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猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株PCR-HRM鉴别检测方法的建立
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作者 饶丹 丛锋 +6 位作者 朱余军 练月晓 肖丽 黄韧 张钰 郭鹏举 陈梅丽 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1463-1466,1527共5页
基于新型的PCR产物分析技术-高分辨率熔解曲线(HRM),大量分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)全基因序列的特点,建立鉴别PEDVcV777疫苗株与野毒株的PCR-HRM分析方法。在ORF1保守区域设计区分引物,同时用普通的RT-PCR方法进行对比。检测1... 基于新型的PCR产物分析技术-高分辨率熔解曲线(HRM),大量分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)全基因序列的特点,建立鉴别PEDVcV777疫苗株与野毒株的PCR-HRM分析方法。在ORF1保守区域设计区分引物,同时用普通的RT-PCR方法进行对比。检测19份临床样品中,PCR-HRM方法检测均为阳性且鉴定为野毒株,普通RT-PCR之后凝胶电泳分析检测18份阳性,为野毒株。结果表明,PCR-HRM方法具有特异性好,灵敏度高,PCR扩增之后产物无需开盖分析,极大地避免了污染问题,是一种新型的鉴别检测方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 疫苗株 毒株 PCR产物分析技术-高分辨率熔解曲线
伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法的建立 预览 被引量:1
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作者 兰德松 顾贵波 侯振中 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第7期1804-1812,共9页
为实现对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的快速、敏感、特异的鉴别诊断,本试验针对PRVgD和gE基因设计了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了PRV野毒株与gE基因缺失疫苗株的TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方... 为实现对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的快速、敏感、特异的鉴别诊断,本试验针对PRVgD和gE基因设计了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了PRV野毒株与gE基因缺失疫苗株的TaqMan实时荧光定量PCR鉴别方法,对引物和探针浓度、退火温度等进行了优化,对方法进行敏感性、特异性、重复性试验,并进行临床样品检测。结果显示,建立的针对gD、gE基因的TaqMan实时荧光定量PCR方法线性相关系数(R2)分别为0.996和0.980,均呈良好的线性关系;检测限分别为39.4和12.1拷贝/μL;与圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒均无交叉反应;重复性试验结果显示,针对gD基因的批内和批间变异系数分别为1.43%~1.86%、1.10%~2.07%,针对gE基因的批内和批间变异系数分别为0.98%~1.41%、1.12%~1.86%。应用建立的TaqMan实时荧光定量PCR与普通PCR分别对11份临床疑似感染样品进行检测,阳性率分别为36.4%和27.3%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强、重复性好,可作为伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株的早期鉴别诊断和定量检测的有效手段。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(PRV) 毒株 gE基因缺失疫苗株 TaqMan实时荧光定量PCR 鉴别
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羊口疮病毒疫苗株与野毒株VIL-10基因的比较分析 预览
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作者 冯倩 吴锦艳 +4 位作者 陈妍 刘永杰 张克山 尚佑军 刘湘涛 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第9期2368-2376,共9页
试验旨在比较分析羊口疮病毒(orf virus,ORFV)VIL-10基因在疫苗株和野毒株之间的差异特征。参照GenBank中公布的ORFV NZ2株的VIL-10基因序列设计并合成1对特异性引物,分别以疫苗株和野毒株提取的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增ORFV的V... 试验旨在比较分析羊口疮病毒(orf virus,ORFV)VIL-10基因在疫苗株和野毒株之间的差异特征。参照GenBank中公布的ORFV NZ2株的VIL-10基因序列设计并合成1对特异性引物,分别以疫苗株和野毒株提取的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增ORFV的VIL-10基因全序列并进行测序,应用生物信息学相关软件分析基因的核苷酸、氨基酸变异情况及蛋白结构。结果显示,本试验测定的疫苗株和野毒株VIL-10基因核苷酸序列同源性为94.4%,差异主要是单个碱基的突变,其中疫苗株在132~134 bp核苷酸序列出现缺失;氨基酸序列同源性为92.5%,出现了15个氨基酸位点的突变,其中疫苗株第42位氨基酸天冬酰胺出现缺失;蛋白质在一级结构及理化性质、二级结构、三级结构、抗原表位参数及有无信号肽之间均存在一定程度的差异,而疫苗株和野毒株编码的蛋白质均无跨膜结构域。系统进化树分析结果表明,本试验测定的野毒株与疫苗株属于不同分支,遗传关系较远。研究结果提示,野毒株与疫苗株的VIL-10基因发生较明显的变异,这些变异可能与ORFV疫苗株的毒力致弱有关。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(ORFV) 疫苗株 毒株 VIL-10基因 比较分析
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伪狂犬病病毒野毒株与gE基因缺失疫苗株微滴数字PCR鉴别方法的建立 预览
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作者 兰德松 魏澍 +1 位作者 顾贵波 侯振中 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1137-1141,1156共6页
为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的鉴别诊断和准确定量的微滴数字PCR(ddPCR)方法,本研究以PRV gD和gE基因为靶基因,设计并合成了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了分别针对PRV gD和gE基因的ddPCR方法。结果显示,本研... 为建立伪狂犬病病毒(PRV)野毒株与gE基因缺失疫苗株的鉴别诊断和准确定量的微滴数字PCR(ddPCR)方法,本研究以PRV gD和gE基因为靶基因,设计并合成了2套特异性引物和TaqMan探针,建立了分别针对PRV gD和gE基因的ddPCR方法。结果显示,本研究建立的ddPCR方法能够特异性地鉴别检测PRV野毒株和疫苗株,与圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等均无交叉反应;该方法针对PRV gD、gE基因的检测限分别为3.9拷贝/μL、2.3拷贝/μL,分别比相应的荧光定量PCR (qPCR)方法敏感性高10倍和5倍;针对PRV gD、gE基因的批内和批间重复性试验结果变异系数(C.V)均小于4 %;通过对45份临床样品的检测,结果显示,与病毒分离方法相比,ddPCR方法敏感性为91.7 %,特异性为97.2 %,符合率为97.8 %;与ddPCR方法相比,qPCR的敏感性为83.3 %,特异性为94.3 %,符合率为95.6 %。本研究建立的ddPCR方法在检测低拷贝临床样品时敏感性更高、特异性强、重复性好,可以作为PRV野毒株与疫苗株的鉴别、准确定量的有效检测手段。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 毒株 gE基因缺失疫苗株 微滴数字PCR 鉴别 定量检测
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一种快速检测猪伪狂犬病毒野毒株的普通PCR方法的优化研究
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作者 王凤求 侯文凤 +1 位作者 李中圣 王贵平 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第13期138-141,共4页
为了快速、便捷运用普通PCR对猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)野毒株进行检测,试验选取PRV g B、g E基因保守区序列,设计2对特异性引物,通过正交试验设计探索最优水平组合的PCR体系,建立鉴别检测PRV野毒株的普通PCR方法,并验证... 为了快速、便捷运用普通PCR对猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)野毒株进行检测,试验选取PRV g B、g E基因保守区序列,设计2对特异性引物,通过正交试验设计探索最优水平组合的PCR体系,建立鉴别检测PRV野毒株的普通PCR方法,并验证其特异性、敏感性、重复性、稳定性以及对临床样品的检测效果。结果表明:PCR体系的最优水平组合为Taq Mix 8μL,g B、g E引物的终浓度分别为0.2μmol/L和0.2μmol/L。建立的普通PCR检测体系仅对PRV野毒株呈双阳性,对疫苗株g B基因呈单阳性,检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒、猪乙型脑炎病毒、大肠杆菌等均显示阴性;敏感度介于1×103~1×104TCID50/m L病毒效价之间;重复性与稳定性良好;检测20份广东地区猪场临床疑似样品,疫苗毒株阳性率为25%,野毒株阳性率为10%,g B、g E单项PCR检测的符合率为100%。说明试验优化建立的普通PCR方法能对PRV野毒株进行快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 毒株 正交试验 PCR 快速检测 鉴定
广东一株猪伪狂犬病毒野毒的分离鉴定和致病性初步研究 被引量:1
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作者 王凤求 何永龙 +3 位作者 侯月娥 伍建敏 李中圣 王贵平 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2018年第1期144-147,254共5页
为了证实广东阳江某猪场存在猪伪狂犬病毒(PRV)强毒力野毒感染,试验采用病毒分离鉴定及仔猪攻毒试验的方法,对该猪场保育猪群病料中存在的病毒进行分离鉴定,以及用15日龄含有母源抗体(中和效价水平为1∶16)的仔猪进行毒株致病性的初步... 为了证实广东阳江某猪场存在猪伪狂犬病毒(PRV)强毒力野毒感染,试验采用病毒分离鉴定及仔猪攻毒试验的方法,对该猪场保育猪群病料中存在的病毒进行分离鉴定,以及用15日龄含有母源抗体(中和效价水平为1∶16)的仔猪进行毒株致病性的初步研究。结果表明:从病料中成功分离出1株PRV野毒株GD-1406株;经滴鼻攻毒,试验Ⅰ组(病毒攻毒效价为1×106TCID50/m L)仔猪攻毒后第5天全部死亡,试验Ⅱ组(病毒攻毒效价为1×104TCID50/m L)仔猪攻毒后第4天死亡率达80%,第6天全部死亡;病理剖检显示,分离的PRV对试验组仔猪的多种组织器官造成肉眼可见的损伤,对照组正常。说明该猪场保育猪群中有PRV野毒强毒株存在。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒(PRV) 毒株 分离 鉴定 致病性
杭州市水痘-带状疱疹病毒流行株基因型特征分析
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作者 张学潮 许二萍 +6 位作者 许玉洋 张小平 刘艳 顾雯雯 杜渐 王骏 车鑫仁 《中国疫苗和免疫》 北大核心 2018年第5期554-558,共5页
目的了解杭州市水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus, VZV)流行株基因型别特征。方法采集2012-2017年临床诊断水痘患者疱疹液,提取样本DNA,PCR扩增ORF 22、38、54、62基因片段。用单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphi... 目的了解杭州市水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus, VZV)流行株基因型别特征。方法采集2012-2017年临床诊断水痘患者疱疹液,提取样本DNA,PCR扩增ORF 22、38、54、62基因片段。用单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism, SNP)方法分析ORF 22基因片段,确定病毒基因型别;用限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism, RFLP)技术分析ORF 38、54、62基因片段,区分野毒株和疫苗株。结果 23例临床诊断水痘患者的疱疹液中21例样本VZV核酸阳性。SNP分析结果显示,21例阳性VZV的基因型均属于clade 2。RFLP分析结果显示,21例阳性VZV均为野毒株(PstI~+BglI~+SmaI~-)。结论杭州市VZV流行株基因型别主要是clade 2,未发现疫苗株感染。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 基因型 毒株 疫苗株
乙脑病毒野毒株SA14感染性克隆的构建及病毒拯救
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作者 冷生玲 黄荣 +4 位作者 冯亚岚 唐丽萍 周仲辉 陈大斌 杨健 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期945-948,共4页
目的构建乙脑病毒野毒株SA14感染性克隆并进行病毒拯救。方法分节段合成乙脑病毒野毒株SA14全长cDNA序列,采用分段连接方式构建SA14全长cDNA质粒,以其为模板体外转录RNA并电转染导入BHK21细胞进行病毒拯救,用噬斑试验和间接免疫荧光法... 目的构建乙脑病毒野毒株SA14感染性克隆并进行病毒拯救。方法分节段合成乙脑病毒野毒株SA14全长cDNA序列,采用分段连接方式构建SA14全长cDNA质粒,以其为模板体外转录RNA并电转染导入BHK21细胞进行病毒拯救,用噬斑试验和间接免疫荧光法鉴定拯救病毒;绘病毒生长曲线,测定拯救病毒对小鼠的神经毒力。结果酶切鉴定质粒模板成功构建,用免疫荧光法检测到恢复病毒包膜蛋白表达,噬斑实验发现乙脑野毒株噬斑直径大于疫苗株;绘制病毒生长曲线,野毒株和疫苗株均在60h达到高峰。用拯救病毒进行动物感染试验,野毒株对小鼠脑内神经毒力LD50为10-1.07,皮下神经毒力LD50为100.33。结论成功建立乙脑野毒株SA14感染性克隆并拯救病毒,为进一步研究乙脑病毒的致病机制等奠定了基础。 展开更多
关键词 乙脑病毒 毒株 感染性克隆
鸡传染性支气管炎疫苗株与广西流行野毒株鉴别方法的建立 预览
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作者 范文胜 王海勇 +4 位作者 唐宁 董志华 韦天超 磨美兰 韦平 《动物医学进展》 北大核心 2018年第5期26-30,共5页
根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)3′端非编码区和S1基因保守区域设计两对特异性引物,对H120、Ma5和4/91、M41等常用疫苗株以及26株广西田间分离株进行二重RT-PCR扩增,并进行该方法的特异性和敏感性试验,同时进行了初步应用。结果表明,... 根据鸡传染性支气管炎病毒(IBV)3′端非编码区和S1基因保守区域设计两对特异性引物,对H120、Ma5和4/91、M41等常用疫苗株以及26株广西田间分离株进行二重RT-PCR扩增,并进行该方法的特异性和敏感性试验,同时进行了初步应用。结果表明,经RT-PCR扩增后,M41毒株得到约160bp的目的片段,Mass型毒株得到约370bp的目的片段,4/91型IBV毒株得到约480bp和345bp 2条目的片段,其他24株广西分离株得到1条大小在260bp-345bp的目的片段。特异性试验表明此二重RT-PCR方法不能扩增NDV、AIV、MDV、IBDV、ALV等,敏感性试验表明最低检测量达到100pg。该方法的临床应用表明,攻毒鸡病料阳性率达90%。研究结果表明了所建立的二重RT-PCR方法可以鉴别IBV疫苗株与广西流行野毒株,且特异性强,敏感度高。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 疫苗株 毒株 敏感性 特异性
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猪流行性腹泻病毒野毒株及弱毒疫苗株RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 卢冰霞 秦毅斌 +10 位作者 段群棚 何颖 李斌 梁家幸 苏乾莲 周英宁 蒋冬福 卢敬专 陈忠伟 闭炳芬 赵武 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第2期83-88,共6页
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)野毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV野毒株及弱毒疫苗株的ORF3基因序列,在缺失区的两端设计合成1对特异性扩增引物,用以特异性的扩增PEDV ORF3基因片段,根据目的片段大小判断P... 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)野毒株及弱毒疫苗株快速鉴别检测方法,根据Gen Bank中公布的PEDV野毒株及弱毒疫苗株的ORF3基因序列,在缺失区的两端设计合成1对特异性扩增引物,用以特异性的扩增PEDV ORF3基因片段,根据目的片段大小判断PEDV的毒株类型;通过退火温度等反应条件优化,建立了区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR鉴别检测方法。结果显示:所建立的RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分PEDV野毒株和弱毒疫苗株;PEDV野毒株扩增出234 bp目的片段,PEDV弱毒疫苗株扩增出185 bp目的片段;与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、A群猪轮状病毒(PRo VA)、猪嵴病毒(PKV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)及猪细小病毒(PPV)均无交叉反应;敏感性试验显示,该方法能检测到病毒滴度为1.3×10^3TCID_(50)/mL。利用该方法对采集自广西部分地区93份临床腹泻样品进行检测,临床腹泻样品中PEDV野毒株阳性率为61.29%(57/93),弱毒株阳性率为5.38%(5/93)。结果表明:该RT-PCR鉴别检测方法特异性强、灵敏度高、操作简便,能快速、准确地区分PEDV自然感染野毒株和弱毒疫苗毒株,为猪流行性腹泻的快速诊断及病原分子鉴别检测研究提供了可供借鉴的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 毒株 毒株 RT-PCR 鉴别检测
猪流行性腹泻病毒强毒株和疫苗株多重RT—PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量:5
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作者 施开创 龙飞翔 +4 位作者 粟艳琼 邹联斌 陈芳芳 李军 陈汉忠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-8,共8页
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)的快速鉴别检测方法,针对PEDV基因序列设计3对特异性引物。第1对引物扩增野毒株(经典株、变异株)和疫苗株ORF3基因198bp和148bp片段;第2对引物扩增经典株和疫苗株S基因429bp片段;第3对引物扩增变异... 为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)的快速鉴别检测方法,针对PEDV基因序列设计3对特异性引物。第1对引物扩增野毒株(经典株、变异株)和疫苗株ORF3基因198bp和148bp片段;第2对引物扩增经典株和疫苗株S基因429bp片段;第3对引物扩增变异株S基因274bp片段。经过反应条件的优化,建立了能够同时检测并区分PEDV经典株、变异株及疫苗株的多重RT—PCR检测方法。该方法可以特异地检测PEDV,而与猪的其他重要病原FMDV、CSFV、PRRSV、TGEV、PRoV、PCV2、PRV无交叉反应;对重组质粒标准品的检出下限为2.62×10。copies/teL:重复试验获得了均匀一致的结果。应用该方法检测336份临床痛料。PEDV阳性的120份,其中变异株96份、疫苗株21份、变异株和疫苗株混合感染3份。结果表明,本研究所建立的多重RT—PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于PEDV经典株、变异株和疫苗株的快速鉴别检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 毒株 疫苗株 多重RT—PCR
水痘带状疱疹病毒野毒株和疫苗株区分方法研究 预览
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作者 权娅茹 陈震 +3 位作者 邱平 崔晓雨 李长贵 袁力勇 《中国药事》 CAS 2017年第9期1026-1031,共6页
目的:建立水痘带状疱疹病毒野毒株和疫苗株的聚合酶链反应和限制性片段多态性(PCRRFLP)区分方法。方法:对疫苗株和水痘临床患者疱疹液进行开放阅读框62(ORF62)区基因序列测定,确定可用于野毒株和疫苗株区分的单核苷酸的多态性(SN... 目的:建立水痘带状疱疹病毒野毒株和疫苗株的聚合酶链反应和限制性片段多态性(PCRRFLP)区分方法。方法:对疫苗株和水痘临床患者疱疹液进行开放阅读框62(ORF62)区基因序列测定,确定可用于野毒株和疫苗株区分的单核苷酸的多态性(SNP)位点。PCR扩增含SmaⅠ、Bss HⅡ和NaeⅠ酶切位点的基因(DNA)片段后进行限制性内切酶酶切,利用酶切图谱区分野毒株和疫苗株。结果:用PCR-RFLP分析疫苗株和疱疹液,疫苗株酶切图谱为SmaⅠ~+Bss HⅡ~+NaeⅠ~+,疱疹液酶切图谱为SmaⅠ~-Bss HⅡ~-NaeⅠ~-。结论:基于ORF62区的106262(SmaⅠ)、107136(Bss HⅡ)、107252(NaeⅠ)的PCR-RFLP可有效区分野毒株和疫苗株。 展开更多
关键词 水痘带状疱疹病毒 毒株 疫苗株 ORF62区 PCR-RFLP
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山羊痘病毒疫苗株和野毒株ORF121基因比较分析
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作者 赵俊皓 张克山 +4 位作者 卢炳州 王文芳 郑海学 刘湘涛 胡永浩 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期648-652,共5页
山羊癌(goat pox,GP)是由山羊痘病毒(goat poxvirus,GPV)感染引起山羊的一种烈性传染病,弱毒疫苗接种是预防和控制GP的重要手段之一。ORF121是GPV编码和GPV转录、复制及细胞内包装相关的基因之一,在GPV突破宿主细胞免疫系统过... 山羊癌(goat pox,GP)是由山羊痘病毒(goat poxvirus,GPV)感染引起山羊的一种烈性传染病,弱毒疫苗接种是预防和控制GP的重要手段之一。ORF121是GPV编码和GPV转录、复制及细胞内包装相关的基因之一,在GPV突破宿主细胞免疫系统过程中扮演重要角色。为比较分析GPV疫苗弱毒株和野毒株编码的ORF121基因特征,本研究扩增并测定了GPV疫苗株和野毒株的ORF121基因序列,比较分析了二者核酸水平和氨基酸水平的变异及其蛋白质二、三级结构差异。结果表明,GPV疫苗弱毒株和野毒株编码的ORF121基因核苷酸序列相似性为97.9%,氨基酸序列相似性为98.2%。本研究结果为揭示GPV异原宿主致弱的机制积累了资料。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 ORF121基因 疫苗株 毒株
基于SH片段的中国腮腺炎病毒疫苗株与野毒株鉴别方法的建立
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作者 肖芳 施勇 +3 位作者 李健雄 龚甜 刘师文 熊英 《实验与检验医学》 CAS 2017年第3期297-300,共4页
目的研究建立一种简便快速的鉴别中国腮腺炎病毒疫苗株与野毒株方法。方法在已扩增出的小疏水蛋白基因(small hydrophobic gene)(SH基因)上,寻找能将中国腮腺炎病毒疫苗株区别于野毒株的限制性内切酶酶切位点,并对逆转录-聚合酶链... 目的研究建立一种简便快速的鉴别中国腮腺炎病毒疫苗株与野毒株方法。方法在已扩增出的小疏水蛋白基因(small hydrophobic gene)(SH基因)上,寻找能将中国腮腺炎病毒疫苗株区别于野毒株的限制性内切酶酶切位点,并对逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)的方法进行特异性实验证明。结果非腮腺病毒RT-PCR结果均未见阳性条带,说明RT-PCR方法特异。PCR产物经BclI酶切作用后,腮腺炎野毒株将会被酶切为170bp和340bp两个片段,而疫苗株则被酶切为270bp和240bp两个片段。结论新建立的RT-PCR-RFLP是一种快速、简便的鉴别中国腮腺炎病毒疫苗株与野毒株的方法。 展开更多
关键词 腮腺炎病毒 疫苗株 毒株 逆转录聚合酶链反应 限制性片段长度多态性分析
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PRRSV美洲型经典株、变异株和疫苗株多重RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用 预览 被引量:3
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作者 施开创 许心婷 +3 位作者 胡杰 粟艳琼 陆文俊 陈汉忠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第3期879-887,共9页
为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、高致病性变异株以及TJM-F92疫苗株的Nsp2基因序列特点,设计2对特异性引物。经优化反应... 为建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速鉴别检测方法,本研究针对PRRSV美洲型经典株、高致病性变异株以及TJM-F92疫苗株的Nsp2基因序列特点,设计2对特异性引物。经优化反应条件后,建立了能同时检测并区分PRRSV美洲型经典株、变异株及疫苗株的多重RT-PCR方法。该方法特异性强,与猪其他病毒间不存在交叉反应;敏感性高,对重组质粒标准品的检出下限为1.13×10^3拷贝/μL。应用所建立的方法对349份临床疑似病料进行检测,结果检出PRRSV阳性119份,其中美洲型经典株5份、变异株107份、TJM-F92疫苗株7份,且有变异株和TJM-F92疫苗株混合阳性7份。表明本研究成功建立了PRRSV美洲型经典株、变异株及TJM-F92疫苗株的多重RT-PCR鉴别检测方法,可用于PRRSV的临床检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型 多重RT-PCR 毒株 疫苗株
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鉴别猪流行性腹泻病毒野毒株与疫苗株双重RT-PCR检测方法的建立 预览
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作者 乔涵 韩昊莹 +5 位作者 张鸿鑫 刘秋歌 郭奎 朱彦宁 杨明凡 陈红英 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期388-392,共5页
为建立鉴别猪流行性腹泻病毒野毒株与疫苗株的检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)M、ORF3基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过PCR扩增条件的优化,建立了鉴别PEDV野毒株和疫苗株的双重RT-PCR检测方法。特... 为建立鉴别猪流行性腹泻病毒野毒株与疫苗株的检测方法,本研究根据Gen Bank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)M、ORF3基因序列,设计合成了2对特异性引物,通过PCR扩增条件的优化,建立了鉴别PEDV野毒株和疫苗株的双重RT-PCR检测方法。特异性试验显示,该检测方法对猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、Salmonella及E.coli等结果均为阴性;敏感性试验显示,所建立的双重PCR检测方法对M基因和ORF3基因的最低有效检测量分别为44.5拷贝/μL和481拷贝/μL。本研究建立的双重RT-PCR检测方法可实现对PEDV野毒和疫苗毒的快速检测,适合于现地猪流行性腹泻的鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 毒株 疫苗株 双重PCR
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最新研究结果支持全猪群疫苗接种 预览
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《国外畜牧学:猪与禽》 2017年第4期38-39,共2页
猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是一种困扰养猪生产者二十余年的病毒性疾病。由于该病毒基因时常发生重组,做好准备比什么都重要。使用改良的活疫苗(Modified Live Vaccine,MLV)对整个猪... 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)是一种困扰养猪生产者二十余年的病毒性疾病。由于该病毒基因时常发生重组,做好准备比什么都重要。使用改良的活疫苗(Modified Live Vaccine,MLV)对整个猪群进行免疫接种已经证明了其价值。 展开更多
关键词 疫苗接种 VACCINE 养猪生产者 免疫接种 病毒基因 病毒性疾病 毒株 活疫苗 免疫猪 Modified
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猪伪狂犬病的现状及净化要点 预览 被引量:2
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作者 万遂如 《兽医导刊》 2016年第1期20-22,31共4页
2011年至2013年,我国华北、华中、华东和东北等地部分养猪场(包括免疫猪群)先后暴发猪伪狂犬病以来,2014年疫情有所缓解,呈现散发状态,发病率与死亡率明显下降。但是阳性猪场野毒株持续感染,阴性猪场野毒感染阳性率上升,出现了一些新... 2011年至2013年,我国华北、华中、华东和东北等地部分养猪场(包括免疫猪群)先后暴发猪伪狂犬病以来,2014年疫情有所缓解,呈现散发状态,发病率与死亡率明显下降。但是阳性猪场野毒株持续感染,阴性猪场野毒感染阳性率上升,出现了一些新情况与新问题。因此,养猪场对猪伪狂犬病的防控还不能掉以轻心,要积极的采取综合防控措施,实施对猪伪狂犬病的区域净化。为此,谈点个人意见,仅供养猪场参考。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病 净化 持续感染 防控措施 养猪场 免疫猪群 毒株 阳性率
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2014年吉林省水痘-带状疱疹病毒基因特征分析 被引量:5
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作者 吴秋华 王爽 +4 位作者 丛宪玲 周剑惠 崔爱利 许文波 许松涛 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期738-742,共5页
目的 分析吉林省水痘-带状疱疹病毒(VZV)野毒株的基因型别,区分疫苗株与野毒株。方法 选择2014年1—12月在吉林省收集的13份疑似水痘患者的疱疹液或咽拭子样本。提取样本DNA,采用DNA PCR扩增病毒基因组的15个开放阅读框(ORF),... 目的 分析吉林省水痘-带状疱疹病毒(VZV)野毒株的基因型别,区分疫苗株与野毒株。方法 选择2014年1—12月在吉林省收集的13份疑似水痘患者的疱疹液或咽拭子样本。提取样本DNA,采用DNA PCR扩增病毒基因组的15个开放阅读框(ORF),结合单核苷酸多态性(SNP)法确定病毒株的基因型别;用PCR-限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)方法区分野毒株与VZV减毒活疫苗(v-Oka疫苗株)。整理序列资料,从GenBank数据库下载VZV各基因型参考株的序列资料,采用MEGA5软件进行基因序列对比分析。结果 13份疑似水痘患者的疱疹液或咽拭子样本中,5份来自男性,8份来自女性,患者年龄为(16.69±5.48)岁,范围为11~27岁,出疹后采样日期为0~3 d。13份疑似样本中,8份为VZV阳性。SNP分析显示,8份阳性样本均来自Clade 2遗传支;与v-Oka疫苗株相比,8份样本在SNP18082位点上均发生了T〉C的同义突变。PCR-RFLP方法区分野毒株与疫苗株结果显示,8份临床样本均为野毒株(PstⅠ+BgⅡ+SmaⅠ-),无疫苗相关病例。结论 吉林省流行的水痘-带状疱疹病毒均属Clade 2遗传支,且均为野毒株。 展开更多
关键词 水痘病毒属 基因型 疫苗 毒株
长沙市2013-2014年麻疹野毒株与疫苗株的快速鉴定与分析 被引量:1
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作者 叶文 孙边成 +4 位作者 陈发明 欧新华 张如胜 黄政 刘晓蕾 《实用预防医学》 CAS 2016年第7期789-790,884共3页
目的了解2013-2014年长沙地区是否存在疫苗株感染,建立实验室快速鉴别麻疹野毒株与疫苗株方法。方法按照《全国麻疹监测方案》,采集麻疹疑似病例咽拭子标本,应用RT-PCR方法进行麻疹病毒核酸检测,再从麻疹病毒核酸阳性病例的咽拭子标本... 目的了解2013-2014年长沙地区是否存在疫苗株感染,建立实验室快速鉴别麻疹野毒株与疫苗株方法。方法按照《全国麻疹监测方案》,采集麻疹疑似病例咽拭子标本,应用RT-PCR方法进行麻疹病毒核酸检测,再从麻疹病毒核酸阳性病例的咽拭子标本中提取核酸,采用转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(reverse transcription-polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,RT-PCR-RFLP)方法进行疫苗株和野毒株的快速鉴定和基因序列分析。结果共采集到697份麻疹疑似病例的咽拭子标本,检出224份麻疹病毒核酸阳性,9例出现麻疹临床症状的患者有麻疹减毒活疫苗(measles attenuated live vaccine,MV)接种史。经RT-PCR-RFLP方法鉴定,均为野毒株感染。测序及序列比对分析结果显示均为H1a基因型。结论 2013-2014年长沙麻疹疑似症状者及9例MV接种史患者均为野毒株感染。成功建立RT-PCR-RFLP方法区别疫苗株与野毒株的感染。 展开更多
关键词 麻疹 毒株 疫苗株 RT-PCR-RFLP
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