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一个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系F7基因信号肽区L12R和3''非翻译区c11814-insAA复合性突变与表型分析 被引量:1
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作者 刘珊 张敬宇 +3 位作者 李峥嵘 王艳 牛志云 林凤茹 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期508-515,共8页
目的:通过对一个遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症患者家系成员表型与基因型分析,研究其基因突变与临床表型的关系,探讨其分子发病机制。方法:对先证者及其父母进行活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原和FⅦ活... 目的:通过对一个遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症患者家系成员表型与基因型分析,研究其基因突变与临床表型的关系,探讨其分子发病机制。方法:对先证者及其父母进行活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原和FⅦ活性(FⅦ:C)、FⅦ抗原(FⅦ:Ag)检测,对其F7基因的全部外显子及侧翼、启动子区进行测序,以寻找致病基因突变。根据信号肽预测数据库构建包含所发现突变的FVII蛋白分子模型,进行功能预测,推断其对蛋白合成和功能的影响。结果:先证者APTT正常,PT明显延长(58.3 s),FⅦ:C显著下降(1.1%),FⅦ:Ag重度降低(0.9%),其父母的APTT、PT、FⅦ:C和FⅦ:Ag均在正常范围内。先证者和其父亲的F7基因第1a外显子第556位核苷酸发生杂合性T/G突变,导致相应氨基酸由亮氨酸(L)变成精氨酸(R),即L12R。功能预测分析提示,L12R突变影响到信号肽区不同区域的分割及其相应功能,进而导致成熟蛋白质的合成减少和因子活性明显降低。同时,先证者F7基因还存在自发性3'非翻译区c11814-ins AA杂合性突变,而其父母均无此突变。结论:发现1例F7基因L12R突变,位于信号肽区的该杂合突变是导致此例遗传性FVII缺乏症发生的主要分子基础,而位于3'非翻译区的自发性c11814-ins AA突变则进一步造成了FⅦ合成的减低。 展开更多
关键词 凝血因子Ⅶ缺陷 F7基因 信号肽L12R 3'翻译 c11814-insAA复合性突变
SNP芯片联合质谱筛检胃癌相关基因3′UTR区SNPs的病例-对照研究 预览
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作者 韩仁杰 吴传城 +2 位作者 刘宝英 郭赛熊 陈昱 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2018年第5期359-364,共6页
目的:探讨胃癌发生相关基因3’非翻译N(3’UTR)单核苷酸多态性位点(SNPs),为寻找有价值的胃癌分子标志物提供新的依据。方法:采用1:1配对病例一对照研究的方法。应用SNP芯片对福建省胃癌高发区仙游县96例胃腺癌患者与96例健康... 目的:探讨胃癌发生相关基因3’非翻译N(3’UTR)单核苷酸多态性位点(SNPs),为寻找有价值的胃癌分子标志物提供新的依据。方法:采用1:1配对病例一对照研究的方法。应用SNP芯片对福建省胃癌高发区仙游县96例胃腺癌患者与96例健康对照人群基因组中消化道肿瘤相关基因3’UTR区SNPs位点进行检测,应用飞行时间质谱分析质谱技术对芯片筛检出来的SNPs位点在622例胃癌患者和622例正常健康基因组中进行验证。结果:SNP芯片及生物信息学分析选取EGFR rs884225、EGFR rs10277413、FAS rs1468063、MSH2 rs17502941和MSH2 rs11125144为候选基因位点。对622对病例一对照组样本的上述候选基因位点进行SNP分型,均未发现上述5个位点与胃癌易感性相关。进一步分层分析结果发现EGFR rs884225中含有T等位基因的基因型(CT+TT)与贲门癌相关(OR=0.67,95%CI:0.46-0.99),而其他位点与贲门癌、非贲门癌的风险关联无统计学意义(P〉0.05)。结论:EGFR基因3’非翻译区的rs884225多态性位点与福建省仙游县的贲门癌发生存在关联,T等位基因可能是贲门癌发生的一个遗传保护因素。 展开更多
关键词 3翻译 靶基因 单核苷酸多态性 胃癌
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葡萄糖调节蛋白78基因3'UTR多态性与男性弱精子症的相关性研究
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作者 覃海媚 王荣 +5 位作者 庞晓霞 韦玉霞 凌正宝 陈兴鸿 韦敬锡 王俊利 《中华男科学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期596-601,共6页
目的:探究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因3'UTR单核苷酸多态性(rs12009、rs1140763和rs16927997位点)与弱精子症的关系。方法:选取400例弱精子症不育男性为弱精子症组,400例有生育史的健康男性为对照组,运用多重单碱基延伸PCR(SNa... 目的:探究葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因3'UTR单核苷酸多态性(rs12009、rs1140763和rs16927997位点)与弱精子症的关系。方法:选取400例弱精子症不育男性为弱精子症组,400例有生育史的健康男性为对照组,运用多重单碱基延伸PCR(SNa Pshot)对所有研究对象GRP78基因的rs12009、rs1140763和rs16927997位点进行基因分型,再分析此3个位点多态性与男性弱精子症的相关性。结果:弱精子症组和对照组的前向运动精子百分率分别为(20.09±8.18)%、(57.16±13.45)%,两者差异具有统计学意义(P〈0.01)。GRP78基因rs12009和rs1140763存在CC、CT、TT 3种基因型和C、T 2种等位基因;rs16927997存在GG、GA、AA 3种基因型和G、A 2种等位基因。在弱精子症组中,rs12009位点C、T等位基因频率分别为47.3%、52.7%;rs1140763位点C、T等位基因频率分别为52.0%、48.0%;rs16927997位点G、A等位基因频率分别为4.4%、95.6%。而在对照组中,rs12009位点C、T等位基因频率分别为44.3%、55.7%;rs1140763位点C、T等位基因频率均为50.0%;rs16927997位点G、A等位基因频率分别为6.0%、94.0%。3个位点基因型及等位基因频率在弱精子症组和对照组中的分布差异均无统计学意义(P〉0.05);进一步单倍型分析,发现在弱精子症组和对照组中主要为C-C-A、T-C-G、T-T-A 3种单倍型,但也未发现单倍型与男性弱精子症存在相关性。结论:GRP78基因3'UTR多态性与男性弱精子症的发病风险不存在相关性。 展开更多
关键词 葡萄糖调节蛋白78基因 弱精子症 多态性 3'翻译
DNA修复基因RAD52 miRNA靶序列单核苷酸多态性与肝细胞癌遗传易感性研究 预览
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作者 王坚武 于祥远 +7 位作者 王倩倩 秦林原 贝春华 谭盛葵 何松青 唐博 廖维甲 余红平 《中国癌症防治杂志》 CAS 2018年第2期99-104,共6页
目的 探讨DNA修复基因RAD52 3'非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)miRNA靶序列单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与广西地区人群肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)遗传易感性的关系。方法采用病... 目的 探讨DNA修复基因RAD52 3'非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)miRNA靶序列单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与广西地区人群肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)遗传易感性的关系。方法采用病例-对照研究,对1 002例确诊的HCC新发病例和1 013例非肿瘤患者RAD52基因3'-UTR区域miRNA靶序列SNPs(rs1051669、rs1051672、rs7301931和rs7310449)进行基因分型,并分析其基因型频率分布及其与HCC遗传易感性的关系。结果 RAD52基因各SNP基因型在病例组和对照组中的分布频率差异均无统计学意义(P〉0.05)。调整年龄、性别、吸烟、饮酒和HBV感染等因素后,未发现各SNP与HCC易感性有关联;分层分析发现,在女性人群中,与携带rs1051669 C等位基因相比,TT基因型可显著降低个体罹患HCC的风险(TT vs CT/CC:OR=0.03,95%CI:0.00~0.62,P=0.03);与携带rs1051672 G等位基因相比,AA基因型可显著降低个体罹患HCC的风险(AA vs GA/GG:OR=0.03,95%CI:0.01~0.88,P=0.04)。结论 RAD52基因3'-UTR区域miRNA靶序列SNPs rs1051669、rs1051672位点可能与广西地区女性人群HCC易感性有关。 展开更多
关键词 肝肿瘤 RAD52基因 3'翻译 单核苷酸多态性 遗传易感性
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microRNA与mRNA不同位点结合后的生物学效应研究进展 预览
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作者 伍华东 丁颖 徐广峰 《山东医药》 北大核心 2017年第30期111-113,共3页
microRNA(miRNA)是一类单链非编码小RNA,主要参与功能基因的转录后调控,具有广泛、多样的生物功能,在真核生物体内对基因表达具有重要的调控作用。miRNA既可以抑制编码基因mRNA的表达,又可以激活mRNA的作用;既可以在细胞质中作用于mRN... microRNA(miRNA)是一类单链非编码小RNA,主要参与功能基因的转录后调控,具有广泛、多样的生物功能,在真核生物体内对基因表达具有重要的调控作用。miRNA既可以抑制编码基因mRNA的表达,又可以激活mRNA的作用;既可以在细胞质中作用于mRNA的不同区域,也可以返回细胞核中发挥重要的生物学功能;同一个miRNA不一定只是一种作用模式,它可以同时作用于3'UTR、5'UTR和ORF区域。在细胞质中,miRNA通过与mRNA 3个区域中存在的识别位点互补配对并结合一些辅助蛋白发挥作用;在细胞核中,miRNA通过与lncRNA的相互作用起到调节基因功能的作用;miRNA还可与DNA的启动子序列相结合,诱导基因转录与翻译。 展开更多
关键词 MICRORNA 3'翻译 5'翻译 启动子 开放阅读框
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牛IRS1基因3’UTR的克隆、鉴定及生物信息学分析 预览
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作者 李文清 李中举 +2 位作者 孟志鹏 牛梦宇 李万利 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期48-52,共5页
以奶牛乳腺组织为材料,采用3’RACE技术克隆到奶牛IRS1基因3’UTR的全长,进一步对测得的序列进行了验证,同时利用Target Scan 7.0和Pic Tar软件预测可能结合的microRNA,并对多个软件预测结合的microRNA,进行最小结合自由能分析。结果表... 以奶牛乳腺组织为材料,采用3’RACE技术克隆到奶牛IRS1基因3’UTR的全长,进一步对测得的序列进行了验证,同时利用Target Scan 7.0和Pic Tar软件预测可能结合的microRNA,并对多个软件预测结合的microRNA,进行最小结合自由能分析。结果表明,成功克隆了1 327 bp的牛IRS1 3’UTR全长,与NCBI上的预测序列一致率达到99%;miR-128、miR-96、miR-27a为2个软件共同预测到的结合microRNA;3个结合位点的最小自由能分别为-89.58、-87.91、-100.88 k J·mol^-1,表明牛IRS1基因表达可能受到这3个microRNA的调控。 展开更多
关键词 胰岛素受体基质1 3翻译 3’RACE 最小自由能
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草鱼SREBP-1-3'-UTR双荧光素酶报告载体构建及miR-33对其表达的影响
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作者 王俊丽 卢荣华 +4 位作者 秦超彬 常志光 孙君君 杨峰 聂国兴 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期17-22,共6页
为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-33在固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)调节脂代谢中的作用,构建了草鱼SREBP-1基因3'端非翻译区(Untranslated region,UTR)含miR-33靶序列... 为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-33在固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)调节脂代谢中的作用,构建了草鱼SREBP-1基因3'端非翻译区(Untranslated region,UTR)含miR-33靶序列的双荧光素酶报告基因载体。首先用PCR法获得SREBP-1 mRNA含miR-33结合位点的3'UTR序列(379 bp),与双荧光素酶报告载体pmir GLO重组后转染DH5α感受态细胞。然后经筛选和双酶切鉴定,获得含有SREBP-1基因3'-UTR的双荧光素酶报告载体:pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR。最后在草鱼肝细胞L8824共转染miR-33mimics和pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR,明确miR-33与SREBP-1基因3'UTR区的靶向关系。结果表明,含有SREBP-1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告基因载体构建成功,PCR、双酶切和基因测序证明序列与目标一致;转染pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR的L8824细胞可表达荧光素酶,单独转染载体组的荧光素酶活性显著高于共转染载体和miR-33 mimics组(P〈0.05)。本研究证实草鱼SREBP-1是miR-33的直接靶基因,miR-33通过和SREBP-1 mRNA 3'UTR结合,调控SREBP-1基因的转录后表达。 展开更多
关键词 草鱼 SREBP-1 miR-33 3'翻译 pmirGLO报告基因载体 荧光素酶活性
四川省首株盖塔病毒SC1210的鉴定 被引量:2
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作者 李伟 潘明 +7 位作者 周兴余 林世华 刘学成 付士红 陈丹林 曹一欧 梁国栋 张佳珂 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期2-7,共6页
目的 对四川省从蚊虫分离到的病毒SC1210进行鉴定并分析其基因组特征.方法 利用披膜病毒科甲病毒属特异性引物进行RT-PCR鉴定,并采用二代测序平台Ion Torrent PGM进行基因组全序列测定,然后利用Mega Align软件对测定的核苷酸和推测的氨... 目的 对四川省从蚊虫分离到的病毒SC1210进行鉴定并分析其基因组特征.方法 利用披膜病毒科甲病毒属特异性引物进行RT-PCR鉴定,并采用二代测序平台Ion Torrent PGM进行基因组全序列测定,然后利用Mega Align软件对测定的核苷酸和推测的氨基酸序列进行比较分析,利用Mega 6软件绘制系统发生树.结果 SC1210为盖塔病毒(Getah virus,GETV),该株病毒基因组全长11 690nt,与国内外其他分离株的核苷酸同源性为99.2%-99.7%,氨基酸同源性为96.5%-99.4%.衣壳蛋白全长为804nt,编码268个氨基酸,与其他株的核苷酸同源性为94.9%-99.2%,氨基酸同源性97%-99.6%.E2基因全长1 266 nt,编码422个氨基酸,与其他株的核苷酸同源性为94.6%-99.6,氨基酸同源性为97.1%-99.5%.3'UTR全长402 nt,具有GETV病毒独特的3个完整的重复序列元件和19 nt的保守序列.结论 四川省分离到的首株GETV SC1210与云南分离株YN0540亲缘关系较近,而与马来西亚原始株MM2021亲缘关系较远. 展开更多
关键词 盖塔病毒 衣壳蛋白基因 E2蛋白基因 3翻译 核苷酸序列
NFKBIA 3'UTR功能鉴定及相互作用蛋白的蛋白质组学筛选
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作者 王静 李涛 +2 位作者 欧小利 姜勇 梅柱中 《生物技术》 北大核心 2017年第2期154-160,共7页
[目的]鉴定NFKBIA基因3'非翻译区功能并筛选与其相互作用的蛋白质。[方法]①PCR扩增获得luciferaseNFKBIA 3'非翻译区融合片段并克隆至p GL3-control载体中获得重组质粒p GL3-NF,转染NIH3T3细胞24h后回收细胞检测荧光素酶活性。②制... [目的]鉴定NFKBIA基因3'非翻译区功能并筛选与其相互作用的蛋白质。[方法]①PCR扩增获得luciferaseNFKBIA 3'非翻译区融合片段并克隆至p GL3-control载体中获得重组质粒p GL3-NF,转染NIH3T3细胞24h后回收细胞检测荧光素酶活性。②制备生物素标记的NFKBIA 3'非翻译区RNA探针,通过链亲和素-生物素RNA-pull down获得与其相互结合的蛋白质并进行质谱鉴定。[结果]①NFKBIA 3'非翻译区能显著性降低与其相连的荧光素酶基因的表达(p〈0.001)。②质谱鉴定得到Myosin9等24种与NFKBIA 3'非翻译区相互作用的蛋白质。[结论]NFKBIA基因3'非翻译区对与其相连的基因的表达起负调控作用。与NFKBIA基因3'非翻译区相互结合的24种蛋白质之间存在直接或间接的相互作用。 展开更多
关键词 核因子"B NFKBIA mRNA 3'翻译 RNA结合蛋白 质谱
选择压力对五个少数民族群体HLA-G基因3’非翻译区多态性的影响 被引量:2
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作者 孙浩 孙倩倩 +5 位作者 黄铠 林克勤 刘舒媛 杨昭庆 褚嘉祐 黄小琴 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期435-441,共7页
目的探讨选择压力与遗传背景对中国5个南北方少数民族群体HLA-G基因3'非翻译区(untranslatedregions,UTR)多态性的影响。方法采用PCR扩增及DNA测序的方法,对中国3个南方少数民族(仡佬族、水族、傣族)和2个北方少数民族(柯尔克... 目的探讨选择压力与遗传背景对中国5个南北方少数民族群体HLA-G基因3'非翻译区(untranslatedregions,UTR)多态性的影响。方法采用PCR扩增及DNA测序的方法,对中国3个南方少数民族(仡佬族、水族、傣族)和2个北方少数民族(柯尔克孜族及蒙古族)共432人进行HLA-G基因第8外显子3’UTR区域多态性位点的基因分型,并选择10个中性短串联重复(shorttandemrepeats,STR)多态性位点进行基因分型。结果在蒙古族、柯尔克孜族和仡佬族的HLA-G基因3’UTR区中检测到8个多态性位点,在傣族和水族中检测到7个多态性位点。3’UTR区域的多态性位点在3个南方少数民族群体的观察杂合度大多高于期望杂合度,在北方的两个少数民族群体中,二者的关系是相反的。STR的期望杂合度和观察杂合度的关系均为随机。单倍型Ewens—Watterson中性检测在南方的傣族和水族中有统计学意义。3个南方群体HLA-G基因3’UTR区域多态性构建基因树与群体STR系统发育树有所偏差。结论居住于中国南方的傣族和水族的HLA-G基因3,UTR区域可能受到选择作用,这种选择作用可能由与病原选择所驱动的。 展开更多
关键词 HLA-G基因 3翻译 多态性 自然选择
NFKBIA 3'UTR不同基因型载体的构建及其功能差异性比较
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作者 杨朔 李嘉丽 +5 位作者 毕惠嫦 周守宁 刘晓曼 曾行 胡冰芳 黄民 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期80-85,共6页
验证NFKBIA基因3'非翻译区(3'UTR)两个SNP--rs8904C〉T和rs696G〉A的功能。以两个位点分别为CC纯合子和GA杂合子基因型的人全基因组DNA为模板,通过设计不同引物以扩增长度为503 bp的NFKBIA基因3'UTR片段,经测序验证后将该片段克隆... 验证NFKBIA基因3'非翻译区(3'UTR)两个SNP--rs8904C〉T和rs696G〉A的功能。以两个位点分别为CC纯合子和GA杂合子基因型的人全基因组DNA为模板,通过设计不同引物以扩增长度为503 bp的NFKBIA基因3'UTR片段,经测序验证后将该片段克隆至荧光素酶载体pGL3-promoter中,构建4种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696G、pGL3-rs8904C/rs696A、pGL3-rs8904T/rs696G和pGL3-rs8904T/rs696A,并转染LS174T细胞,检测荧光素酶活性。与转染了pGL3-vector组(阴性对照)相比,转染重组双荧光素酶报告质粒的荧光素酶活性均显著下降(P〈0.001)。对于rs696G〉A,含等位基因A的两种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696A和pGL3-rs8904T/rs696A的荧光素酶活性分别比含等位基因G的两种重组质粒pGL3-rs8904C/rs696G和pGL3-rs8904T/rs696G下降约45.1%(P〈0.05)和56.1%(P〈0.001)。对于rs8904C〉T,含等位基因T的两种重组质粒分别与含等位基因C的两种重组质粒相比,荧光素酶活性无显著性差异。NFKBIA基因3'UTR双荧光素酶报告基因载体构建成功,并发现rs696G〉A会减弱荧光素酶活性的表达,rs8904C〉T对荧光素酶活性的表达无明显影响。 展开更多
关键词 NFKBIA 3'翻译 单核苷酸多态性 荧光素酶报告基因载体 rs696 rs8904
MiRNA-24、miRNA-34a和miRNA-375抑制小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中Neurod1/BETA2的蛋白表达 被引量:2
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作者 张许 朱云霞 韩晓 《医学分子生物学杂志》 CAS 2015年第4期197-201,共5页
目的在小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中分析miRNA-24、miRNA-34a和miRNA-375对Neurod1/BETA2的表达调控以及作用方式。方法设计并合成针对小鼠Neurod1基因3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)序列的引物,克隆于pMIR-REPORT^TM... 目的在小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中分析miRNA-24、miRNA-34a和miRNA-375对Neurod1/BETA2的表达调控以及作用方式。方法设计并合成针对小鼠Neurod1基因3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)序列的引物,克隆于pMIR-REPORT^TM荧光素酶报告基因载体中;用miranda软件预测可能调控Neurod1表达的miRNAs,挑选在B细胞中有相关功能研究的miRNAs并委托公司合成pre—miRNAs;脂质体法转染至MIN6细胞中。荧光素酶报告基因技术分析这些miRNA对Neurod1的作用;定量RT.PCR分析Neurod1的mRNA水平;Western印迹检测Neurod1的蛋白表达水平;GSIS检测干扰Neurod1后MIN6细胞的功能。结果成功制备小鼠Neurod1基因的3’UTR荧光素酶报告基因载体;选取了预测在Neurod1的3’UTR有互补结合位点的3个miRNAs(miRNA-24、miR-34a和miR.375),并挑选一个没有互补结合位点的miRNA(miR-29a)作为阴性对照;在MIN6细胞中过表达pre-miRNA-24、pre-miR-34a和pre-miR-375能够抑制Neurod1基因3’UTR荧光素酶报告基因的活性,而过表达阴性对照miRNA-29a则不能抑制其活性;pre—miRNA-24、pre-miR-34a和pre-miR-375还可以不同程度抑制Neumd1的蛋白表达;在MIN6细胞中干扰Neurod1蛋白表达能够降低细胞的GSIS功能。结论miRNA-24、miR-34a和miR-375能够抑制小鼠胰岛B细胞系MIN6细胞中Neurod1的蛋白表达。 展开更多
关键词 miRNA-24 miRNA-34a miRNA-375 Neurod1 3翻译 胰岛Β细胞
微小RNA-106b靶向下调腺瘤性息肉病基因表达促进Hep-2细胞的增殖 被引量:2
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作者 段继惠 杨磊 +2 位作者 王巍 穆红 唐志琴 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1650-1652,共3页
目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-106b影响喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖的分子机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)法分析miR-106b对Hep-2细胞株增殖的影响;通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot技术检测miR-106b各转染组腺瘤... 目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-106b影响喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株增殖的分子机制.方法 应用噻唑蓝(MTT)法分析miR-106b对Hep-2细胞株增殖的影响;通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot技术检测miR-106b各转染组腺瘤性息肉病基因(APC) mRNA和蛋白表达水平;将APC基因3'非翻译区(3'UTR)-荧光素酶表达载体及其突变体与miR-106b共转染至Hep-2细胞,采用双荧光素酶检测系统检测荧光素酶的活性.结果 与miR-106b inhibitor和对照组比较,转染miR-106b-mimics能明显促进Hep-2细胞的增殖;APC蛋白在miR-106b-mimics转染组、对照组和miR-106b inhibitor中的表达水平分别为0.586 ±0.023,0.734 ±0.024和0.927±0.018,3组间差异有统计学意义(P<0.05);而APC mRNA的表达水平在3组间差异无统计学意义(P>0.05);在共转染野生型APC基因3'UTR-荧光素酶表达载体的Hep-2细胞中,上述3组荧光素酶的活性分别为4.37±1.04,8.376±1.23和23.75±1.63,3组间差异有统计学意义(P<0.05);而在共转染突变型APC基因3'UTR-荧光素酶表达载体的Hep-2细胞中,上述3组荧光素酶的活性差异无统计学意义(P>0.05).结论 在喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株中,miR-106b可结合到APC基因3'UTR,在转录后水平负性调控APC基因的表达,从而促进Hep-2细胞的增殖. 展开更多
关键词 喉肿瘤 微小RNA 腺瘤性息肉病基因 3'翻译
TBX2基因3'非翻译区位点rs59382073与汉族人群散发型先天性心脏病的易感性密切相关 预览 被引量:2
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作者 王凤 张萍 +3 位作者 段文元 俞立玮 赵健元 桂永浩 《中国循证儿科杂志》 CSCD 北大核心 2015年第3期166-170,共5页
目的分析TBX2基因3'UTR变异位点与汉族人群散发型先天性心脏病(CHD)的遗传易感性是否关联,初步探讨其可能的发病机制。方法纳入2010年8月至2012年4月山东济南军区总医院心血管病研究所诊断的非综合征型汉族CHD为CHD组,以同期医院和... 目的分析TBX2基因3'UTR变异位点与汉族人群散发型先天性心脏病(CHD)的遗传易感性是否关联,初步探讨其可能的发病机制。方法纳入2010年8月至2012年4月山东济南军区总医院心血管病研究所诊断的非综合征型汉族CHD为CHD组,以同期医院和社区体检的健康儿童为对照组。选择CHD组和对照组各24例行TBX2 3'UTR测序。根据测序结果在CHD组和对照组分别行SNa Pshot基因分型和关联分析;通过细胞转染及荧光素酶检测对阳性位点进行功能分析。结果 CHD组纳入768例,年龄(6.1±4.8)岁,男383例(49.9%);对照组纳入660例,年龄(6.5±3.2)岁,男354例(53.6%)。124例CHD和24例对照行TBX2基因3'UTR区测序发现3个已知的SNPs位点:rs59382073、rs1058004和rs729782,未检出新发SNPs位点。2样本采集中期CHD和对照组各288例样本的关联分析显示,rs59382073的基因型在CHD组和对照组的分布差异有统计学意义(P=0.012);余2个SNPs在两组间差异无统计学意义(P〉0.5),后续样本未行该2个SNPs检测。3全样本关联分析显示,TBX2 3'UTR rs59382073位点与散发型CHD的患病风险密切相关,GT/TT基因型较GG基因型可导致CHD的患病风险增加2.13倍(OR=2.13,95%CI:1.51~2.99,P=1.44×10-5);进一步分层分析显示,与GG基因型相比,GT/TT基因型增加2.75倍圆椎动脉干畸形(OR=2.75,95%CI:1.57~4.81,P=3.99×10-4)、3.18倍法洛四联症(OR=3.18,95%CI:1.53~6.61,P=1.90×10-3)和1.70倍室间隔缺损(OR=1.70,95%CI:1.17~2.46,P=5.14×10-3)的患病风险。4细胞水平的功能研究提示,与G等位基因相比,转染T等位基因可分别导致HEK293 T及H9C2细胞的荧光素酶活性下降29.2%和33.6%。结论 TBX2 3'UTR rs59382073位点可显著增加汉族人群散发型CHD的患病风险;其不同等位基因的荧光素酶表达水平存在差异,为潜在的功能位点。 展开更多
关键词 先天性心脏病 TBX2基因 单核苷酸多态性 3'翻译
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miR-122靶向调控心肌样细胞诱导分化过程中GATA4基因的表达 预览 被引量:2
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作者 郭励京 张志 +2 位作者 刘紫东 付伟 季州 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第4期333-336,I0006共5页
目的:实现大鼠骨髓间充质干细胞(bMSCs)向心肌样细胞的诱导分化,并验证分化过程中miR-122靶向调控GATA4基因的表达。方法首先,分离培养bMSCs,应用5-氮杂胞苷(5-azacytidine)将其诱导分化为心肌样细胞。然后,采用靶基因预测软件... 目的:实现大鼠骨髓间充质干细胞(bMSCs)向心肌样细胞的诱导分化,并验证分化过程中miR-122靶向调控GATA4基因的表达。方法首先,分离培养bMSCs,应用5-氮杂胞苷(5-azacytidine)将其诱导分化为心肌样细胞。然后,采用靶基因预测软件miRanda和TargetScan对miR-122和GATA4基因的靶向匹配关系进行预测并通过双荧光素酶报告基因系统鉴定。qRT-PCR检测诱导分化过程中miR-122和GATA4的表达。结果诱导分化后的细胞平行排列,紧密相连,形态规则均一,免疫荧光化学显示有心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达。生物信息学方法预测发现miR-122和GATA4基因两者匹配良好,通过双荧光素酶报告基因系统检测发现miR-122能结合到GATA4 mRNA的3′UTR并有效抑制其表达。qRT-PCR检测结果表明,miR-122的表达水平与GATA4表达呈负相关。结论 miR-122能调控心肌样细胞诱导分化过程中GATA4的表达。 展开更多
关键词 间质干细胞 微RNAs GATA4转录因子 3翻译 计算生物学 大鼠 Sprague-Dawley MIR-122 肌样细胞
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胰岛素样生长因子2受体基因3'非翻译区的单核苷酸多态性及其生物信息学分析 预览 被引量:2
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作者 陈凤霞 张文文 +1 位作者 杨芳 管晓翔 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第12期1262-1265,共4页
目的基因3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)中miRNA结合区域的遗传突变能够影响基因的表达调控,文中利用生物信息学技术预测胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor 2 receptor,IGF2R)基因3'UTR的遗传突变,... 目的基因3'非翻译区(3'untranslated region,3'UTR)中miRNA结合区域的遗传突变能够影响基因的表达调控,文中利用生物信息学技术预测胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor 2 receptor,IGF2R)基因3'UTR的遗传突变,并检测其对基因表达的影响。方法运用多个在线数据库,获取IGF2R基因3'UTR中具有最小等位基因频率(minor allele frequency,MAF)的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs),计算其在不同人种中的频率分布及各SNPs之间的连锁不平衡,并预测与其相应结合的miRNA。最后,检测在淋巴母细胞系中不同变体基因型对IGF2R基因mRNA表达的影响。结果在IGF2R基因3'UTR的33个SNPs中,仅有5个SNPs(rs8191959、rs200237825、rs3832385、rs201568808、rs1050015)具有〉0.05的MAF,其中只有rs1050015基因型突变对mRNA表达水平差异具有统计学意义(P=0.010)。结论IGF2R基因3'UTR的rs1050015突变能够促进其表达,可作为帮助预测癌症风险的遗传标志物及个体化治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子2受体基因 3'翻译 单核苷酸多态性 生物信息学
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GW112 mRNA 3’端非翻译区特异性结合蛋白研究 预览
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作者 吴莉雅 安娜 +2 位作者 蒋雪 刘先俊 黄轶 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期369-373,共5页
目的:通过体外实验筛选出与GW112 mRNA 3’非翻译区临床特异性结合蛋白,并研究蛋白性质。方法:以稳定表达GW112基因的胃癌细胞SGC-7901为实验对象,体外转录法获得GW112 mRNA 3’非翻译区片段并用生物素标记,结合亲和素磁珠特异性吸附... 目的:通过体外实验筛选出与GW112 mRNA 3’非翻译区临床特异性结合蛋白,并研究蛋白性质。方法:以稳定表达GW112基因的胃癌细胞SGC-7901为实验对象,体外转录法获得GW112 mRNA 3’非翻译区片段并用生物素标记,结合亲和素磁珠特异性吸附原理,从细胞总蛋白中纯化出与GW112 mRNA 3’非翻译区特异性结合蛋白。经过质谱鉴定得到蛋白信息,并用Western blot验证结果。结果:用磁珠纯化的蛋白样品经SDS-PAGE电泳后,取目的条带进行质谱分析发现存在核仁素蛋白,以核仁素单克隆抗体进行Western blot验证后发现与质谱结果一致。结论:核仁素是GW112 mRNA 3’非翻译区特异性结合蛋白的一种,并很可能对GW112 mRNA稳定性有直接影响,这为进一步揭示GW112在胃癌细胞抗凋亡机制中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 GW112基因 GW112 MRNA 3翻译 体外转录 磁珠吸附 核仁素
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mRNA3'末端非编码区及其多态性在炎症与免疫中的调控作用 预览
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作者 田鹏(综述) 孙雨 邹华(审校) 《医学综述》 2012年第19期3153-3156,共4页
信使RNA 3'末端非编码区(3'UTR)含有多种顺式反应元件,该顺式元件参与基因表达的转录后调节。其中,存在于3'UTR的A/U富集元件(ARE)具有调控基因表达作用。ARE介导的基因表达的转录后调控广泛存在。人类细胞内ARE-containing基因... 信使RNA 3'末端非编码区(3'UTR)含有多种顺式反应元件,该顺式元件参与基因表达的转录后调节。其中,存在于3'UTR的A/U富集元件(ARE)具有调控基因表达作用。ARE介导的基因表达的转录后调控广泛存在。人类细胞内ARE-containing基因主要编码一些短暂生物学过程,如免疫、炎症及凋亡等的蛋白质。另外,人类基因中广泛存在多个可选择性多聚腺苷酸化位点,产生不同3'UTR长度或不同蛋白质产物的转录本,而且人体很多3'UTR改变的事件涉及机体免疫及炎性反应。 展开更多
关键词 信使RNA 3'翻译 选择性多聚腺苷酸化 免疫 炎症 基因表达
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大鼠Nrn1基因3’UTR克隆及序列分析 预览 被引量:2
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作者 菅辉玲 程江 +1 位作者 黄瑾 高蕊 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1066-1069,共4页
目的 neuritin(Nrn1/Cpg15)是一种神经突起生长因子,在神经修复过程中发挥着重要作用。本文旨在探讨miRNAs调控Nrn1基因表达的潜在性。方法采用PCR技术克隆大鼠Nrn1基因的3’UTR片段,同时利用MiRanda、DNAMAN软件对Nrn1基因序列及miRN... 目的 neuritin(Nrn1/Cpg15)是一种神经突起生长因子,在神经修复过程中发挥着重要作用。本文旨在探讨miRNAs调控Nrn1基因表达的潜在性。方法采用PCR技术克隆大鼠Nrn1基因的3’UTR片段,同时利用MiRanda、DNAMAN软件对Nrn1基因序列及miRNA结合位点进行生物信息学分析。结果成功克隆了649bp的Nrn1 3’UTR核心区段;Nrn1基因在不同物种间的序列同源性呈高度保守。MiRanda靶标预测结果表明miR-204在3’UTR结合位点处高度保守,分值和能值较高,具有很强的潜在性。结论 Nrn1基因3’UTR在不同物种间序列保守性较高,miRanda软件预测miR-204结合位点处序列高度保守,进一步暗示Nrn1基因表达可能受到miR-204的调控。 展开更多
关键词 Nrn1基因 3翻译 序列同源性 靶标位点
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人EZH2基因编码区及3’非翻译区融合蛋白重组慢病毒表达载体构建及其在293T细胞中的表达 预览 被引量:4
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作者 彭攸 赵卫卫 +4 位作者 李晓娇 王玉平 卢晓佳 邬美玉 冯景 《中华临床医师杂志(电子版)》 2012年第24期8151-8155,共5页
目的构建携带人EZH2基因编码区(coding region,CDS)及3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)融合红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)重组慢病毒表达载体,使mCherry-EZH2融合蛋白在293T细胞中稳定表达。方法运用In-Fusio... 目的构建携带人EZH2基因编码区(coding region,CDS)及3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)融合红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)重组慢病毒表达载体,使mCherry-EZH2融合蛋白在293T细胞中稳定表达。方法运用In-Fusion定向克隆技术构建人EZH2基因CDS区及3’UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体,测序无误后抽提质粒,转染293T细胞,包装病毒,测定病毒滴度。Western blot检测mCherry-EZH2的表达。结果测序证实重组慢病毒表达载体基因序列完全正确;病毒颗粒包装成功,滴度为1.59×109IU/ml;Western blot检测293T细胞中可以表达mCherry-EZH2融合蛋白。结论成功构建人EZH2基因CDS区及3’UTR融合蛋白重组慢病毒表达载体及病毒,其mCherry-EZH2可以在293T细胞中稳定表达。为进一步分析可能调控EZH2基因CDS区及3’UTR表达的miRNA奠定前期实验基础。 展开更多
关键词 3翻译 EZH2基因 红色荧光蛋白 慢病毒载体
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