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五指山小型猪近交系异种移植产业化研发进展 预览
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作者 冯书堂 戴一凡 +1 位作者 章金刚 潘志强 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期469-473,共5页
为了早日实现五指山小型猪(WZSP)近交系异种移植产业化目标,努力推进近交繁育获得近交系,同时开展克服异种移植免疫排斥和猪内源性逆转录病毒(PERV)传染生物安全性两大难题的研发内容。本文从WZSP近交系双基因敲除克隆猪繁育成功、猪-... 为了早日实现五指山小型猪(WZSP)近交系异种移植产业化目标,努力推进近交繁育获得近交系,同时开展克服异种移植免疫排斥和猪内源性逆转录病毒(PERV)传染生物安全性两大难题的研发内容。本文从WZSP近交系双基因敲除克隆猪繁育成功、猪-猴异种角膜内皮移植取得突破性进展、WZSP近交系PERV无传染性群体建立、WZSP近交系是理想的动物模型和异种移植供体等方面,介绍WZSP近交系异种移植产业化的研发进展。 展开更多
关键词 五指山小型 近交系 异种移植 免疫排斥反应 α-1 3-半乳糖基转移酶基因敲除(αGTKO) 内源性逆转录病毒(PERV) 非α-1 3-半乳糖(Gal)抗原 CRISPR/Cas9基因编辑技术
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新型实验动物——近交系猪的应用前景 预览 被引量:6
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作者 霍金龙 罗古月 +2 位作者 张娟 张美 曾养志 《中国牧业通讯》 2004年第4期 68-70,共3页
编者按:随着生物科学的迅猛发展,对实验动物的要求越来越高,渐渐由一般实验动物过渡到了近交系动物,而近交系猪因具有遗传背景清楚、基因纯合度高、与人体在很多方面相似等独特的优点而成为特有疾病的动物模型.现已被广泛应用在器官移... 编者按:随着生物科学的迅猛发展,对实验动物的要求越来越高,渐渐由一般实验动物过渡到了近交系动物,而近交系猪因具有遗传背景清楚、基因纯合度高、与人体在很多方面相似等独特的优点而成为特有疾病的动物模型.现已被广泛应用在器官移植、转基因研究等方面,在其他生命科学领域中也具有综合开发利用价值,其应用前景十分广阔. 展开更多
关键词 实验动物 近交系 应用前景 疾病模型 器官移植 转基因
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中国版纳近交系小型猪心脏异种抗表位α1,3—Gal的分布 预览 被引量:3
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作者 张伟 曾养志 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期 258-260,共3页
目的:研究中国版纳小型猪心脏的异种抗原α1,3-Gal的分布和半宣分析,为小型猪心脏的转基因和异种移植提供资料。方法:通过亲和免疫组织化学法和图像分析对10头版纳小型猪心脏进行α1,3-Gal的分布和半定量研究。结果:α1,3-Gal分布... 目的:研究中国版纳小型猪心脏的异种抗原α1,3-Gal的分布和半宣分析,为小型猪心脏的转基因和异种移植提供资料。方法:通过亲和免疫组织化学法和图像分析对10头版纳小型猪心脏进行α1,3-Gal的分布和半定量研究。结果:α1,3-Gal分布,心肌细胞未发现α1,3-Gal分布。半定量分析发现α1,3-Gal表达量心房内膜最多,心肌间质最少。结论:异种抗原α1,3-Gal在心脏中的表达存在较大差异,提示可以通过转基因猪来克服超急性异种排斥反应。 展开更多
关键词 异种抗原 近交系 心脏移植 免疫组织化学 中国版纳近交系 表位α1 3-Gal
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中国近交系猪到人异种植靶抗原研究 预览 被引量:20
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作者 步宏 曾养志 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2000年第2期 115-118,共4页
研究人血清对近交系猪组织的结合情况及猪组织内α-半乳糖残基的分布。方法采取近交系中国版纳小耳猪4头及近交系五指山猪1头的心、肝、脾、肺、肾、胰、小肠、胸腺、皮肤、淋巴结及各组血管组织,分别以中国正常人A、B、O和AB... 研究人血清对近交系猪组织的结合情况及猪组织内α-半乳糖残基的分布。方法采取近交系中国版纳小耳猪4头及近交系五指山猪1头的心、肝、脾、肺、肾、胰、小肠、胸腺、皮肤、淋巴结及各组血管组织,分别以中国正常人A、B、O和AB型因清及BSI-B4为一搞或亲和物,用亲和免疫组织方法观察各型人血清对上述各组织的结构和组织内α-Gal分布相似。A、B、O和AB型血清与被测两种的各部位组织结合无明显差异,主要为各级 展开更多
关键词 近交系 异种移植 免疫组织化学 靶抗原
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中国近交系猪的氟烷基因型研究 预览 被引量:12
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作者 步宏 曾养志 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2000年第5期 311-314,共4页
目的 选育猪到人异种移植的供器官猪种和医药实验研究大动物用猪种,首先应筛查其是否易患猪应激综合征(PSS)。方法 采用酶合酶链反应结合限制性内切酶技术(PCR-RELP)研究版纳小耳猪近交系(BMI)和近交培育之中的... 目的 选育猪到人异种移植的供器官猪种和医药实验研究大动物用猪种,首先应筛查其是否易患猪应激综合征(PSS)。方法 采用酶合酶链反应结合限制性内切酶技术(PCR-RELP)研究版纳小耳猪近交系(BMI)和近交培育之中的五指山猪(WZSP)的氟烷基因型,筛查其是否有易患猪应激综合征的可能。结果 50头版纳小耳猪近交系和15头五指山猪氟烷基因型均为阴性纯合子。结论 这两种猪种可望成为猪到人异种移植和医药 展开更多
关键词 近交系 氟烷基因型 异种移植 PCR-RFLP
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Scriptaid处理可提高近交系五指山猪克隆胚胎的发育能力和克隆效率 预览 被引量:3
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作者 朱彦宾 龙川 +2 位作者 冯冲 潘登科 罗玉柱 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期 268-273,共6页
为探讨一种新型低毒的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid处理克隆胚胎时对其发育能力和克隆效率的影响,本研究以近交系五指山小型猪胎儿成纤维细胞为供体细胞进行体细胞核移植构建重构胚胎,重构胚胎激活后培养在添加Scriptaid不同浓度(0... 为探讨一种新型低毒的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid处理克隆胚胎时对其发育能力和克隆效率的影响,本研究以近交系五指山小型猪胎儿成纤维细胞为供体细胞进行体细胞核移植构建重构胚胎,重构胚胎激活后培养在添加Scriptaid不同浓度(0~300nmol/L)的胚胎培养液中培养不同的时间(0~36h),观察克隆胚胎的卵裂率和囊胚率,评价克隆胚胎体外的发育能力。实验结果发现100nmol/L Scriptaid处理24h组克隆胚胎的囊胚发育率(30.4%)较对照组(17.5%)显著提高,P〈0.05。将100nmol/L Scriptaid处理24h组克隆胚胎和对照组胚胎分别移植到4头受体母猪中,进一步观察其体内的发育能力。处理组克隆胚胎的受体在平均窝产仔数和克隆效率(分别为5头,2.4%)均显著高于对照组(分别为1.5头,0.7%),P〈0.05。以上结果表明,100nmol/L Scriptaid处理24h近交系五指山小型猪克隆胚胎,有利于提高克隆胚胎的发育能力和克隆效率。 展开更多
关键词 近交系小型 Scriptaid 核移植胚胎 克隆效率
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近交系猪皮质骨复合骨髓基质干细胞及BMP修复兔大段骨缺损 预览 被引量:3
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作者 滕寿发 林月秋 +3 位作者 徐永清 汤逊 阮默 黄若昆 《中国骨肿瘤骨病》 2007年第2期 80-84,124,共6页
目的探讨及观察近交系版纳小耳猪皮质骨复合骨髓基质干细胞(MSCs)及骨形态发生蛋白(BMP)在修复日本大耳兔大段骨缺损中的疗效及可行性。方法将35只日本大耳兔,双上肢桡骨中段制造长约1.5cm的骨缺损模型。左侧作为实验组,将版纳... 目的探讨及观察近交系版纳小耳猪皮质骨复合骨髓基质干细胞(MSCs)及骨形态发生蛋白(BMP)在修复日本大耳兔大段骨缺损中的疗效及可行性。方法将35只日本大耳兔,双上肢桡骨中段制造长约1.5cm的骨缺损模型。左侧作为实验组,将版纳猪皮质骨脱脂、脱蛋白处理,消毒后与MSCs在体外联合培养,并加入BMP后植入骨缺损区,右侧作为对照组,骨缺损区单纯用脱脂、脱蛋白处理后的皮质骨植入。另5只兔骨缺损区不植入任何材料,作为空白对照组。术后4,8,12周各时间点行标本大体观察,X线观察,组织学观察,骨密度测试,比较其骨缺损区修复愈合情况。结果术后第12周,实验组骨缺损区完全修复,骨矿密度接近正常,实验后4、8、12周各移植区骨矿密度实验组明显高于对照组(BMC:P〈0.05,BMDIP〈0.01);对照组骨缺损区修复缓慢,新骨形成量少;空白对照组骨缺损区未修复。结论近交系小耳猪皮质骨复合MSCs及BMP治疗骨缺损效果满意,经处理的近交系小耳猪皮质骨是良好的骨组织工程支架材料,为大段骨缺损提供了一种新的可靠的治疗方法。 展开更多
关键词 近交系小耳 大段骨缺损 皮质骨 骨髓基质干细胞 骨形态发生蛋白
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重组牛角胎复合骨构建组织工程骨的扫描电镜观察(摘要) 预览
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作者 文涛 胡侦明(导师) 劳汉昌(导师) 《昆明医学院学报》 2006年第3期 122,共1页
目的观察骨髓基质细胞在重组牛角胎复合骨上的生长情况,了解组织工程骨构建的表面形念学变化.方法Urist改良法提取牛、小耳猪长骨BMP,制成重组牛角胎复合骨、重组牛复合骨、重组近交系小耳猪复合骨,将10周龄新西兰大白兔骨髓基质细... 目的观察骨髓基质细胞在重组牛角胎复合骨上的生长情况,了解组织工程骨构建的表面形念学变化.方法Urist改良法提取牛、小耳猪长骨BMP,制成重组牛角胎复合骨、重组牛复合骨、重组近交系小耳猪复合骨,将10周龄新西兰大白兔骨髓基质细胞进行体外培养10d后,接种培养到重组牛角胎、牛、近交系小耳猪复合骨及单纯牛角胎上体外培养至第3天,第1、2、3、4周时进行扫描电镜检测. 展开更多
关键词 牛角胎 近交系小耳 组织工程骨 骨髓基质细胞
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中国近交系版纳微型猪α1,3-半乳糖基转移酶基因剪接变异体的克隆及其在人类细胞中的表达 被引量:2
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作者 刘美 朱圣明 +6 位作者 郑鸿 王宇 王竹 杨娅君 伍艳霞 曾养志 王艳萍 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 145-150,共6页
目的克隆中国近交系版纳微型猪(Chinese Banna Minipig Inbred Line,BMI)的α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)基因并分离其剪接变异体,构建其真核表达载体并观察BMIα1,3-GT基因在人肺腺癌A549细胞中的表达和功能。方法提取BMI肝组织... 目的克隆中国近交系版纳微型猪(Chinese Banna Minipig Inbred Line,BMI)的α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)基因并分离其剪接变异体,构建其真核表达载体并观察BMIα1,3-GT基因在人肺腺癌A549细胞中的表达和功能。方法提取BMI肝组织总RNA,RT-PCR扩增全长的α1,3-GTcDNA,并克隆到pMD18-T载体,挑选15个阳性克隆进行测序,获得GT1、GT2两种基因剪接变异体。将GT1、GT2克隆到pEGFP-N1上构建其真核表达载体,分别命名为pN-GT1、pN-GT2。将pN-GT1、pN-GT2分别转染人肺腺癌A549细胞,RT-PCR检测转染细胞中α1,3-GT mRNA的表达,倒置荧光显微镜和流式细胞术观察转染细胞上α-半乳糖基(α-Gal)的表达,流式细胞术检测人血清中IgM抗体和补体C3与转染细胞上α-Gal的结合。结果在BMI中发现了碱基长度为1116bp和1080bp的两个α1,3-GT基因剪接变异体,后者缺失了外显子5。pN-GT1或pN-GT2转染的A549细胞中,均检测到了α1,3-GT mRNA和α-Gal的表达,转染细胞膜上也检测到IgM和C3的沉积,且两种转染细胞中α-Gal的表达及IgM和C3的沉积没有差异(P〉0.05)。结论成功克隆了BMI的α1,3-GT基因,并发现两种α1,3-GT基因剪接变异体。两种基因剪接变异体转染的细胞中,均检测到α1,3-GT mRNA的表达且α1,3-GT能催化合成具有生物学效应的α-Gal,这为BMI用于异种移植中涉及α1,3-GT基因操作的研究提供了基因背景资料。 展开更多
关键词 异种移植 中国近交系版纳微型 Α1 3-半乳糖基转移酶 α-半乳糖基
中国近交系版纳微型猪α1,3-半乳糖基转移酶基因的克隆及其真核表达载体的构建 被引量:3
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作者 朱圣明 王艳萍 +5 位作者 郑鸿 程惊秋 陆燕蓉 曾养志 王字 王竹 《生物医学工程学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期360-365,共6页
克隆中国近交系版纳微型猪(Banna minipig inbred-line,BMI)α1,3-半乳糖基转移酶基因(α1,3-galacto-syltransferase α1,3-GT)并构建其真核表达载体。从版纳微型猪肝脏中提取总RNA,RT-PCR扩增出α1,3-GT cDNA全长序列,克隆... 克隆中国近交系版纳微型猪(Banna minipig inbred-line,BMI)α1,3-半乳糖基转移酶基因(α1,3-galacto-syltransferase α1,3-GT)并构建其真核表达载体。从版纳微型猪肝脏中提取总RNA,RT-PCR扩增出α1,3-GT cDNA全长序列,克隆到pMD18-T载体,测序后再克隆到质粒pEGFP-N1中,构建α1,3-GT真核表达载体pEGFP-N1-GT。用脂质体法瞬时转染人肺腺癌细胞A549,RT-PCR检测转染细胞中α1,3-GTmRNA的表达;利用荧光素标记的植物凝集素(FITC-BS-IB4 lectin),直接免疫荧光法检测转染细胞中α1,3-GT合成α-Gal表位的能力。结果显示版纳微型猪α1,3-GT DNA全长1116 bp,其序列与GenBank中小鼠和牛α1,3-GT cDNA具有高度同源性,与猪α1,3-GT DNA全长序列完全一致。酶切和PCR证实重组真核表达载体pEGFP-N1-GT构建成功。转染pEG-FP-N1-GT的A549细胞有α1,3-GTmRNA表达,在其细胞膜检测到α-Gal表位的表达。中国近交系版纳微型猪α1,3-GT cDNA的克隆及其真核表达载体的构建为该基因在异种器官移植和肿瘤免疫治疗中的进一步研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 中国近交系版纳微型 Α1 3-半乳糖基转移酶 异种移植
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