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干细胞源性星形胶质细胞分化中的生长状态研究 预览
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作者 欧亚 元小冬 张丽丽 《中国实验诊断学》 2019年第2期320-323,共4页
中枢神经系统退行性疾病已经成为我国人口与健康领域中的重大科学与社会问题。目前,神经退行性疾病的发病机制尚不完全清楚,也缺乏有效的治疗方法,而干细胞或神经元和神经胶质细胞等目标细胞移植被认为是最有前途的治疗方法之一[1,2]。... 中枢神经系统退行性疾病已经成为我国人口与健康领域中的重大科学与社会问题。目前,神经退行性疾病的发病机制尚不完全清楚,也缺乏有效的治疗方法,而干细胞或神经元和神经胶质细胞等目标细胞移植被认为是最有前途的治疗方法之一[1,2]。星形胶质细胞是胶质细胞中数量最多、具有重要功能的细胞,可以通过分泌多种神经因子来实现对神经元的营养修复作用。星形胶质细胞分泌的神经营养因子等活性物质在脑内广泛分布. 展开更多
关键词 星形胶质 诱导分化 分化时间 细胞源性 细胞分化 生长状态 细胞存活率
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人脐带间充质干细胞分离鉴定及向角质形成细胞的诱导分化
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作者 魏奥 张东 +4 位作者 刘乐 刘春霞 曹俊伟 孟凡华 张焱如 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第4期695-701,共7页
该研究从人脐带华通胶中获得了人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs),通过基因鉴定和分化能力检测其纯度,建立hUCMSCs系。检测结果表明,获得的hUCMSCs表达转录因子SOX2、间充质干细胞表面标志物基... 该研究从人脐带华通胶中获得了人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUCMSCs),通过基因鉴定和分化能力检测其纯度,建立hUCMSCs系。检测结果表明,获得的hUCMSCs表达转录因子SOX2、间充质干细胞表面标志物基因CD29、CD90和CD105,不表达造血系细胞表面标志物基因CD34、CD45及人白细胞抗原基因HLA-DR。hUCMSCs可以向神经细胞和成骨细胞分化,证明其多向分化潜能。P3代hUCMSCs向角质细胞分化后,免疫荧光染色鉴定结果为阳性,实时荧光定量PCR检测表达角蛋白CK19基因,随着诱导分化时间的增加而升高。该实验建立了hUCMSCs系和角质形成细胞的诱导分化体系,为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 诱导分化 角质形成细胞 多向分化潜能
干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨分化能力 预览 被引量:1
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作者 陈钦桂 曾勉 +2 位作者 何婉媚 张莉珊 郑海崇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第5期673-679,共7页
背景:foxM1基因被认为参与了干细胞分化命运的调控,但其对间充质干细胞成骨分化的影响尚未见报道,关于foxM1基因的研究也主要集中于肿瘤领域。目的:探索干扰foxM1基因表达水平对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法:全骨髓贴壁法... 背景:foxM1基因被认为参与了干细胞分化命运的调控,但其对间充质干细胞成骨分化的影响尚未见报道,关于foxM1基因的研究也主要集中于肿瘤领域。目的:探索干扰foxM1基因表达水平对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。方法:全骨髓贴壁法培养SD大鼠(中山大学实验动物中心提供)骨髓间充质干细胞,构建含嘌呤霉素抗性基因的foxM1shRNA重组慢病毒载体并转染大鼠骨髓间充质干细胞,经嘌呤霉素筛选建立foxM1稳定敲低细胞株,另设置空病毒载体组以及未转染组。使用骨髓间充质干细胞成骨诱导分化培养基诱导培养并行茜素红染色检测其成骨分化能力,使用定量RT-PCR检测成骨相关基因的表达水平,同时提取胞核蛋白,Westernblot检测β-catenin蛋白表达水平。结果与结论:①与空病毒载体组以及未转染组比较,foxM1敲低的大鼠骨髓间充质干细胞经成骨诱导分化后形成的骨结节数量明显增多,成骨相关基因col1a1和runx2表达水平均显著升高,但胞核β-catenin蛋白水平无明显改变;②干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨能力。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 成骨 诱导分化 慢病毒载体 foxM1基因 基因干扰 β-catenin 国家自然科学基金 叉头转录因子类 RNA干扰 骨髓 间质干细胞 细胞分化 成骨细胞 组织工程
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脑脊液促进间充质干细胞神经元样分化的特点 预览
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作者 任超 冀永强 管丽娜 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第17期2770-2775,共6页
背景:目前研究表明对内源神经干细胞进行调控,或进行外源神经干细胞移植,是治疗痴呆等神经系统疾病最新和最有希望的方法。其中外源其他组织来源干细胞向神经干细胞定向分化的成功,为神经干细胞的来源增加了新途径。近年研究表明脑脊液... 背景:目前研究表明对内源神经干细胞进行调控,或进行外源神经干细胞移植,是治疗痴呆等神经系统疾病最新和最有希望的方法。其中外源其他组织来源干细胞向神经干细胞定向分化的成功,为神经干细胞的来源增加了新途径。近年研究表明脑脊液既可营养神经细胞,又可成为一种有效、适宜的诱导剂,为神经干细胞的获得增加新的途径。目的:文章将对国内外脑脊液对干细胞影响的相关研究进行综述,以期为将来神经干细胞临床应用提供帮助。方法:以'Cerebrospinal fluid,Stem cells,Induced differentiation,Neural stem cells,Stem cell transplantation therapy'为英文关键词,通过计算机检索PubMed数据库与Embase数据库;以'脑脊液、干细胞、诱导分化、增殖、分化、神经干细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞、银杏叶提取物、干细胞移植治疗、神经变性疾病'为中文关键词,计算机检索CNKI数据库,万方数据库,维普数据库等科技期刊数据库;检索时间为1998-12-10至2018-12-10。对脑脊液对间充质干细胞、胚胎干细胞及神经干细胞等的影响进行总结分析,为将来神经干细胞临床应用提供帮助。结果与结论:①'脑脊液-干细胞'相互作用是治疗神经系统疾病的希望;②脑脊液也能促进间充质干细胞分化成为神经元样细胞;③脑脊液能诱导人胚胎源干细胞分化为神经样细胞,但所得不同类型细胞的比例不同;④脑脊液能诱导内源性神经干细胞的增殖分化。 展开更多
关键词 脑脊液 干细胞 诱导分化 增殖 分化 神经干细胞 间充质干细胞 胚胎干细胞 银杏叶提取物 干细胞移植治疗 神经变性疾病
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胰腺组织裂解液诱导骨髓间充质干细胞分化为胰岛样结构的鉴定 预览
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作者 刘红静 王慧丰 +2 位作者 韦雅淑 赵文婧 陈维平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第13期2088-2093,共6页
背景:目前,体外已成功将骨髓间充质干细胞定向诱导分化为能够分泌胰岛素的胰岛样细胞团,但是对细胞的形态变化规律、胰岛样细胞团中内分泌细胞的类型及其相互关系的研究报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞定向分化为胰岛样结构过程中... 背景:目前,体外已成功将骨髓间充质干细胞定向诱导分化为能够分泌胰岛素的胰岛样细胞团,但是对细胞的形态变化规律、胰岛样细胞团中内分泌细胞的类型及其相互关系的研究报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞定向分化为胰岛样结构过程中细胞的形态变化、内分泌细胞的组成及分布规律。方法:取生长良好的第3代骨髓间充质干细胞,扩增培养至细胞集落汇合占据瓶底面积80%,加入胰腺组织裂解液连续诱导培养。以双硫腙染色方法对骨髓间充质干细胞定向分化形成的细胞团进行初步筛选,Mallory染色鉴别胰岛内分泌细胞的类型及其分布;采用免疫荧光细胞化学染色法检测胰岛内分泌细胞中胰岛素、C肽、胰高血糖素和生长抑素蛋白表达。结果与结论:①双硫腙染色显示,随着诱导时间延长,阳性细胞数量逐渐增多;②Mallory染色显示,胰岛样细胞团内α样细胞位于周边,β样细胞分布在中央及周边,成纤维样细胞分布在周围;③免疫荧光染色显示,胰岛样细胞团内有胰岛素、C肽、胰高血糖素和生长抑素阳性细胞;④结果表明,在特定的微环境条件下,骨髓间充质干细胞能分化为胰岛样结构,内含α、β、δ样细胞,周围有类成纤维细胞包绕。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 胰腺组织裂解液 诱导分化 胰岛样结构 内分泌细胞 广西自然科学基金 骨髓 间质干细胞 细胞分化 胰岛 组织工程
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人脐带间充质干细胞向神经元样细胞诱导分化:两种方法的比较 预览
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作者 王武 齐保军 +1 位作者 武忠炎 崔泳 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第1期41-46,共6页
背景:干细胞因其可向神经元样细胞诱导分化而在临床神经损伤疾病治疗中具有广阔的前景,但干细胞向神经元样细胞诱导分化的效率不高,为此作者对传统的诱导方法进行了改良。目的:探讨2种不同方法诱导人脐带间充质干细胞向神经元样细胞分... 背景:干细胞因其可向神经元样细胞诱导分化而在临床神经损伤疾病治疗中具有广阔的前景,但干细胞向神经元样细胞诱导分化的效率不高,为此作者对传统的诱导方法进行了改良。目的:探讨2种不同方法诱导人脐带间充质干细胞向神经元样细胞分化的潜能及2种诱导方法的优劣。方法:采用组织块法分离培养人脐带间充质干细胞,显微镜下观察其形态并利用流式细胞仪进行干细胞鉴定,在神经营养因子诱导方案下,采用相同的诱导剂(2%B27、20μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20μg/L表皮生长因子),2种不同的诱导方法将其向神经元样细胞诱导分化(传统方法:将B27、碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子及青链霉素合剂加入DMEM/F12培养基中进行诱导,3 d后加入全反式维甲酸,共培养10 d;改良方法:将B27、碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、青链霉素合剂及胎牛血清加入DMEM/F12培养基中进行诱导,6 d后用胰酶消化后重新接种于共聚焦小皿内,次日去除B27和胎牛血清,并加入全反式维甲酸,共培养14 d)。应用免疫荧光染色对诱导分化后细胞表面神经标志物——神经丝蛋白(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行检测,比较2种方法诱导后细胞表面神经标志物的阳性表达率。结果与结论:①成功分离出人脐带间充质干细胞,经流式细胞仪鉴定其高表达CD29、CD105,低表达CD34、CD45,符合干细胞特性;②2种方法诱导后,镜下观察到的细胞均可呈现神经细胞样改变,免疫荧光检测提示2种方法诱导后细胞中神经丝蛋白与胶质纤维酸性蛋白均呈阳性表达;③传统方法组神经丝蛋白与胶质纤维酸性蛋白的阳性率分别为18.73%和18.01%,改良方法组二者的阳性率分别为27.48%和29.24%,两组比较差异有显著性意义(P<0.05);④结果表明,2种诱导方法均可将人脐带间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞;但在诱� 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 诱导分化 神经细胞 神经丝蛋白 胶质纤维酸性蛋白 干细胞 脐带 间质干细胞 细胞分化 神经元 组织工程
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一种中药复方制剂对急性髓系白血病细胞株MV4-11增殖和凋亡的影响
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作者 贾梅艳 申振铭 胡振波 《潍坊医学院学报》 2019年第3期176-178,F0003共4页
目的了解一种中药复方制剂对急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11增殖和凋亡的影响。方法用该中药复方制剂处理MV4-11细胞株,应用瑞氏染色方法观察细胞形态的变化,Cell Counting Kit-8法检测中药复方制剂对MV4-11细胞增殖的抑制情况,Annexi... 目的了解一种中药复方制剂对急性髓系白血病(AML)细胞株MV4-11增殖和凋亡的影响。方法用该中药复方制剂处理MV4-11细胞株,应用瑞氏染色方法观察细胞形态的变化,Cell Counting Kit-8法检测中药复方制剂对MV4-11细胞增殖的抑制情况,Annexin V法观察程序性坏死抑制剂与凋亡抑制剂处理MV4-11细胞株后其凋亡情况。结果该中药复方制剂对MV4-11细胞株的增殖起抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖关系,该中药复方制剂可诱导MV4-11细胞株的分化和凋亡。结论该中药复方制剂可能主要通过诱导白血病细胞株MV4-11分化和诱导凋亡的作用抑制白血病细胞的增殖。 展开更多
关键词 中药复方制剂 MV4-11细胞系 细胞增殖 诱导分化 诱导凋亡
间介中胚层样细胞在肾脏再生中的应用 预览
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作者 张建烨 管勇 +1 位作者 孔峰 赵升田 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期291-299,共9页
目的体外诱导脂肪干细胞分化为间介中胚层样细胞,对肾脏脱细胞支架进行再细胞化,经共培养构建有部分肾脏结构的组织工程肾脏。方法手术获取Wistar大鼠腹股沟脂肪垫,从中分离、培养原代脂肪干细胞后对其进行干细胞特性鉴定。经过在不同... 目的体外诱导脂肪干细胞分化为间介中胚层样细胞,对肾脏脱细胞支架进行再细胞化,经共培养构建有部分肾脏结构的组织工程肾脏。方法手术获取Wistar大鼠腹股沟脂肪垫,从中分离、培养原代脂肪干细胞后对其进行干细胞特性鉴定。经过在不同阶段添加糖原合成酶激酶3抑制剂(CHIR99021)和成纤维生长因子9(FGF9),诱导脂肪干细胞分化为间介中胚层样细胞,并于诱导7 d后进行间介中胚层相关蛋白鉴定。将诱导成功的间介中胚层样细胞结合制备好的肾脏脱细胞支架进行共培养,10 d后获取再细胞化的组织工程肾脏,并对其进行肾脏分化的鉴定。结果获取的脂肪干细胞具有成骨成脂及成软骨分化的能力,能表达脂肪干细胞表面标志物。体外诱导7 d后得到的间介中胚层样细胞经过免疫荧光鉴定可以观察到锌指蛋白转录因子和配对盒基因- 2的阳性表达,Western blot验证可得到同样的阳性结果。结合肾脏脱细胞支架后培养10 d,通过免疫荧光鉴定可以观察到Wilms肿瘤基因1、 GATA连接蛋白- 3和E-钙黏素的阳性表达。结论脂肪干细胞可被诱导分化为间介中胚层样细胞,诱导后的间介中胚层样细胞结合肾脏脱细胞支架可以观察到肾系分化的现象。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 间介中胚层样细胞 脱细胞支架 诱导分化
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SD乳鼠骨髓间充质干细胞体外改良筛选法培养及鉴定 预览
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作者 李楠 翁军权 +1 位作者 谢华德 孙海鹏 《标记免疫分析与临床》 CAS 2019年第5期851-857,共7页
目的评估应用SD乳鼠骨髓的改良筛选法分离培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)的可行性及优势,探讨一种简单高效的BMSCs体外分离、纯化及扩增的方法。方法选择7d龄SD大鼠6只,无菌解剖大鼠双侧股骨,于完全培... 目的评估应用SD乳鼠骨髓的改良筛选法分离培养骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSCs)的可行性及优势,探讨一种简单高效的BMSCs体外分离、纯化及扩增的方法。方法选择7d龄SD大鼠6只,无菌解剖大鼠双侧股骨,于完全培养基浸泡、剪碎,反复吹打暴露骨髓腔,高速震荡3min后取上清液接种于培养瓶中,24h后半量换液,48h后全量换液,以后隔天换液。应用CCK-8法测定生长曲线;成骨分化诱导3周后进行茜素红染色,成脂分化诱导4周后进行油红“O”染色;应用流式细胞仪鉴定细胞表面抗原。结果原代培养的BMSCs细胞生长曲线呈“S”形,接种1d后有少量细胞贴壁,第3~6天为对数增殖期,第7天进入平台期。BMSCs经成骨诱导3周后茜素红染色细胞外基质中可见深红色团块状矿化结节;经成脂肪诱导4周后胞浆内充满“串珠状”红色脂滴。流式细胞仪检测BMSCs表面抗原CD29、CD44、CD90阳性,CD34和CD45阴性。结论应用7d龄SD乳鼠的改良全骨髓自然贴壁筛选法可以高效分离纯化出BMSCs。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞分离 细胞培养 SD乳鼠 诱导分化
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新西兰兔肌内和皮下前体脂肪细胞原代培养与诱导分化的研究 预览
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作者 陈涛 马立霞 +2 位作者 李志鑫 曾勇庆 陈伟 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期39-44,共6页
为建立新西兰兔前体脂肪细胞的体外培养模型,比较新西兰兔肌内和皮下前体脂肪细胞分化过程中相关基因的差异表达,实验采集 1 日龄新西兰兔背最长肌和皮下脂肪组织,采用胶原酶消化方法,分别从 2 种组织中分离前体脂肪细胞,进行细胞原代培... 为建立新西兰兔前体脂肪细胞的体外培养模型,比较新西兰兔肌内和皮下前体脂肪细胞分化过程中相关基因的差异表达,实验采集 1 日龄新西兰兔背最长肌和皮下脂肪组织,采用胶原酶消化方法,分别从 2 种组织中分离前体脂肪细胞,进行细胞原代培养,绘制细胞生长曲线,并对肌内和皮下前体脂肪细胞诱导分化,利用 RT-PCR 检测相关基因的表达变化。结果表明:细胞在分离后 2 h 已经贴壁,24 h 时呈现出短梭形的细胞形态,第 2 天细胞变成长梭形,第 3 天进入对数生长期。肌内和皮下前体脂肪细胞在诱导分化后均被油红O 染色,皮下前体脂肪细胞的脂质积累在诱导分化的第 2 天显著高于肌内前体脂肪细胞(P<0.05);荧光定量结果表明,肌内和皮下前体脂肪细胞 CCAAT 增强子结合蛋白(C/EBPα)基因的表达趋势在诱导分化过程中相同,肌内前体脂肪细胞过氧化物酶体增殖激活受体(PPARγ)第 4 天的表达量显著高于第 6 天,而皮下前体脂肪细胞 PPARγ表达量差异不显著;肌内前体脂肪细胞脂蛋白脂肪酶(LPL)表达量在第 0天和第 2天差异不显著,而皮下前体脂肪细胞第 2 天显著高于第 0 天(P<0.05);肌内前体脂肪细胞脂肪酸合酶(FAS)基因第 0、2、4 天的表达量差异不显著,而皮下前体脂肪细胞第 2、4 天显著高于第 0 天(P<0.05)。本研究成功构建了新西兰兔肌内和皮下前体脂肪细胞的体外培养和诱导分化模型,并发现皮下前体脂肪细胞分化早于肌内前体脂肪细胞,为进一步研究新西兰兔前体脂肪细胞的分化机制和脂肪沉积奠定基础。 展开更多
关键词 新西兰兔 肌内前体脂肪细胞 皮下前体脂肪细胞 原代培养 诱导分化
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FGF10基因真核表达载体的构建及其在从江香猪不同组织中的表达
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作者 徐敏 许厚强 +1 位作者 杨洋 陈伟 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期471-480,共10页
成纤维细胞生长因子10基因(fibroblast growth factor 10, FGF10)属于6个FGFs亚家族中的FGF7亚家族,是特异地表达于白色脂肪组织的唯一FGF,在脂肪组织的发育和代谢过程中具有重要的作用。本实验旨在研究从江香猪(Sus scrofa)肌内前体脂... 成纤维细胞生长因子10基因(fibroblast growth factor 10, FGF10)属于6个FGFs亚家族中的FGF7亚家族,是特异地表达于白色脂肪组织的唯一FGF,在脂肪组织的发育和代谢过程中具有重要的作用。本实验旨在研究从江香猪(Sus scrofa)肌内前体脂肪细胞中FGF10对脂肪代谢的调控功能,实验采用qRT-PCR的方法检测了从江香猪不同组织中的表达情况,并根据克隆得到的FGF10的CDS区,构建了真核过表达载体pEGFP-C1-FGF10;分离培养从江香猪肌内前体脂肪细胞运用胶原酶消化法分离培养从江香猪肌内前体脂肪细胞,并进行了诱导培养,采用油红O染色法进行鉴定;运用qRT-PCR技术检测FGF10基因在不同诱导阶段的从江香猪肌内前体脂肪细胞中的表达;利用脂质体法将重组质粒pEGFP-C1-FGF10瞬时转染从江香猪肌内前体脂肪细胞,并检测过表达FGF10基因后脂肪相关代谢沉积的氧化物酶体增殖物激活受体γ基因(peroxisome proliferator activated receptorγ, PPARγ)、脂联素基因(adiponectin,ADIPOQ)、脂肪酸结合蛋白4基因(fatty acid binding protein 4, FABP4)、脂肪酸合成酶基因(fatty acid synthase, FAS)、脂肪组织甘油三酯水解酶(adipose triglyceride lipase, ATGL)、激素敏感脂酶基因(hormone sensitive lipase, HSL)、脂蛋白酯酶基因(lipoprotein lipase, LPL)以及乙酰辅酶A羧化酶基因(acetyl-CoA carboxylase, ACC)的表达水平。FGF10基因表达量最低是在背最长肌中,表达量最高是在胃中(P<0.05),其次是在肾脏和脂肪中;在诱导的早期阶段,FGF10基因表达量逐渐增加,在诱导分化48 h的表达量最高;经双酶切和测序鉴定,成功构建了pEGFP-C1-FGF10表达载体,且在从江香猪肌内前体脂肪细胞中成功表达;与空白对照相比,ACC、FABP4、FAS、LPL、PPARγ的表达量均增加,ADIPOQ、ATGL和HSL的表达量均减少。FGF10对脂肪的沉积具有一定的调控作用,这种作用可能是通过对相关脂肪代谢基因的调控实现的� 展开更多
关键词 从江香猪 FGF10基因 真核表达载体 肌内前体脂肪细胞 诱导分化 脂肪沉积
桔梗叶片愈伤组织诱导分化研究 预览
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作者 李霞 高克利 +1 位作者 吴红 张钰晗 《湖南农业科学》 2019年第6期5-7,共3页
以桔梗叶片作为外植体,采用酒精和氯化汞组合消毒,研究不同消毒时间对消毒效果的影响,并比较不同浓度激素下愈伤组织诱导及分化的变化.结果表明,桔梗外植体最适合的消毒方案为:酒精消毒30s后氯化汞消毒6min;桔梗叶片愈伤组织诱导的最适... 以桔梗叶片作为外植体,采用酒精和氯化汞组合消毒,研究不同消毒时间对消毒效果的影响,并比较不同浓度激素下愈伤组织诱导及分化的变化.结果表明,桔梗外植体最适合的消毒方案为:酒精消毒30s后氯化汞消毒6min;桔梗叶片愈伤组织诱导的最适培养基为:1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L;桔梗叶片诱导分化的最适培养基为:1/2MS+6-BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L,此培养基培养,桔梗不定芽的诱导分化率能达到37%,且不定芽数量多,芽强壮. 展开更多
关键词 桔梗 外植体 诱导分化
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北京鸭肝间充质干细胞分离、培养及分化潜能研究 预览
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作者 李婷婷 许龙 梁峻 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2882-2889,共8页
试验旨在研究北京鸭肝间充质干细胞(liver mesenchymal stem cells,LMSCs)的分离、培养、鉴定及多向分化潜能等生物学特性。取孵化19日龄健康鸭胚通过酶消法分离出北京鸭LMSCs,进行体外培养,通过免疫荧光、RT-PCR和流式细胞术等技术对... 试验旨在研究北京鸭肝间充质干细胞(liver mesenchymal stem cells,LMSCs)的分离、培养、鉴定及多向分化潜能等生物学特性。取孵化19日龄健康鸭胚通过酶消法分离出北京鸭LMSCs,进行体外培养,通过免疫荧光、RT-PCR和流式细胞术等技术对北京鸭LMSCs特异性标记物(CD29、CD44、CD71、CD73、CD90、CD105、CD133及CD166)进行检测,因北京鸭LMSCs分离过程中会存在少量造血干细胞,所以对造血干细胞特异性标记物CD31、CD34进行检测,同时对细胞进行成脂和成骨的分化诱导,检测其多向分化潜能。结果显示,通过酶消法获得的北京鸭LMSCs具有间充质干细胞特异性标记物,造血干细胞特异性标记物为阴性表达,证明其为肝间充质干细胞,且向成脂肪细胞和成骨细胞分化诱导。RT-PCR检测结果发现,成脂分化诱导中,过氧化物酶体增殖因子活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)、脂蛋白酶(lipoprotein lipase,LPL)呈阳性表达;成骨分化诱导中,Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)和Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)呈阳性表达。北京鸭LMSCs较强的自我增殖能力可使畜禽遗传资源有无限利用的可能性,多向分化潜能强则说明重编程的水平较低,对畜禽种质资源的复原有巨大的优势,为组织再生研究提供了一定的理论基础,对于畜禽资源的开发与利用打开了一个更为宽广的平台。 展开更多
关键词 北京鸭 间充质干细胞 生物学特性 诱导分化 肝脏
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长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响
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作者 张权 张亚奇 +3 位作者 饶巍 周端鹏 韩兵 武栋成 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第1期42-52,共11页
该课题研究长期体外传代培养对人脐带间充质干细胞重要生物学属性的影响。采用组织块法分离人脐带间充质干细胞,体外反复传代培养后比较第5、10、20代细胞的主要生物学属性:采用细胞计数法与流式细胞仪检测不同代次细胞增殖活性和表面... 该课题研究长期体外传代培养对人脐带间充质干细胞重要生物学属性的影响。采用组织块法分离人脐带间充质干细胞,体外反复传代培养后比较第5、10、20代细胞的主要生物学属性:采用细胞计数法与流式细胞仪检测不同代次细胞增殖活性和表面免疫标志物;染色体常规核型分析和微阵列分析检测其基因稳定性;成脂、成骨诱导分化检测其多向分化潜能;定量RT-PCR检测端粒酶反转录基因hTERT的表达;SA-β-gal活性确定细胞老化状态。第5、10、20代脐带间充质干细胞呈现相同的增殖曲线,各代次干细胞的增殖速率无显著性差异。不同培养代次的脐带间充质干细胞表面均呈现CD105、CD90、CD44、CD73高表达, CD19、CD34、CD45及HLA-DR不表达或低表达。基因稳定性分析证实三个代次干细胞均为正常二倍体核型,染色体基因组未发生基因拷贝数缺失、重复和大片段纯合子现象。成脂和成骨分化潜能以及hTERT表达均未见显著性差异。SA-β-gal活性检测显示,随培养代次的增加,脐带间充质干细胞开始呈现衰老征象,尤以第20代明显。体外反复传代长期培养对人脐带间充质干细胞的基本生物学属性、基因稳定性及其多向分化潜能均无显著性影响。过度长期培养有可能导致干细胞老化,活性降低。 展开更多
关键词 人脐带间充质干细胞 长期培养 基因稳定性 诱导分化
白血病细胞的定向诱导分化及PADI4在诱导分化中的作用 预览
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作者 赵钰 林玮 《中南医学科学杂志》 CAS 2019年第1期85-88,共4页
白血病是血液系统的常见病和多发病,定向诱导白血病细胞分化是治疗白血病的重要策略之一。肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PAD/PADI)是催化精氨酸转化为瓜氨酸的关键酶,在白血病诱导分化过程中起关键作用。国内外学者在白血病诱导分化的机制及策... 白血病是血液系统的常见病和多发病,定向诱导白血病细胞分化是治疗白血病的重要策略之一。肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PAD/PADI)是催化精氨酸转化为瓜氨酸的关键酶,在白血病诱导分化过程中起关键作用。国内外学者在白血病诱导分化的机制及策略方面开展了众多研究。本文对诱导白血病细胞定向分化为粒细胞、树突状细胞及巨噬细胞的研究概况及PADI4在白血病细胞定向分化中的机制研究进展作一综述。 展开更多
关键词 白血病 诱导分化 肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PADI4) 全反式维甲酸
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微囊化软骨细胞诱导间充质干细胞定向分化治疗兔椎间盘退变的实验研究 预览
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作者 张子琦 杨佩 +3 位作者 王春生 刘瑞宇 柏传毅 王坤正 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期49-54,共6页
目的探讨经微囊化软骨细胞诱导分化的间充质干细胞对兔椎间盘退变的治疗效果。方法将微囊化软骨细胞与间充质干细胞进行共培养,干细胞诱导分化。观察分化后干细胞的免疫学特征、增殖曲线、蛋白多糖及Ⅱ型胶原蛋白合成能力。建立兔椎间... 目的探讨经微囊化软骨细胞诱导分化的间充质干细胞对兔椎间盘退变的治疗效果。方法将微囊化软骨细胞与间充质干细胞进行共培养,干细胞诱导分化。观察分化后干细胞的免疫学特征、增殖曲线、蛋白多糖及Ⅱ型胶原蛋白合成能力。建立兔椎间盘退变模型,并观察分化后的间充质干细胞对兔椎间盘退变的修复能力。结果经微囊化软骨细胞分化诱导7d后的间充质干细胞,增殖能力未受到明显影响,同时具备了软骨细胞的部分表面特征,能够合成蛋白多糖及Ⅱ型胶原蛋白,且能力优于Transwell对照组。将干细胞植入兔椎间盘退变模型中,在术后16周内,椎间盘的力学性能得到修复,形态及结构也得到了明显改善。结论与传统的Transwell诱导体系相比,微囊诱导体系具有更高的诱导效率;经微囊化软骨细胞诱导的MSCs,植入椎间盘退变模型动物体内后,能更好地维持椎间盘的形态、结构及力学特征。 展开更多
关键词 椎间盘退变 微囊 诱导分化 间充质干细胞 软骨细胞
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免疫磁珠分选的口腔鳞状细胞癌干细胞诱导分化及成瘤活性研究
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作者 廖显翔 房芳 +5 位作者 羊良慧 陈国生 王代友 彭剑波 刘诗奇 麦华明 《中国癌症防治杂志》 CAS 2019年第2期131-137,共7页
目的探讨口腔鳞状细胞癌干细胞的诱导分化及成瘤活性。方法采用免疫磁珠分选法从6例原代培养的口腔鳞状细胞癌细胞中分选出CD133^+、CD44^+细胞,以流式细胞术检测其纯度及细胞周期,并绘制CD133^+细胞生长曲线。将分选出的细胞经诱导向... 目的探讨口腔鳞状细胞癌干细胞的诱导分化及成瘤活性。方法采用免疫磁珠分选法从6例原代培养的口腔鳞状细胞癌细胞中分选出CD133^+、CD44^+细胞,以流式细胞术检测其纯度及细胞周期,并绘制CD133^+细胞生长曲线。将分选出的细胞经诱导向成骨肪细胞及成脂肪细胞分化,将原代鳞癌细胞、分选所得的CD44^+细胞及CD133^+细胞进行体内成瘤实验。结果经免疫磁珠分选法成功获得CD44^+细胞、CD133^+细胞,其纯度经检测均在94%以上,且主要处于G0/G1期。CD133+细胞在接种后第2天进入对数期,细胞倍增时间为3.22 d。经诱导后CD44^+、CD133^+细胞成功分化为成骨细胞及成脂肪细胞。皮下注射后第3天可触及新生肿物,在3种细胞成瘤实验中CD133^+细胞组瘤体体积最大,HE染色显示符合低分化口腔鳞状细胞癌病理表现。结论免疫磁珠分选法可高效获得高纯度的口腔鳞状细胞癌干细胞。CD44^+、CD133^+细胞均具有较强的多向分化能力,CD133^+细胞成瘤性较强。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 磁珠分选 干细胞 CD44 CD133 诱导分化
北京鸭肝上皮样干细胞生物学特性研究
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作者 梁峻 张涛 李婷婷 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期107-114,共8页
为了研究北京鸭肝上皮样干细胞(liver epithelioid stem cells,LESCs)生物学特性,对其进行分离、体外培养、鉴定,多向分化潜能等实验。取孵化17日龄健康鸭胚分离北京鸭LESCs,通过免疫荧光、RT-PCR以及流式细胞术等技术对北京鸭LESCs进... 为了研究北京鸭肝上皮样干细胞(liver epithelioid stem cells,LESCs)生物学特性,对其进行分离、体外培养、鉴定,多向分化潜能等实验。取孵化17日龄健康鸭胚分离北京鸭LESCs,通过免疫荧光、RT-PCR以及流式细胞术等技术对北京鸭LESCs进行鉴定,同时诱导北京鸭LESCs分化,检测多向分化潜能。结果表明:从鸭胚中分离培养的细胞为北京鸭LESCs,并成功向成脂肪细胞和成软骨细胞分化,证明具有干细胞多向分化潜能的共性。北京鸭LESCs在体外具有较强的增殖与自我更新能力,并具有一定的可塑性,可以作为种质细胞进行保存,使这一品种遗传资源以干细胞的形式长期保存下来,同时也可以为北京鸭基因的改良提供参考。 展开更多
关键词 上皮样干细胞 诱导分化 北京鸭 生物学特性
人羊膜上皮细胞的体外培养及诱导分化
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作者 白立恒 张钰堃 +2 位作者 刘默凝 李岩 曹贵方 《内蒙古大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第2期162-170,共9页
人羊膜上皮细胞由外胚层发育而来,属于成体干细胞,具有来源广泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在医学伦理道德限制等优点.研究目的:建立人羊膜上皮细胞的体外分离培养的方法,检测其向三胚层诱导分化培养潜能.在无菌条件下机械分离羊膜,... 人羊膜上皮细胞由外胚层发育而来,属于成体干细胞,具有来源广泛、免疫原性低、非致瘤性、不存在医学伦理道德限制等优点.研究目的:建立人羊膜上皮细胞的体外分离培养的方法,检测其向三胚层诱导分化培养潜能.在无菌条件下机械分离羊膜,使用胰蛋白酶分步消化法收集人羊膜上皮细胞,体外培养,观察其细胞形态与生长规律;并通过免疫细胞化学法,RTPCR及三胚层定向诱导等方法对其进行鉴定.结果:成功从人羊膜中分离得到纯度较高的人羊膜上皮细胞.免疫细胞化学法鉴定结果显示,分离到的羊膜上皮细胞内的角蛋白19呈阳性;RT-PCR鉴定干细胞标志基因REX1、Oct-4和Nanog,在mRNA水平均有表达;定向诱导条件下,人羊膜上皮细胞可向成脂、成神经和成肝样细胞分化.结论:人羊膜上皮细胞可在体外分离培养,具有干细胞特性,可以定向诱导分化成内胚层、中胚层、和三胚层三个胚层组织与细胞. 展开更多
关键词 羊膜上皮细胞 体外培养 诱导分化
巴什拜羊骨骼肌卫星细胞分离培养及诱导分化
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作者 张伟 王世银 +3 位作者 邓双义 杨力伟 刘晓娜 石国庆 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期82-88,共7页
为了获得巴什拜羊骨骼肌卫星细胞,本研究采集出生1日龄巴什拜羔羊后肢骨骼肌组织,采用两步酶消化法结合差速贴壁法分离纯化巴什拜羊骨骼肌卫星细胞,并对分离获得的骨骼肌卫星细胞进行了鉴定、传代培养及诱导分化等研究。结果表明,本研... 为了获得巴什拜羊骨骼肌卫星细胞,本研究采集出生1日龄巴什拜羔羊后肢骨骼肌组织,采用两步酶消化法结合差速贴壁法分离纯化巴什拜羊骨骼肌卫星细胞,并对分离获得的骨骼肌卫星细胞进行了鉴定、传代培养及诱导分化等研究。结果表明,本研究采用的分离纯化方法可以高效获得巴什拜羊骨骼肌卫星细胞,RT-PCR检测结果表明骨骼肌卫星细胞标志性基因pax7、Myf5、MyoD、desmin和c-Met均呈阳性表达。获得的骨骼肌卫星细胞具有较强的增殖能力,连续传代12代,细胞的形态仍保持正常,且细胞的克隆形成率仍保持在50%以上,但是当细胞传代至第18代时,逐渐表现出较为明显的衰退。细胞的生长符合典型的"S"型生长曲线,且第2代和第8代细胞的生长曲线没有明显的差异,至第14代时细胞的增殖速度逐渐降低。采用低浓度马血清培养体系,可成功诱导巴什拜羊骨骼肌卫星细胞向肌管方向分化,诱导培养至第5天时,骨骼肌卫星细胞分化标志基因MyHC呈阳性表达。由此得出结论,本研究采用的骨骼肌卫星细胞分离纯化体系高效、可靠,可以满足较高纯度巴什拜羊骨骼肌卫星细胞的分离培养。 展开更多
关键词 巴什拜羊 骨骼肌 卫星细胞 诱导分化 增殖能力
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