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K.paraultunense角蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究
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作者 羊希 李霞 +2 位作者 姜河 廖学品 石碧 《皮革科学与工程》 CAS 北大核心 2019年第3期5-11,共7页
将角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense(K. paraultunense)所产角蛋白酶的粗酶液,依次通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose-FF阴离子交换以及Superdex 75凝胶色谱层析等分离纯化,最终得到一种电泳纯的角蛋白酶。其纯化倍数为14.55,... 将角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense(K. paraultunense)所产角蛋白酶的粗酶液,依次通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose-FF阴离子交换以及Superdex 75凝胶色谱层析等分离纯化,最终得到一种电泳纯的角蛋白酶。其纯化倍数为14.55,回收率为7.24%。SDS-PAGE分析结果表明该酶的相对分子质量约为29 KDa。酶学性质研究表明,该酶最适作用温度为80 ℃;最适pH为7.5,在pH 6.0~9.0范围内酶活力较为稳定;当以酪蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为4.37 mg·mL^-1,Vm为14 556 U·(mg·min)^-1,而当以羊毛角蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为15.66 mg·mL^-1,Vm为2610 U·(mg·min)^-1;Ca2+对酶活有明显的促进作用,但苯基甲基磺酰氟(PMSF)对酶活有较强的抑制作用。 展开更多
关键词 K.paraultunense 角蛋白酶 分离纯化 学性质
戈壁异常球菌角蛋白酶基因的克隆及功能研究 预览
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作者 耿秀秀 周正富 +2 位作者 刘盈盈 平淑珍 王劲 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期65-70,共6页
旨为深入发掘角蛋白酶重要的基因资源,进一步提高其水解酶活,为工业生产提供理论基础。从分离于新疆戈壁沙漠的戈壁异常球菌(Deinococcus gobiensis)I-0中克隆出一个编码角蛋白酶的基因并命名Dgker。构建原核表达载体pET-22b-Dgker并进... 旨为深入发掘角蛋白酶重要的基因资源,进一步提高其水解酶活,为工业生产提供理论基础。从分离于新疆戈壁沙漠的戈壁异常球菌(Deinococcus gobiensis)I-0中克隆出一个编码角蛋白酶的基因并命名Dgker。构建原核表达载体pET-22b-Dgker并进行体外诱导表达纯化,通过对羽毛水解活性的测定探究粗酶液的最适温度和pH。结果显示,Dgker蛋白N端前50个氨基酸对蛋白的表达纯化有很大影响。Dgker的重组菌株3d完全分解羽毛,在奶粉平板上重组菌株粗酶液比空载菌株粗酶液降解圈更显著。Dgker适应的温度和pH较为广泛其中最适温度是60℃、最适pH是5.0。Dgker能降解羽毛在以后的工业生产及处理废弃羽毛有极大的应用空间。 展开更多
关键词 蛋白 戈壁异常球菌 角蛋白酶
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产角蛋白酶毕赤酵母工程菌的构建及酶学性质 预览
3
作者 许佳惠 尹雅洁 +4 位作者 李欣悦 柳凯 梁运祥 赵述淼 胡远亮 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期71-76,共6页
将Brevibacillus brevis US575角蛋白酶基因kerUS进行密码子优化,并在毕赤酵母GS115中表达,以提高角蛋白酶产量。结果表明:优化的基因可在毕赤酵母中成功表达,重组角蛋白酶的分子质量约30 ku,最佳反应条件为pH 9.5和60℃,1 mmol/L的Mn^2... 将Brevibacillus brevis US575角蛋白酶基因kerUS进行密码子优化,并在毕赤酵母GS115中表达,以提高角蛋白酶产量。结果表明:优化的基因可在毕赤酵母中成功表达,重组角蛋白酶的分子质量约30 ku,最佳反应条件为pH 9.5和60℃,1 mmol/L的Mn^2+、Ba^2+对角蛋白酶活性有促进作用。此外,重组角蛋白酶易降解干酪素和β角蛋白(羽毛粉),酶促反应最大速度v max=0.019 g/(L·min),Km=4.64 g/L,比活力=440/mg。研究获得的产角蛋白酶重组毕赤酵母具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 角蛋白酶 毕赤酵母 密码子优化 重组 表达
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猪毛角蛋白降解菌的分离筛选及其降解特性研究 预览
4
作者 刘标 尹红梅 刘惠知 《农业工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第7期311-316,共6页
为了筛选能高效降解猪毛角蛋白的微生物,该研究利用猪毛角蛋白为唯一碳氮源的培养基从土壤中分离角蛋白降解菌,并对其菌种分类及降解角蛋白的特性进行了研究。通过驯化共筛选到6株能够降解猪毛角蛋白的菌株,经过7d发酵培养,菌株X-3对猪... 为了筛选能高效降解猪毛角蛋白的微生物,该研究利用猪毛角蛋白为唯一碳氮源的培养基从土壤中分离角蛋白降解菌,并对其菌种分类及降解角蛋白的特性进行了研究。通过驯化共筛选到6株能够降解猪毛角蛋白的菌株,经过7d发酵培养,菌株X-3对猪毛角蛋白的降解率达77.3%,降解效果最佳。结合菌株形态特征、生理生化特征及16SrDNA发育进化树分析,初步鉴定该菌株为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。菌株X-3是一株广谱的角蛋白降解菌,对猪毛、羊毛、鸡毛、鹅毛、鸭毛的降解率均大于60%。该菌株在角蛋白底物作用下可产生角蛋白酶和二硫键还原酶,且酶活与猪毛角蛋白降解率变化存在显著的正相关性,表明菌株X-3产生的角蛋白酶和二硫键还原酶在角蛋白降解中起到非常关键的作用。在降解过程中,产生了大量的可溶性蛋白,二硫键中的硫也随之转化为硫酸盐、亚硫酸盐和巯基化合物,其中硫酸盐是主要的转化形式。该菌株的分离筛选丰富了猪毛角蛋白降解菌的微生物资源库,在氨基酸饲料生产中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 含硫化合物 猪毛蛋白降解菌 凝结芽孢杆菌 角蛋白酶 二硫键还原
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角蛋白酶及其应用研究进展 预览
5
作者 蒋少龙 蔡俊 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第6期348-354,360共8页
角蛋白主要存在于动物的毛发、鳞片、羽毛、蹄、角等部位,由于其分子间富含二硫键以及疏水氨基酸,使得角蛋白难以被常规蛋白酶降解,而角蛋白酶可以在较为温和的条件下高效的降解角蛋白。目前角蛋白酶的基因工程研究已发展到基因改造的阶... 角蛋白主要存在于动物的毛发、鳞片、羽毛、蹄、角等部位,由于其分子间富含二硫键以及疏水氨基酸,使得角蛋白难以被常规蛋白酶降解,而角蛋白酶可以在较为温和的条件下高效的降解角蛋白。目前角蛋白酶的基因工程研究已发展到基因改造的阶段,并且角蛋白酶的应用领域也被逐渐拓展。文中综述了角蛋白酶的来源、分类、性质、基因工程研究、作用机制及应用,为今后的角蛋白酶研究提供参考。 展开更多
关键词 蛋白 角蛋白酶 理化性质 基因工程 应用
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一株产角蛋白酶菌株诱变筛选及发酵条件优化 预览
6
作者 刘文龙 王兴吉 +1 位作者 张志来 王克芬 《中国饲料添加剂》 2018年第10期17-21,共5页
对实验室保藏产角蛋白酶菌A2进行NTG(亚硝基胍)诱变,从中筛选出一株酶活提高144%的突变菌株A2-453,对该突变株的发酵条件进行优化。从产酶时间、添加外源碳、氮源来研究其酶活变化,经优化后得到最佳的发酵条件是:发酵60h时酶活... 对实验室保藏产角蛋白酶菌A2进行NTG(亚硝基胍)诱变,从中筛选出一株酶活提高144%的突变菌株A2-453,对该突变株的发酵条件进行优化。从产酶时间、添加外源碳、氮源来研究其酶活变化,经优化后得到最佳的发酵条件是:发酵60h时酶活单位最高:最佳外源碳源是葡萄糖,最佳外源氮源是豆饼粉。经最优条件进行发酵,酶活单位提高42%。 展开更多
关键词 角蛋白酶 亚硝基胍 诱变 碳源 氮源
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使用一种新底物优化角蛋白酶活性检测方法的研究 预览
7
作者 张雅洁 徐丽 +3 位作者 程瑛 邓晓旭 陈雪姣 周樱 《饲料工业》 北大核心 2018年第12期54-58,共5页
研究旨在优化角蛋白酶活性测定方法,使其更可靠和简便。选用液体角蛋白作为底物,以碱性蛋白酶检测方法作为参考,分别从底物浓度、反应时间、吸光值范围和底物专一性四个方面设计了四组试验,来研究此底物的适用性和可行性,同时优化... 研究旨在优化角蛋白酶活性测定方法,使其更可靠和简便。选用液体角蛋白作为底物,以碱性蛋白酶检测方法作为参考,分别从底物浓度、反应时间、吸光值范围和底物专一性四个方面设计了四组试验,来研究此底物的适用性和可行性,同时优化检测方法。研究结果表明,当底物浓度为l%,反应时间10min,净吸光值范围控制在0.2~0.45时测定出的角蛋白酶活性结果较为稳定,方法的重现性也较好。此底物较适合用于角蛋白酶活性的检测,优化后的方法较传统方法简便可靠,为工业生产中角蛋白酶活性的研究提供一定的帮助,改进生产技术。 展开更多
关键词 角蛋白酶 活性检测 改进方法
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基于基因组改组技术的角蛋白酶高产菌株选育研究 预览 被引量:1
8
作者 舒伟学 马怡茗 +5 位作者 李晓霞 张晋龙 柯欣 颜霞 颜华 贾良辉 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第4期137-146,共10页
【目的】筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物,为提高废弃羽毛中角蛋白资源的利用奠定基础。【方法】采用梯度稀释法,以羽毛作为惟一碳氮源对土样中的产角蛋白酶菌株进行筛选,筛选可高效降解羽毛的细菌。通过菌株的形态、生理生化特性以... 【目的】筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物,为提高废弃羽毛中角蛋白资源的利用奠定基础。【方法】采用梯度稀释法,以羽毛作为惟一碳氮源对土样中的产角蛋白酶菌株进行筛选,筛选可高效降解羽毛的细菌。通过菌株的形态、生理生化特性以及16S rDNA序列分析,对菌株进行分类鉴定,并探讨其最适发酵条件。利用硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)对目的菌株进行诱变,确定最适诱变条件,并进行原生质体融合,通过基因组改组选育角蛋白酶高产菌株。【结果】分离筛选到1株具有较强羽毛降解能力的菌株ZJT01,该菌落圆形凸出,革兰氏染色呈阳性,酪素水解、硝酸盐利用、柠檬酸利用等生理生化试验均呈阳性。结合菌株16S rDNA同源序列比对分析,初步鉴定其为节杆菌(Arthrobactersp.)。菌株ZJT01产角蛋白酶的最适发酵温度和时间分别为32℃和72h。其DES最适用量为9μL/mL,诱变时间为20min;NTG的最适合质量浓度是0.6mg/mL,处理时间为15min。原生质体制备的最佳条件为:溶菌酶终质量浓度10 mg/mL,酶解温度37℃,酶解0.5h。经过硫酸二乙酯(DES)和亚硝基胍(NTG)分别诱变处理,获得角蛋白酶活性提高的菌株DES-2和NTG-2;对其进行3轮基因组改组后,筛选到2株角蛋白酶活性比亲本菌株ZJT01提高了5.48倍的重组菌株,且其产酶活性可稳定遗传。【结论】通过基因组改组技术获得了2株角蛋白酶活性大幅提高的菌株F3-5和F3-6,这2株菌对羽毛的降解效果较亲本菌株ZJT01明显提高,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 角蛋白酶 节杆菌属 诱变 基因组改组
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酶解豆粕工艺参数的探索和优化 预览
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作者 于海涛 周智旋 +2 位作者 张波 孙得发 陆文清 《中国畜牧杂志》 北大核心 2018年第9期77-83,共7页
本试验旨在研究酶解参数(料水比、温度、酶添加量和处理时间)对角蛋白酶降解豆粕β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白效果的影响,并以小麦麸为酶解豆粕的辅料探究酶解豆粕干燥速率和干燥后物料结块程度。结果表明:在本试验条件下,25℃、添加6k... 本试验旨在研究酶解参数(料水比、温度、酶添加量和处理时间)对角蛋白酶降解豆粕β-伴大豆球蛋白和大豆球蛋白效果的影响,并以小麦麸为酶解豆粕的辅料探究酶解豆粕干燥速率和干燥后物料结块程度。结果表明:在本试验条件下,25℃、添加6kg/t角蛋白酶、料水比为5:4、酶解24h,豆粕中约60%的β-伴大豆球蛋白和37%的大豆球蛋白被降解;65℃恒温干燥后,与纯酶解豆粕相比,添加30%小麦麸的酶解豆粕的干燥速率变化不大,但是干燥后物料结块现象不明显;纯豆粕酶解干燥后,6目大颗粒占总物料含量由0增加至7%,6~18目颗粒占总物料含量由20%增加至40%;添加30%小麦麸的豆粕酶解干燥后,6目大颗粒含量变化不明显,6~18目颗粒含量由25%增加至30%。综上可知,在本试验条件下,酶解豆粕中添加30%小麦麸能够有效降低豆粕中的抗营养因子以及减少在高水分条件下酶解豆粕结块。 展开更多
关键词 豆粕 角蛋白酶 Β-伴大豆球蛋白 大豆球蛋白 小麦麸 颗粒
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角蛋白酶研究进展及其在饲料工业中的应用 预览 被引量:1
10
作者 侯玉煌 丁宏标 《中国畜牧杂志》 北大核心 2018年第1期13-18,共6页
角蛋白酶主要由微生物产生,可以降解角蛋白,可以用于畜禽羽毛、被毛的分解。本文主要介绍角蛋白酶的来源、基本性质、检测方法和角蛋白酶在饲料行业中的应用以及在动物生产试验中的效价。
关键词 角蛋白酶 来源 性质 应用
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角蛋白酶工程菌株产酶条件的优化研究 预览
11
作者 张秀江 孙小玉 +4 位作者 谷立峰 胡虹 王秋菊 刘莹莹 杨灵杰 《河南科学》 2018年第12期1935-1940,共6页
通过对菌株Bacillus subtilisYKM05发酵产酶条件的优化研究,使其产角蛋白酶活力显著提升.最适产酶诱导物为羽毛粉,最适碳源为玉米粉,最适氮源为豆粕粉,Ca2+、Fe3+对产酶有促进效果,Mn2+、Zn2+、Cu2+对产酶有抑制效果.最佳的培养基组成为... 通过对菌株Bacillus subtilisYKM05发酵产酶条件的优化研究,使其产角蛋白酶活力显著提升.最适产酶诱导物为羽毛粉,最适碳源为玉米粉,最适氮源为豆粕粉,Ca2+、Fe3+对产酶有促进效果,Mn2+、Zn2+、Cu2+对产酶有抑制效果.最佳的培养基组成为:羽毛粉2.0%、玉米粉2.0%、豆粕粉2.0%、磷酸二氢钠0.3%、磷酸氢二钠0.5%、氯化钙0.6%.菌株优化产酶条件为:发酵温度36℃、培养基初始pH值为9、种子接种量为3%、1000mL三角瓶最佳装液量为300mL、发酵时间72h. 展开更多
关键词 角蛋白酶 菌株 发酵 活力
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嗜热地衣芽胞杆菌Y6角蛋白酶的异源表达与表征
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作者 刘建新 姚大伟 +1 位作者 刘艳海 杨德吉 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期302-310,共9页
嗜热角蛋白酶可在较高的温度下降解角蛋白,具有良好的热稳定性。为了克隆嗜热地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)Y6角蛋白酶基因,研究重组角蛋白酶酶学特性,本实验根据角蛋白酶基因设计引物,克隆了一个含完整开放性阅读框的1 140 b... 嗜热角蛋白酶可在较高的温度下降解角蛋白,具有良好的热稳定性。为了克隆嗜热地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)Y6角蛋白酶基因,研究重组角蛋白酶酶学特性,本实验根据角蛋白酶基因设计引物,克隆了一个含完整开放性阅读框的1 140 bp基因片段(Gen Bank No.MF327392),将该片段插入到表达载体p ET-32a,转化至大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),成功诱导表达出重组角蛋白酶,经Ni-亲和柱纯化后对酶学特性进行测定。结果显示Y6菌株的角蛋白酶前体有1个29个氨基酸残基的信号肽,成熟蛋白的理论相对分子量为27.27 k D,等电点为6.57,属于疏水性稳定蛋白质。以酪蛋白为底物,测得重组角蛋白酶最适反应温度为70℃,最适反应pH为8.5,V_(max)为0.149 mmol/(L·min),K_m为0.029 mmol/L,K_(cat)为20.1 S(-1)。乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)、苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride,PMSF)、Mn(2+)、Fe(3+)对其酶活性有一定的抑制作用,但异丙醇、甘油、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)等有机溶剂对其活性没有影响。该嗜热角蛋白酶具有较大的应用潜力,未来可应用于某些工业生产中。 展开更多
关键词 地衣芽胞杆菌 角蛋白酶 克隆 表达
高温放线菌YT06降解羽毛的研究 预览
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作者 王琳 钱玉婷 +2 位作者 周影 魏启舜 黄红英 《生物加工过程》 CAS 2018年第4期49-56,共8页
前期研究筛选获得1株能在60℃、48 h内降解完整羽毛的菌株YT06,通过形态学和16S r DNA分析,该菌株属于高温放线菌属(Thermoactinomyces sp.)。利用单因素和正交试验优化YT06的产高温角蛋白酶条件,结果发现:最适培养条件为蔗糖15 g/L... 前期研究筛选获得1株能在60℃、48 h内降解完整羽毛的菌株YT06,通过形态学和16S r DNA分析,该菌株属于高温放线菌属(Thermoactinomyces sp.)。利用单因素和正交试验优化YT06的产高温角蛋白酶条件,结果发现:最适培养条件为蔗糖15 g/L、Na NO38 g/L、羽毛5 g/L,初始p H 9,培养温度60℃,转速180 r/min,摇床培养48 h后,角蛋白酶酶活为43.5 U/mL。当羽毛添加量为10 g/L时,降解产物中游离氨基酸含量高达3.328 mg/mL,其中,近50%的游离氨基酸为甘氨酸、缬氨酸和天冬氨酸。应用扫描电镜观察YT06对羽毛的降解过程,发现菌丝能穿透羽毛表面沿纵向生长,破坏羽毛角蛋白紧密的表面结构。红外光谱显示羽毛角蛋白的C—S键在降解之后消失,该结果能对高温放线菌降解羽毛角蛋白机制的研究提供依据。 展开更多
关键词 高温放线菌 羽毛降解 角蛋白酶 优化 废弃物降解
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枯草芽胞杆菌FJ-3-16产角蛋白酶条件优化及在生猪脱毛中的应用
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作者 朱耀霞 马德源 +7 位作者 毕玉平 彭振英 于金慧 陈高 张燕 王留明 岳寿松 边斐 《农业生物技术学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期346-356,共11页
枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)FJ-3-16是一株角蛋白酶高产菌株,在畜禽废弃物降解和生物脱毛方面有潜在应用价值。为提高菌株B.subtilis FJ-3-16胞外角蛋白酶产量,本研究综合利用单因子实验、Plackett-Burman(PB)设计和中心组合... 枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)FJ-3-16是一株角蛋白酶高产菌株,在畜禽废弃物降解和生物脱毛方面有潜在应用价值。为提高菌株B.subtilis FJ-3-16胞外角蛋白酶产量,本研究综合利用单因子实验、Plackett-Burman(PB)设计和中心组合设计(Central composite design,CCD)优化了B.subtilis FJ-3-16的摇瓶产酶发酵条件,优化后的培养基配方为玉米粉1.41%、豆粉3.62%、酪素2%、CaC_l20.16%、K_2HPO_4 0.3%、KH_2PO_4 0.1%、pH 8.0,温度37℃,转速250 r/min,培养时间48 h,胞外角蛋白酶酶活由原有培养基的73.82U/mL提高至166.08 U/mL。且建立了利用50 L发酵罐生产角蛋白酶的发酵工艺,酶活在摇瓶发酵的基础上进一步提高,达207.6 U/mL,同时产酶时间缩短至18 h。同时利用菌株发酵液对巴马香猪(Sus scrofa)的猪蹄、猪头皮张及猪蹄整蹄进行脱毛,效果显著,表明B.subtilis FJ-3-16在巴马香猪为代表的难脱毛生猪的脱毛应用中具有极好的应用前景。本研究为实现角蛋白酶的工业化应用提供了基础资料。 展开更多
关键词 角蛋白酶 发酵优化 响应面法 法脱毛
特比萘芬联合角蛋白酶凝胶治疗皮肤癣菌感染的疗效观察 预览
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作者 陆延娜 徐天华 +2 位作者 熊林 万静 周晓凤 《中国中西医结合皮肤性病学杂志》 CAS 2018年第6期509-511,共3页
目的比较特比萘芬凝胶联合角蛋白酶治疗皮肤癣菌病的疗效。方法选择2014年1月—2017年12月来我院就诊的120例体癣患者,按治疗方法分为对照组、观察组,每组60例。对照组于患处涂自制1%特比萘芬的特比萘芬凝胶Ⅰ,观察组于患处涂含1%角蛋... 目的比较特比萘芬凝胶联合角蛋白酶治疗皮肤癣菌病的疗效。方法选择2014年1月—2017年12月来我院就诊的120例体癣患者,按治疗方法分为对照组、观察组,每组60例。对照组于患处涂自制1%特比萘芬的特比萘芬凝胶Ⅰ,观察组于患处涂含1%角蛋白酶和1%特比萘芬的自制特比萘芬凝胶Ⅱ。记录并比较2组组治疗期间偶数日的病变记分;治疗期第14天和28天,比较2组的真菌清除率和治愈率。结果治疗期第10天直至结束,对照组病变记分显著高于对照组(P<0.05)。治疗期第14天和28天,对照组真菌清除率(37.7%和73.6%)显著低于(P<0.05)观察组(63.6%和92.7%)。治疗期第14天和28天,对照组治愈率(9.4%和56.6%)显著低于(P<0.05)观察组(27.3%和83.6%)。结论特比萘芬联合角蛋白酶对皮肤癣菌感染所致体癣治疗效果优于特比萘芬单独应用,值得临床推广。 展开更多
关键词 特比萘芬 角蛋白酶 皮肤癣菌病 体癣
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角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense对废弃羽毛的发酵特性研究 预览
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作者 羊希 李霞 +2 位作者 余康 廖学品 石碧 《中国酿造》 北大核心 2018年第8期101-106,共6页
采用角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense厌氧发酵废弃羽毛,以全培养基、无机盐培养基和纯水培养基分别进行发酵,测定了发酵过程中角蛋白酶的酶活、羽毛的降解率、可溶性蛋白和游离氨基酸的含量。研究发现,羽轴比羽枝更难被降解... 采用角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense厌氧发酵废弃羽毛,以全培养基、无机盐培养基和纯水培养基分别进行发酵,测定了发酵过程中角蛋白酶的酶活、羽毛的降解率、可溶性蛋白和游离氨基酸的含量。研究发现,羽轴比羽枝更难被降解,但羽轴粉碎后,能达到同样的降解效果。采用无机盐培养基发酵时,主要降解产物是可溶性蛋白,含量可达0.93 mg/mL;而采用全培养基发酵时,主要发酵产物是角蛋白酶和游离氨基酸,当羽毛底物量提高到100 g/L,角蛋白酶的酶活高达11 179 U/mL。角蛋白降解菌K.paraultunense能快速高效地降解高浓度的废弃羽毛,可生产大量的可溶性蛋白和高活力的角蛋白酶。 展开更多
关键词 废弃羽毛 发酵 培养基 角蛋白酶 可溶性蛋白 游离氨基酸
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产角蛋白酶菌株的筛选及发酵条件优化
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作者 蒋彪 王常高 +2 位作者 杜馨 林建国 蔡俊 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2017年第12期182-185,共4页
采用以羽毛为唯一碳氮源的无机盐培养基,通过考察HC值(水解圈直径与菌落直径的比值)、羽毛的降解程度,筛选得到10株产角蛋白酶的菌株,经测定10株菌株摇瓶发酵液的蛋白酶活力,确定了一株产酶能力较强的菌株CJPE209,并对菌株进行鉴定,菌... 采用以羽毛为唯一碳氮源的无机盐培养基,通过考察HC值(水解圈直径与菌落直径的比值)、羽毛的降解程度,筛选得到10株产角蛋白酶的菌株,经测定10株菌株摇瓶发酵液的蛋白酶活力,确定了一株产酶能力较强的菌株CJPE209,并对菌株进行鉴定,菌株CJPE209被鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.),其发酵液酶活为267 U/mL。通过单因素实验,确定了菌株CJPE209产角蛋白酶的最适发酵条件:发酵周期48 h,培养基装液量25 mL/250 mL,发酵温度37℃,初始pH7,摇床转速220 r/min,发酵液酶活为337.6 U/mL,是优化前的1.26倍。 展开更多
关键词 角蛋白酶 角蛋白酶菌株 筛选 鉴定 条件
羽毛降解菌的分离鉴定及角蛋白酶基因克隆 预览
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作者 陈晓堂 刘超 +4 位作者 侯衍英 张显忠 李艳玲 郭东会 史仁玖 《生物技术进展》 2017年第1期58-64,J0003共8页
为了从废弃羽毛堆积土壤中分离筛选具有高效降解羽毛角蛋白的细菌,采用形态学观察、生化测定和16S rDNA序列分析鉴定菌株,测定蛋白水解研究酶活性及酶特性,鉴定该菌为假单胞菌属的嗜麦芽窄食单胞菌,降解羽毛的最适发酵培养温度为30℃,最... 为了从废弃羽毛堆积土壤中分离筛选具有高效降解羽毛角蛋白的细菌,采用形态学观察、生化测定和16S rDNA序列分析鉴定菌株,测定蛋白水解研究酶活性及酶特性,鉴定该菌为假单胞菌属的嗜麦芽窄食单胞菌,降解羽毛的最适发酵培养温度为30℃,最适pH 7.0,最适接种量1%,最适发酵时间48 h,羽毛含量在0.25~0.5 g/50m L时产酶酶活性最高且较稳定,适合降解羽毛和头发。嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶的作用温度和pH宽泛、稳定性好,具有良好的开发价值和应用前景。 展开更多
关键词 嗜麦芽窄食单胞菌 角蛋白酶 羽毛降解 基因克隆
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酶菌联用降解羽毛工艺优化及降解产物对黑水虻幼虫生长性能的影响 预览 被引量:1
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作者 Mazu Sabirath Shanti 林俊宏 +5 位作者 朱剑锋 朱辉 李楚君 庞旭 董璐 胡文锋 《饲料工业》 北大核心 2017年第22期41-46,共6页
试验采用角蛋白酶和蜡样芽孢杆菌联用处理鸡羽毛,以羽毛降解率为指标,研究了不同pH值、酶添加量、细菌接种量、羽毛添加量和发酵时间对羽毛降解率的影响,优化了降解羽毛的工艺条件。之后分别使用三种降解产物和猪粪作为饲料,研究了... 试验采用角蛋白酶和蜡样芽孢杆菌联用处理鸡羽毛,以羽毛降解率为指标,研究了不同pH值、酶添加量、细菌接种量、羽毛添加量和发酵时间对羽毛降解率的影响,优化了降解羽毛的工艺条件。之后分别使用三种降解产物和猪粪作为饲料,研究了羽毛降解产物对黑水虻幼虫生长性能的影响,包括平均增重、料重比和存活率等。结果表明,适宜的酶菌联用降解羽毛工艺条件为:pH值9.0、酶添加量2000u/g、蜡样芽孢杆菌接种量3.0%(v/v)、羽毛添加量2.5%,发酵5d。使用发酵上清液干物质作为饲料养殖黑水虻幼虫,能有效提高黑水虻幼虫平均增重、优化料重比、提高存活率。 展开更多
关键词 角蛋白酶 蜡样芽孢杆菌 羽毛 黑水虻幼虫
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一株产角蛋白酶的铜绿假单胞菌的分离鉴定 预览
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作者 黄妙容 钟楚红 +3 位作者 任广彩 刘传高 叶俊贤 陈瑞爱 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第3期920-927,共8页
本研究从鸡场长期堆放羽毛的土壤中筛选到一株降解羽毛能力强的菌株。该菌株在牛奶平板上培养24h后产生透明降解圈,形状不规则,表面粗糙,边缘模糊,产生绿色荧光色素;革兰氏染色阴性,短杆状,无芽孢,有鞭毛,无荚膜。生化试验显示,该分离... 本研究从鸡场长期堆放羽毛的土壤中筛选到一株降解羽毛能力强的菌株。该菌株在牛奶平板上培养24h后产生透明降解圈,形状不规则,表面粗糙,边缘模糊,产生绿色荧光色素;革兰氏染色阴性,短杆状,无芽孢,有鞭毛,无荚膜。生化试验显示,该分离株能够水解牛奶、明胶,具有角蛋白酶活性,能利用柠檬酸盐,硝酸还原反应阳性。系统进化树分析显示,分离株与铜绿假单胞菌模式菌株(GenBank登录号:BAMA01000316)亲缘关系最近,综合以上结果,最终确定分离株为铜绿假单胞菌,并正式命名为Pesudomonas aeruginosa B1-2。将该分离株在以1%羽毛为唯一碳氮源的基础培养基中发酵培养,48h后角蛋白酶活性最高达到60.3U/mL,对羽毛降解率为85.7%。本研究中分离获得的Pesudomonas aeruginosa B1-2可用于畜禽废弃物的处理。 展开更多
关键词 分离鉴定 生化试验 角蛋白酶 铜绿假单胞菌
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