑制剂48 h、促进剂24 h荧光测定聚合酶链扩增反应(polymerase chain reaction,PCR)酪氨酸激酶受体A(tyrosine kinase receptor A,TYKA)基因mRNA含量。结果神经母细胞瘤细胞在20、40、50、60和100μmo1/L浓度PI3K/AKT抑制剂处理后24 h和48 h A值均小于对照组,差异均具有统计学意义(均P〈0.05);在25、50、100、150和200ng/mL PI3K/AKT促进剂IGF-1处理后12 h和24 h A值均大于对照组,差异均具有统计学意义(均P〈0.05)。抑制剂48 h时间点TYKA基因mRNA含量低于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05);促进剂24 h时间点TYKA基因mRNA含量高于对照组,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论 PI3K/AKT信号通路在神经母细胞瘤细胞增殖中发挥作用。抑制PI3K/AKT信号通路可能通过抑制TYKA基因mRNA表达发挥抑癌作用。 展开更多
关键词 神经母细胞瘤/病理生理学 1-磷脂酰肌醇3-激酶/拮抗剂和抑制剂 细胞增殖 细胞 培养的 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶 信号传导
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