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流式细胞术检测供体猪α-1,3-Gal和人源CD46的表达 预览
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作者 杜敏杰 魏静 +1 位作者 臧荣鑫 潘登科 《实用器官移植电子杂志》 2018年第5期375-379,共5页
目的检测基因修饰猪细胞表面α-1,3-半乳糖(α-Gal)抗原敲除情况和人源蛋白CD46(hCD46)的表达情况,为异种器官移植提供可靠的供体。方法采集500μl野生型(wild type,WT)、α—1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)、hCD46和GTK... 目的检测基因修饰猪细胞表面α-1,3-半乳糖(α-Gal)抗原敲除情况和人源蛋白CD46(hCD46)的表达情况,为异种器官移植提供可靠的供体。方法采集500μl野生型(wild type,WT)、α—1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)、hCD46和GTKO/hCD46巴马小型猪血液,分离外周血单核细胞(peripheral blood inononuclear cell,PBMCo异硫氰酸荧光素标记的植物凝集素(FITC—GSIB4)与PBMC共孵育后采用流式细胞术检测α-Gal抗原敲除情况,异硫氰酸荧光素标记的hCD46膜辅蛋白抗体(anti—CD46-FITC)与PBMC共孵育后采用流式细胞术检测hCD46蛋白表达情况。结果GTKO和GTKO/hCD46巴马猪PBMC表面α—Gal检测呈阴性,WT和hCD46巴马猪检测呈阳性,与测序结果一致;hCD46和GTKO/hCD46巴马猪PBMC表面hCD46蛋白检测呈阳性,WT和GTKO巴马猪检测呈阴性,与PCR鉴定结果一致。结论建立了微量血液流式细胞术直观检测供体猪α-Gal抗原和人源CD46蛋白表达的方法。 展开更多
关键词 α-1 3-半乳糖基转移酶 人源蛋白CD46 外周血单核细胞 流式细胞术
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敲除α-1,3-半乳糖基转移酶基因五指山小型猪的繁育和鉴定 预览 被引量:2
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作者 龙川 高景波 +5 位作者 唐雨婷 杜敏杰 石宁宁 冯冲 鲁琳 潘登科 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第2期121-126,共6页
目的 总结α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)五指山小型猪的繁育和鉴定。方法统计GTKO五指山小型猪的繁育结果及窝产仔数;采用聚合酶链反应(PCR)技术对GTKO五指山小型猪GGTA1基因敲除类型进行鉴定;采用荧光显微镜和流... 目的 总结α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除(GTKO)五指山小型猪的繁育和鉴定。方法统计GTKO五指山小型猪的繁育结果及窝产仔数;采用聚合酶链反应(PCR)技术对GTKO五指山小型猪GGTA1基因敲除类型进行鉴定;采用荧光显微镜和流式细胞术对人、野生型五指山小型猪、GTKO五指山小型猪外周血单核细胞(PBMC)的α-1,3-半乳糖(αGal)表型进行检测;比较GTKO五指山小型猪与野生型五指山小型猪血常规指标的差异。结果 GGTA1基因型的遗传符合孟德尔定律;GGTA1-/-猪的PBMC流式检测无荧光表达,与基因型鉴定结果一致;GTKO五指山小型猪雌性猪初产窝产仔数为(6.8±1.8)只,经产窝产仔数为(8.3±2.2)只;血常规检测的各项指标与野生型五指山小型猪差异均无统计学意义(均为P〉0.05)。结论 连续2代GTKO五指山小型猪遗传稳定,繁殖力正常。GTKO五指山小型猪可作为异种器官移植研究的可靠供体。 展开更多
关键词 α-1 3-半乳糖基转移酶 因敲除 五指山小型猪 繁殖性能 α-1 3-半乳糖表型 外周血单核细胞
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人血清中非Gal异种抗体检测方法的探讨 预览 被引量:2
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作者 叶学军 卢希彬 +3 位作者 潘登科 蔡志明 牟丽莎 赵成江 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第2期132-137,共6页
目的 探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件。方法选用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8%、16.7%、100%)和孵育时间... 目的 探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件。方法选用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8%、16.7%、100%)和孵育时间(0.5、1.0、2.0、3.0、6.0 h)条件下,利用流式细胞仪检测GTKO猪的PBMC上结合IgM和IgG的水平。结果 在16.7%血清浓度下,孵育时间从0.5 h延长至3.0 h,能显著提高非Gal IgM结合PBMC的水平(P〈0.01),而IgG水平的提高则差异无统计学意义(P〉0.05)。提高血清浓度也可提高非Gal IgM的结合水平,采用100%的血清浓度孵育3 h,IgM结合PBMC水平最高且有统计学意义(P〈0.01)。采用100%的血清孵育6 h,IgG结合水平升高有统计学意义(P〈0.05)。延长孵育时间和提高血清浓度不会影响PBMC的活力。结论检测人血清中抗非Gal异种抗原抗体的最佳条件为每1×105个猪PBMC,采用100%人血清浓度孵育3 h检测IgM水平,或加100%人血清浓度孵育6 h检测IgG水平。这一条件的优化有助于筛选非Gal表达抗原低表达的供体猪。 展开更多
关键词 异种移植 外周血单核细胞 非Gal抗原 流式细胞术 IgM/IgG α-1 3-半乳糖基转移酶 因敲除 五指山小型猪
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异种肝移植的历史与发展 预览 被引量:5
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作者 陶开山 李霄 窦科峰 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第2期85-88,共4页
异种移植是解决同种供体器官短缺的重要途径。以α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪为供体、非人灵长类动物为受体的心脏和肾移植,最长存活达945 d和136 d,但肝移植尚无长期存活报道。国内外研究表明,免疫排斥和凝血调节障碍... 异种移植是解决同种供体器官短缺的重要途径。以α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)小型猪为供体、非人灵长类动物为受体的心脏和肾移植,最长存活达945 d和136 d,但肝移植尚无长期存活报道。国内外研究表明,免疫排斥和凝血调节障碍仍是阻碍移植肝和受体长期存活的主要原因。本文总结异种肝移植的发展历程,分析目前存在的问题,为未来的临床异种移植研究提供参考。 展开更多
关键词 异种移植 肝脏 因修饰 非人灵长类动物 α-1 3-半乳糖基转移酶
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利用体细胞LOH突变制备α1,3-半乳糖基转移酶基因(GGTA1)缺失的五指山小型猪 预览 被引量:2
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作者 王飞 冯冲 +8 位作者 龙川 岳成鹤 王宁 李西睿 曹随忠 李明洲 储明星 潘登科 帅素容 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期522-527,共6页
制备α1,3-半乳糖基转移酶(αl,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因缺失的五指山小型猪,为我国异种器官移植研究奠定基础。在已经获得的GGTA1单等位基因敲除(GGTA+/-)五指山小型猪基础上,建立GGTA1+/-猪耳成纤维细胞系。利用特... 制备α1,3-半乳糖基转移酶(αl,3-galactosyltransferase,GGTA1)基因缺失的五指山小型猪,为我国异种器官移植研究奠定基础。在已经获得的GGTA1单等位基因敲除(GGTA+/-)五指山小型猪基础上,建立GGTA1+/-猪耳成纤维细胞系。利用特异性结合α1,3Gal的药物GSI-B4联合免疫磁珠筛选,成功分离出自发杂合性缺失(Loss of heterozygosity,LOH)的双等位基因敲除(GGTA1-/-)耳成纤维细胞。单细胞克隆培养与PCR鉴定后,以GGTA1-/-细胞为核供体,体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎并移植。先后将3 122枚重构胚移植到13头受体母猪,其中4头怀孕,产仔12头。采用PCR和Southern blotting进行GGTA1基因型检测,11头为GGTA1-/-猪;流式细胞术分析表明,GGTA1-/-仔猪耳成纤维细胞不表达α1,3Gal。获得能克服异种器官超急性排斥反应(HAR)的GGTA1-/-猪,不仅为异种器官供体的进一步基因修饰提供了平台,也为异种移植临床前研究提供了宝贵资源。 展开更多
关键词 Α1 3-半乳糖基转移酶 自发杂合性缺失 异种器官移植 体细胞核移植 五指山小型猪
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中国近交系版纳微型猪α1,3-半乳糖基转移酶基因剪接变异体的克隆及其在人类细胞中的表达 被引量:2
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作者 刘美 朱圣明 +6 位作者 郑鸿 王宇 王竹 杨娅君 伍艳霞 曾养志 王艳萍 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 145-150,共6页
目的克隆中国近交系版纳微型猪(Chinese Banna Minipig Inbred Line,BMI)的α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)基因并分离其剪接变异体,构建其真核表达载体并观察BMIα1,3-GT基因在人肺腺癌A549细胞中的表达和功能。方法提取BMI肝组织... 目的克隆中国近交系版纳微型猪(Chinese Banna Minipig Inbred Line,BMI)的α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)基因并分离其剪接变异体,构建其真核表达载体并观察BMIα1,3-GT基因在人肺腺癌A549细胞中的表达和功能。方法提取BMI肝组织总RNA,RT-PCR扩增全长的α1,3-GTcDNA,并克隆到pMD18-T载体,挑选15个阳性克隆进行测序,获得GT1、GT2两种基因剪接变异体。将GT1、GT2克隆到pEGFP-N1上构建其真核表达载体,分别命名为pN-GT1、pN-GT2。将pN-GT1、pN-GT2分别转染人肺腺癌A549细胞,RT-PCR检测转染细胞中α1,3-GT mRNA的表达,倒置荧光显微镜和流式细胞术观察转染细胞上α-半乳糖基(α-Gal)的表达,流式细胞术检测人血清中IgM抗体和补体C3与转染细胞上α-Gal的结合。结果在BMI中发现了碱基长度为1116bp和1080bp的两个α1,3-GT基因剪接变异体,后者缺失了外显子5。pN-GT1或pN-GT2转染的A549细胞中,均检测到了α1,3-GT mRNA和α-Gal的表达,转染细胞膜上也检测到IgM和C3的沉积,且两种转染细胞中α-Gal的表达及IgM和C3的沉积没有差异(P〉0.05)。结论成功克隆了BMI的α1,3-GT基因,并发现两种α1,3-GT基因剪接变异体。两种基因剪接变异体转染的细胞中,均检测到α1,3-GT mRNA的表达且α1,3-GT能催化合成具有生物学效应的α-Gal,这为BMI用于异种移植中涉及α1,3-GT基因操作的研究提供了基因背景资料。 展开更多
关键词 异种移植 中国近交系版纳微型猪 Α1 3-半乳糖基转移酶 α-半乳糖
小鼠α1,3-半乳糖糖基化修饰对人肝癌HuH7细胞生物学特性的影响 预览
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作者 喻凤 喻召才 +4 位作者 刘文超 茹懿 杨静悦 申兴勇 刘新平 《现代肿瘤医学》 CAS 2011年第5期 832-836,共5页
目的:探讨利用小鼠α1,3半乳糖基转移酶基因进行肝癌基因治疗的可行性。方法:将pcDNA3.1-α1,3GT真核表达载体以脂质体介导法转染人肝癌细胞HuH7,经G418压力筛选出稳定表达的阳性克隆,经生长曲线法,平板克隆形成试验,流式细胞仪等试... 目的:探讨利用小鼠α1,3半乳糖基转移酶基因进行肝癌基因治疗的可行性。方法:将pcDNA3.1-α1,3GT真核表达载体以脂质体介导法转染人肝癌细胞HuH7,经G418压力筛选出稳定表达的阳性克隆,经生长曲线法,平板克隆形成试验,流式细胞仪等试验分析稳定表达株相关生物学特性变化。结果:转染有α1,3GT的HuH7经RT-PCR法检测到有α1,3GT的表达,免疫荧光镜检测其细胞表面有明显的Galα(1,3)Gal糖表位表达,转染细胞的增殖能力明显降低,同时促进细胞凋亡。结论:转染α1,3-半乳糖基转移酶基因可明显抑制人肝癌细胞HuH7的恶性生物学行为,具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 Α1 3-半乳糖基转移酶 Galα(1 3)Gal 肝癌
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利用正负筛选打靶载体在猪肾细胞系PK-15细胞中敲除GGTA1基因
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作者 常宏宇 宫锋 +5 位作者 季守平 鲍国强 李素波 章扬培 李芳 聂亚玲 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2010年第3期234-238,共5页
目的半乳糖-α1,3-半乳糖(αGal)表位是猪到人异种移植中引起排斥反应的主要异种抗原。通过同源重组敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因可从异种移植物表面彻底清除αGal表位。本研究的目的在于利用正负筛选打靶载体定向缺失猪GGTA1基因... 目的半乳糖-α1,3-半乳糖(αGal)表位是猪到人异种移植中引起排斥反应的主要异种抗原。通过同源重组敲除猪α1,3-半乳糖基转移酶基因可从异种移植物表面彻底清除αGal表位。本研究的目的在于利用正负筛选打靶载体定向缺失猪GGTA1基因。方法构建猪α1,3-半乳糖基转移酶基因正负筛选打靶载体pSL/GT,载体包含了正负筛选标记基因neo和tk,打靶载体线性化后用脂质体包裹转染猪肾细胞系PK-15细胞,利用G418和GANC进行抗性细胞克隆的药物筛选,挑选抗性克隆进行PCR及Southern杂交鉴定。结果共得到436个抗性细胞克隆,其中31个克隆PCR结果阳性。经Southern杂交鉴定证实,其中1个克隆发生了同源重组,为杂合子。结论本研究构建了有效的猪GGTA1基因的正负筛选打靶载体pSL/GT,并利用其在猪肾细胞系PK-15细胞中定向缺失GGTA1基因,获得了杂合子GGTA1(+/-)PK-15细胞。 展开更多
关键词 α-Gal表位 Α1 3-半乳糖基转移酶 因打靶 异种移植
中国近交系版纳微型猪α1,3-半乳糖基转移酶基因的克隆及其真核表达载体的构建 被引量:3
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作者 朱圣明 王艳萍 +5 位作者 郑鸿 程惊秋 陆燕蓉 曾养志 王字 王竹 《生物医学工程学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期360-365,共6页
克隆中国近交系版纳微型猪(Banna minipig inbred-line,BMI)α1,3-半乳糖基转移酶基因(α1,3-galacto-syltransferase α1,3-GT)并构建其真核表达载体。从版纳微型猪肝脏中提取总RNA,RT-PCR扩增出α1,3-GT cDNA全长序列,克隆... 克隆中国近交系版纳微型猪(Banna minipig inbred-line,BMI)α1,3-半乳糖基转移酶基因(α1,3-galacto-syltransferase α1,3-GT)并构建其真核表达载体。从版纳微型猪肝脏中提取总RNA,RT-PCR扩增出α1,3-GT cDNA全长序列,克隆到pMD18-T载体,测序后再克隆到质粒pEGFP-N1中,构建α1,3-GT真核表达载体pEGFP-N1-GT。用脂质体法瞬时转染人肺腺癌细胞A549,RT-PCR检测转染细胞中α1,3-GTmRNA的表达;利用荧光素标记的植物凝集素(FITC-BS-IB4 lectin),直接免疫荧光法检测转染细胞中α1,3-GT合成α-Gal表位的能力。结果显示版纳微型猪α1,3-GT DNA全长1116 bp,其序列与GenBank中小鼠和牛α1,3-GT cDNA具有高度同源性,与猪α1,3-GT DNA全长序列完全一致。酶切和PCR证实重组真核表达载体pEGFP-N1-GT构建成功。转染pEG-FP-N1-GT的A549细胞有α1,3-GTmRNA表达,在其细胞膜检测到α-Gal表位的表达。中国近交系版纳微型猪α1,3-GT cDNA的克隆及其真核表达载体的构建为该基因在异种器官移植和肿瘤免疫治疗中的进一步研究和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 中国近交系版纳微型猪 Α1 3-半乳糖基转移酶 异种移植
小鼠α1,3-半乳糖基转移酶RNA干扰重组慢病毒的构建与鉴定 预览 被引量:1
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作者 吕承育 谷雅川 +1 位作者 戚峰 朱理玮 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第31期 6089-6092,共4页
背景:研究表明,通过抑制α1,3-半乳糖基转移酶的生成而减少甚至避免供体Gala(1,3)Gal的生成,是渡过器官移植后超急性排斥反应的一条切实可行的方法。目的:构建小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的RNA于扰慢病毒载体,有效沉默小鼠... 背景:研究表明,通过抑制α1,3-半乳糖基转移酶的生成而减少甚至避免供体Gala(1,3)Gal的生成,是渡过器官移植后超急性排斥反应的一条切实可行的方法。目的:构建小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的RNA于扰慢病毒载体,有效沉默小鼠血管内皮细胞的α1,3-半乳糖基转移酶基因表达,以期为有效控制异种移植超急性排斥反应提供稳定的转染细胞载体。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-07/2007—05在天津医科大学总医院普外研究所完成。材料:慢病毒载体系统(四质粒)购自Tronolab公司,包装细胞293T细胞株购自中科院上海细胞所。方法:在线软件设计小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因发卡小分子干扰RNA片段。合成的双链DNA片段并将其连接到Tele-sh003/U6.2载体的黏性末端,产生重组质粒Tele-sh003/U62-shRNA/α1,3-半乳糖基转移酶。对干扰质粒做测序分析。用磷酸钙法将得到的阳性重组子与慢病毒包装质粒共转化293T细胞,72h后收集含病毒上清液,超速离心后得到重组慢病毒。用实时定量聚合酶链反应测定病毒滴度。主要观察指标:干扰质粒的测序分析,慢病毒颗粒的包装和滴度测定。结果:小鼠α1.3-半乳糖基转移酶基因小发卡RNA片段被成功克隆进Tele-sh003质粒中,测序结果显示干扰质粒小干扰RNA编码序列与设计片段的序列完全一致。所得慢病毒亦为阳性克隆,经定量聚合酶链反应测定病毒滴度为2×10^8Tu/mL。结论:成功构建出小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的小发卡RNA慢病毒RNA干扰表达载体,为进一步控制异种移植超急性排斥反应提供了稳定的转染细胞的载体。 展开更多
关键词 Α1 3-半乳糖基转移酶 RNA干扰 质粒 慢病毒 小鼠
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生物学——生物物理学 预览
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《中国学术期刊文摘》 北大核心 2008年第3期 6-7,共2页
mTOR信号通路与细胞生长调控;谷氧还蛋白系统及其对细胞氧化还原态势的调控;细胞表面β1,4-半乳糖基转移酶1功能研究进展;生物鲁棒性的研究进展.
关键词 生物物理学 生物学 半乳糖基转移酶 细胞表面 生长调控 信号通路 MTOR 还原态
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皮肤肿瘤 预览
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《中国医学文摘:皮肤科学》 2007年第6期 389-393,共5页
人端粒酶逆转录酶,bcl-2蛋白在病理性瘢痕组织中的表达及其相关性;细胞周期蛋白E在瘢痕疙瘩不同区域中的表达及意义;Jun活化结构域结合蛋白-1和S期激酶相关蛋白-2在病理瘢痕组织中的表达及意义;β1,4-半乳糖基转移酶-I在瘢痕疙瘩中的表达
关键词 皮肤肿瘤 病理性瘢痕组织 S期激相关蛋白-2 人端粒逆转录 bcl-2蛋白 细胞周期蛋白E 半乳糖基转移酶 结合蛋白-1
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鼠源性α-1,3-半乳糖基转移酶催化结构域的表达及纯化 预览 被引量:1
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作者 张睿 迟宝荣 +1 位作者 朱学伟 王俊懿 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期 151-153,共3页
目的:表达和纯化鼠源性的α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域(α1,3 GTcd)以及为在肿瘤细胞表面生成α-gal表位提供了可行性手段.方法:利用pET-15b载体以可溶性形式表达鼠源性α1,3 GTcd.利用高效液相色谱阴离子交换柱检测酶的活性... 目的:表达和纯化鼠源性的α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域(α1,3 GTcd)以及为在肿瘤细胞表面生成α-gal表位提供了可行性手段.方法:利用pET-15b载体以可溶性形式表达鼠源性α1,3 GTcd.利用高效液相色谱阴离子交换柱检测酶的活性.结果:①成功地构建了带有His-tag的α1,3GTcd重组质粒.②可溶性高效表达与纯化了带有His-tag的α1,3GTcd.③利用HPLC阴离子交换柱检测α1,3GTcd的活性.结论:可溶性地表达了α1,3 GTcd. 展开更多
关键词 α-1 3-半乳糖基转移酶 α-gal表位 催化结构域 pET-15b
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在人消化道肿瘤细胞表面构建α—gal表位的研究 预览 被引量:2
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作者 张睿 迟宝荣 朱学伟 《中国实验诊断学》 2007年第3期 376-379,共4页
目的在大肠杆菌中以可溶性形式表达鼠源性α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域(α1,3GTcd;catalytic domain of α1,3GT),利用其在人消化道肿瘤细胞表面构建钟α-gal表位(Gah1-3Gal-β1-4GlcNAc-R),拟用来制备一种新的自体肿... 目的在大肠杆菌中以可溶性形式表达鼠源性α-1,3-半乳糖基转移酶的催化结构域(α1,3GTcd;catalytic domain of α1,3GT),利用其在人消化道肿瘤细胞表面构建钟α-gal表位(Gah1-3Gal-β1-4GlcNAc-R),拟用来制备一种新的自体肿瘤疫苗。方法利用pET-15b载体以可溶性形式表达鼠源性α1,3GTed,利用高效液相色谱阴离子交换柱检测酶的活性。通过其在人不同消化道肿瘤细胞表面构建钟α-gal表位,先与人血清孵育,FTTC标记的羊抗人的IgG为第二抗体,用流式细胞仪检测荧光强度,以分析钟鲥表位的表达结果。结果可溶性高效表达与纯化了带有His-tag的α1,3GTcd并利用HPLC阴离子交换柱检测α1,3GTcd的活性。流式细胞仪检测结果证明了在人消化道肿瘤细胞表面成功构建了即gal表位。结论本研究可溶性的表达了α1,3GTcd,并利用其在人消化道肿瘤细胞表面成功地构建了α-gal表位.为该方法的临床治疗的应用打下坚实的基础。 展开更多
关键词 α-1 3-半乳糖基转移酶 α-Gal表位 催化结构域 人消化道肿瘤 肿瘤疫苗
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小鼠α1,3-半乳糖基转移酶基因的克隆及测序 预览
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作者 杨明浩 郭军 《昆明医学院学报》 2006年第3期 19-22,共4页
目的克隆α1,3-半乳糖基转移酶的序列,为进一步利用其构建真核表达载体,对肿瘤进行基因治疗奠定基础.方法从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,行RT-PCR扩增出编码α1,3-半乳糖基转移酶的全长cDNA,并克隆入pUCm-T测序载体.经... 目的克隆α1,3-半乳糖基转移酶的序列,为进一步利用其构建真核表达载体,对肿瘤进行基因治疗奠定基础.方法从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,行RT-PCR扩增出编码α1,3-半乳糖基转移酶的全长cDNA,并克隆入pUCm-T测序载体.经DNA测序证实序列.结果经RT-PCR扩增出大小约为1.2kb的基因片段,成功克隆入pUCm-T载体.结论成功地克隆α1,3-半乳糖基转移酶基因序列,为进一步肿瘤基因治疗奠定了基础. 展开更多
关键词 Α1 3-半乳糖基转移酶 Galα(1 3)Gal RT-PCR 克隆
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小鼠α1,3—半乳糖基转移酶基因的克隆及其重组真核表达载体的构建 预览 被引量:1
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作者 郭军 丁杰 +3 位作者 喻召才 李韧 郭长存 樊代明 《第四军医大学学报》 北大核心 2003年第1期 37-39,共3页
目的: 构建α1,3-半乳糖基转移酶的重组真核表达质粒pcDNA3.1/V5-HisAα1,3GT,为进一步利用其进行胃癌的基因治疗奠定基础. 方法: 从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,行RT-PCR扩增出编码α1,3-半乳糖基转移酶的全长cDNA,并克隆入pUC... 目的: 构建α1,3-半乳糖基转移酶的重组真核表达质粒pcDNA3.1/V5-HisAα1,3GT,为进一步利用其进行胃癌的基因治疗奠定基础. 方法: 从BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,行RT-PCR扩增出编码α1,3-半乳糖基转移酶的全长cDNA,并克隆入pUCm-T测序载体. 经DNA测序证实序列无误后,将α1,3-半乳糖基转移酶基因片段亚克隆入pcDNA3.1/V5-HisA真核表达载体. 结果: 经RT-PCR扩增出大小约为1.2 kb的基因片段,成功克隆入pUCm-T载体. 经DNA测序证实为α1,3-半乳糖基转移酶(α1, 3-galactosyltransferase, 3GT),大小为1221 bp,编码序列及读框均正确. 经亚克隆酶切鉴定,获得携有α1,3GT基因的重组质粒pcDNA3.1/V5-HisAα1,3GT. 结论: 成功地构建α1,3GT真核表达载体,为进行肿瘤基因治疗奠定了基础. 展开更多
关键词 Α1 3-半乳糖基转移酶 Galα(1 3)Gal RT-PCR 克隆 胃癌 因治疗
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细胞表面半乳糖基转移酶及其生物学功能 预览
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作者 张春雨 段恩奎 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第6期 518-520,564,共4页
根据mRNA转录子的大小,β-1,4-半乳糖基转移酶分为短型和长型两类半乳糖基转移酶,短型的位于同尔基体的成熟面,长型的主要表面在细胞表面,通过与相邻细胞表面或细胞外基质上的适当的糖苷底物的结合介导细胞-细胞和细胞-... 根据mRNA转录子的大小,β-1,4-半乳糖基转移酶分为短型和长型两类半乳糖基转移酶,短型的位于同尔基体的成熟面,长型的主要表面在细胞表面,通过与相邻细胞表面或细胞外基质上的适当的糖苷底物的结合介导细胞-细胞和细胞-基质间的相互作用,如精子发生、精卵结合,胚胎细胞产粘附,次生滋层巨细胞行移和神经轴突向外等,或作为胞外寡糖链配基的信号传递受体影响G蛋白信号途径,另外,表面半乳糖基转移酶通过调节表皮因 展开更多
关键词 细胞 半乳糖基转移酶 生物学功能
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血清学表现为类B2亚型个体的分子遗传学分析
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作者 池泉 张爱 +1 位作者 郭永建 任本春 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期118-118,共1页
关键词 分子遗传学 B2 血清学 等位因型 健康献血者 抗原表达 控制 直接测序 半乳糖基转移酶 遗传学特征
小鼠α1,3—半乳糖基转移酶基因转染胃癌GC9811细胞的功能研究 预览
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作者 郭军 丁杰 《胃肠病学》 2002年第B11期 14,共1页
关键词 小鼠 Α1 3-半乳糖基转移酶 因转染 胃癌 GC9811细胞
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GGTA1/β4GalNT2双基因敲除的巴马小型猪PFFs细胞系的建立 预览
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作者 厉小雪 李楚 +3 位作者 任雪洋 王盈 杨海元 戴一凡 《实用器官移植电子杂志》 2019年第4期277-282,共6页
目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立巴马小型猪胚胎成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)α-1,3-半乳糖基转移酶(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)/β-1,4 N-乙酸氨基半乳糖转移酶(β-1,4 N-acetylgalactosaminyltransfera... 目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立巴马小型猪胚胎成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)α-1,3-半乳糖基转移酶(α-1,3-galactosyltransferase,GGTA1)/β-1,4 N-乙酸氨基半乳糖转移酶(β-1,4 N-acetylgalactosaminyltransferase,β4GalNT2)双基因敲除细胞系,为构建α-1,3-半乳糖(α-1,3-galactose,α-Gal)和SD(a)抗原缺失的巴马小型猪模型奠定基础。方法分别选取猪GGTA1基因的第三外显子和β4GalNT2基因的第八外显子为敲除靶点,利用在线工具(http://crispr.mit.edu)设计并合成单导向RNA(single guide RNA,sgRNA),以含有Cas9基因的pX330质粒为骨架构建打靶载体,转染野生巴马小型猪的PFFs,用T7EN1酶切验证打靶载体敲除效率。将打靶载体与G418抗性质粒(tdTomato)共转染巴马小型猪PFFs,经药物筛选获得阳性单细胞克隆后测序鉴定基因型。结果成功构建靶向GGTA1和β4GalNT2基因的Cas9/sgRNA表达载体。转染PFFs后用药物筛选得到31个单克隆细胞系,其中5个为GGTA1/β4GalNT2双基因敲除的细胞系。结论Cas9/sgRNA表达载体可以高效编辑PFFs的GGTA1/β4GalNT2基因并获得了双基因敲除的单细胞克隆,为构建GGTA1/β4GalNT2敲除的巴马小型猪提供必需的实验材料。 展开更多
关键词 巴马小型猪 CRISPR/Cas9 猪胚胎成纤维细胞 α-1 3-半乳糖基转移酶/β-1 4 N-乙酸氨半乳糖转移酶
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