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钙对人系膜细胞增殖及1,25-D3-MARRS蛋白表达的影响 预览
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作者 任国臣 刘刚 +2 位作者 赵丹 顾杰 杨晓萍 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第9期1396-1399,共4页
目的探讨钙离子对人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响及维生素D膜相关快速反应结合蛋白(1,25-D3-MARRS)表达的改变。方法①体外培养HMC,给予不同浓度钙离子培养液干预细胞48 h,分为3组:正常对照组(0 mol/L CaCl 2)、低钙组(10^-4 mol/L Ca... 目的探讨钙离子对人肾小球系膜细胞(HMC)增殖的影响及维生素D膜相关快速反应结合蛋白(1,25-D3-MARRS)表达的改变。方法①体外培养HMC,给予不同浓度钙离子培养液干预细胞48 h,分为3组:正常对照组(0 mol/L CaCl 2)、低钙组(10^-4 mol/L CaCl 2)、高钙组(1.8×10^-3 mol/L CaCl 2);② CCK-8法检测细胞增殖能力;③免疫荧光法和Western blot法检测各组1,25-D 3-MARRS蛋白的表达;④ RT-PCR法检测各组1,25-D 3-MARRS mRNA的含量。结果①与正常对照组比较,低钙组(10^-4 mol/L) HMC抑制率增高,高钙组(1.8×10^-3 mol/L ) HMC的抑制率降低( P <0.05);② 1,25-D 3-MARRS在各组HMC均有表达,且主要表达在细胞膜,与正常对照组比较,低钙组1,25-D 3-MARRS蛋白表达升高( P <0.05);高钙组蛋白表达降低,但差异无统计学意义;③与正常对照组比较,低钙组 1,25-D 3-MARRS mRNA 表达升高( P <0.05),高钙组mRNA表达降低,但差异无统计学意义。结论低浓度钙离子可以抑制HMC的增殖,其作用机制可能与1,25-D 3-MARRS蛋白的表达增高有关。 展开更多
关键词 肾小球肾炎 钙离子 系膜细胞 1 25-D3-MARRS
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大鼠1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白的原核表达及纯化
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作者 徐静 张振书 +2 位作者 王灿 刘富强 白岚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期538-542,共5页
目的原核表达并纯化大鼠1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合(1,25D3-Membrane associated rapid re-sponse steroid binding,1,25D3-MARRS)蛋白。方法经RT-PCR扩增大鼠1,25D3-MARRS基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)... 目的原核表达并纯化大鼠1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合(1,25D3-Membrane associated rapid re-sponse steroid binding,1,25D3-MARRS)蛋白。方法经RT-PCR扩增大鼠1,25D3-MARRS基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白,并进行Western blot鉴定。结果重组原核表达质粒pET-32a-1,25D3-MARRS经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为77 000,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,且具有良好的反应原性。结论已成功表达并纯化了重组1,25D3-MARRS蛋白,为进一步研究其性质、功能及分布特点奠定了基础。 展开更多
关键词 1 25D3-膜相关快速反应类固醇结合蛋白 原核细胞 基因表达 纯化 胃钙素
免疫沉淀1,25D3-MARRS后胃黏膜提取物对成骨细胞生物学活性的影响 预览 被引量:1
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作者 刘富强 陈建庭 +1 位作者 徐静 白岚 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2010年第12期913-919,共7页
目的 探讨1,25D3-MARRS(Membrane Associated,Rapid Response Steroid binding)Receptor蛋白是否参与胃黏膜提取物(EOM)对成骨细胞生物学活性的影响.方法 酶消化法培养SD大鼠新生乳鼠的成骨细胞.提取SD大鼠胃黏膜提取物,每500μg胃... 目的 探讨1,25D3-MARRS(Membrane Associated,Rapid Response Steroid binding)Receptor蛋白是否参与胃黏膜提取物(EOM)对成骨细胞生物学活性的影响.方法 酶消化法培养SD大鼠新生乳鼠的成骨细胞.提取SD大鼠胃黏膜提取物,每500μg胃黏膜提取物中分别加入10 μg、1μg、0.1μg ERp57抗体(即1,25D3-MARRS抗体)、1μg正常IgG抗体进行孵育,然后分别加入50μl预洗的Protein A/G bead slurry进行免疫沉淀反应,离心去除1,25D3-MARRS-1,25D3-MARRS抗体-Protein A/G bead slurry复合物后取上清液作为高沉淀组EOM、中沉淀组 EOM、低沉淀组EOM和正常IgG组EOM,并设生理盐水和未处理组EOM干预成骨.MTT法检测0~3天成骨细胞的增殖能力.逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测成骨细胞I型胶原和骨钙素的表达变化.结果 在成骨细胞增殖实验中,生理盐水组低于其他5组的增殖能力(P〈0.05),免疫沉淀组EOM和未处理组EOM之间无显著差别(P〉0.05).I型胶原和骨钙素的表达水平在免疫沉淀1,25D3-MARRS后发生不同程度的降低.结论 免疫沉淀1,25D3-MARRS后胃黏膜提取物对成骨细胞的增殖能力无明显影响,但降低分化能力,提示可能它通过参与EOM对成骨细胞的分化作用而影响骨钙代谢. 展开更多
关键词 免疫沉淀 1 25D3-MARRS 胃黏膜提取物 成骨细胞
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胃泌素对大鼠小肠上皮1,25(OH)_2D_3膜相关快速反应类固醇结合蛋白的影响 预览
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作者 梁芬芬 刘翠平 +2 位作者 黎丽旋 郭瑜 白岚 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期990-993,共4页
目的探讨胃泌素对大鼠小肠上皮1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白(1,25D3-MARRS结合蛋白)表达的影响。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和免疫印迹法,检测胃泌素、奥美拉唑处理后的SD大鼠小肠中1,25D3-MARRS结合蛋白的表达情况... 目的探讨胃泌素对大鼠小肠上皮1,25(OH)2D3膜相关快速反应类固醇结合蛋白(1,25D3-MARRS结合蛋白)表达的影响。方法应用免疫组织化学、RT-PCR和免疫印迹法,检测胃泌素、奥美拉唑处理后的SD大鼠小肠中1,25D3-MARRS结合蛋白的表达情况与对照组的差异,并测大鼠血清中钙、磷离子的浓度变化。结果大鼠小肠上皮细胞中1,25D3-MARRS结合蛋白分布于胞核、胞浆和胞膜。胃泌素、奥美拉唑均引起大鼠小肠组织1,25D3-MARRS结合蛋白的mRNA和蛋白两个水平表达增高(P〈0.05),但其作为一个促小肠钙磷吸收的蛋白,无明显增高血清钙磷浓度的作用(P〉0.05)。结论 1,25D3-MARRS结合蛋白作为一个广泛分布的多功能蛋白,受胃泌素的调节,在消化道相关疾病具有很高的研究价值及临床应用前景。 展开更多
关键词 1 25D3-MARRS结合蛋白 胃泌素 小肠钙磷吸收
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