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转AM79-EPSPS基因抗草甘膦大豆遗传稳定性分析
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作者 翁嘉慧 楼亿圆 +5 位作者 徐京 周骏 蒋红叶 赵振宁 何军光 刘永立 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1550-1559,共10页
培育耐除草剂转基因大豆(Glycine max)新品种,是我国实现大豆供需平衡的有效手段。转基因作物新品种在商品化之前,必需进行安全评价,其中遗传稳定性是重要评价因素之一。我国科研人员已克隆获得具有国家自主知识产权的新型抗草甘膦基因A... 培育耐除草剂转基因大豆(Glycine max)新品种,是我国实现大豆供需平衡的有效手段。转基因作物新品种在商品化之前,必需进行安全评价,其中遗传稳定性是重要评价因素之一。我国科研人员已克隆获得具有国家自主知识产权的新型抗草甘膦基因AM79-EPSPS,但目前尚未有该基因在转基因大豆中应用的报道。本研究以已获得的2个转AM79-EPSPS基因大豆株系A6和A8的T1和T2代材料为研究对象,分别从转化体DNA水平、转录水平、翻译水平以及转化体对草甘膦耐受性等方面进行了遗传稳定性分析。实验结果表明,主要功能元件在不同世代均插入完整;目的基因AM79-EPSPS在不同世代均以单拷贝形式插入,且世代间整合情况一致;目的基因AM79-EPSPS在不同世代、不同组织的转录和翻译水平均稳定表达;转化体对除草剂草甘膦的耐受性在世代间保持稳定。上述结果表明2个转化体可作为推广应用的材料,AM79-EPSPS基因可以作为培育商业化抗草甘膦大豆的候选基因。 展开更多
关键词 AM79-EPSPS基因 草甘膦抗性 大豆 遗传稳定性
鸽副黏病毒灭活疫苗候选株aYQ的生物学特性研究 预览
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作者 赵文奇 杨志远 +14 位作者 林健 陈光华 杨龙峰 赵际成 段会娟 丁国杰 马会籽 王小蕾 刘立新 田方杰 潘洁 程水生 孙晔 蒋桃珍 刘月焕 《动物医学进展》 北大核心 2019年第1期36-41,共6页
评价鸽副黏病毒(PPMV)致弱毒株aYQ的生物学特性,为研制鸽副黏病毒灭活疫苗奠定基础。将PPMVaYQ株经SPF鸡胚连续传代,建立种子批。测定各代次毒种的血凝效价(HA)和鸡胚半数感染量(EID50),并进行纯净性检验;测定毒种鸡胚最小致死量的平均... 评价鸽副黏病毒(PPMV)致弱毒株aYQ的生物学特性,为研制鸽副黏病毒灭活疫苗奠定基础。将PPMVaYQ株经SPF鸡胚连续传代,建立种子批。测定各代次毒种的血凝效价(HA)和鸡胚半数感染量(EID50),并进行纯净性检验;测定毒种鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT)、1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI);测定毒种对鸡胚和鸽的毒力、遗传稳定性和抗原相关性。PPMVaYQ株经SPF鸡胚传代至F10,HA效价为1∶256~1∶512,病毒含量为10^-8.5EID50/0.1mL~10-^8.9EID50/0.1mL,毒种各代次均无细菌、霉菌、支原体以及外源病毒污染;PPMVaYQ株的ICPI和IVPI结果均为0,MDT测定结果大于120h;以10^3倍稀释的PPMVaYQ株病毒液接种10日龄SPF鸡胚96h无死亡,无眼观病变。以10^6EID50/羽的剂量人工感染鸽,未见异常症状;PPMVaYQ株各代次F基因均未发生基因突变,F蛋白裂解位点氨基酸序列均为-112GRQGRL117-;交叉血凝抑制试验和交叉中和试验结果表明,PPMVaYQ株与NDVLaSota株间存在明显的抗原性差异。鸽副黏病毒弱毒株aYQ能够在SPF鸡胚上稳定传代,且生物学特性稳定,免疫原性良好,可以作为鸽源副黏病毒灭活疫苗的毒种。 展开更多
关键词 鸽副黏病毒 疫苗 毒种 生物学特性 遗传稳定性
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崂山奶山羊骨髓间充质干细胞永生化细胞系的建立 预览
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作者 程明 刘开东 +5 位作者 张宝旬 孙友德 李培培 杨培培 王建华 刘宗正 《畜牧与饲料科学》 2019年第1期11-14,共4页
为建立崂山奶山羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)永生化细胞系,将已构建的pcDNA3.1-EGFP-TERT转入崂山奶山羊BMSCs中,利用含G418的培养基筛选获得稳定转染的TERT-BMSCs;通过多次传代,测定其生长曲线;选取高代次TERT-BMSCs的分裂中期相的细胞,... 为建立崂山奶山羊骨髓间充质干细胞(BMSCs)永生化细胞系,将已构建的pcDNA3.1-EGFP-TERT转入崂山奶山羊BMSCs中,利用含G418的培养基筛选获得稳定转染的TERT-BMSCs;通过多次传代,测定其生长曲线;选取高代次TERT-BMSCs的分裂中期相的细胞,检测其染色体及核型的稳定性。结果表明,转入TERT基因的崂山奶山羊BMSCs能够稳定表达该基因,其生长曲线呈“S”形;在多次传代后,P40代细胞的核型正常率仍能达到88.24%。综上提示,转染得到的TERT-BMSCs具有良好的生长状态,其细胞生长稳定,符合永生化细胞特征,为间充质干细胞应用于组织修复及基因工程种子细胞的制备提供了理论基础。 展开更多
关键词 崂山奶山羊 骨髓间充质干细胞 永生化 TERT基因 遗传稳定性
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交趾黄檀种源苗期生长性状地理变异和遗传稳定性分析
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作者 麦宝莹 洪舟 +3 位作者 徐大平 罗明道 张宁南 黄锡钊 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期168-174,共7页
【目的】交趾黄檀(Dalbergia cochinchinensis)是珍稀红木树种之一,其木材及木制品极为珍贵,亦具有重要的药用价值。为了研究交趾黄檀不同种源的苗木生长差异、种源与环境互作效应、地理变异模式以及遗传稳定性,进行不同种源交趾黄檀苗... 【目的】交趾黄檀(Dalbergia cochinchinensis)是珍稀红木树种之一,其木材及木制品极为珍贵,亦具有重要的药用价值。为了研究交趾黄檀不同种源的苗木生长差异、种源与环境互作效应、地理变异模式以及遗传稳定性,进行不同种源交趾黄檀苗期生长评价,为交趾黄檀的幼林期试验提供科学指导和理论支持,也为今后进一步开展交趾黄檀优良种源选择和育苗工作奠定基础。【方法】将引种于泰国、柬埔寨交趾黄檀10个种源的种子分别在海南乐东、广东广州和福建漳州进行多点育苗试验,并对1年生的苗木开展苗期生长性状(苗高和地径)测定与分析。用ASReml-R 3.0对种源与试验点进行方差分析,探讨种源间变异水平以及遗传稳定性;通过种源生长量均值与种子引种地的地理气候因子的简单相关分析揭示交趾黄檀苗期生长的地理变异模式;应用R语言程序(GGEBiplots)双标图进行各种源表现型及试验点的代表性分析,并采用类平均法进行基于表型的种源系统聚类分析。【结果】①不同种源交趾黄檀在3个试验点中表现一致,平均参试苗木高生长表现最好的是泰国北柳(T-CS)种源,平均地径生长表现最好的是泰国呵叻(T-NR)种源,来自柬埔寨磅湛(C-KC)种源的苗木生长表现最差。②交趾黄檀种源间苗期生长性状具有显著差异,各性状种源×地点具有极显著效应,表明种源、环境、种源×环境互作等效应对交趾黄檀苗木生长性状影响极其显著。③通过不同种源苗木多点生长表现与引种地地理气候因子的相关分析发现,10个种源交趾黄檀的生长性状在地理空间上存在一定程度的连续变异。生长性状的地理变异存在明显的气候生态学特征,主要受经度和年降雨量控制。④通过各种源在3个试验点的GGE双标图分析,泰国北柳(T-CS)种源和柬埔寨暹粒(C-SR)种源在3个试验点表现较优。柬埔寨暹粒(C-SR 展开更多
关键词 交趾黄檀 种源 苗期性状 地理变异 遗传稳定性
Walvax-2细胞基质培养甲型肝炎病毒YN5株的遗传稳定性分析
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作者 杨燕羽 陆伟 +4 位作者 刘馨 张胜祥 林建祥 吴凯 马波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第5期503-507,511共6页
目的分析Walvax-2细胞基质培养甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)YN5株的遗传稳定性。方法将HAV YN5株在Walvax-2细胞中于35℃连续适应培养,取P24、P27、P29、P35和P40代病毒,提取RNA,以其为模板进行RT-PCR扩增,并测序。采用生物信... 目的分析Walvax-2细胞基质培养甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)YN5株的遗传稳定性。方法将HAV YN5株在Walvax-2细胞中于35℃连续适应培养,取P24、P27、P29、P35和P40代病毒,提取RNA,以其为模板进行RT-PCR扩增,并测序。采用生物信息学软件DNAMAN、Vector NTI、BioEdit等进行序列分析,与GenBank中登录的标准株HM175(M14707)进行同源性比较。结果 5代病毒全基因组间的核苷酸序列同源性为100%。与标准株HM175比较,5代病毒基因组5′-NCR(101~200 bp)片段的124和152位发生突变,且存在134~137 bp缺失;2A(3 012~3 210 bp)片段的3 025和3 196位发生突变,其中,3 025位点A变为T,与标准株HM175 VP1/2A(3 024~3 191 bp)的差异小于7.5%,基因亚型与其相同,均为IB型;2C(3 986~4 960 bp)片段的4 043、4 087、4 185、4 222、4 563、4 802、4 880位点发生突变。5代病毒与标准株HM175氨基酸序列同源性为99.4%,共有29个氨基酸发生突变,主要抗原位点与标准株HM175完全一致。结论 Walvax-2细胞基质培养HAV YN5株可保持良好的遗传稳定性,有望用于甲肝疫苗的研发及生产。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒YN5株 Walvax-2细胞 遗传稳定性
SKLZΔspiC鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株的遗传稳定性分析
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作者 王耀楠 王虎强 +4 位作者 蔡媛 张健 潘志明 焦新安 耿士忠 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期129-133,共5页
目的分析鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspiC的遗传稳定性。方法将疫苗株SKLZΔspiC与其亲体株S06004进行体外混合培养、体内共同感染,同时将重组质粒pMD20-spiC电转化导入疫苗株SKLZΔspiC,连续传至20代后,进行PCR及测序鉴定。结... 目的分析鸡白痢沙门菌减毒活疫苗候选株SKLZΔspiC的遗传稳定性。方法将疫苗株SKLZΔspiC与其亲体株S06004进行体外混合培养、体内共同感染,同时将重组质粒pMD20-spiC电转化导入疫苗株SKLZΔspiC,连续传至20代后,进行PCR及测序鉴定。结果在体外混合培养、体内混合感染条件下,疫苗株SKLZΔspiC均无法从野生株S06004获得靶基因spiC;疫苗株SKLZΔspiC无法从外源质粒获得靶基因spiC。结论疫苗株SKLZΔspiC具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 鸡白痢沙门菌 减毒活疫苗 遗传稳定性
樱桃缓慢生长保存及遗传稳定性检测 预览
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作者 宋常美 李庆宏 《种子》 北大核心 2019年第9期67-72,84共7页
探讨矿质元素、温度、PVP和ABA对赫章樱桃缓慢生长保存的影响。结果显示,1/2 MS、1/4 MS比MS更利于保存;25 ℃比6 ℃更适合;PVP可能提高再生率;蔗糖是较好的渗透调节剂,随着浓度从2%到6%,成活率和再生率无明显差异,增殖率提高,而组培苗... 探讨矿质元素、温度、PVP和ABA对赫章樱桃缓慢生长保存的影响。结果显示,1/2 MS、1/4 MS比MS更利于保存;25 ℃比6 ℃更适合;PVP可能提高再生率;蔗糖是较好的渗透调节剂,随着浓度从2%到6%,成活率和再生率无明显差异,增殖率提高,而组培苗的生长势越来越差。有趣的是,外源ABA在降低成活率、增殖率和再生率的同时却使植株增高。综上,樱桃缓慢生长保存较适合的培养基为1/2 MS+0.5 mg ·L^-1 ABA+0.1 mg ·L^-1 IBA+400 mg ·L ^-1 PVP+2%蔗糖+ 0.7%琼脂,25 ℃下可保存8个月,且13条ISSR引物对保存前后的单芽姊妹系植株进行遗传稳定性检测,未发现变异条带。 展开更多
关键词 樱桃 离体保存 缓慢生长 遗传稳定性
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一株Vero细胞适应的柯萨奇病毒A组10型毒株遗传稳定性研究
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作者 张捷 刘红波 +5 位作者 丛山日 张名 张海浩 孙浩 杨昭庆 马绍辉 《中国病毒病杂志》 CAS 2019年第3期202-208,共7页
目的探讨一株手足口病相关柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)毒株R6-19/XY/CHN/2017在Vero细胞中的适应性,及其连续传代的遗传稳定性。方法对R6-19/XY/CHN/2017毒株在Vero细胞上进行连续适应传代培养后,对适应前病毒及适应... 目的探讨一株手足口病相关柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10,CV-A10)毒株R6-19/XY/CHN/2017在Vero细胞中的适应性,及其连续传代的遗传稳定性。方法对R6-19/XY/CHN/2017毒株在Vero细胞上进行连续适应传代培养后,对适应前病毒及适应后的第1、5、10、15代次毒株的致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、病毒感染性滴度、全基因组核苷酸序列及氨基酸序列等进行比较分析。结果该毒株能较好地在Vero细胞上适应,不同代次的感染性滴度在7.85 lgCCID50/ml~8.17 lgCCID50/ml。与适应前毒株比较,其5′UTR及编码区共有7个碱基发生改变,VP4和VP1编码区分别有1、3个氨基酸发生改变;而适应后病毒各代次在CPE、病毒感染力特点等无明显区别,且各代次全基因核酸序列中,只有第15代的VP1蛋白编码区发生一个碱基突变。结论 CV-A10株R6-19/XY/CHN/2017能在Vero细胞较好地适应,并具有良好的遗传稳定性,这将为后续CV-A10疫苗的研发和相关机制研究提供参考。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A组10型 Vero细胞适应病毒株 连续传代 遗传稳定性
B型流感病毒在MDCK细胞上的遗传稳定性
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作者 刘飞雪 单亚明 +1 位作者 赵大鹏 张雪梅 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期609-613,共5页
目的研究流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK细胞上连续传代的遗传稳定性。方法将SPF级鸡胚制备的流感病毒NYMC BX-51B尿囊液毒株接种至MDCK细胞上,连续传代培养至10代(M1~M10),参照《中国药典》三部(2015版)毒种检定方法进行支原体和无菌检... 目的研究流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK细胞上连续传代的遗传稳定性。方法将SPF级鸡胚制备的流感病毒NYMC BX-51B尿囊液毒株接种至MDCK细胞上,连续传代培养至10代(M1~M10),参照《中国药典》三部(2015版)毒种检定方法进行支原体和无菌检查、外源因子检查、鉴别试验,并进行血凝试验和病毒滴度检测。提取尿囊液、M1代、M10代病毒总RNA,RT-PCR法扩增血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因,并进行测序。结果流感病毒NYMC BX-51B株在MDCK细胞上连续传代培养至M10代,血凝滴度最高可达1∶256,病毒滴度最高可达6. 5 LgCCID50/mL;鉴别试验、无菌检查、支原体检查、外源因子检查结果均符合药典要求。尿囊液、M1代、M10代病毒的HA和NA基因的氨基酸序列与GenBank中登录的流感病毒NYMC BX-51B的HA和NA基因比对结果完全一致。结论 NYMC BX-51B型流感病毒在MDCK细胞基质上连续传代培养至M10代,遗传稳定性良好,为MDCK细胞基质流感疫苗的研究和生产奠定了基础。 展开更多
关键词 B型流感病毒 MDCK细胞 遗传稳定性
产青蒿酸酿酒酵母工程菌的抗性筛选
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作者 陈伟 于文文 +2 位作者 陈亚军 滕云 杨胜利 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期524-529,共6页
本研究以产青蒿酸的酿酒酵母工程菌为出发菌株,通过3 种抗菌素(诺尔斯菌素、遗传霉素和潮霉素B)对出发菌株进行抗性筛选。研究表明,当诺尔斯菌素和潮霉素B 复合添加且添加浓度分别为150 和100 μg/ml 时,经抗性筛选获得的抗性菌株发酵... 本研究以产青蒿酸的酿酒酵母工程菌为出发菌株,通过3 种抗菌素(诺尔斯菌素、遗传霉素和潮霉素B)对出发菌株进行抗性筛选。研究表明,当诺尔斯菌素和潮霉素B 复合添加且添加浓度分别为150 和100 μg/ml 时,经抗性筛选获得的抗性菌株发酵产量高达(926.8±21.9)mg/L,与出发菌株的(785.3±18.1)mg/L 相比提高了18.0%。经多次传代验证,经抗性筛选获得的菌株遗传稳定性好,具备工业化生产价值。 展开更多
关键词 青蒿酸 酿酒酵母工程菌 抗性筛选 遗传稳定性
重离子诱变枯草芽孢杆菌高产复合酶菌种的筛选 预览
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作者 刘艳新 胡建华 +5 位作者 崔金娜 张耀胜 李永丽 石雅丽 朱明达 刘占英 《激光生物学报》 CAS 2019年第2期123-130,共8页
重离子诱变作为一种新型高效的辐照诱变方式,具有突变率高、突变谱广、突变体稳定等特点。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)因具有多种水解酶活力而广泛应用于工业生产,虽然经过多次诱变和改造,其酶活力不断提高,但其复合酶活力仍有提... 重离子诱变作为一种新型高效的辐照诱变方式,具有突变率高、突变谱广、突变体稳定等特点。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)因具有多种水解酶活力而广泛应用于工业生产,虽然经过多次诱变和改造,其酶活力不断提高,但其复合酶活力仍有提升空间。同时,多次同种诱变剂的使用容易导致菌种产生“抗性”,酶活力提高不大。为此,本研究首次利用不同剂量12C6+重离子束对枯草芽孢杆菌20076进行辐照诱变。诱变后通过透明圈初筛和酶活力验证复筛方式选育出一株复合酶活力较高的菌株B.subtilisKC-1。与原始菌株相比,其发酵液滤纸酶活力、内切葡聚糖酶活力、β-葡萄糖苷酶活力、外切葡聚糖酶活力、蛋白酶活力和α-淀粉酶活力分别提高了20.2%、79.6%、98.2%、7.4%、10.4%和27.4%。11代遗传稳定性实验结果表明该突变株具有良好的稳定性。 展开更多
关键词 枯草芽孢杆菌 复合酶 重离子诱变 遗传稳定性
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转TaDREB3a基因大豆材料抗旱性鉴定 预览
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作者 李冬梅 李悦 +1 位作者 李永光 李文滨 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期12-22,共11页
研究通过分子生物学方法证明TaDREB3a基因已整合至大豆基因组中,对T1~T3连续3代大豆植株作筛选鉴定并分析遗传稳定性,初步评价室内和田间抗旱表现。通过除草剂筛选获得T1代135株抗性植株,经PCR检测其中96株扩增出基因目的条带,获得15个... 研究通过分子生物学方法证明TaDREB3a基因已整合至大豆基因组中,对T1~T3连续3代大豆植株作筛选鉴定并分析遗传稳定性,初步评价室内和田间抗旱表现。通过除草剂筛选获得T1代135株抗性植株,经PCR检测其中96株扩增出基因目的条带,获得15个阳性TaDREB3a过表达大豆T1代株系;T2代转基因大豆株系经PEG模拟干旱处理和PCR鉴定获得阳性TaDREB3a过表达大豆T2代株系共10个;T3代转基因大豆株系经PCR鉴定、半定量PCR鉴定、Bar基因试纸条检测、Southern blot分析、Western blot分析,获得6个转基因阳性株系,证实TaDREB3a基因已整合于大豆基因组,可转录完整目的mRNA,其中4个株系检测到目的蛋白表达。盆栽干旱试验显示,TaDREB3a过表达可改善转基因大豆干旱条件下生长状况,转基因植株株高和荚数明显优于对照组植株;大田干旱试验结果显示,TaDREB3a过表达株系提高大豆抗旱性、改善干旱条件下地上形态,减少产量损失。 展开更多
关键词 大豆 转录因子 遗传稳定性 抗旱性评价
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吸附无细胞百白破疫苗生产用菌株主要保护性抗原基因序列的遗传稳定性及理化性质的稳定性
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作者 姬秋彦 顾琴 +7 位作者 梁疆莉 衡燮 马艳 高娜 戴永娟 宋绍辉 史荔 孙明波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期1-4,13共5页
目的对吸附无细胞百白破疫苗生产用菌株的主要保护性抗原基因序列遗传稳定性及理化性质稳定性进行研究,为无细胞百白破疫苗的安全性和有效性提供依据。方法分别从百日咳、白喉和破伤风疫苗生产用菌株的主代、工作代、疫苗生产用工作种子... 目的对吸附无细胞百白破疫苗生产用菌株的主要保护性抗原基因序列遗传稳定性及理化性质稳定性进行研究,为无细胞百白破疫苗的安全性和有效性提供依据。方法分别从百日咳、白喉和破伤风疫苗生产用菌株的主代、工作代、疫苗生产用工作种子(P1)、P2、P3(P1后再传2代)的菌体全基因组DNA中,扩增出百日咳主要抗原组分[百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、外膜蛋白(pertactin,PRN)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)]、白喉主要抗原[白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)原液]、破伤风主要抗原[破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)原液]的基因序列,克隆至p LB-Simple Vector,转化E.coli DH5α,测序后,运用DNAMAN软件与Gen Bank中登录的相应序列进行比对和分析。按照《中国药典》三部(2015版)相关方法,进行菌株理化性质稳定性检测。结果生产用百日咳、白喉、破伤风菌株的主代、工作代、P1、P2、P3的主要抗原基因序列大小及同源性与预期一致,理化性质稳定。结论吸附无细胞百白破疫苗生产用菌株的主要保护性抗原基因序列遗传稳定,理化性质稳定。 展开更多
关键词 百白破联合疫苗 抗原基因序列 理化性质 遗传稳定性
生物制品生产用细胞系遗传稳定性鉴定方法的研究进展
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作者 周美玲 刘晓志 +1 位作者 高健 王志明 《药物生物技术》 CAS 2018年第2期186-188,共3页
细胞系的遗传稳定性是一个关键的分析属性,需要证明细胞系随着时间变化的质量稳定性。在细胞传代过程中,基因组DNA中可能出现突变,从而可能最终导致疫苗产品的质量变化。在生物制品的整个生产过程中,都必须对主细胞库、扩展细胞库... 细胞系的遗传稳定性是一个关键的分析属性,需要证明细胞系随着时间变化的质量稳定性。在细胞传代过程中,基因组DNA中可能出现突变,从而可能最终导致疫苗产品的质量变化。在生物制品的整个生产过程中,都必须对主细胞库、扩展细胞库、补充细胞系或转基因重组细胞的性状和完整性进行检验。在过去的几年中,传统的遗传稳定性评价方法已被包括定量PCR、数字PCR和高通量测序等分子方法所取代。然而,这些基于分子方法学主要用于研究领域,而不符合GMP要求。文章简要地讨论了利用这些分子生物学方法对生产用细胞系遗传稳定性鉴定中的机遇和挑战。 展开更多
关键词 细胞系 遗传稳定性 转基因 疫苗 分子生物学方法
转Bt基因抗虫玉米HGK60的农艺性状分析 预览
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作者 梁海生 李梦桃 +3 位作者 李圣彦 汪海 张杰 郎志宏 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2018年第7期92-100,共9页
为了确定转Bt cry1Ah抗虫玉米HGK60的自交系及其杂交后代外源基因的遗传表达稳定性和农艺性状,通过实时荧光定量PCR和ELISA分析外源基因的遗传表达稳定性,通过室内外生测和田间性状考量分析农艺性状。荧光定量PCR结果表明Bt cry1Ah基因... 为了确定转Bt cry1Ah抗虫玉米HGK60的自交系及其杂交后代外源基因的遗传表达稳定性和农艺性状,通过实时荧光定量PCR和ELISA分析外源基因的遗传表达稳定性,通过室内外生测和田间性状考量分析农艺性状。荧光定量PCR结果表明Bt cry1Ah基因在玉米的不同组织中可以正常转录,但RNA表达水平存在一定的差异;ELISA结果表明在转基因植株的不同发育时期、不同器官中Cry1Ah的蛋白表达量顺序:雄穗〉叶片〉苞叶〉籽粒〉花丝〉穗轴。两地连续三代的田间及室内抗虫性检测结果表明HGK60抗虫玉米对亚洲玉米螟均表现出很好的抗性。性状考量结果表明HGK60抗虫玉米与受体材料对照比较,种子发芽率、生育期、穗行数、穗长、千粒重等农艺性状均无显著差异。通过多年多点田间试验和分子检测结果证明HGK60转基因抗虫玉米中外源基因稳定的遗传和表达,对亚洲玉米螟有很好的抗性,农艺性状与对照材料无显著差异。HGK60转基因抗虫玉米对亚洲玉米螟的良好抗性使其具有很好的产业化应用前景。 展开更多
关键词 cry1Ah 转基因玉米 遗传稳定性 农艺性状
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乙型脑炎病毒E264位点回复突变对疫苗安全性的影响 预览
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作者 刘莉娜 孙艳 +7 位作者 范凤鸣 杨欢 牟建超 陈智 刘俐 刘杰 曾献武 杨会强 《微生物学免疫学进展》 2018年第5期1-6,共6页
目的通过反向遗传学技术,构建乙型脑炎病毒减毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白(envelope protein,E蛋白)第264位氨基酸的回复突变株,并分析该位点突变对疫苗株小鼠毒力的影响。方法通过融合PCR扩增含基因组第1 769核苷酸位点回复突变的基因... 目的通过反向遗传学技术,构建乙型脑炎病毒减毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白(envelope protein,E蛋白)第264位氨基酸的回复突变株,并分析该位点突变对疫苗株小鼠毒力的影响。方法通过融合PCR扩增含基因组第1 769核苷酸位点回复突变的基因片段(T→G),替换SA14-14-2相应区域,使得编码E264位点的氨基酸位点由SA14-14-2的组氨酸(H)回复突变成强毒株SA14的谷氨酰胺(Q),将该回复突变株命名为r JEV264(H→Q),通过测定蚀斑大小和一步生长曲线,分析r JEV264的增殖特征;通过测定该突变株的昆明种小鼠脑内神经毒力、皮下感染入脑能力、腹腔感染入脑能力,分析E264位点回复突变后对小鼠毒力的影响。结果成功构建了回复突变株r JEV264,该突变株蚀斑大小与SA14-14-2相似,在PHK细胞上的增殖特征与SA14-14-2没有明显差异。r JEV264对小鼠有可检测的脑内神经毒力,毒力为5.51 lg PFU/LD50,但无论是皮下注射还是腹腔注射,都没有使小鼠发病。结论在分子水平证明了E264位点是影响乙脑减毒活疫苗安全性的关键位点之一,E264位点的回复突变增强了SA14-14-2的小鼠脑内神经毒力,但没有增强小鼠神经侵袭力。 展开更多
关键词 乙型脑炎减毒活疫苗 E264 回复突变 神经毒力 遗传稳定性
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岩白菜属植物规模化繁殖及遗传稳定性
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作者 吕秀立 张群 +3 位作者 陈香波 李圃锦 吴伟 关媛 《植物学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期643-652,共10页
根据市场需求和野生资源现存状况,筛选厚叶岩白菜(Bergenia crassifolia)、秦岭岩白菜(B.scopulosa)和岩白菜(B.purpurascens)进行规模化繁殖,并利用ISSR分子标记对组培苗进行遗传稳定性分析。以顶芽为外植体,筛选出MS+0.5mg... 根据市场需求和野生资源现存状况,筛选厚叶岩白菜(Bergenia crassifolia)、秦岭岩白菜(B.scopulosa)和岩白菜(B.purpurascens)进行规模化繁殖,并利用ISSR分子标记对组培苗进行遗传稳定性分析。以顶芽为外植体,筛选出MS+0.5mg·L-1 6-BA+0.01 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-1 VC为最佳增殖培养基,3种岩白菜属植物增殖系数分别为3.10、2.50和2.10;在1/2MS+1.0 mg·L-1 IBA+2.0 mg·L-1 VC培养基上,3种岩白菜属植物生根率分别为85%、80%和75%;在腐殖土:黄沙:珍珠岩=2:1:1(v/v/v)的混合基质中,移栽成活率分别为90%、85%和80%。规模化繁殖厚叶岩白菜20万株,秦岭岩白菜2万株,岩白菜1万株,目前还在持续生产中。ISSR分子标记结果表明,岩白菜后代遗传变异较大,秦岭岩白菜后代遗传变异较小,3个种在继代至第20代时出现了遗传变异;岩白菜和秦岭岩白菜的平均遗传变异率随继代次数的增加而增加,厚叶岩白菜的平均遗传变异率随继代次数的增加呈现不规律变化。 展开更多
关键词 厚叶岩白菜 秦岭岩白菜 岩白菜 遗传稳定性 规模化繁殖
重组人超氧化物岐化酶基因工程菌稳定性研究 预览
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作者 李敏 侯增淼 +4 位作者 李晓颖 何越 高恩 杨小琳 赵金礼 《科技创新与应用》 2018年第4期11-12,共2页
目的:研究重组人超氧化物岐化酶毕赤酵母基因工程菌的遗传稳定性.方法:基因工程菌连续传代50次,每10代取样保藏菌种,通过对菌株形态、菌落形态、质粒稳定性、目的基因的PCR鉴定,蛋白表达的SDS-PAGE鉴定来评价工程菌的稳定性.结果:在... 目的:研究重组人超氧化物岐化酶毕赤酵母基因工程菌的遗传稳定性.方法:基因工程菌连续传代50次,每10代取样保藏菌种,通过对菌株形态、菌落形态、质粒稳定性、目的基因的PCR鉴定,蛋白表达的SDS-PAGE鉴定来评价工程菌的稳定性.结果:在连续传代50代的过程中,菌株、落形态与原始工程菌相比无明显差异,质粒保有率高,PCR鉴定结果显示,重组载体携带目的基因传至50代未消失,SDS-PAGE结果表明,传至50代蛋白表达量无明显差异.结论:该工程菌有良好的遗传稳定性. 展开更多
关键词 重组人超氧化物岐化酶 毕赤酵母工程菌 遗传稳定性
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蛹虫草线粒体基因型快速检测体系的构建及线粒体遗传稳定性的初步研究
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作者 张姝 贺瑞红 +1 位作者 赵宇翔 张永杰 《菌物学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1035-1043,共9页
本研究的目的是建立一种快速确定蛹虫草菌株线粒体基因型的技术体系,并探讨蛹虫草连续传代培养后线粒体的遗传稳定性。从已知线粒体基因组的蛹虫草菌株中扩增线粒体内含子位点,将扩增产物混合并制作出两套DNA分子量标准,即在8个内含子... 本研究的目的是建立一种快速确定蛹虫草菌株线粒体基因型的技术体系,并探讨蛹虫草连续传代培养后线粒体的遗传稳定性。从已知线粒体基因组的蛹虫草菌株中扩增线粒体内含子位点,将扩增产物混合并制作出两套DNA分子量标准,即在8个内含子位点分别具有内含子的8条扩增条带组成的M-I和在6个内含子位点分别缺失内含子的6条扩增条带组成的M-II。从待检测的蛹虫草菌株(包括3个已知和2个未知线粒体基因组的菌株)中扩增同样的(假定)内含子位点,然后通过琼脂糖凝胶电泳分别与制备好的两个DNA分子量标准进行比较,能够准确判断蛹虫草菌株的线粒体内含子分布模式,从而验证了所构建的线粒体基因型快速检测体系的有效性。选择10个蛹虫草组织分离菌株和8个单分生孢子菌株连续转接培养15代,没有发现线粒体内含子分布模式发生改变。本研究成功构建了快速检测蛹虫草线粒体基因型的技术体系,并发现蛹虫草线粒体具有很高的遗传稳定性,为开展蛹虫草线粒体遗传规律的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蛹虫草 线粒体基因型 快速检测 内含子 遗传稳定性
胭脂花离体快繁及遗传稳定性检测
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作者 卢婉佩 游晓会 潘会堂 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第22期7443-7451,共9页
胭脂花(P. maximowiczii)是报春花属多年生草本植物,具有优良的观赏特性,建立一个稳定、高效的胭脂花离体培育技术体系,对胭脂花优良性状的保存与应用具有重要意义。本研究以经过低温处理的胭脂花未萌发芽作为外植体进行组培快繁技术... 胭脂花(P. maximowiczii)是报春花属多年生草本植物,具有优良的观赏特性,建立一个稳定、高效的胭脂花离体培育技术体系,对胭脂花优良性状的保存与应用具有重要意义。本研究以经过低温处理的胭脂花未萌发芽作为外植体进行组培快繁技术研究,并利用SSR和AFLP分子标记对再生植株进行遗传稳定性检测。结果表明,以经过低温60~90 d处理的胭脂花芽鳞片作为外植体接种,外植体的最佳表面消毒方法为75%酒精浸泡30 s后,再用3%次氯酸钠灭菌15 min;最适宜启动培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,芽诱导率达100%;最适宜继代增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,增殖系数达4.77。遗传稳定性检测发现,继代5代的胭脂花组培苗SSR和AFLP分子标记检测变异率分别是4.35%和3.80%,遗传一致性在95%以上。本研究结果表明,以经过低温处理的胭脂花未萌发芽为材料进行组培扩繁是保存胭脂花优异种质的理想途径。 展开更多
关键词 胭脂花 离体快繁 遗传稳定性 SSR AFLP
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