期刊文献+
共找到9篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
Asia1型口蹄疫病毒3B蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
1
作者 刘华南 杨帆 +6 位作者 杨华 吕律 曹伟军 石正旺 岳城 郑海学 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1225-1230,共6页
为了获得Asia1型口蹄疫病毒非结构蛋白3B的单克隆抗体,以含Asia1型FMDV/JS/05毒株3B基因的pCAGGS-3B质粒为模板,扩增3B蛋白基因,并克隆至pET-30a(+)载体,进行原核表达及纯化。分别以Asia1型口蹄疫病毒、纯化的3B蛋白为抗原,免疫4~6... 为了获得Asia1型口蹄疫病毒非结构蛋白3B的单克隆抗体,以含Asia1型FMDV/JS/05毒株3B基因的pCAGGS-3B质粒为模板,扩增3B蛋白基因,并克隆至pET-30a(+)载体,进行原核表达及纯化。分别以Asia1型口蹄疫病毒、纯化的3B蛋白为抗原,免疫4~6周龄的雌性BALB/c小鼠,经过4次免疫后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按5∶1~10∶1进行细胞融合,用本实验室建立的间接ELISA对融合后的细胞进行筛选,并进行4次有限稀释筛选出的阳性细胞扩大培养后,注射小鼠腹腔,制备腹水。对制备的腹水进行类别鉴定、反应原性和效价鉴定。结果表明,获得1株能稳定分泌抗Asia1型口蹄疫病毒3B蛋白的细胞株,其抗体类别为IgM,腹水效价为1∶12 800,通过Western-blot和间接免疫荧光试验,确定其能识别口蹄疫病毒3B蛋白。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3B蛋白 单克隆抗体
口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体的制备与鉴定 预览 被引量:2
2
作者 李永亮 田美娜 +4 位作者 卢曾军 杨苏珍 付元芳 曹轶梅 刘在新 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第2期 296-300,共5页
用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot—and—mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹... 用E.coli原核表达并纯化的口蹄疫病毒(Foot—and—mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白3B免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,间接ELISA筛选出分泌鼠IgG的杂交瘤细胞株,将该杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水,用间接ELISA法筛选获得6株能稳定分泌抗3B蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3E5、4B1、4D7、4E11、782、8811。鉴定结果显示,4B1和4E11细胞分泌IgG1,其余4株细胞分泌IgG2b;纯化后6株腹水单抗的纯度达90%以上,对3B蛋白的ELISA滴度均可达到1:100000以上;6株单抗均不与FMDV结构蛋白VP1和3D非结构蛋白发生反应;间接免疫荧光试验证明所制备的单抗能够识别3B蛋白;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存6个月后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 非结构蛋白 3B蛋白 单克隆抗体
在线阅读 下载PDF
LRRC3B对食管癌细胞Eca109迁移、侵袭及PI3K/Akt信号通路的影响 预览 被引量:2
3
作者 曹燕飞 任睿 +2 位作者 杨晔 罗向晖 王水利 《中国癌症杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期345-352,共8页
背景与目的:先前的研究已经证实富含亮氨酸重复序列3B蛋白(leucine-rich repeatcontaining 3B,LRRC3B)在多种癌症中低表达,并且与癌细胞的迁移侵袭密切相关。该研究旨在探讨LRRC3B在食管癌发展中的作用机制。方法:免疫组织化学染色... 背景与目的:先前的研究已经证实富含亮氨酸重复序列3B蛋白(leucine-rich repeatcontaining 3B,LRRC3B)在多种癌症中低表达,并且与癌细胞的迁移侵袭密切相关。该研究旨在探讨LRRC3B在食管癌发展中的作用机制。方法:免疫组织化学染色检测LRRC3B在60例食管癌组织及60例癌旁组织中的表达情况,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白[质]印迹法(Western blot)分别检测食管癌细胞Eca109和食管正常上皮细胞系HEEC中LRRC3B的mRNA和蛋白表达。处理食管癌细胞Eca109并分3组:正常对照组、阴性对照组(转染对照空pCMV6质粒)和过表达LRRC3B组(转染pCMV6-LRRC3B过表达质粒)。采用Transwell法检测各组Eca109细胞迁移和侵袭的变化。采用Western blot检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达以及p-Akt蛋白水平。结果:LRRC3B在食管癌组织和细胞中的表达明显低于癌旁组织和食管正常上皮细胞。过表达LRRC3B明显抑制Eca109细胞的迁移和侵袭能力,上调上皮因子E-cadherin表达,抑制间质标志物N-cadherin和Vimentin表达,同时降低细胞内p-Akt水平。结论:LRRC3B在食管癌中低表达,上调LRRC3B能够抑制食管癌细胞的EMT过程,可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。 展开更多
关键词 富含亮氨酸重复序列3B蛋白 食管癌 上皮间质转化 PI3K/AKT
在线阅读 下载PDF
自身免疫调节因子促进THP-1细胞的自噬性凋亡 预览 被引量:3
4
作者 石亮 李一荣 胡丽华 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期 461-465,共5页
目的探讨自身免疫调节因子(AIRE)对THP-1单核细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将THP-1细胞以佛波醇酯(PMA)诱导分化后,进行瞬时转染。免疫荧光和Western blot法检测转染效率。通过AnnexinⅤ-FITC、PI双染色法和流式细胞仪检... 目的探讨自身免疫调节因子(AIRE)对THP-1单核细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将THP-1细胞以佛波醇酯(PMA)诱导分化后,进行瞬时转染。免疫荧光和Western blot法检测转染效率。通过AnnexinⅤ-FITC、PI双染色法和流式细胞仪检测过表达AIRE的THP-1细胞凋亡率。通过间接免疫荧光染色和Western blot检测自噬蛋白LC3B的表达。结果 PMA诱导后,THP-1细胞贴壁生长,形态多样,胞质内可见空泡、吞噬细胞碎片等典型成熟分化形态。转染48 h后,THP-1细胞的AIRE蛋白呈现明显高表达。对比空载体转染和阴性对照,过表达AIRE使THP-1细胞的凋亡率上升;同时,Western blot显示LC3B-Ⅱ的蛋白水平也较空载体转染组增高,且间接免疫荧光染色提示单个细胞的阳性LC3B-Ⅱ斑点数目较空载体转染组明显增加(P〈0.05)。结论 AIRE可能通过上调THP-1细胞的自噬促进其凋亡。 展开更多
关键词 细胞凋亡 自噬 自身免疫调节因子 LC3B蛋白
在线阅读 下载PDF
高剂量西罗莫司可能通过促进细胞自噬对老年小鼠肝脏缺血-再灌注损伤起保护作用 预览 被引量:1
5
作者 滕旭 丁凡 +1 位作者 陈文捷 许赤 《器官移植》 CAS CSCD 2017年第5期349-354,共6页
目的探讨高剂量西罗莫司(雷帕霉素)对老年小鼠肝脏缺血.再灌注损伤(HIRI)的保护作用及其作用机制。方法20只C57BL/6系老年小鼠按随机数字表法随机分为4组:缺血.再灌注组(IRI组)、低剂量雷帕霉素预处理组(rpm组)、高剂量雷... 目的探讨高剂量西罗莫司(雷帕霉素)对老年小鼠肝脏缺血.再灌注损伤(HIRI)的保护作用及其作用机制。方法20只C57BL/6系老年小鼠按随机数字表法随机分为4组:缺血.再灌注组(IRI组)、低剂量雷帕霉素预处理组(rpm组)、高剂量雷帕霉素预处理组(RPM组)、对照组(Sham组),每组5只。Sham组仅开腹、关腹;其余3组建立老年小鼠70%HIRI模型,缺血时间均为60min;rpm组和RPM组分别在术前1h腹腔注射雷帕霉素1mg/kg和5mg/kg。再灌注12h后,采用苏木素.伊红(HE)染色检测各组小鼠肝组织病理学变化,并采用Suzuki评分法进行病理学评分;比较各组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平、血清肿瘤坏死因子(TNF).0t和白细胞介素(IL)-10水平以及肝组织中细胞自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ蛋白水平。结果小鼠肝组织HE染色示Sham组为正常肝组织;IRI组和rpm组肝细胞损伤严重,炎症细胞大量浸润;RPM组可见肝窦轻度淤血,炎症细胞轻度浸润。病理学评分示RPM组为5(4-6)分,均低于rpm组[7(5~8)分]及IRI组[8(7~10)分](Z-2.554、-2.73l,均为P〈0.05)。各组小鼠术后肝功能结果显示,RPM组AST[(691±207)U/L]显著低于IRI组[(2032±575)U/L]、rpm组[(1817±777)U/L](同.90、3.13,均为P〈0.05);RPM组ALT[(996±584)U/L]均显著低于IRI组[(2992±992)U/L]、rpm组[(2373±687)U/L](t=3.86、3.41,均为P〈0.05),而IRI组和rpm组的AST、ALT比较,差异均无统计学意义(均为P〉0.05)。各组小鼠血清中的TNF-α和IL-10水平比较差异均无统计学意义(均为P〉0.05)。Westem-blot法显示RPM组肝组织LC3B.II蛋白的相对表达量明显高于Sham组、IRI组、rpm组(均为P〈0.05)。结论高剂量雷帕霉素可能通过促进细胞自噬对老年小鼠HIRI起保护作用。 展开更多
关键词 缺血-再灌注损伤 肝移植 小鼠 老年 西罗莫司(雷帕霉素) 细胞自噬 丙氨酸转氨酶 天冬氨酸转氨酶 肿瘤坏死因子 白细胞介素 LC3B-Ⅱ蛋白
在线阅读 下载PDF
丙型肝炎病毒NS3-5B转基因小鼠模型的构建 预览
6
作者 赵海卫 韩佩君 +7 位作者 姚敏 吕欣 雷迎峰 杨敬 乔卿华 翁代慧 党品香 尹文 《生物技术通讯》 CAS 2015年第5期627-631,共5页
目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6... 目的:构建表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3-5B蛋白的转基因小鼠模型。方法:显微注射线性化p IRES2-EGFP-NS3-5B载体到小鼠受精卵,制备并传代筛选HCV NS3-5B转基因小鼠;通过血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)检测和肝脏HE染色,对6周龄转基因小鼠进行肝功能评价。结果:PCR、RT-PCR和Western印迹结果表明HCV NS3-5B转基因小鼠构建成功;6周龄部分转基因小鼠血清ALT和AST值升高,但差别无统计学意义,肝组织形态无改变。结论:构建了HCV NS3-5B转基因小鼠模型,为进一步在体研究HCV复制复合体建立了平台。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS3-5B蛋白 复制复合体 转基因小鼠模型
在线阅读 免费下载
口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体(MAb)的制备及基于MAbELISA方法的初步建立 预览 被引量:1
7
作者 李超斯 周国辉 +2 位作者 孙静 刘云 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期448-452,共5页
为建立区分口蹄疫病毒(FMDV)疫苗免疫和自然感染动物的血清学鉴别检测方法,本研究采用杆状病毒表达的FMDV非结构蛋白3ABC免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,并以原核表达的FMDV非结构蛋白3B作为抗原筛选融合细胞的培养上... 为建立区分口蹄疫病毒(FMDV)疫苗免疫和自然感染动物的血清学鉴别检测方法,本研究采用杆状病毒表达的FMDV非结构蛋白3ABC免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,并以原核表达的FMDV非结构蛋白3B作为抗原筛选融合细胞的培养上清液,获得一株稳定分泌抗3B蛋白单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞。经间接免疫荧光鉴定其为一株抗FMDV非结构蛋白3B的特异性MAb,为IgG1/κ亚类,间接ELISA检测杂交瘤细胞上清液和腹水的抗体效价分别为1∶12 800 和1∶106。硫氰酸盐洗脱法测定其相对亲和力常数为1.5 mol/L。采用该MAb作为包被抗体并特异性的结合原核表达的3B重组蛋白用于检测血清中抗FMDV的非结构蛋白抗体,初步建立了以MAb为基础的ELISA方法。其MAb包被浓度为5 μg/mL,3B重组蛋白浓度为1.1 μg/mL,被检血清1∶100稀释,通过检测猪血清并与3B间接ELISA和prioCHECKR NSP ELISA试剂盒进行比较,表明该方法具有更强的特异性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 3B重组蛋白 MAB ELISA
在线阅读 下载PDF
ERCC1,TUBB3在上皮性卵巢癌中表达及其临床病理特征和相关性的研究 预览 被引量:1
8
作者 陈可心 李琛 +2 位作者 秦誉 姚国栋 耿敬姝 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2014年第4期294-298,共5页
目的研究核苷酸切除修复交叉互补组1(ERCC1)和TUBB3编码的β-tubulin-Ⅲ(3型B微管蛋白)在卵巢上皮性癌中的表达情况、病理特征及其临床意义,为个体化治疗提供一定的理论依据。方法本研究主要通过逆转录一实时荧光定量反应(RTq-PC... 目的研究核苷酸切除修复交叉互补组1(ERCC1)和TUBB3编码的β-tubulin-Ⅲ(3型B微管蛋白)在卵巢上皮性癌中的表达情况、病理特征及其临床意义,为个体化治疗提供一定的理论依据。方法本研究主要通过逆转录一实时荧光定量反应(RTq-PCR)方法检测上皮性卵巢癌组织中ER.CCI和TUBB3mRNA的表达情况,进一步分析上皮性卵巢癌临床病理特征与ERCC1,TUBB3的关系及二者之间的相关性。结果ERCC1和TUBB3在上皮性卵巢癌中均呈高表达,表达率分别为28.21%(22/78)和29.49%(23/78)。单因素分析ERCC1、TUBB3基因在上皮性卵巢癌高表达患者中仅与残余肿物大小有关(P〈0.05),二者与其他临床病理因素无关。ERCC1和TUBB3在上皮性卵巢癌中表达水平呈正相关(r=0.4249,P〈0.05)。结论上皮性卵巢癌组织存在不同水平的ERCC1和TUBB3基因mRNA,二者在癌组织中表达密切相关。ERCC1、TUBB3基因在上皮性卵巢癌中的表达与残余肿物大小呈正相关。 展开更多
关键词 上皮性卵巢癌 核苷酸切除修复交叉互补组1 3B微管蛋白 逆转录一实时荧光定量 反应
在线阅读 免费下载
丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达 预览 被引量:1
9
作者 韩佩君 雷迎峰 +5 位作者 吕欣 杨敬 姚敏 乔卿华 党品香 尹文 《科学技术与工程》 北大核心 2013年第36期10794-10797,10805共5页
通过PCR方法扩增出HCVNS3—5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒p1RES2-EG,FP—NS3—5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和WesternBlot检测NS3—5b基因的表达。结果显示成功构建了真核... 通过PCR方法扩增出HCVNS3—5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒p1RES2-EG,FP—NS3—5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和WesternBlot检测NS3—5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP—NS3—5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCVRdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(hepatitis e virus HCV) NS3-5B蛋白 真核表达
在线阅读 免费下载
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈