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高产酯化酶红曲菌的筛选、鉴定及酶学性质研究 预览
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作者 刘欢欢 杨帆 +4 位作者 李贞景 王旭锋 薛意斌 陈勉华 王昌禄 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第5期49-53,共5页
该研究从研究室保藏的10株红曲霉菌株中筛选高产酯化酶菌株,通过分子生物学技术对其进行鉴定,并对其最适培养基进行选择,最后对其所产的酯化酶酶学特性进行初步研究。结果表明,筛选获得一株高产酯化酶菌株X1,并被鉴定为血红红曲霉(Monas... 该研究从研究室保藏的10株红曲霉菌株中筛选高产酯化酶菌株,通过分子生物学技术对其进行鉴定,并对其最适培养基进行选择,最后对其所产的酯化酶酶学特性进行初步研究。结果表明,筛选获得一株高产酯化酶菌株X1,并被鉴定为血红红曲霉(Monascus sanguineus)。其最适产酶培养基为可溶性淀粉70 g/L,大豆蛋白胨20 g/L,NaNO3 2 g/L,KH2PO4 1 g/L,MgSO4·7H2O 2 g/L,初始pH值4.5。采用最优培养基,在30 ℃、180 r/min条件下发酵4 d,酯化酶活力为315.19 U/mL。该酯化酶的最适反应温度为40 ℃,在25~35 ℃范围内稳定性较好;最适pH值为5.0,在pH为6.0时稳定性较高;金属离子Ca2+可提高该酯化酶活性,Mg2+、Fe2+、Na+和Ag+则有不同程度抑制作用,且Ag+抑制作用最明显。 展开更多
关键词 红曲菌 酯化 筛选 鉴定 特性
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纤维素降解菌的筛选鉴定及其特性研究概况 预览
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作者 潘知乐 杨鸿 +3 位作者 时佳旭 李宇航 刘勇 刘霄 《环境科学与管理》 CAS 2019年第4期102-105,共4页
近年来秸秆焚烧已成为重大环境问题,而纤维素是秸秆的重要成分之一。本文通过对纤维素、纤维素酶、纤维素降解菌的选育、纤维素酶特性的研究进行综述。文献研究结果表明纤维素降解菌的研究一直在不断深入和完善,为秸秆的处理做出了较大... 近年来秸秆焚烧已成为重大环境问题,而纤维素是秸秆的重要成分之一。本文通过对纤维素、纤维素酶、纤维素降解菌的选育、纤维素酶特性的研究进行综述。文献研究结果表明纤维素降解菌的研究一直在不断深入和完善,为秸秆的处理做出了较大的贡献,但一般来说纤维素降解效果不太理想,其关键就在于纤维素降解菌自身的降解能力、产酶条件等尚需进一步优化。因此,在今后的研究中还需要关注以上几个问题,以期为中国的焚烧秸秆等影响环境质量等问题得到解决提供更多理论依据。 展开更多
关键词 纤维素降解 纤维素 选育 特性 优化
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用于高果糖浆制备的宛氏拟青霉嗜热嗜酸菊粉酶酶学特性分析 预览
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作者 高兆建 王先凤 +4 位作者 芦宁 李宝林 张抗震 许祥 陈雪莲 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期94-101,共8页
为实现酶法水解菊糖制备高果糖浆,从宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii)XS27发酵液中分离纯化菊粉酶,并对其酶学特性进行研究。发酵液经过硫酸铵盐析、透析、DEAE-Sepharose Fast Flow层析、Sephacry S-100分子筛过滤层析,得到电泳纯的... 为实现酶法水解菊糖制备高果糖浆,从宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii)XS27发酵液中分离纯化菊粉酶,并对其酶学特性进行研究。发酵液经过硫酸铵盐析、透析、DEAE-Sepharose Fast Flow层析、Sephacry S-100分子筛过滤层析,得到电泳纯的菊粉酶,比活力327.4U/mg,纯化倍数37.85。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳测得菊粉酶为单一亚基的酶蛋白,分子质量62.0kDa。菊粉酶能在较宽的pH值范围(3.5~6.5)内保持高活性,最适作用pH4.0。在温度40~65℃之间,酶活力较高,最适作用温度为60℃。薄层色谱分析显示菊粉酶水解菊糖最终产物为果糖。以菊糖为底物,酶的Km和Vmax分别为5.93μmol/L和75.18μmol/(L·min)。Mg^2+、Mn^2+、Ca^2+对酶有显著激活作用,Ba^2+、Ni^2+和Hg^2+对酶有一定抑制作用。β-巯基乙醇、二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸对酶有抑制作用,表面活性剂(十二烷基硫酸钠、Tween80和TritionX100)以及乙醇对酶活力没有影响。从宛氏拟青霉XS27发酵液中分离纯化的菊粉酶在强酸高热的环境下具有强活性和稳定性,对表面活性剂乙醇有高耐受性,适合于果葡糖浆的工业化生产。 展开更多
关键词 菊粉 高果糖浆 分离纯化 特性
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海栖热袍菌耐热葡聚糖内切酶EG12B基因的克隆表达及酶学特性分析 预览
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作者 王珊珊 任艳艳 +2 位作者 张涛 路宏朝 王令 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第4期20-26,共7页
为了促进家畜对纤维素饲料的消化吸收,提高饲料利用率,改善畜产品品质,本研究基于海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的基因组信息,通过筛选获得一段具有潜在耐热特性的葡聚糖内切酶基因(EG12B)序列。经删除预测信号肽和优化密码子偏好性... 为了促进家畜对纤维素饲料的消化吸收,提高饲料利用率,改善畜产品品质,本研究基于海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的基因组信息,通过筛选获得一段具有潜在耐热特性的葡聚糖内切酶基因(EG12B)序列。经删除预测信号肽和优化密码子偏好性,运用基因工程手段将成熟肽 EG12B 基因克隆至原核表达载体pET-28a中,成功构建了重组表达质粒pET28-EG12B。转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经重组菌发酵培养及IPTG诱导表达,实现了 EG12B 在大肠杆菌系统中的胞内高效表达,表达量约占全细胞总蛋白的36%。通过细胞超声破碎、镍离子亲和层析以及热处理分离纯化,获得了电泳纯重组酶EG12B。酶学特性分析表明,该重组酶的最适反应温度为90 ℃,最适反应pH为5.2,在70 ℃下保温1 h,酶活力基本维持不变。表明葡聚糖内切酶EG12B具有优越的耐热性和良好的热稳定性,为进一步作为饲料添加剂用于纤维素饲料关键技术的开发和畜产品品质的提升奠定了理论基础。 展开更多
关键词 海栖热袍菌 葡聚糖内切 克隆表达 特性 饲料添加剂
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Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶的酶学特性及3-氰基吡啶调控机理的研究 预览
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作者 郭静静 郭磊磊 +1 位作者 赵云岫 戴亦军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期51-58,共8页
克隆和异源表达固氮菌Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶(NAMase),研究其酶学特性,并探究3-氰基吡啶(3-CP)对该酶的调控机制。PCR扩增获得E.meliloti 1021烟酰胺酶基因(nam)序列,构建含nam的重组质粒并导入Escherichia coli Rosetta(DE3)... 克隆和异源表达固氮菌Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶(NAMase),研究其酶学特性,并探究3-氰基吡啶(3-CP)对该酶的调控机制。PCR扩增获得E.meliloti 1021烟酰胺酶基因(nam)序列,构建含nam的重组质粒并导入Escherichia coli Rosetta(DE3)中异源表达,用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,探究温度、pH、有机溶剂及金属离子对NAMase活性的影响,并对烟酰胺酶进行了固定化研究。结果显示,克隆得到长636bp的nam,编码的蛋白分子量为22.6kD,等电点(PI)为5.5。NAMase的最适pH为7.0,在30-50℃温度范围内孵育2h酶活维持在97.1%以上,最适温度在30-70℃。Ag2+和异戊醇对NAMase的活性抑制率最大。在E.meliloti 1021野生菌株及NAMase过表达菌株转化烟酰胺的过程中3-CP会抑制烟酸的产量,这种效应并非底物抑制作用。 展开更多
关键词 草木樨剑菌 静息转化 烟酰胺 特性
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木聚糖酶和甘露聚糖酶在毕赤酵母中的共表达及产酶分析
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作者 姚银 闵琪 +1 位作者 熊海容 张莉 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期37-45,共9页
木聚糖酶和甘露聚糖酶是两种重要的半纤维素酶,也是两种重要的饲用酶制剂,通过毕赤酵母表达系统中的体外串联表达盒构建多拷贝的方法构建了木聚糖酶DSB和甘露聚糖酶Man A共表达重组质粒p PICZαA/DSB-ManA,将该重组质粒电转化至宿主菌... 木聚糖酶和甘露聚糖酶是两种重要的半纤维素酶,也是两种重要的饲用酶制剂,通过毕赤酵母表达系统中的体外串联表达盒构建多拷贝的方法构建了木聚糖酶DSB和甘露聚糖酶Man A共表达重组质粒p PICZαA/DSB-ManA,将该重组质粒电转化至宿主菌毕赤酵母X33中获得共表达两种酶的重组菌X33/DSB-ManA,实现了两种酶的共分泌表达,经诱导表达后木聚糖酶和甘露聚糖酶的酶活分别为273.6 U/ml和256.8 U/ml,为单独表达重组菌X33/DSB和X33/Man A酶活的30.4%和73.4%。酶学性质的分析显示DSB和Man A的最适反应温度均为75℃,在45℃~75℃范围内具有较好的温度稳定性,酶活可保持最高酶活的60%以上;DSB最适pH为6.5,Man A最适pH为6.0,在pH 3.0、40℃条件下,Man A处理1h能保持最高酶活的80%以上,DSB处理1 h时能保持最高酶活的50%以上;DSB和Man A对多种金属离子和化学试剂(浓度为1 mM)具有较好的耐受性,均可保留60%以上的酶活力。通过单一菌株成功完成了不同酶的共表达,为复合酶饲料添加剂的生产和应用研究提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 木聚糖 甘露聚糖 毕赤酵母 共表达 特性
菠菜乙醇酸氧化酶的酶学特性及同工酶电泳分析 预览
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作者 罗莎 黄璐瑶 +3 位作者 殷勤 张钰莹 赵燕 张智胜 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期156-164,共9页
为了解析菠菜乙醇酸氧化酶(Sp GLO)的酶学特性及同工酶谱。首先提取菠菜的RNA并反转录成c DNA,通过NCBI数据库中提供的菠菜GLO基因mRNA序列信息,设计特异性引物,扩增目标序列并连接到p MD19-T载体上进行测序鉴定;随后再次设计引物并在... 为了解析菠菜乙醇酸氧化酶(Sp GLO)的酶学特性及同工酶谱。首先提取菠菜的RNA并反转录成c DNA,通过NCBI数据库中提供的菠菜GLO基因mRNA序列信息,设计特异性引物,扩增目标序列并连接到p MD19-T载体上进行测序鉴定;随后再次设计引物并在上游引物加入His标签,克隆Sp GLO基因构建到p YES2载体上,将该载体转入酿酒酵母中进行表达并通过His-tag亲和柱纯化,然后在不同诱导时间点取样测定Sp GLO酶活。结果显示,转化后的酿酒酵母菌株在诱导发酵20 h后能得到最高的GLO活性。以乙醇酸为底物测定Sp GLO在不同p H、不同温度条件下的催化活性,其最适p H值为8. 0,最适温度为39℃。然后分别以乙醇酸、乙醛酸、甘油酸为反应底物,系统分析了Sp GLO的酶学特性,数据显示,Sp GLO对乙醇酸的亲和力最高,其Km为0. 41 mmol/L,Vm为45. 92μmol/(min·mg)。以乙醇酸、乙醛酸为底物,使用草酸抑制其催化活性,其Ki分别为4. 61,2. 09 mmol/L,表明以乙醛酸为底物时Sp GLO的催化活性更易被草酸抑制。同时将纯化后的Sp GLO通过Caps-氨水电泳体系进行同工酶电泳,经过染色后出现2条同工酶带,表明菠菜叶片中可能存在2种GLO同工酶。为将来深入研究植物GLO同工酶之间的生化特性差异并分析其不同生理功能奠定良好的基础。 展开更多
关键词 乙醇酸氧化 特性 同工电泳 菠菜
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水解毛桃果酒中花色素苷的β-葡萄糖苷酶酶学特性
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作者 王兴吉 王克芬 +1 位作者 闫宜江 刘文龙 《食品科技》 CAS 北大核心 2019年第2期270-273,共4页
花色素苷广泛存在于植物细胞中,是植物花和果实的主要呈色物质。毛桃果酒酿造过程中添加β-葡萄糖苷酶处理后,花色素苷被分解,提升了果酒品质和风味。选取果酒中花色素苷含量最大的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷作为样品,对β-葡萄糖苷酶水解... 花色素苷广泛存在于植物细胞中,是植物花和果实的主要呈色物质。毛桃果酒酿造过程中添加β-葡萄糖苷酶处理后,花色素苷被分解,提升了果酒品质和风味。选取果酒中花色素苷含量最大的矢车菊素-3-O-葡萄糖苷作为样品,对β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的特性进行了研究。结果显示:β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的最佳条件为35℃、pH4.0、最佳添加酶量为30 U/mL,Na+及Fe3+能促进反应进行,适当乙醇浓度对酶活有促进作用,β-葡萄糖苷酶水解花色素苷的米氏常数Km和Vmax分别为1.175 mg/L和0.221 mg/h·L。 展开更多
关键词 毛桃酒 Β-葡萄糖苷 特性 花色素苷
橡胶树中碱性转化酶基因HbNIN7的克隆与表达分析
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作者 马燕燕 阳江华 +1 位作者 秦云霞 唐朝荣 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期3224-3230,共7页
蔗糖主要由植物光合作用产生,其水解依赖于转化酶和蔗糖合成酶。其中,转化酶催化蔗糖不可逆分解为葡萄糖与果糖。本研究基于橡胶树的基因组和转录组数据库,采用RT-PCR技术克隆得到一个中碱性转化酶基因HbNIN7基因,预测编码683个氨基酸... 蔗糖主要由植物光合作用产生,其水解依赖于转化酶和蔗糖合成酶。其中,转化酶催化蔗糖不可逆分解为葡萄糖与果糖。本研究基于橡胶树的基因组和转录组数据库,采用RT-PCR技术克隆得到一个中碱性转化酶基因HbNIN7基因,预测编码683个氨基酸。同源与亚细胞定位分析表明HbNIN7属于α类中碱性转化酶,定位于线粒体。通过原核表达获得其重组蛋白,酶活性分析表明,HbNIN7重组蛋白最适酶活pH值7.2;最适酶活温度45℃;最大反应速率32.69 mmol hexose·mg^-1protein·h^-1;Km值25.04 mmol/L。利用荧光定量方法分析基因的表达特征,结果显示:HbNIN7基因在雄花中表达水平最高,且在雄花发育的不同阶段差异显著,说明Hb NIN7很可能参与橡胶树花组织中糖利用及糖信号调控。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 HbNIN7基因 表达分析 特性
产低温纤维素酶菌株的分离鉴定及产酶特征研究 预览
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作者 王继莲 陈芸 +1 位作者 李明源 库尔班江·艾买提 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期356-364,共9页
自东帕米尔高原布伦口湖群湿地10cm草甸中分离到一株高酶活低温纤维素酶产生菌BLKC2,经16S rDNA序列鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。BLKC2在10℃低温条件下保持繁殖能力,在20℃,pH7.0条件下发酵72h,酶活力达到最大值28.7U/mL... 自东帕米尔高原布伦口湖群湿地10cm草甸中分离到一株高酶活低温纤维素酶产生菌BLKC2,经16S rDNA序列鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。BLKC2在10℃低温条件下保持繁殖能力,在20℃,pH7.0条件下发酵72h,酶活力达到最大值28.7U/mL。酶学特性显示,BLKC2分泌的粗酶最适催化温度为30℃,对热敏感,最适反应pH8.0左右,在pH7.0~9.0的偏碱性环境中酶活力较稳定,Mn^2+、Zn^2+、Mg^2+对酶反应有明显激活作用,而Fe^3+、Cu^2+则抑制了酶反应。 展开更多
关键词 布伦口湖群 低温纤维素 枯草芽孢杆菌 特性
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黑曲霉1504产葡萄糖氧化酶的酶学特性及对馒头品质的改良 预览
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作者 朱运平 褚文丹 +1 位作者 黎芳 李秀婷 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第4期175-183,共9页
对来源于菌株黑曲霉1504的葡萄糖氧化酶(GOD)进行分离纯化,研究其酶学性质,并将其应用于面粉及馒头品质改良。GOD经PEG20000浓缩、硫酸铵分级沉淀、DEAE-SFF离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到电泳单条带,纯化倍数为51.13... 对来源于菌株黑曲霉1504的葡萄糖氧化酶(GOD)进行分离纯化,研究其酶学性质,并将其应用于面粉及馒头品质改良。GOD经PEG20000浓缩、硫酸铵分级沉淀、DEAE-SFF离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到电泳单条带,纯化倍数为51.13,酶活回收率为27.07%,用凝胶过滤层析测得酶的分子质量为150.2 ku;纯酶的最适反应pH值为6.1,30℃时pH值稳定范围是4.5~8.0,最适反应温度40℃,50℃时处理4h保留75%以上的酶活力。各种金属离子中,Pb2^+对酶促反应的促进作用最强,Ag^+对酶促反应的抑制作用最强。利用双倒数作图法求得此GOD的Km为36.7 mmol/L,Vmax为20.83μmol/(L·s);考察GOD对馒头品质的影响:当加酶量为2.5 mg/kg时,馒头比容增加13.7%,延展率提高6.5%,同时馒头硬度明显下降,仅为对照组的41.1%。 展开更多
关键词 葡萄糖氧化 特性 馒头品质
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牦牛源木聚糖酶产生菌的筛选和鉴定
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作者 赵龙妹 代地 +2 位作者 张兰 张腾月 秦亚宁 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期389-395,共7页
目的以牦牛粪便为样本,筛选并鉴定产木聚糖酶菌株。方法利用碱提取法从玉米芯中提取木聚糖,以自制木聚糖为唯一碳源,从牦牛牛粪中筛选产木聚糖酶细菌,利用16S rDNA基因序列分析鉴定菌种,3,5-二硝基水杨酸法(DNS)测定其产酶能力并分析所... 目的以牦牛粪便为样本,筛选并鉴定产木聚糖酶菌株。方法利用碱提取法从玉米芯中提取木聚糖,以自制木聚糖为唯一碳源,从牦牛牛粪中筛选产木聚糖酶细菌,利用16S rDNA基因序列分析鉴定菌种,3,5-二硝基水杨酸法(DNS)测定其产酶能力并分析所产酶的酶学特性。结果筛选获得牦牛源产木聚糖酶类芽胞杆菌,所产木聚糖酶的最适反应条件为50℃、pH 8.0,在pH值为7.0或8.0以及温度50℃条件下,表现出较好的稳定性,Mn2+对酶活力具有显著抑制作用,该菌最佳发酵时间为12 h,酶活最高达到1.2 U/mL。结论该菌所产木聚糖酶能够针对性地降解玉米芯木聚糖,在畜牧业和工业上有一定的应用价值。 展开更多
关键词 木聚糖 类芽胞杆菌 筛选 木聚糖 特性
海洋源蛋白酶产生菌筛选及酶学特性的初步研究 预览
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作者 曹红 王秀娟 +4 位作者 翁佩芳 周小敏 高志中 吴祖芳 张鑫 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期93-100,共8页
从海洋源鱿鱼中筛选高产蛋白酶菌株。通过检测蛋白酶产生水解圈结合蛋白酶活性测定的方法筛选高产蛋白酶菌株,采用PCR技术对筛选菌株进行16S rRNA鉴定,并构建目的菌株的系统发育树,同时研究粗蛋白酶的酶学特性。结果表明:筛选得到的10... 从海洋源鱿鱼中筛选高产蛋白酶菌株。通过检测蛋白酶产生水解圈结合蛋白酶活性测定的方法筛选高产蛋白酶菌株,采用PCR技术对筛选菌株进行16S rRNA鉴定,并构建目的菌株的系统发育树,同时研究粗蛋白酶的酶学特性。结果表明:筛选得到的10株产蛋白酶活力较高的菌株,经鉴定分别属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、普罗威登斯菌属(Providencia sp.)和假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。其中SW5菌株产酶活性最高达257.67±2.44 U/mL,为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。该菌株所产粗蛋白酶的酶学特性研究发现,其最适pH为8.0,最适温度为40℃,终离子浓度为1 mmol/L时Mn2+、Ba2+和Ca2+对该蛋白酶活性有较高的激活作用,而Fe2+和Zn2+能明显抑制该蛋白酶活性。 展开更多
关键词 蛋白 菌株 鉴定 16S RRNA 特性
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一株产低温β-半乳糖苷酶微杆菌的筛选鉴定、产酶条件及其酶学特性
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作者 张宇洁 王丽军 +3 位作者 李梦 顾燕玲 关波 倪永清 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期609-617,共9页
【背景】低温β-半乳糖苷酶能在低温下仍保持较高的乳糖水解活性,筛选酶学特性适合在牛乳体系中高效水解乳糖的β-半乳糖苷酶生产菌株,是低乳糖牛乳加工产业关注的焦点。【目的】对天山中国一号冰川沉积物中分离的一株产低温β-半乳糖... 【背景】低温β-半乳糖苷酶能在低温下仍保持较高的乳糖水解活性,筛选酶学特性适合在牛乳体系中高效水解乳糖的β-半乳糖苷酶生产菌株,是低乳糖牛乳加工产业关注的焦点。【目的】对天山中国一号冰川沉积物中分离的一株产低温β-半乳糖苷酶菌株的产酶条件和酶学特性进行研究。【方法】结合X-Gal平板法初筛和测定粗酶液酶活复筛,获得产低温β-半乳糖苷酶的菌株。通过形态学、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析对筛选菌株进行鉴定,单因素摇瓶实验优化菌株的产酶条件,硫酸铵分级沉淀初步纯化β-半乳糖苷酶并对其酶学特性进行分析。【结果】通过形态学、生理生化特征和16S rRNA基因鉴定,确定菌株LW106为微杆菌属(Microbacterium)菌株;该菌株最适产酶温度为25°C,最佳产酶碳源为可溶性淀粉,培养基初始pH为7.0,接种量为3%;对初步纯化的低温β-半乳糖苷酶酶学性质的研究表明,LW106所产β-半乳糖苷酶的最适pH为6.0,最适反应温度为35°C,4°C时酶活为最大酶活的78%,4°C和pH 7.0时的稳定性最好,10 mmol/L的Na+对酶活性基本没有抑制作用,Ca2+对酶活性具有一定的激活作用。【结论】菌株LW106所产低温β-半乳糖苷酶的酶学特性表明该酶在乳品低温加工领域具有进一步研究和应用的价值。 展开更多
关键词 低温β-半乳糖苷 微杆菌 中国一号冰川 特性
一株瘤胃源产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及其酶学特性研究 预览
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作者 张庆芳 王泽坤 +2 位作者 姜南 于爽 迟乃玉 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第4期47-52,共6页
该研究从西藏黄牛瘤胃液中筛选一株高产纤维素酶的菌株,通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行鉴定,并对其酶学特性进行初步研究。结果表明,筛选获得一株高产纤维素酶的菌株N30,并被鉴定为灿烂类芽孢杆菌(Paenibacillus l... 该研究从西藏黄牛瘤胃液中筛选一株高产纤维素酶的菌株,通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行鉴定,并对其酶学特性进行初步研究。结果表明,筛选获得一株高产纤维素酶的菌株N30,并被鉴定为灿烂类芽孢杆菌(Paenibacillus lautus),其发酵72h时,纤维素酶活力最高,为15.6U/mL。该纤维素酶的最适反应温度为55℃,在10~35℃之间保持较高的酶活力,相对酶活力>80%;最适反应pH值为4.5,在pH3.5~9.0时相对酶活>60%;金属离子Ag^2+、K^+、Mg^2+、Fe^2+、Zn^2+、Co^+对纤维素酶活力有促进作用,而金属离子Cu2+对纤维素酶活力有抑制作用。 展开更多
关键词 纤维素 西藏黄牛瘤胃 筛选 鉴定 特性
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黄曲霉产β-1,4-木聚糖酶发酵条件的优化及其酶学特性 预览
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作者 陈瑶瑶 陈洲 +3 位作者 刘璐 刘杨柳 李思霆 贾英民 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第7期131-137,共7页
研究发现一株高产β-1,4-木聚糖酶的黄曲霉,拟优化其产酶条件并分析该酶的酶学特性。采用单因素法优化其摇瓶发酵条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合酶谱法判定酶的特性以及薄层色谱分析法(TLC)判定酶的水解特异性。结果表明,产酶... 研究发现一株高产β-1,4-木聚糖酶的黄曲霉,拟优化其产酶条件并分析该酶的酶学特性。采用单因素法优化其摇瓶发酵条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合酶谱法判定酶的特性以及薄层色谱分析法(TLC)判定酶的水解特异性。结果表明,产酶最佳培养基为:麸皮3.5%、磷酸氢二铵3.0%、吐温-60 1.0%、NaCl 0.5%、MgSO4·7H2O 0.05%和KH2PO4 0.075%;黄曲霉在35℃下培养5 d达到最高酶活力115.08 U/mL,为未优化时的9.4倍。该菌能分泌两种β-1,4-木聚糖酶,分子量约为20.1和31.0 kDa,均不同于已有报道。粗酶的最适pH和最适温度分别为MOPS 7.5和55℃,在pH5.5~9.0及30~50℃范围内能保持酶活力的稳定。该酶不仅能水解榉木木聚糖产生低聚木糖,还能微弱降解大麦葡聚糖,有助于它在木质纤维素降解领域中的应用。 展开更多
关键词 黄曲霉 β-1 4-木聚糖 发酵条件 特性 水解特异性
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纳米酶:中国原创领域的机遇与挑战——香山科学会议第606次学术研讨会简报
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作者 梁敏敏 孟凡霞 《生物化学与生物物理进展》 CSCD 北大核心 2018年第2期272-276,共5页
“纳米酶(Nanozyme)”是指蕴含酶学特性的纳米材料,它能够在生理条件下催化酶底物的反应,具有如同天然酶一样的催化效率和酶促反应动力性质.纳米酶是我国科学家发现的,来自生物、化学、材料和医学领域的专家打破传统学科界限、经过多... “纳米酶(Nanozyme)”是指蕴含酶学特性的纳米材料,它能够在生理条件下催化酶底物的反应,具有如同天然酶一样的催化效率和酶促反应动力性质.纳米酶是我国科学家发现的,来自生物、化学、材料和医学领域的专家打破传统学科界限、经过多年通力合作,在国际上报道了首例纳米酶的实验证据(Nature Nanotechnology,2007),从此改变了人们对纳米材料生物惰性的传统认知.纳米酶作为新一代人工模拟酶,引起了国内外科学家们的广泛兴趣与高度重视. 展开更多
关键词 纳米材料 特性 香山科会议 术研讨会 原创 中国 促反应 人工模拟
嗜酸乳杆菌ATCC4356分选酶A基因克隆、表达及功能分析 预览
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作者 吴京 王文文 +4 位作者 熊蓉露 吴振 潘道东 曾小群 郭宇星 《食品科学》 CSCD 北大核心 2018年第4期76-81,共6页
分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用。为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异,以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板,构建分选酶A(sortase A,SrtA)重组表达载体p ET28a-SrtAΔN48,转入大肠杆菌感受态细胞Transetta... 分选酶在细菌对宿主细胞的黏附过程中具有重要作用。为探究乳酸菌分选酶的特性及与其他致病菌分选酶的差异,以嗜酸乳杆菌ATCC4356为模板,构建分选酶A(sortase A,SrtA)重组表达载体p ET28a-SrtAΔN48,转入大肠杆菌感受态细胞Transetta(DE3)内表达,使用Dabcyl-QALPTTGEE(Edans)探究其酶活特性。结果发现:嗜酸乳杆菌ATCC4356 SrtA(Lap-SrtAΔN48)分子质量为20 k Da左右;Mg^2+、Zn^2+、Mn^2+可提高Lap-SrtAΔN48的转肽能力;Ca^2+不会影响SrtAΔN48的活性,明显区别于致病菌;且分选酶抑制剂查尔酮会抑制Lap-SrtAΔN48的活性。进一步通过蛋白质同源建模分析发现Lap-SrtA由8条中心β桶状结构互相折叠而成,属于经典的分选酶结构,Lap-SrtA的活性位点为His137、Cys198、Arg205。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 分选A 基因克隆 特性 结构特性
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宏基因组来源耐Mn^2+、热稳定细菌漆酶的分子克隆及酶学特性
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作者 董冰雪 夏敏 +3 位作者 蔡心清 李鹏 押玉柯 毛润乾 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1190-1199,共10页
【背景】漆酶和锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)是木质素降解的主要酶,二者有协同效应。Mnp活性依赖于Mn^2+,而Mn^2+是大多数漆酶的抑制剂。【目的】获得耐Mn^2+的细菌漆酶用于木质素降解。【方法】构建许昌市某污水河污... 【背景】漆酶和锰过氧化物酶(Manganese peroxidase,Mnp)是木质素降解的主要酶,二者有协同效应。Mnp活性依赖于Mn^2+,而Mn^2+是大多数漆酶的抑制剂。【目的】获得耐Mn^2+的细菌漆酶用于木质素降解。【方法】构建许昌市某污水河污泥宏基因组文库,通过活性筛选获得细菌漆酶基因lac1542。使用大肠杆菌异源表达Lac1542,研究纯化后的重组蛋白酶学性质并进一步检测了含Lac1542复合酶系降解木质素能力。【结果】测序结果显示lac1542编码一个含513个氨基酸的蛋白。以ABTS为底物Lac1542最适反应pH为4.0,在pH 3.0-6.5范围内酶活性稳定。最适反应温度是75°C,在70°C以下酶活性稳定;100 mmol/L的Mn^2+仍能提高酶的活性。动力学参数研究发现,该酶的最适底物顺序为:ABTS〉丁香醛联氮〉儿茶酚〉2,6-DMP〉愈创木酚。Lac1542/Mnp复合酶系对木质素降解率为47.8%,比单独使用Mnp木质素降解率(22.4%)提高25.4%。Lac1542/Mnp/灰盖鬼伞过氧化物酶(Coprinus cinereus Peroxidase,CIP)复合酶系木质素降解高达71.5%,比Mnp/CIP酶系木质素降解率(48.9%)提高22.6%,加入Lac1542后的复合酶系能明显提高木质素的降解率。【结论】Lac1542的可溶性表达、耐受高浓度Mn^2+、热稳定性使得Lac1542可以替代一些经典的真菌漆酶应用于制浆、造纸、纤维素乙醇生产、染料脱色等工业。 展开更多
关键词 细菌漆 Mn^2+耐受 特性 宏基因组 木质素降解
绿芦笋过氧化物酶的酶学特性
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作者 逄婧 王晓丽 +2 位作者 王兆升 侯汉学 董海洲 《中国食品学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期67-72,共6页
过氧化物酶(POD)是植物木质化过程关键酶之一。为控制绿芦笋贮藏及加工过程中产生的木质化问题,以愈创木酚为底物,采用分光光度法对绿芦笋POD酶学特性进行研究。结果表明:绿芦笋POD的最适pH值为6.0,最适温度35℃。90℃处理6 min或10... 过氧化物酶(POD)是植物木质化过程关键酶之一。为控制绿芦笋贮藏及加工过程中产生的木质化问题,以愈创木酚为底物,采用分光光度法对绿芦笋POD酶学特性进行研究。结果表明:绿芦笋POD的最适pH值为6.0,最适温度35℃。90℃处理6 min或100℃处理2 min可使酶基本失活。以愈创木酚为底物时,绿芦笋POD催化愈创木酚的反应符合米氏方程,动力学参数Km=1.56 mmol/L,Vmax=1 111.11 U/min;K^+、Mg^2+和Na^+对POD有明显的激活作用,Ca^2+、Cu^2+、Fe^2+、Fe^3+和Mn^2+对POD有抑制作用。几种抑制剂的抑制效果排序为:EDTA-2Na〉柠檬酸〉亚硫酸氢钠〉抗坏血酸。 展开更多
关键词 绿芦笋 过氧化物 特性
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