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西马特罗多克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立 认领
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作者 司艳芳 李鹏 +3 位作者 郭东光 孙国鹏 岳锋 王选年 《河南农业科学》 北大核心 2020年第6期157-164,共8页
为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CI... 为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CIM-OVA,并采用UV、SDS-PAGE、质谱3种方法进行完全抗原的鉴定。用CIM-BSA免疫新西兰大白兔制备抗西马特罗多克隆抗体并建立间接竞争ELISA检测方法。结果表明,成功合成了西马特罗完全抗原,具有合成抗原的分子特征;免疫新西兰大白兔后,成功制备了抗西马特罗多克隆抗体,其效价为1∶64000,对西马特罗的半数抑制质量浓度为4.26μg/L,与特布他林、莱克多巴胺、沙丁胺醇、齐帕特罗等β2型受体激动剂药物无交叉反应。经过条件优化,建立了西马特罗间接竞争性ELISA检测方法,其最低检测限为0.04μg/L,在0.1~12.8μg/L检测范围内,线性关系拟合度为R2=0.9771,拟合曲线方程为y=-0.2469x+0.6623。检测猪尿和饲料样品,回收率分别为96.3%~103.9%和67.0%~105.0%。综上,成功建立了具有良好应用前景的西马特罗间接竞争ELISA免疫学检测方法。 展开更多
关键词 西马特罗 重氮化法 完全抗原 间接竞争ELISA 多克隆抗体 残留检测
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β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法的建立 认领
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作者 王瑞 曹旭敏 +11 位作者 徐军 李锐 高海侠 张泽宇 苏扣 孙晓亮 李木子 秦立德 王晓茵 王淑婷 李琳 赵思俊 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2020年第7期37-43,共7页
【目的】建立β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法,为动物食源性β2-受体激动剂类药物残留的快速检测提供技术支持。【方法】以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA的检测条件,建立一种快速检测猪尿中沙丁胺醇、... 【目的】建立β2-受体激动剂类药物多残留间接竞争ELISA检测方法,为动物食源性β2-受体激动剂类药物残留的快速检测提供技术支持。【方法】以沙丁胺醇多克隆抗体为基础,优化间接竞争ELISA的检测条件,建立一种快速检测猪尿中沙丁胺醇、卡布特罗、西布特罗、克伦特罗、溴布特罗、马布特罗、克伦潘特、可尔特罗、吡布特罗、马喷特罗、比托特罗与妥布特罗等12种β2-受体激动剂类药物的间接竞争ELISA检测方法。【结果】建立的β2-受体激动剂类药物间接竞争ELISA检测方法的最佳反应条件为:37℃,抗原以1∶10000倍包被1 h,抗体以1∶40000稀释作用40 min,酶标抗体以1∶20000稀释作用40 min。采用建立的间接竞争ELISA最佳反应条件对猪尿中的β2-受体激动剂类药物残留进行检测,结果表明12种β2-受体激动剂类药物在0.1~20μg/L范围内线性关系良好,相关系数均大于0.952;检出限为0.15μg/L,定量限为0.5μg/L;在0.5与1.0μg/L的添加浓度下,回收率为68.4%~114.2%,批内、批间RSD分别为0.4%~10.1%和0.4%~12.5%。【结论】所建立的β2-受体激动剂类药物残留ELISA检测方法操作简单、快速,灵敏度高,适用于猪尿中β2-受体激动剂药物的筛选与检测。 展开更多
关键词 Β2-受体激动剂 间接竞争ELISA 多残留检测 猪尿
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氯霉素间接竞争ELISA检测方法的建立 认领
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作者 郭秀丽 赵丽花 +3 位作者 庞永宏 梁建飞 牛斌 魏东 《河南科技学院学报:自然科学版》 2020年第3期22-26,共5页
为了对动物性食品中氯霉素(CAP)进行快速检测,以CAP与卵清蛋白(OVA)偶联合成的CAP-OVA为包被抗原,CAP为竞争的半抗原,通过优化反应条件,建立间接竞争ELISA检测方法.结果显示:最佳包被抗原质量浓度为0.25μg/mL,单克隆抗体稀释倍数为1∶3... 为了对动物性食品中氯霉素(CAP)进行快速检测,以CAP与卵清蛋白(OVA)偶联合成的CAP-OVA为包被抗原,CAP为竞争的半抗原,通过优化反应条件,建立间接竞争ELISA检测方法.结果显示:最佳包被抗原质量浓度为0.25μg/mL,单克隆抗体稀释倍数为1∶32000,酶标二抗稀释倍数为1∶4000,最低检测限为1.01 ng/mL,批内和批间变异系数分别为3.80%和6.30%,建立的回归方程为y=-10.7x+66.042(R2=0.9969),建立了快速检测氯霉素残留的间接竞争ELISA法. 展开更多
关键词 氯霉素 残留检测 间接竞争ELISA
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软骨藻酸多克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测法的建立 认领
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作者 李炳喜 刘靖 +1 位作者 李扬 叶剑敏 《华南师范大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2020年第2期68-76,共9页
软骨藻酸(Domoic Acid,DA)是记忆缺失性贝毒(Amnesic Shellfish Poisoning,ASP)的主要成分,能在鱼类、贝类富集,通过食物链的传递作用对人产生毒性作用.DA是小分子半抗原,运用活泼酯法将DA与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(B... 软骨藻酸(Domoic Acid,DA)是记忆缺失性贝毒(Amnesic Shellfish Poisoning,ASP)的主要成分,能在鱼类、贝类富集,通过食物链的传递作用对人产生毒性作用.DA是小分子半抗原,运用活泼酯法将DA与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)提高偶联效率,通过紫外-可见分光光度法和聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)检测鉴定,成功制备偶联比为44∶1的完全免疫抗原DA-KLH和偶联比为16∶1的包被抗原DA-BSA;用DA-KLH免疫小鼠后获得高达210000 units/m L效价的抗血清,并通过不断优化间接竞争ELISA(ic-ELISA)检测DA的条件,确定各项最佳工作质量浓度及条件,最后成功绘制100 ng/m L~10μg/m L范围内的DA检测标准曲线.通过优化ic-ELISA检测方法成功实现了快速定量检测DA,这对水产品藻毒素检测试剂盒的开发具有指导意义,也为建立赤潮毒素监督体系提供了良好的实验基础. 展开更多
关键词 记忆缺失性贝毒 软骨藻酸 多克隆抗体 间接竞争ELISA
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间接竞争ELISA方法快速检测猪肉组织中的氯丙嗪 认领 被引量:1
5
作者 王敏 王玮 +3 位作者 吕青骎 徐幸莲 周光宏 李春保 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期172-177,共6页
[目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno... [目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),同时优化检测条件并对该方法进行评价。[结果]采用自行制备的特异性鼠抗CPZ单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:抗原包被稀释倍数为1∶10000,单克隆抗体浓度为1μg·mL-1,酶标二抗稀释倍数为1∶1000,最低检测限为0.51 ng·mL-1,线性检测范围为1.37~111.11 ng·mL^-1。线性回归直线方程为y=-1.2526x+2.8532,相关系数(R 2)为0.9866,总变异系数(CV)为6.97%,空白猪肉添加回收率为96.90%~118.79%。[结论]建立的间接竞争ELISA方法特异性强,灵敏度、精密度、准确度和重现性良好,可用于猪肉组织中CPZ残留的快速检测。 展开更多
关键词 氯丙嗪 猪肉 单克隆抗体 间接竞争ELISA 检测
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间接竞争ELISA法检测黄连解毒汤中黄芩苷在大鼠脑脊液中的分布 认领
6
作者 刘佳星 赵琰 +3 位作者 王苏娜 王晓克 罗娟 孔慧 《环球中医药》 CAS 2020年第4期535-539,共5页
目的检测黄连解毒汤灌胃给药后黄芩苷在大鼠脑脊液中的分布。方法通过考察线性关系、精密度、回收率等方法学考察指标,建立基于黄芩苷单克隆抗体的间接竞争ELISA(icELISA)法;通过建立的icELISA法,检测大鼠灌胃给药后1小时、2小时、3小时... 目的检测黄连解毒汤灌胃给药后黄芩苷在大鼠脑脊液中的分布。方法通过考察线性关系、精密度、回收率等方法学考察指标,建立基于黄芩苷单克隆抗体的间接竞争ELISA(icELISA)法;通过建立的icELISA法,检测大鼠灌胃给药后1小时、2小时、3小时和4小时脑脊液中黄芩苷的含量。结果在大鼠脑脊液中建立的黄芩苷标准曲线为y=0.1069ln(x)+1.0144(R 2=0.9885),浓度范围为3.2~2000 ng/mL,在400、80、3.2 ng/mL三个浓度的精密度分别为13.14%、6.65%和6.04%(RSD≤15%),回收率分别为91.35%、87.04%和117.67%(SD≤15%)。给药后1小时、2小时、3小时和4小时脑脊液中黄芩苷的平均含量分别为(60.53±18.05)、(223.32±29.72)、(121.35±31.93)、(4.46±2.54)ng/mL。结论在脑脊液中建立的黄芩苷icELISA检测法灵敏度高、精密度和回收率能够满足生物样品的检测要求,可以作为黄芩苷的检测方法。在脑脊液中可以检出黄芩苷,给药后2小时黄芩苷在脑脊液中的浓度最高,然后随时间逐渐降低,说明黄芩苷可以透过血脑屏障从而分布到脑脊液中,为黄芩苷治疗脑部疾病提供了直接的实验依据。 展开更多
关键词 间接竞争ELISA 黄芩苷 黄连解毒汤 大鼠 脑脊液
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苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立 认领 被引量:1
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作者 项自来 王玲 +6 位作者 夏苏干 邹辉 顾建红 袁燕 刘学忠 刘宗平 卞建春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期849-857,共9页
为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利... 为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5~1000ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845(R^2=0.990),其IC50为58.88ng/mL,LOD为3.83ng/mL,回收率在85.96%~104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。 展开更多
关键词 苯乙醇胺A(PA) 杂交瘤 单克隆抗体 间接竞争ELISA 回收试验
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ELISA测定猪尿液中β-受体激动剂残留的准确性评价 认领
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作者 张泽宇 苏扣 +2 位作者 王瑞 霍乃蕊 赵思俊 《中国动物检疫》 CAS 2019年第5期103-109,共7页
本研究建立克伦特罗间接竞争ELISA检测方法,对检测条件进行了优化确定,并利用猪尿液进行添加回收试验。结果显示:ELISA反应CLE-OVA包被抗原和CLE单抗的最适浓度分别为1:40000和1:20000,间接竞争ELISA的线性范围为0.016l~8.5200ng/mL。... 本研究建立克伦特罗间接竞争ELISA检测方法,对检测条件进行了优化确定,并利用猪尿液进行添加回收试验。结果显示:ELISA反应CLE-OVA包被抗原和CLE单抗的最适浓度分别为1:40000和1:20000,间接竞争ELISA的线性范围为0.016l~8.5200ng/mL。该方法对克伦特罗、溴氯特罗、马布特罗和溴布特罗均有交叉反应。对冷冻储存半年以上的猪尿进行ELISA测定时,发现检测限可达58.8483ng/mL,药物添加回收率为85.19%~5173.25%,变异系数为4.78%~96.79%;而经过MCX固相萃取柱净化处理后,检测限为0.076ng/mL,添加回收率在101.21%~119.10%之间,变异系数为6.05%~18.38%。结果表明,SPE净化处理后,可有效去除尿液中的色素、蛋白等基质,提高了该法的灵敏度和准确性。 展开更多
关键词 克伦特罗 猪尿 间接竞争ELISA 固相萃取
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间接竞争ELISA检测食品中的邻苯二甲酸二丁酯 认领 被引量:1
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作者 尚淑娜 生威 +2 位作者 王璐璐 赵秋霞 王硕 《食品与机械》 北大核心 2019年第5期67-71,155共6页
以4-氨基邻苯二甲酸为原料,通过酯化反应合成半抗原4-氨基邻苯二甲酸二丁酯,将合成的半抗原通过重氮化反应与钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联制备免疫抗原,与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联制备包被抗原。通过免疫新西兰大白兔获得邻苯二甲酸二... 以4-氨基邻苯二甲酸为原料,通过酯化反应合成半抗原4-氨基邻苯二甲酸二丁酯,将合成的半抗原通过重氮化反应与钥孔血蓝蛋白(KLH)进行偶联制备免疫抗原,与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联制备包被抗原。通过免疫新西兰大白兔获得邻苯二甲酸二丁酯抗血清,利用纯化获得的抗体和包被抗原建立邻苯二甲酸二丁酯间接竞争酶联免疫检测方法(ELISA)。该方法的IC50为40.68μg/L,最低检测限IC15为1.98μg/L,方法对邻苯二甲酸二丁酯具有较好的特异性。经对白酒、牛奶、食用油样品进行检测,添加回收率为84.57%~102.40%,用气相色谱-质谱法(GC-MS)进行验证,两种方法均呈现良好的线性相关性(R2=0.9908)。研究建立的方法可以被应用于食品中塑化剂邻苯二甲酸二丁酯的快速检测。 展开更多
关键词 间接竞争ELISA 邻苯二甲酸二丁酯 多克隆抗体 酶联免疫分析法 食品分析
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重金属铜的单抗的制备及免疫学检测方法的建立 认领 被引量:4
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作者 郝代玲 黄建芳 +4 位作者 杨浩 冯沛然 张宇 王宏 向军俭 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2017年第19期245-248,255共5页
目的:制备针对重金属铜离子的单克隆抗体,建立Cu^2+的间接和直接竞争ELISA检测法,实现对cu。’的快速定量测定。方法:利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu^2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测原;用免疫原免疫Balb/... 目的:制备针对重金属铜离子的单克隆抗体,建立Cu^2+的间接和直接竞争ELISA检测法,实现对cu。’的快速定量测定。方法:利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu^2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联,制备免疫原和检测原;用免疫原免疫Balb/c小鼠;细胞融合后,通过间接及间接竞争ELISA筛选稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水型单抗并进行鉴定;建立间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。结果:成功筛选出4株稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中G8制备出腹水型单抗效价为5×10^5倍,抗体亚型为IgG,型,轻链类型为K型,特异性检测结果表明该单抗对NOTA及Mn^2+、Pb^2+、Cd^2+、Zn^2+’等其金属离子交叉反应率远低于2%,与Mg^2+交叉反应率小于8%,表明单克隆抗体G8对重金属Cu^2+具有很强的特异性,不会干扰结果的准确性;建立间接竞争ELISA的检测灵敏度为29.8ng/mL,检测限为2.4ng/mL,线性范围为4.5-196.7ng/mL;直接竞争ELISA检测法的检测灵敏度为12.89ng/mL,检测限为0.88ng/mL,检测范围为1.72~96.58ng/mL。结论:成功制备出抗重金属铜离子的单克隆抗体,并建立了间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。 展开更多
关键词 铜离子 单克隆抗体 间接竞争ELISA 直接竞争ELISA
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亲和短肽用于快速检测转基因蛋白Cry3Bb 认领 被引量:1
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作者 王耘 武爱华 +3 位作者 刘贤金 谢雅晶 闫娜 张存政 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期690-694,共5页
本研究利用竞争洗脱法淘选与Cry3Bb毒素具有亲和力的特异性短肽,以此建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法(IC-ELISA)。经过4轮淘选、富集,获得与靶蛋白具有较高亲和力的B10克隆(ACIHSPTALCGGG)。所建立的检测方法稳定性较好,变异系数... 本研究利用竞争洗脱法淘选与Cry3Bb毒素具有亲和力的特异性短肽,以此建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法(IC-ELISA)。经过4轮淘选、富集,获得与靶蛋白具有较高亲和力的B10克隆(ACIHSPTALCGGG)。所建立的检测方法稳定性较好,变异系数在5%以内;线性检测范围为0.03~29.95μg/ml,线性回归方程为(Y=20.044x+50.407,R2=0.983 4),检测限为0.009 6μg/ml,在玉米样品中提取回收率为92.26%~101.22%。本研究所建立的ELISA检测方法为粮食中Cry3Bb蛋白的定量检测提供了有效的手段,在转基因产品的检验检疫中有较高的应用价值。 展开更多
关键词 Cry3Bb毒素 转基因植物 噬菌体展示肽 间接竞争ELISA
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磁珠筛选抗Cry2Aa人源化单链抗体及检测方法的建立 认领 被引量:2
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作者 武爱华 王耘 +2 位作者 刘媛 胡晓丹 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期945-950,共6页
为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(sc Fv)。通过4轮'扩增-吸附-洗脱',从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定。选取相对结... 为了建立转基因成分的快速检测方法,利用亲和磁珠偶联Cry2Aa毒素蛋白从人源化噬菌体抗体库Tomlinson I中液相淘选特异性单链抗体(sc Fv)。通过4轮'扩增-吸附-洗脱',从洗脱产物计数板上随机挑取单克隆进行初步鉴定。选取相对结合活性最好的阳性克隆建立间接竞争ELISA,确定其检测范围。筛选后第4轮相对产出率较第1轮提高了4.07×106倍;单克隆ELISA鉴定出8个含有完整外源基因片段的阳性克隆,测序后获得3个不同序列的阳性克隆。D5克隆的噬菌体上清对Cry2Aa的检测灵敏度(IC10)为6.632 ng/ml,线性范围为0.016~2.881μg/ml。该克隆对Cry2Aa具有良好的特异性和板内板间重现性。 展开更多
关键词 Cry2Aa毒素 单链抗体 磁珠 间接竞争ELISA
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有机磷农药广谱抗原表位多肽的制备及应用 认领
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作者 赵扬 武爱华 +4 位作者 张霄 莫海珍 张存政 刘贤金 胡梁斌 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期共6页
利用噬菌体展示技术,以广谱型单克隆抗体筛选十二肽噬菌体展示库,获得能够模拟有机磷类农药抗原表位的十二肽,建立了一种间接竞争ELISA方法用于检测多种有机磷类农药.结果表明,获得的特异性多肽氨基酸序列为HPAPDHSSQSHQ,呈现出较好的... 利用噬菌体展示技术,以广谱型单克隆抗体筛选十二肽噬菌体展示库,获得能够模拟有机磷类农药抗原表位的十二肽,建立了一种间接竞争ELISA方法用于检测多种有机磷类农药.结果表明,获得的特异性多肽氨基酸序列为HPAPDHSSQSHQ,呈现出较好的抗原性、亲水性及表面可及性,可广谱模拟有机磷农药抗原表位.所建立的间接ELISA方法对有机磷农药通用结构半抗原(BPB)的IC50和IC10分别为1.776 μg/ml及0.358 μg/ml,与对硫磷、蝇毒磷、乙拌磷、辛硫磷、喹硫磷和三唑磷的交叉反应率分别为58.74%、44.93%、52.03%、43.98%、36.82%和4.87%.建立的检测方法具有绿色、广谱、高效的特点,是一种新型有机磷类农药累积毒性检测技术. 展开更多
关键词 有机磷类农药 噬菌体展示十二肽库 模拟抗原表位多肽 间接竞争ELISA
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兽药残留检测中磺胺嘧啶ELISA试剂盒的研制 认领 被引量:6
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作者 田博 金坚 +3 位作者 惠人杰 徐凤莲 吴涛 李伟 《生物加工过程》 CAS 2017年第1期69-72,共4页
以合成的耦联抗原BSA磺胺嘧啶和磺胺嘧啶(SD)的单克隆抗体为材料, 建立了SD间接竞争ELISA的方法.方法的检测灵敏度为0.213ng/mL, 线性检测范围为1.84-57.41ng/mL, 除与磺胺二甲嘧啶反应率超过10%外 ,与其他磺胺类药物交叉反应率均低于... 以合成的耦联抗原BSA磺胺嘧啶和磺胺嘧啶(SD)的单克隆抗体为材料, 建立了SD间接竞争ELISA的方法.方法的检测灵敏度为0.213ng/mL, 线性检测范围为1.84-57.41ng/mL, 除与磺胺二甲嘧啶反应率超过10%外 ,与其他磺胺类药物交叉反应率均低于1.5%, 4℃放置180d没有明显的变化.采用猪尿、牛奶、猪肉3类样本 进行的添加回收实验,批内CV均小与10%,批间CV小于15%,平均添加回收率介于75%-90% .因此,组建的试 剂盒可以满足动物饲养检测SD的要求. 展开更多
关键词 磺胺嘧啶 间接竞争ELISA 回收实验 交叉反应率
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阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及其间接竞争-ELISA检测方法 认领 被引量:2
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作者 翟绪昭 曾海娟 +7 位作者 王广彬 董庆利 谢曼曼 丁承超 刘武康 王淑娟 李杰 刘箐 《食品科学》 CSCD 北大核心 2017年第20期268-272,共5页
以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC29004免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,经过两次细胞融合共制备出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2)。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256000,6E3... 以阪崎克罗诺杆菌标准菌株ATCC29004免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,经过两次细胞融合共制备出7株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E9、2A7、2D10、3E5、5B10、6E3、12A2)。其中2A7、2D10、3E5、12A2的效价达到了1∶256000,6E3的效价为1∶128000,5B10的效价为1∶64000,1E9的效价为1∶32000。亚型鉴定结果显示1E9的亚型为IgG1,6E3的亚型为IgG2b,其余抗体2A7、2D10、3E5、5B10、12A2的亚型均为IgG2a。对7株抗体进行特异性检测结果显示,2A7能与3株阪崎克罗诺杆菌(ATCC29004、ATCC29544、ATCC12868)都结合,1E9能与其中两株(ATCC29004、ATCC12868)结合,且与其他11株类似菌和常见致病菌交叉反应结果显示7个抗体均有良好的特异性。用2A7建立的间接竞争酶联免疫吸附测定法对阪崎克罗诺杆菌的检测灵敏度可达到106CFU/mL。 展开更多
关键词 阪崎克罗诺杆菌 单克隆抗体 间接竞争ELISA
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拉沙里菌素单克隆抗体的研制及间接竞争ELISA检测方法的建立 认领 被引量:5
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作者 杨小康 张绘艳 +4 位作者 顾建红 袁燕 卞建春 刘宗平 刘学忠 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第10期3049-3056,共8页
为制备拉沙里菌素(LAS)单克隆抗体,建立针对LAS的间接竞争ELISA(Ci-ELISA)方法,试验采用了活性酯法将LAS分别与BSA和OVA偶联成LAS-BSA和LAS-OVA作为免疫原和检测原,6次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,最终筛选出一株能稳定分... 为制备拉沙里菌素(LAS)单克隆抗体,建立针对LAS的间接竞争ELISA(Ci-ELISA)方法,试验采用了活性酯法将LAS分别与BSA和OVA偶联成LAS-BSA和LAS-OVA作为免疫原和检测原,6次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,最终筛选出一株能稳定分泌抗LAS单克隆抗体的杂交瘤细胞株C11。经鉴定,C11的抗体类型为Ig G1,轻链为κ链;所制腹水效价为1∶16 000,与莫能菌素钠、盐霉素钠、马杜霉素胺、头孢噻吩钠和硫酸链霉素均无交叉反应。用此单克隆抗体建立LAS Ci-ELISA检测方法显示,Ci-ELISA标准工作曲线为y=0.376x-0.2374(R2=0.9914),LAS在5~1 000 ng/m L时,线性关系良好,IC50为90.22 ng/m L,加标回收率为81.76%~102.41%,表明方法精确度好、灵敏度高。LAS单克隆抗体的制备和Ci-ELISA方法的建立为下一步试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 拉沙里菌素 半抗原 单克隆抗体 间接竞争ELISA
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雌二醇单克隆抗体制备及间接竞争ELISA检测方法的建立 认领 被引量:3
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作者 白宇 胡景炎 +4 位作者 许永鹏 何杰 金俊杰 李培德 刘素贞 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第10期3100-3105,共6页
为建立敏感、特异、快速的雌二醇(estradiol,E2)残留免疫检测方法,本研究利用雌二醇人工抗原(E2-BSA)免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备特异性雌二醇单克隆抗体,利用高效价、高特异性单克隆抗体建立间接竞争ELISA(ic ELIS... 为建立敏感、特异、快速的雌二醇(estradiol,E2)残留免疫检测方法,本研究利用雌二醇人工抗原(E2-BSA)免疫BALB/c小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备特异性雌二醇单克隆抗体,利用高效价、高特异性单克隆抗体建立间接竞争ELISA(ic ELISA)方法。结果显示,试验成功筛选获得一株稳定分泌抗雌二醇抗体的杂交瘤细胞株(3H3),抗体效价可达1∶320 000,利用3H3腹水抗体优化间接竞争ic ELISA反应条件,检测抗体的敏感度,IC50为1.636 ng/m L,IC20~IC80线性范围为0.202~13.281 ng/m L。雌二醇腹水抗体与雌三醇、乙炔雌二醇的交叉反应率分别达0.31%和0.25%,而与雌酮、戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、炔雌醚、己烯雌酚、壬基酚的交叉反应率均〈0.1%。结果表明,利用本研究制备的单克隆抗体建立雌二醇间接竞争ELISA检测方法,可满足食品中雌二醇残留高灵敏度的检测要求。 展开更多
关键词 雌二醇 单克隆抗体 间接竞争ELISA
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恩诺沙星完全抗原的合成及间接竞争ELISA方法的建立 认领 被引量:1
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作者 李树莹 唐云飞 +2 位作者 盛建武 刘丽 何苗 《环境科学学报》 CSCD 北大核心 2017年第8期2904-2910,共7页
为了建立环境新型抗生素类污染物恩诺沙星的免疫检测方法,采用间接竞争ELISA方法,用酶标仪测定酶标二抗与底物反应生成的有色产物量来确定恩诺沙星含量.研究了恩诺沙星完全抗原的合成方法,以及间接竞争ELISA的优化条件和实际水样的检测... 为了建立环境新型抗生素类污染物恩诺沙星的免疫检测方法,采用间接竞争ELISA方法,用酶标仪测定酶标二抗与底物反应生成的有色产物量来确定恩诺沙星含量.研究了恩诺沙星完全抗原的合成方法,以及间接竞争ELISA的优化条件和实际水样的检测效果.结果表明,通过碳二亚胺法(EDC+NHS)成功合成了恩诺沙星的理想完全抗原,采用BCA法测定完全抗原浓度,紫外吸收法和MADLI-TOF MS法测得完全抗原的偶联比为14~16.建立的恩诺沙星间接竞争ELISA检测方法,检测限为1.92μg·L-1,定量检测区间为7.33~238.24μg·L-1.采用优化后的实验条件测定了清华大学地下水和饮用水配制的恩诺沙星加标样品,发现所有样品的变异系数和回收率分别为3%~11%和82%~122%,表明建立的间接竞争ELISA方法适用于实际水样中恩诺沙星的快速简便检测. 展开更多
关键词 恩诺沙星 间接竞争ELISA 完全抗原 水样
缩短显色时间对间接竞争ELISA试验检测磺胺类药物结果的影响 认领
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作者 姚学军 吕艳秋 +8 位作者 黄东风 阚纯利 蒋永安 刘艳霞 王美丽 邢国栋 王金霞 刘志忠 王爱玲 《当代畜牧》 2017年第11期42-43,共2页
笔者采用间接竞争ELISA试验方法检测34份鸡饲料中磺胺类药物(十五合一)含量,在检测过程中,对照组与试验组的操作步骤基本相同,只有在显色反应步骤,对照组采用说明书中规定的避光环境中反应15min,而试验组为避光环境中反应10min... 笔者采用间接竞争ELISA试验方法检测34份鸡饲料中磺胺类药物(十五合一)含量,在检测过程中,对照组与试验组的操作步骤基本相同,只有在显色反应步骤,对照组采用说明书中规定的避光环境中反应15min,而试验组为避光环境中反应10min。显色反应之后,2组分别加入终止液,设定酶标仪于450nm处,测定每孔吸光度值(OD值),2组数据分别在5min内读取完成。结果表明,2组OD值经方差分析无显著差异。 展开更多
关键词 间接竞争ELISA 显色 OD值
大型溞ChE和NAGase间接竞争和非竞争ELISA方法的比较 认领 被引量:1
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作者 郎倩萍 李少南 +1 位作者 郑佳豪 张文萍 《安徽农业科学》 CAS 2016年第24期1-5,共5页
[目的]探索间接非竞争ELISA和间接竞争ELISA法测定大型溞ChE和NAGase的试验条件及方法灵敏度。[方法]分别采用间接竞争和间接非竞争ELISA方法测定大型溞ChE和NAGase。[结果]对于ChE,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为1... [目的]探索间接非竞争ELISA和间接竞争ELISA法测定大型溞ChE和NAGase的试验条件及方法灵敏度。[方法]分别采用间接竞争和间接非竞争ELISA方法测定大型溞ChE和NAGase。[结果]对于ChE,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为1.466μg/mL和1∶10 000,灵敏度为7.4267 ng/mL;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为5.277μg/mL和1∶8 000,灵敏度为0.163 4 ng/mL。对于NAGase,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为8.961μg/mL和1∶6 000,灵敏度为4.199 9 ng/mL;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为6.450μg/mL和1∶4 000,灵敏度为0.250 8 ng/mL。[结论]无论是ChE还是NAGase,间接竞争ELISA在最适抗体浓度下的检测灵敏度均高于间接非竞争ELISA,加之其操作简便,间接竞争ELISA在生物和环境样品ChE和NAGase含量检测中值得推广应用。 展开更多
关键词 胆碱酯酶 氨基葡糖糖苷酶 间接竞争ELISA 间接竞争ELISA 大型溞
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