期刊文献+
共找到43篇文章
< 1 2 3 >
每页显示 20 50 100
人血清白蛋白在蛋白多肽类药物长效化中的应用
1
作者 徐欢 周美玲 +1 位作者 葛琳 王志明 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期82-89,共8页
重组蛋白/多肽类药物在人体血清内半衰期较短,很大程度上限制了其临床应用。人血清白蛋白(HSA)具有半衰期长、生物相容性好、低免疫原性等优点,是理想的药物载体。各种基于HSA的蛋白质药物长效化技术得到了广泛的应用和发展,目前主要包... 重组蛋白/多肽类药物在人体血清内半衰期较短,很大程度上限制了其临床应用。人血清白蛋白(HSA)具有半衰期长、生物相容性好、低免疫原性等优点,是理想的药物载体。各种基于HSA的蛋白质药物长效化技术得到了广泛的应用和发展,目前主要包括构建HSA融合蛋白,通过共价化学键与HSA偶联,通过非共价键与HSA可逆性结合。总结了近年来基于白蛋白药物长效化技术的发展,各项技术的优缺点及药物开发现状。 展开更多
关键词 白蛋白融合 连接 化学偶联 脂肪酸修饰 白蛋白结合
PHLD融合蛋白在毕赤酵母中的构建和表达 预览
2
作者 张新国 郭广君 +4 位作者 李坤 孙巧云 郭思佳 马小弟 马国艳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第6期475-482,共8页
δ-睡眠肽(delta sleep inducing peptide, DSIP)的相对分子质量较小,在体内半衰期较短,因此本研究将蛋白质转导结构域(protein transduction domain, PTD)、人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)、连接肽(linker)以及δ-睡眠肽(DSIP... δ-睡眠肽(delta sleep inducing peptide, DSIP)的相对分子质量较小,在体内半衰期较短,因此本研究将蛋白质转导结构域(protein transduction domain, PTD)、人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)、连接肽(linker)以及δ-睡眠肽(DSIP)进行融合表达,以获得重组PHLD睡眠肽融合蛋白。研究以pPIC9K/HSA为模板,利用PCR技术进行扩增,将获得的PHLD基因连接到表达载体pPIC9K上,然后转入组氨酸缺陷型毕赤酵母GS115,经G418筛选获得了高表达PHLD融合蛋白的酵母工程菌株,并进一步获得了高纯度的融合蛋白。本研究将为DSIP的深入研究和应用提供技术资料。 展开更多
关键词 δ-睡眠(DSIP) 人血清白蛋白(HSA) 连接 蛋白质转导结构域(PTD) 毕赤酵母 融合蛋白
在线阅读 免费下载
自组装双亲短肽氨基酸组成及连接肽对其融合酶表达量的影响 预览 被引量:1
3
作者 赵伟欣 刘松 +2 位作者 刘立明 陈坚 堵国成 《食品与发酵工业》 CSCD 北大核心 2017年第12期1-6,共6页
自组装双亲短肽(self-assembling amphipathic peptides,SAPs)是一类亲疏水氨基酸按一定规律分布,具有自聚合效应的氨基酸短肽,融合在酶蛋白N端时,具有促进表达和稳定化的功能。以自组装双亲短肽S1(AEAEAKAKAEAEAKAK)为出发序列,与... 自组装双亲短肽(self-assembling amphipathic peptides,SAPs)是一类亲疏水氨基酸按一定规律分布,具有自聚合效应的氨基酸短肽,融合在酶蛋白N端时,具有促进表达和稳定化的功能。以自组装双亲短肽S1(AEAEAKAKAEAEAKAK)为出发序列,与来源于Bacillus sp.WSHB04-02的碱性果胶酶(alkaline polygalacturonate lyase,PGL)组成的融合酶为模式蛋白,考察SAPs的氨基酸组成及SAPs融合蛋白内部连接肽(linker peptide)对PGL-SAP融合酶的表达量的影响。结果显示,含有较弱疏水性的甘氨酸和丙氨酸残基的PGL-S1突变体可使融合酶正常表达,其中,含有组氨酸的PGL-S1v1具有相对最高的胞外酶活,较野生型提高了9倍,较PGL-S1提高了1.5倍。连接肽方面,与刚性连接肽相比,含有柔性连接肽的融合酶具有更高的胞外酶活,含有(GGGGS)3的PGL-F-S1融合酶胞外酶活是野生型的14倍。上述结果表明,SAPs的氨基酸组成及融合蛋白之间的连接肽对PGL融合酶的表达具有重要影响。 展开更多
关键词 自组装双亲短 融合蛋白 连接 氨基酸极性 表达量 碱性果胶酶
在线阅读 免费下载
不同类型连接肽对β-甘露聚糖酶AuMan5A酶学性质的影响 预览
4
作者 王春娟 唐诗涵 +3 位作者 邬敏辰 董运海 杭宜岭 李剑芳 《食品与生物技术学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期938-943,共6页
以柔性肽F(GGGGS)3或刚性肽R(EAAAK)3为连接肽,将海栖热胞菌27家族碳水化合物结合域(CBM27)与宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)的C末端融合,探讨不同类型连接肽对Au Man5A酶学性质的影响,获取具有优良酶学性质的融合酶... 以柔性肽F(GGGGS)3或刚性肽R(EAAAK)3为连接肽,将海栖热胞菌27家族碳水化合物结合域(CBM27)与宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)的C末端融合,探讨不同类型连接肽对Au Man5A酶学性质的影响,获取具有优良酶学性质的融合酶。采用重叠PCR技术扩增融合酶基因Auman5A-F-cbm~27和Auman5A-R-cbm~27,分别将Auman5A和融合酶基因在毕赤酵母GS115中进行表达,分析表达产物reAuMan5A、reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C的酶学性质。结果表明:该3种β-甘露聚糖酶对角豆胶的K_m值分别为1.7、1.9和0.9 mg/mL。3种酶的最适温度T_(opt)分别为70、65和70℃;reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C在70℃的半衰期t_(1/2)~(70)分别为36 min和124 min,较reAuMan5A的(t_(1/2)~(70)=9 min)延长了3倍和12.8倍。reAuMan5A-R-C具有底物亲和力强、热稳定性高和pH稳定范围广等特点,在食品、饲料、医药和能源等领域有着巨大的应用潜力。 展开更多
关键词 连接 Β-甘露聚糖酶 融合酶 底物亲和力 热稳定性
在线阅读 下载PDF
连接肽在融合蛋白设计中的选择及应用 被引量:2
5
作者 于健 Sarra Setrerrahmane 徐寒梅 《药物生物技术》 CAS 2016年第3期260-263,共4页
融合蛋白的设计中,经常需要用链接肽将不同功能的蛋白进行连接融合。连接肽的设计和选择对融合蛋白的表达、稳定性及功能活性至关重要。文章将常见的两种连接肽分为柔性(Flexibility)和刚性(Rigidity)进行比较说明。其中柔性连接... 融合蛋白的设计中,经常需要用链接肽将不同功能的蛋白进行连接融合。连接肽的设计和选择对融合蛋白的表达、稳定性及功能活性至关重要。文章将常见的两种连接肽分为柔性(Flexibility)和刚性(Rigidity)进行比较说明。其中柔性连接肽即成柔软线性的一类易弯折的氨基酸序列,常见为(GGGGS)。重复序列(n=3—4);刚性连接肽即成稳固螺旋结构的一类长度固定的氨基酸序列,常见为(EAAAK)。重复序列(n=2~5)。设计连接肽时应考虑长度、氨基酸成分、亲水性、构象、柔韧性及电荷等因素。连接肽中的氨基酸组成对柔性连接肽影响较大,而氨基酸排列影响着刚性连接肽的结构。文章结合近年来融合蛋白设计中两种最常用连接肽的相关报道进行阐述,为连接肽的研究提供参考。 展开更多
关键词 融合蛋白 重组蛋白 连接 接头序列 柔性连接 刚性连接
多功能融合酶基因Linker的优化及表达 预览
6
作者 王锐丽 刘敏杰 薛业敏 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第4期31-36,共6页
在融合酶阿拉伯/木糖苷酶-木聚糖酶(Xar-xynA)之间插入不同组成和长度的多肽Linker,避免催化结构域相互之间的干扰,改善融合酶的催化效率。5个含不同长度及Ala/Gly比例连接肽Linker的融合突变体在大肠杆菌重组表达、纯化,并对融合酶的... 在融合酶阿拉伯/木糖苷酶-木聚糖酶(Xar-xynA)之间插入不同组成和长度的多肽Linker,避免催化结构域相互之间的干扰,改善融合酶的催化效率。5个含不同长度及Ala/Gly比例连接肽Linker的融合突变体在大肠杆菌重组表达、纯化,并对融合酶的酶学性质、动力学参数和酶解作用进行研究。结果表明,融合酶Xar-L1/L2/L3-xynA和融合酶Xar-xynA有着相似的最适温度和最适pH值。其中融合酶Xar-L1-xynA在65~80℃和pH值6.6~8.2有更强的阿拉伯/木糖苷酶热稳定性和pH值稳定性,将融合酶Xar-L1-xynA在65℃保温60 min其阿拉伯/木糖苷酶活性有着明显的激活现象。并获得连接Xar和XynA的最优Linker:L1和L4,麦麸和玉米芯木聚糖产物酶解试验的结果表明,融合酶Xar-L1-xynA和Xar-L4-xynA比其他的融合酶有着更高的催化效率。 展开更多
关键词 多功能性酶 基因融合 木糖苷酶/阿拉伯糖苷酶 木聚糖酶 连接
在线阅读 下载PDF
连接肽长度对单链抗体与小分子半抗原结合力的影响
7
作者 夏雪 石玉玲 +6 位作者 喻艳琴 冯敏 王婷婷 方蓉 黄顺莉 曾柱 胡祖权 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2429-2434,共6页
为了分析单链抗体的连接肽长度对其与小分子半抗原结合力的影响,本研究以含(G_4S)_3连接肽的伏马菌素特异单链抗体基因H2为模板,PCR扩增获得含G_4S和(G_4S)_2连接肽的单链抗体编码基因,分别命名为H2-5和H2-10,通过基因工程操作构建... 为了分析单链抗体的连接肽长度对其与小分子半抗原结合力的影响,本研究以含(G_4S)_3连接肽的伏马菌素特异单链抗体基因H2为模板,PCR扩增获得含G_4S和(G_4S)_2连接肽的单链抗体编码基因,分别命名为H2-5和H2-10,通过基因工程操作构建到p HENHi载体中,转化大肠杆菌XL1-Blue进行原核表达,纯化后利用ELISA检测单链抗体的亲和力。结果显示含不同长度连接肽的单链抗体均能在大肠杆菌中可溶性表达,单链抗体结合力与连接肽长度的关系为(G_4S)_3〉G_4S〉(G_4S)_2,即单链抗体H2与其抗原伏马菌素的亲和力最高,其次为H2-5和H2-10抗体。因此,含有较长连接肽的单链抗体能够自身折叠形成有活性的蛋白,并表现出与小分子半抗原更强的结合能力。 展开更多
关键词 单链抗体 连接 小分子半抗原 结合力
密码子优化的(GGGGS)_3对重组人血清白蛋白在毕赤酵母中表达的影响 预览 被引量:1
8
作者 王参军 陈克平 +2 位作者 芦慧霞 邹文艺 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期17-19,29共4页
为探讨密码子优化的(GGGGS)_3对重组人血清白蛋白在毕赤酵母中表达的影响,分别用PCR的方法扩增出hsa和hsa-(ggggs)_3,经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切后与BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切的pPIC9K连接,构建成pPIC9KHSA与pPIC9K-HSA-(GGGGS)_3重组分泌... 为探讨密码子优化的(GGGGS)_3对重组人血清白蛋白在毕赤酵母中表达的影响,分别用PCR的方法扩增出hsa和hsa-(ggggs)_3,经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切后与BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切的pPIC9K连接,构建成pPIC9KHSA与pPIC9K-HSA-(GGGGS)_3重组分泌表达载体,转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α后,表达载体分别用SalⅠ线性化后电击转化至毕赤酵母SMD1168感受态细胞中,将阳性转化子进行PCR鉴定并用甲醇诱导表达。SDS-PAGE分析表明HSA-(GGGGS)_3比HSA的表达量高约170.57%,Western Blotting表明HSA与HSA-(GGGGS)_3均具有与人血清白蛋白相同的免疫原性。密码子优化的(GGGGS)_3可以提高重组人血清白蛋白在毕赤酵母中的表达。 展开更多
关键词 连接 人血清白蛋白 毕赤酵母
在线阅读 下载PDF
连接肽的设计及在融合蛋白中的应用 预览 被引量:4
9
作者 李剑芳 王春娟 邬敏辰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1121-1127,共7页
利用基因工程技术改造酶分子已成为现代分子酶工程的一个研究热点,其中基于融合蛋白设计的融合酶技术已逐渐应用于多功能酶的构建中,表现出了重要的理论与应用研究价值。作为重组融合蛋白不可缺少的部分,连接肽已在融合蛋白的稳定性、... 利用基因工程技术改造酶分子已成为现代分子酶工程的一个研究热点,其中基于融合蛋白设计的融合酶技术已逐渐应用于多功能酶的构建中,表现出了重要的理论与应用研究价值。作为重组融合蛋白不可缺少的部分,连接肽已在融合蛋白的稳定性、生物活性等方面表现出重要的作用。根据近年来的最新研究成果,作者总结了自然界中天然连接肽的性质,并对糖苷水解酶融合酶中连接肽的分类及其对融合酶的作用作了归纳和总结,并对连接肽设计的关键问题进行了探讨和展望。 展开更多
关键词 糖苷水解酶 融合蛋白 连接
在线阅读 下载PDF
一种人源性穿膜肽融合蛋白中连接肽的引入及其在HeLa细胞中的穿膜活性 预览
10
作者 李堰忠 杨旭中 +2 位作者 吕强 王富军 赵健 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1272-1278,共7页
p14ARF( alternate reading frame )是一种人肿瘤抑制因子,其N端1-22位氨基酸可以携带药物蛋白进入细胞发挥药理作用,记为ARF。在示踪蛋白EGFP和ARF间引入了二肽( linker 2)、柔性七肽( linker 7F)和刚性七肽(linker 7S),研... p14ARF( alternate reading frame )是一种人肿瘤抑制因子,其N端1-22位氨基酸可以携带药物蛋白进入细胞发挥药理作用,记为ARF。在示踪蛋白EGFP和ARF间引入了二肽( linker 2)、柔性七肽( linker 7F)和刚性七肽(linker 7S),研究其对融合蛋白EGFP-ARF穿膜活性的影响。实验结果显示引入七肽(linker 7)的融合蛋白,其荧光强度高于linker 2的融合蛋白。激光共聚焦观察表明,引入linker 7F的融合蛋白比引入linker 2的融合蛋白的穿膜效率高5倍左右,比引入linker 7S的融合蛋白高3.8倍左右。结果表明连接肽的形式对融合蛋白的结构和功能都有显著影响,为ARF作为药物运输载体的研究提供了依据。 展开更多
关键词 连接 ARF 融合蛋白 穿膜 重组表达
在线阅读 下载PDF
连接肽对融合蛋白ELP[Ⅰ]30-1inker-eGFP相变的影响 预览 被引量:1
11
作者 张立超 李军明 +2 位作者 葛高顺 孔令岭 胡学军 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期401-405,共5页
研究G4S和PolyN连接肽对融合蛋白ELP[Ⅰ]30-linker-eGFP相变的影响.将编码两种不同连接肽G4S和PolyN的绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,eGFP)基因克隆到pET28-ELP[Ⅰ]30表达载体中,在宿主菌EcoliBLR(DE3)中经IPTG... 研究G4S和PolyN连接肽对融合蛋白ELP[Ⅰ]30-linker-eGFP相变的影响.将编码两种不同连接肽G4S和PolyN的绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,eGFP)基因克隆到pET28-ELP[Ⅰ]30表达载体中,在宿主菌EcoliBLR(DE3)中经IPTG诱导表达ELP[Ⅰ]30-linker—eGFP,通过可逆相变循环(inversetransitioncycling,ITC)及镍柱亲和层析纯化ELP[Ⅰ]30-linker—eGFP蛋白.结果显示,成功构建、表达具有活性的两种连接肽的融合蛋白ELP[Ⅰ]30-linker—eGFP,连接肽G4S使融合蛋白产生不可逆相变,而Poly N不影响融合蛋白可逆相变,该研究对类弹性蛋白标签的应用具有指导意义. 展开更多
关键词 连接 融合蛋白 纯化标签 类弹性蛋白 绿色荧光蛋白
在线阅读 免费下载
蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化 预览 被引量:1
12
作者 杨辉 吴崇超 +5 位作者 陈佳 陈伟 杨依丽 罗勇 姚冬生 熊盛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期 116-120,共5页
蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达... 蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。SUMO-L5-CVN在大肠杆菌BL21中呈可溶性表达;通过表达条件优化,以0.5 mmol/L IPTG在20℃诱导24 h是最佳的诱导表达条件;SUMO-L5-CVN表达量占菌体总蛋白的30%;经Ni-NTA亲和层析获得融合蛋白SUMO-L5-CVN,SUMO蛋白酶酶切,以及进一步从Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白L5-CVN蛋白纯度〉98%。结果表明,低浓度的L5-CVN与流感病毒表面糖蛋白gp120就有较高的亲和力。 展开更多
关键词 蓝藻抗病毒蛋白-N 连接 发酵 纯化
在线阅读 免费下载
融合酶的设计和应用研究进展 被引量:6
13
作者 黄子亮 张翀 +2 位作者 吴希 苏楠 邢新会 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期 393-409,共17页
酶的分子改造和重新设计是解决酶催化工业应用瓶颈的重要途径。基于融合蛋白设计的融合酶技术是分子酶工程的一个研究热点,已逐渐应用于多功能酶和酶靠近效应的构建与控制研究中,显示出重要的理论和应用研究价值。文中对近年来融合酶的... 酶的分子改造和重新设计是解决酶催化工业应用瓶颈的重要途径。基于融合蛋白设计的融合酶技术是分子酶工程的一个研究热点,已逐渐应用于多功能酶和酶靠近效应的构建与控制研究中,显示出重要的理论和应用研究价值。文中对近年来融合酶的分子设计策略和应用研究的进展进行了综述。首先介绍了融合酶的概念和特点,并对最近研究中出现的融合酶构建策略进行了归纳总结,重点阐述了不同种类连接肽对融合酶的影响及其可能机理。同时,对目前融合酶的应用研究进行了归纳和讨论。最后,结合本实验室的研究,指出了融合酶领域的关键问题并对其发展方向进行了探讨和展望。 展开更多
关键词 酶工程 空间靠近效应 融合酶 融合蛋白 连接
新型四价抗体的优势与基因工程制备方法
14
作者 周匡果(综述) 涂振霄(综述) +2 位作者 刘颖(综述) 雷萍(审阅) 沈关心(审阅) 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第6期540-544,共5页
近年来基因工程抗体技术发展迅速,将单价小分子抗体改建为双价或多价,成为抗体工程中活跃的领域之一.四价抗体相比于单价或双价抗体在增加抗体亲和力、降低解离率、延长半寿期等药代动力学,受体交联效应等方面具有优势.因此,具有较好的... 近年来基因工程抗体技术发展迅速,将单价小分子抗体改建为双价或多价,成为抗体工程中活跃的领域之一.四价抗体相比于单价或双价抗体在增加抗体亲和力、降低解离率、延长半寿期等药代动力学,受体交联效应等方面具有优势.因此,具有较好的研究和临床应用前景.制备四价抗体的方法主要有化学偶联法和基因工程法,后者主要包括:①通过改变单链抗体VH和VL之间的连接肽的长短对单链抗体之间的聚合作用产生影响;②利用连接肽将scFv进行连接而形成多价抗体分子;③通过寡聚化的结构域,如亮氨酸拉链结构、链亲和素、人p53四聚化功能域、子宫球蛋白等介导多价抗体的形成. 展开更多
关键词 四价抗体 制备 连接 寡聚化
抗乙型肝炎表面抗原单链抗体(ScFv)的原核表达、纯化及鉴定 预览
15
作者 雷清 刘鹏 +1 位作者 郭敏 蒋琳 《微生物学免疫学进展》 2008年第4期 36-39,共4页
从抗HBsAg鼠单抗的杂交瘤细胞提取RNA,经反转录得到cDNA,进一步扩增得到鼠重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),按VH-linker-VL的结构将VH、VL基因拼接成单链抗体(scn)基因;经测序正确后进一步构建了表达重组体p26HBSc并... 从抗HBsAg鼠单抗的杂交瘤细胞提取RNA,经反转录得到cDNA,进一步扩增得到鼠重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),按VH-linker-VL的结构将VH、VL基因拼接成单链抗体(scn)基因;经测序正确后进一步构建了表达重组体p26HBSc并在E.coli中表达,得到一约30kD的外源蛋白;纯化后经ELISA检测与HBsAg有较高的亲和力活性,为下一步的人源化改造奠定了基础。 展开更多
关键词 单链抗体 连接 基因表达
在线阅读 下载PDF
融合蛋白连接肽的研究进展 预览 被引量:11
16
作者 闫璐颖 陈建华 张新国 《生物技术》 CAS CSCD 2008年第3期 92-94,共3页
融合蛋白是将两个或多个基因的编码区首尾连接,由同一调控序列控制构成的基因表达产物。对于有连接肽的融合蛋白,连接肽的设计在其中起着决定性的作用。该文从连接肽的设计、构建、分类、功能以及用连接肽构建融合蛋白时出现的问题和... 融合蛋白是将两个或多个基因的编码区首尾连接,由同一调控序列控制构成的基因表达产物。对于有连接肽的融合蛋白,连接肽的设计在其中起着决定性的作用。该文从连接肽的设计、构建、分类、功能以及用连接肽构建融合蛋白时出现的问题和问题的解决等几个方面作了综述。 展开更多
关键词 融合蛋白 连接 构建
在线阅读 下载PDF
单链双价抗体连接肽的优化设计 预览 被引量:1
17
作者 张建华 尚志刚 张晓晖 《数理医药学杂志》 2008年第5期 602-605,共4页
以单链抗体为元件构建的基因工程双价抗体分子近年来在肿瘤的治疗方面显示出良好的应用前景,但双价单链抗体分子的亲和性及抗肿瘤活性分别较衍生因子的功能及活性有所变化。合适的连接肽可以赋予双价单链抗体更适于临床应用需求的生物... 以单链抗体为元件构建的基因工程双价抗体分子近年来在肿瘤的治疗方面显示出良好的应用前景,但双价单链抗体分子的亲和性及抗肿瘤活性分别较衍生因子的功能及活性有所变化。合适的连接肽可以赋予双价单链抗体更适于临床应用需求的生物学活性,如何选取或设计连接肽是构建单链双特异性抗体的关键步骤。在分子量子化的模型基础上,运用同源模建的方法建立单链抗体分子间结构与功能的关系模型,采用改进的遗传算法把连接肽的设计看作为方程的求解问题,改善算法的搜索能力、搜索效率和收敛性能,设计全局最优的连接肽。双价单链抗体连接肽的设计是在充分利用生物信息学的基础上,探索具有不同功能域的复合蛋白质以及连接肽的设计,为恶性肿瘤的靶向多功能基因治疗提供科学依据,并为寻找有效的治疗因子提供研究方向。 展开更多
关键词 同源模建 改进遗传算法 单链双特异性抗体 连接
在线阅读 下载PDF
人/鲑降钙素嵌合基因在大肠杆菌中的串联表达 预览 被引量:5
18
作者 周一江 张学成 +1 位作者 王玉梅 臧晓南 《中国海洋大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期 103-106,共4页
人工合成人/鲑降钙素嵌合基因。用同尾酶法构建多拷贝串联基因表达质粒pLEX—nCT(n=1,2,3,4,5)(单个降钙素基因之间用一段编码柔性连接肽的DNA连接),并在大肠杆菌G1724中表达。Western blotting结果显示,串联多肽具有人源降钙... 人工合成人/鲑降钙素嵌合基因。用同尾酶法构建多拷贝串联基因表达质粒pLEX—nCT(n=1,2,3,4,5)(单个降钙素基因之间用一段编码柔性连接肽的DNA连接),并在大肠杆菌G1724中表达。Western blotting结果显示,串联多肽具有人源降钙素的抗原性。 展开更多
关键词 嵌合基因 降钙索 串联表达 连接 抗原性
在线阅读 下载PDF
热休克蛋白HSP65嵌合表达系统的构建和表达 预览 被引量:2
19
作者 雷清 蒋琳 +1 位作者 马超 刘鹏 《微生物学免疫学进展》 2007年第3期 24-26,共3页
设计一条含(GlySer)3连接肽的引物,从BCG经PCR得到HSP65-Linker的基因片段.将该基因定向克隆入原核表达载体pET42b(+),用大肠杆菌BL21(DE3)转化,构建了pET42-LHSP65的嵌合表达载体.DNA测序正确后经IPTG诱导表达,得到可溶性目的蛋白,West... 设计一条含(GlySer)3连接肽的引物,从BCG经PCR得到HSP65-Linker的基因片段.将该基因定向克隆入原核表达载体pET42b(+),用大肠杆菌BL21(DE3)转化,构建了pET42-LHSP65的嵌合表达载体.DNA测序正确后经IPTG诱导表达,得到可溶性目的蛋白,Western-blot也证实了此重组蛋白可与抗HSP65发生特异性免疫反应.此重组体的构建为进一步探索HSP65的免疫佐剂功效奠定了基础. 展开更多
关键词 HSP65 连接 基因表达
在线阅读 下载PDF
不同连接肽的双价单链抗体基因的构建及表达 预览 被引量:4
20
作者 严丹丹 方瑾 宋今丹 《细胞生物学杂志》 CSCD 2007年第2期272-276,共5页
采用基因重组技术分别借助不同长度的连接肽[G4S和(G4S)3],将两个相同的抗人大肠癌单链抗体基因ND—1scFv共价连接,构建表达载体pET-28a(+)ND—1sc(Fv)2,并在大肠杆菌BL21中表达ND—1sc(Fv)2的融合蛋白。应用Ni^2+亲和层... 采用基因重组技术分别借助不同长度的连接肽[G4S和(G4S)3],将两个相同的抗人大肠癌单链抗体基因ND—1scFv共价连接,构建表达载体pET-28a(+)ND—1sc(Fv)2,并在大肠杆菌BL21中表达ND—1sc(Fv)2的融合蛋白。应用Ni^2+亲和层析方法对表达产物进行纯化,SDS—PAGE、免疫荧光法(IFA)和ELISA对纯化后的蛋白质进行纯度和免疫活性分析。结果表明成功构建了表达载体pET-28a(+)ND—1sc(Fv)2,并在大肠杆菌中获得高效表达,其表达产物以不溶性包涵体形式存在。纯化后ND—1sc(Fv)12-5、ND—1sc(Fv)2-15的蛋白质纯度分别为90%和86%。IFA及ELISA结果表明,二者均保留了亲本抗体的免疫活性,对表达在人大肠癌细胞上的肿瘤相关抗原LEA具有特异结合活性,其免疫活性均明显高于ND—1scFv,其中ND—1sc(Fv)2-15的免疫活性更接近于亲本单抗ND—1,该抗体有望成为大肠癌临床导向诊断和治疗的理想载体。 展开更多
关键词 双价单链抗体 ND-1 连接 大肠癌 表达
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 3 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈