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外源海藻糖对PEG渗透胁迫下小麦Rubisco及其活化酶的影响 预览
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作者 马超 张均 +3 位作者 宋鹏 王香生 韩潇杰 冯雅岚 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1241-1249,共9页
以抗旱品种‘晋麦47’和干旱敏感品种‘郑引1号’为材料,通过室内水培试验研究了外源海藻糖对PEG渗透胁迫下小麦叶片净光合速率、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)和1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活化酶(RCA)含量和相关基因表... 以抗旱品种‘晋麦47’和干旱敏感品种‘郑引1号’为材料,通过室内水培试验研究了外源海藻糖对PEG渗透胁迫下小麦叶片净光合速率、1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)和1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶活化酶(RCA)含量和相关基因表达特性的影响。结果表明:(1)外源海藻糖和渗透胁迫均能显著增加2个小麦品种叶片海藻糖含量。(2)渗透胁迫显著降低了2个品种小麦叶片的净光合速率,而外源海藻糖能显著缓解受胁迫小麦叶片净光合速率的降低幅度。(3)渗透胁迫仅使‘郑引1号’Rubisco大亚基基因(rbcL)相对表达量及相应蛋白含量显著降低;渗透胁迫显著降低了小麦RCAα和β亚基基因相对表达量,并显著降低RCA蛋白含量,而外源海藻糖不能缓解RCA蛋白含量的降低;渗透胁迫显著降低了Rubisco总活性、初始活性、活化状态及RCA活性,而外源海藻糖则能显著缓解上述酶活性的下降。(4)小麦叶片净光合速率与其rbcL、RCAα和β亚基基因相对表达量及Rubisco总活性、初始活性、活化状态及RCA活性均呈极显著正相关关系。研究发现,在渗透胁迫条件下,外源海藻糖主要从翻译后层面对小麦叶片Rubisco和RCA的活性发挥显著保护作用,从而缓解了小麦净光合速率的降低。 展开更多
关键词 小麦 渗透胁迫 海藻 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶活化
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不同初始氮浓度下尖状栅藻同化硝态氮和CO_2的研究 预览 被引量:1
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作者 王倩雅 罗舒怀 +2 位作者 张莹 李爱芬 张成武 《植物科学学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期583-591,共9页
尖状栅藻(Scenedesmus acuminatus(Lagerheim)Chodat)是一种高产油淡水单细胞绿藻,该藻在较低氮素浓度下能显著提高产油效率,是生产生物柴油的理想藻株。本研究以尖状栅藻为实验材料,通过测定藻细胞硝酸还原酶和Rubisco活性、碳氮... 尖状栅藻(Scenedesmus acuminatus(Lagerheim)Chodat)是一种高产油淡水单细胞绿藻,该藻在较低氮素浓度下能显著提高产油效率,是生产生物柴油的理想藻株。本研究以尖状栅藻为实验材料,通过测定藻细胞硝酸还原酶和Rubisco活性、碳氮元素含量和培养液硝酸根离子浓度,分析18.0、9.0、6.0、3.6 mmol·L-1初始氮浓度下尖状栅藻的碳氮同化特征和时相变化规律。结果显示,18.0 mmol·L-1组尖状栅藻细胞密度最高,为7.9×107cells·m L-1,硝酸还原酶和Rubisco的活性高,且持续时间长。培养液中产生的NO-2随初始氮浓度的升高而增多,18.0 mmol·L-1组至培养期结束仍保持相对较高的NO-2水平。4个实验组(初始氮从高到低)培养10 d藻细胞的氮含量依次为7.2%、4.1%、2.8%和1.9%DW,碳含量为46%、52%、54.5%和57.4%DW,细胞的C/N摩尔比值为:8.0、16.7、24.3和35.2。研究结果表明初始氮浓度影响尖状栅藻的生长繁殖,藻细胞的碳氮同化相互影响,适宜的低氮浓度可促进藻细胞碳固定。 展开更多
关键词 尖状栅藻 硝酸还原 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 碳氮同化 生物固碳
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盐胁迫对黄瓜幼苗光合作用及其关键酶基因表达特性的影响 预览 被引量:3
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作者 孙超 单楠 +4 位作者 王慧娟 章颖佳 王振雨 张振贤 眭晓蕾 《中国蔬菜》 北大核心 2016年第8期29-34,共6页
以对盐胁迫敏感性不同的两个黄瓜品种中农大22号和戴多星为材料,研究了盐胁迫下黄瓜幼苗叶片光合特性、叶绿体超微结构以及光合作用关键酶1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性及其编码基因... 以对盐胁迫敏感性不同的两个黄瓜品种中农大22号和戴多星为材料,研究了盐胁迫下黄瓜幼苗叶片光合特性、叶绿体超微结构以及光合作用关键酶1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)活性及其编码基因表达的变化。结果表明:盐胁迫(150 mmol·L^-1NaCl处理)下,黄瓜幼苗光合色素(叶绿素和类胡萝卜素)含量、净光合速率、暗呼吸速率和蒸腾速率显著降低;叶绿体类囊体片层结构垛叠程度下降,淀粉粒变小且数量减少;Rubisco大亚基编码基因rbc L、PEPC编码基因Csppc2的表达水平先响应性上调,随后下降;Rubisco和PEPC活性呈降低趋势。相对中农大22号,戴多星具有较强的盐胁迫耐受性。 展开更多
关键词 黄瓜 盐胁迫 光合特性 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 磷酸烯醇式丙羧化酶
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宁波港压载水浮游植物多样性的研究 预览 被引量:2
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作者 周君 刘兵 +4 位作者 李春丽 王中华 姜南 苏秀榕 李太武 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期197-201,共5页
为了避免压载水作为媒介转移外来物种并造成污染危害,利用分子生物学技术研究宁波港来自印度洋、新加坡和美洲的压载水浮游植物。结果显示,新加坡和美洲的压载水没有检测到浮游植物。而印度洋的压载水里面含有硅藻门的直链藻属(Aulacos... 为了避免压载水作为媒介转移外来物种并造成污染危害,利用分子生物学技术研究宁波港来自印度洋、新加坡和美洲的压载水浮游植物。结果显示,新加坡和美洲的压载水没有检测到浮游植物。而印度洋的压载水里面含有硅藻门的直链藻属(Aulacoseirasp.)、海链藻属(Thalassiosirasp.)、骨条藻属(Skeletonemasp.)、冠盘藻属(Stephanodiscussp.)和星盘藻属(Discostellasp.);隐藻门的全沟藻属(Teleaulaxsp.)和斜片藻(Plagioselmissp.);绿藻门的括小球藻属(Chlorellasp.)、卵囊藻属(Oocystissp.)和Pseudococcomyxasp.;链形植物门包括新月藻属(Closteriumsp.)。同宁波港的港池浮游植物相比,生长速度快、抗逆性强的硅藻数量明鲜增多,有些种类是外来的。 展开更多
关键词 压载水 浮游植物 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 RBCL基因
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黄瓜叶片蛋白质双向电泳样品分级优化 预览 被引量:9
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作者 任丽萍 范海延 +3 位作者 王珊珊 郝宇涵 宫玉洁 朱延姝 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期 1706-1710,共5页
以‘津研4号’苗期叶片为材料,采用聚乙二醇(PEG)分级沉淀法对黄瓜叶片蛋白质样品进行分级分离,将黄瓜叶片中存在的高丰度蛋白1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶特异性地集中于一个组分之中,以提高对黄瓜叶片蛋白质双向电泳中低丰度蛋白... 以‘津研4号’苗期叶片为材料,采用聚乙二醇(PEG)分级沉淀法对黄瓜叶片蛋白质样品进行分级分离,将黄瓜叶片中存在的高丰度蛋白1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶特异性地集中于一个组分之中,以提高对黄瓜叶片蛋白质双向电泳中低丰度蛋白质的检测率。结果表明:(1)分级后各组分和全蛋白在SDS-PAGE谱带中差异显著,全蛋白得到了有效的分离。(2)二维电泳图谱上点的分辨率有很大的提高,所有组分的点数是未分级前的3倍之多。(3)浓度为24%的PEG-4000富集高丰度蛋白Rubisco的效果最好。该方法可推广应用于黄瓜叶片蛋白质组分析的样品制备。 展开更多
关键词 黄瓜叶片 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 聚乙 双向电泳
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巴夫杜氏藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因的克隆和分析 预览 被引量:6
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作者 尚常花 朱顺妮 +2 位作者 袁振宏 吕鹏梅 王忠铭 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期668-674,共7页
1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了... 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是光合作用中的一个关键酶,其小亚基rbcS具有调控羧化反应催化效率和影响该酶对二氧化碳/氧气底物特异性的功能。从巴夫杜氏藻中克隆rbcS基因及其5′-上游序列,并对基因及5′-上游序列进行了分析。根据已知rbcS基因保守核苷酸序列设计引物,分别克隆到1 841 bp的DNA和380 bp的cDNA序列。以此为基础,使用染色体步移(Genome walking)和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,获得了799bp的5′端DNA序列和500 bp的3′端cDNA序列。序列分析发现,巴夫杜氏藻rbcS DNA全长为2 031 bp(不包括476 bp 5′-上游序列),cDNA全长包括570 bp开放读码框(GenBank登录号:HQ315783)和294 bp 3′端非翻译区。5′-上游序列区域存在一系列预测的顺式作用元件。该研究旨在为后继的rbcS基因的功能和表达研究、Rubisco的遗传改造奠定基础。同时,rbcS启动子因其可驱动基因高效表达而引起广泛关注,因此获得的rbcS 5′-上游序列经验证和优化后,可用于在嗜盐微藻中驱动转基因的高效表达以及完善微藻转化系统。 展开更多
关键词 巴夫杜氏藻 基因克隆 5′-上游序列分析 RBCS 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶
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水稻叶片自然衰老过程中Rubisco大亚基的含量变化 预览 被引量:7
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作者 李瑞 周玮 +1 位作者 李丽 陆巍 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期 555-558,共4页
以水稻低叶绿素b突变体及其野生型(镇恢249)为材料,研究了水稻第5叶叶片自然衰老过程中光合放氧、Rubisco大亚基含量变化以及对胰蛋白酶敏感性的变化,并通过喷施不同的抗氧化剂以及氧化剂研究其对Rubisco大亚基含量变化的影响。结... 以水稻低叶绿素b突变体及其野生型(镇恢249)为材料,研究了水稻第5叶叶片自然衰老过程中光合放氧、Rubisco大亚基含量变化以及对胰蛋白酶敏感性的变化,并通过喷施不同的抗氧化剂以及氧化剂研究其对Rubisco大亚基含量变化的影响。结果表明,叶片全展后随着衰老进程,突变体与野生型光合放氧速率、Rubisco大亚基相对含量呈下降趋势,抗氧化剂可以不同程度地缓解Rubisco大亚基含量的下降,而氧化剂则加速Rubisco大亚基含量的下降。低叶绿素b突变体的光合放氧速率高于野生型,Rubisco大亚基含量下降慢于野生型,并且衰老进程中突变体Rubisco大亚基对胰蛋白酶的敏感性低于野生型,推测活性氧是Rubisco降解的调节剂之一。 展开更多
关键词 水稻 叶绿素B 突变体 衰老 光合放氧 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶
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杜氏盐藻rbcS启动子的克隆和功能分析 预览 被引量:7
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作者 柴玉荣 田芳 +2 位作者 刘红涛 李杰 薛乐勋 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 47-52,共6页
为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因r6cS的5’上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用Dra I、EcoR V、Pvu II和Stu 1... 为提高转基因盐藻的表达效率,利用基因组步行方法和巢式PCR,从盐藻中克隆了1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(rubisco)的小亚基基因r6cS的5’上游调控序列,并对其进行序列分析和转基因功能分析。采用Dra I、EcoR V、Pvu II和Stu 14种平端限制内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建基因组步行文库GWL1、GWL2、GWL3和GWL4;设计特异引物从这4种文库中扩增rbcS基因的5’上游调控序列。在GWL1、GWL4中分别扩增出约1.2kb的片段。对该序列的分析表明,它的3’端与已知盐藻rbcS cDNA的5’端序列完全一致,说明是该基因的5’端上游区,并且包含多个与转录调控有关的保守序列(如TATA-box,CAAT-box),富含GT的重复序列。此序列EcoR I下游的片段与除草剂抗性基因bar相融合,构建表达载体,电击法转化盐藻。通过对转化藻株的抗性筛选以及PCR和Southern blot检测,表明该区域能驱动外源基因bar在转基因盐藻中的表达,推断是盐藻rbcS岱基因的启动子调控区。 展开更多
关键词 盐藻 I 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 RBCS 启动子
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杜氏盐藻RbcS基因cDNA片段的克隆和序列分析 预览 被引量:2
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作者 柴玉荣 陈华艳 +4 位作者 王天云 侯卫红 袁保梅 王建民 薛乐勋 《郑州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2005年第2期 248-250,共3页
目的:克隆杜氏盐藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)小亚基RbcS cDNA片段.方法:根据莱茵衣藻、团藻、玉米等真核生物的RuBisCO小亚基RbcS氨基酸的高度保守序列ETRSYLPP和MNKLPMFG,设计一对简并引物,采用RT-PCR方法及该简并引物... 目的:克隆杜氏盐藻1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)小亚基RbcS cDNA片段.方法:根据莱茵衣藻、团藻、玉米等真核生物的RuBisCO小亚基RbcS氨基酸的高度保守序列ETRSYLPP和MNKLPMFG,设计一对简并引物,采用RT-PCR方法及该简并引物克隆杜氏盐藻RbcS cDNA.PCR产物经T-A克隆与T-vector相连,转化大肠杆菌JM109,随机挑取数个菌落,筛选鉴定,对阳性克隆进行测序分析.将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性比较.结果:得到的cDNA长度为209 bp,编码69个氨基酸.推导的氨基酸序列与团藻、Chloromonas sp.ANT3、衣藻、伞藻、菠菜、玉米的RbcS相比较,同源性分别为85%、84%、82%、76%、70%、69%.结论:所克隆的序列为杜氏盐藻RbcS cDNA片段. 展开更多
关键词 杜氏盐藻 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 RBCS 简并引物
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藻类CCM分子生物学研究进展 预览 被引量:1
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作者 何培民 尹顺吉 +1 位作者 吴庆磊 张荣铣 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期 71-75,共5页
1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RibuloseBisphosphate Carboxylase,EC4.1.1.39,简称Rubisco)是光合作用还原和光合氧化二个连锁循环的交叉点,为调节光合作用和光呼吸、决定净光合速率的第一个关键酶[1].Rubisco的羧化和氧化作用的相对... 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RibuloseBisphosphate Carboxylase,EC4.1.1.39,简称Rubisco)是光合作用还原和光合氧化二个连锁循环的交叉点,为调节光合作用和光呼吸、决定净光合速率的第一个关键酶[1].Rubisco的羧化和氧化作用的相对速率是由该酶周围环境中的CO2和O2的相对浓度所调节.因此,提高Rubisco周边环境CO2浓度,可以提高其羧化反应速度[1,2]. 展开更多
关键词 藻类 CCM分子生物学 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 光合作用
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盐藻rbcS基因克隆及其原核表达 预览 被引量:3
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作者 柴玉荣 王亚锋 +4 位作者 王天云 侯卫红 王宁 王建民 薛乐勋 《四川大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期 818-821,共4页
1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,E.C.4.1.1.39简称RuBisCO)是光合作用中的关键酶,作者应用RT-PCR技术从一种极其耐盐的生物-杜氏盐藻的总RNA中克隆RuBisCO的小亚基(rbcS)的cDNA,它的... 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,E.C.4.1.1.39简称RuBisCO)是光合作用中的关键酶,作者应用RT-PCR技术从一种极其耐盐的生物-杜氏盐藻的总RNA中克隆RuBisCO的小亚基(rbcS)的cDNA,它的开放读码框为570bp,编码190个氨基酸.将此cDNA定向克隆于原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET-rbcS,经IPTG诱导,在大肠杆菌株BL21中表达.SDS-PAGE电泳表明,rbcS融合蛋白分子量约为26kDa. 展开更多
关键词 盐藻 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 RBCS 表达
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Degradation of Rubulose-1.5-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase in Wheat Leaves During Dark-induced Senescence 预览 被引量:2
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作者 RUIQi XULang-Lai 《植物学报:英文版》 CSCD 2004年第2期 137-141,共5页
The degradation of Ribulose-1.5-bisphosphate carboxylase/oxygenase(Rubisco,EC4.1.1.39)in wheat(TnticumaestivumL.CV.Yan6mai 158)leaves dunng dark—induced senescence was studied.An/in vivo degradation product of ... The degradation of Ribulose-1.5-bisphosphate carboxylase/oxygenase(Rubisco,EC4.1.1.39)in wheat(TnticumaestivumL.CV.Yan6mai 158)leaves dunng dark—induced senescence was studied.An/in vivo degradation product of Rubisco large subunit(LSU)with molecular weiht of 50kD was detected by SDS—PAGE and immunobloted with antibody against tobacco Rubisco.This fragment could also be detected in natural senescence.The result also suggested that the Rubisco holoenzyme had not dissociated when LSU hydrolyzed from 53 kD to 50kD.And.LSUcould be fragmented to 50kD at 30-35℃and at DH7.5 in crude enzyme extracts of wheat leaves dark—induced for 48h.which suggested that maybe LSU was degraded to 50 kD by anunknown protease in chloroplast. 展开更多
关键词 小麦 叶片 蛋白 蛋白质降解 l 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 衰老
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原核生物Rubisco的研究进展 预览 被引量:2
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作者 吕红 周集体 +1 位作者 王竞 安利佳 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期 82-85,共4页
1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是卡尔文循环中的关键酶,该酶广泛存在于植物和一些原核生物中.由于在结构上,原核生物中Rubisco与植物有相似之处,因此人们对原核生物中的Rubisco进行了大量研究,就原核生物Rubisco的结构、基因... 1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)是卡尔文循环中的关键酶,该酶广泛存在于植物和一些原核生物中.由于在结构上,原核生物中Rubisco与植物有相似之处,因此人们对原核生物中的Rubisco进行了大量研究,就原核生物Rubisco的结构、基因调节、装配等方面的最新进展作一综述. 展开更多
关键词 生物 RUBISCO 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 结构 基因调节 装配
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节旋藻FACHB341 Rubisco基因部分序列的克隆和分析 预览 被引量:7
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作者 刘金姐 茅云翔 +2 位作者 臧晓南 隋正红 张学成 《高技术通讯》 CAS CSCD 2003年第6期 87-93,共7页
以节旋藻FACHB341为材料,对所克隆Rubisco基因进行了核苷酸序列测定和分析,由此推导出相应的氨基酸序列,并与部分其他蓝藻的同源基因进行了同源性分析.结果表明:所克隆DNA片段包含Rubisco大小亚基基因部分序列及rbcX基因序列,长度为2073... 以节旋藻FACHB341为材料,对所克隆Rubisco基因进行了核苷酸序列测定和分析,由此推导出相应的氨基酸序列,并与部分其他蓝藻的同源基因进行了同源性分析.结果表明:所克隆DNA片段包含Rubisco大小亚基基因部分序列及rbcX基因序列,长度为2073 bp,其中rbcL和rbcX基因之间存在两个转录茎环结构;大小亚基酸性氨基酸和碱性氨基酸的比例分别为13.14%和14.51%,疏水氨基酸的比例为42.16%;rbcL核苷酸序列与集胞藻 PCC6803、Prochlorothrix hollandica、聚球藻PCC6301、Agmenellum quadruplicatum和鱼腥藻PCC7120同源序列的相似性分别为91.7%、79.9%、74.8%、77.2%和76.1%;rbcS核苷酸序列与鱼腥藻 PCC7120同源序列的相似性为67.6%,而与PCC6301和集胞藻 PCC7002同源序列的相似性分别为30.1%和63.8%. 展开更多
关键词 节旋藻 基因序列 克隆 “l 5-二磷酸羧化酶/加氧酶 苷酸 同源性分析 氨基酸 RUBISCO基因 密码子
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桂糖11号Rubisco基因克隆、原核表达及纯化 预览
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作者 吴朝兴 蒋媛 +5 位作者 王露蓉 顾彩彩 牛俊奇 孙波 李杨瑞 杨丽涛 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期524-529,共6页
【目的】通过原核表达及纯化获得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亚基融合蛋白,为获得符合抗体制备条件的高纯度融合蛋白提供技术支持。【方法】以甘蔗品种桂糖11号(GT11)+1叶为材料,根据NCBI公布的甘蔗Rubisc... 【目的】通过原核表达及纯化获得甘蔗1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)的大、小亚基融合蛋白,为获得符合抗体制备条件的高纯度融合蛋白提供技术支持。【方法】以甘蔗品种桂糖11号(GT11)+1叶为材料,根据NCBI公布的甘蔗Rubisco大、小亚基基因(rbc L和rbc S)的编码域序列(CDS)设计特异性引物,PCR扩增rbc L和rbc S基因的CDS,然后连接至原核表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒后转入原核细胞(大肠杆菌Rosetta)中诱导表达,用镍亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,并比较分析桂糖11号与其他甘蔗品种在rbc L和rbc S基因的CDS及编码蛋白序列方面的差异。【结果】rbc L和rbc S基因的CDS长度分别为1431和510 bp,其中桂糖11号rbc L基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar SP80-3280(Gen Bank登录号AE009947)、Saccharum hybrid cultivar Q155(Gen Bank登录号KU214867)的一致,桂糖11号rbc S基因的CDS与Saccharum hybrid cultivar GT28(Gen Bank登录号JN591757)的存在7个碱基差异,但仅有2个氨基酸发生错义突变。Rbc L和Rbc S融合蛋白以包涵体形式存在原核细胞中,用镍离子亲和层析纯化及超滤浓缩后其浓度均在1.0 mg/m L以上。【结论】从桂糖11号成功克隆Rubisco大亚基和小亚基基因的CDS,大亚基基因的CDS比小亚基的保守性更高,且均可在原核细胞中高度表达,经纯化浓缩获得的高纯度融合蛋白可用于制备Rubisco单克隆抗体。 展开更多
关键词 甘蔗 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco) 克隆 表达 融合蛋白 纯化
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小麦叶片中1种降解Rubisco大亚基的蛋白酶鉴定 预览 被引量:1
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作者 吴蔚 陈晓 +5 位作者 张鹏 郑斯旻 吴文 郭金贺 徐朗莱 芮琪 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期63-69,共7页
[目的]探明小麦叶片衰老过程中1种降解1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco)大亚基蛋白酶的生化特性。[方法]通过天然梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳后切胶回收的方法获得Rubisco全酶,... [目的]探明小麦叶片衰老过程中1种降解1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(ribulose 1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase,Rubisco)大亚基蛋白酶的生化特性。[方法]通过天然梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳后切胶回收的方法获得Rubisco全酶,采用离子交换层析、非完全变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和切胶回收蛋白等方法分离目的蛋白酶,并采用含明胶的聚丙烯酰胺凝胶电泳研究其生化特性(主要是最适p H、最适温度、热稳定性、蛋白酶类型等)。[结果]切胶回收的Rubisco全酶样品中存在降解大亚基的蛋白酶。在Mono-Q离子交换层析条件下,该蛋白酶与Rubisco不易分离。利用非完全变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离出这种降解大亚基的蛋白酶;在聚丙烯酰胺凝胶中,该蛋白酶相对分子质量大于大亚基相对分子质量,位置在大亚基上方,其余部分没有检测到蛋白酶活性。该酶的最适温度为60℃;最适p H值为7.0,在p H 5.0~8.0均表现出较高的活性;该酶热稳定性一般,在50℃以上几乎完全丧失其活性;丝氨酸蛋白酶抑制剂AEBSF[4-(2-Aminoethyl)benzenesulfonyl fluoride hydrochloride]可以完全抑制蛋白酶活性,金属蛋白酶抑制剂1,10-phenanthroline可以部分抑制该蛋白酶的活性,酸性蛋白酶抑制剂pepstatin、半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64[transepoxysuccinyl-L-leucylamido(4-guanidino)butane]、金属蛋白酶抑制剂EDTA(ethylene diamine tetraacetic acid)和EGTA[ethylenebis(oxyethylenenitrilo)tetraacetic acid]以及丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF(phenylmethanesulfonyl fluoride)不抑制该蛋白酶的活性。[结论]在切胶回收的Rubisco全酶中发现了1种可以降解Rubisco大亚基的蛋白酶,其可能是1种需要金属离子的丝氨酸型蛋白酶。 展开更多
关键词 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco) 蛋白水解 小麦叶片 衰老 理化特性
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野大麦盐胁迫rbcS基因的克隆及序列分析 预览 被引量:2
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作者 岳海燕 尹剑锐 +6 位作者 闫守庆 冯宇隆 张莲姬 郭建强 李怀亮 丁雪梅 沈景林 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第1期 73-74,77,共3页
[目的]对野大麦盐胁迫rbcS基因进行克隆及序列分析。[方法]以盐胁迫下的野大麦幼嫩叶片为试材,根据GenBank中小麦和大麦rbcS基因核酸序列的同源性设计引物,对野大麦基因组DNA进行PCR扩增、回收、连接、转化及测序。[结果]在野大麦的基... [目的]对野大麦盐胁迫rbcS基因进行克隆及序列分析。[方法]以盐胁迫下的野大麦幼嫩叶片为试材,根据GenBank中小麦和大麦rbcS基因核酸序列的同源性设计引物,对野大麦基因组DNA进行PCR扩增、回收、连接、转化及测序。[结果]在野大麦的基因组中克隆了2个大小不同的rbcS基因序列rbcS1和rbcS2,长度分别为1252和908bp。rbcS1和rbcS2均由2个外显子和1个内含子组成,外显子长度相等,编码序列为525bp,同源性为96%,编码174个氨基酸;rbcS1和rbcS2内含子大小不同,分别为448和107bp。[结论]为进一步探讨rbcS基因在野大麦耐盐机制中的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 野大麦 盐胁迫 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基 序列分析
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野大麦盐胁迫rbcS基因的克隆及序列分析(摘要)(英文) 预览 被引量:1
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作者 岳海燕 尹剑锐 +6 位作者 闫守庆 冯宇隆 张莲姬 郭建强 李怀亮 丁雪梅 沈景林 《农业科学与技术:英文版》 CAS 2010年第8期 42-44,共3页
[目的]研究野大麦盐胁迫rbcS基因的克隆及序列分析。[方法]以盐胁迫下的野大麦幼嫩叶片为试材,根据GenBank中小麦和大麦rbcS基因核酸序列的同源性设计引物,对野大麦基因组DNA进行PCR扩增、回收、连接、转化及测序。[结果]在野大麦的基... [目的]研究野大麦盐胁迫rbcS基因的克隆及序列分析。[方法]以盐胁迫下的野大麦幼嫩叶片为试材,根据GenBank中小麦和大麦rbcS基因核酸序列的同源性设计引物,对野大麦基因组DNA进行PCR扩增、回收、连接、转化及测序。[结果]在野大麦的基因组中克隆了2个大小不同的rbcS基因序列rbcS1和rbcS2,长度分别为1252和908bp。rbcS1和rbcS2均由2个外显子和1个内含子组成,外显子长度相等,编码序列为525bp,同源性为96%,编码174个氨基酸;rbcS1和rbcS2内含子大小不同,分别为448和107bp。[结论]该研究为进一步探讨rbcS基因在野大麦耐盐机制中的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 野大麦 盐胁迫 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基 序列分析
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小麦叶片内1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶大亚基由53000到50000裂解反应的定位研究 预览 被引量:2
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作者 芮琪 张列峰 徐朗莱 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期 23-27,共5页
研究了小麦叶片内1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco,EC 4.1.1.39)大亚基(LSU)由53000裂解为50000的反应。结果显示,成熟叶片的粗提液在pH5.5的条件下反应后能检测到50000的裂解产物,而暗诱导衰老叶片的粗提液在pH7.... 研究了小麦叶片内1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco,EC 4.1.1.39)大亚基(LSU)由53000裂解为50000的反应。结果显示,成熟叶片的粗提液在pH5.5的条件下反应后能检测到50000的裂解产物,而暗诱导衰老叶片的粗提液在pH7.5的条件下也能发现LSU的这一降解。分别从成熟叶片和衰老叶片中提取叶绿体,以其裂解液为反应体系研究LSU由53000裂解为50000这步反应的细胞器定位。结果显示,衰老叶片中的叶绿体裂解液在pH7.5时反应1h后能检测到50000降解产物,而成熟叶片叶绿体裂解液在pH5.5和pH7.5的条件下反应后均未检测到LSU的50000裂解产物。上述结果表明:衰老叶片中ISU由53000部分裂解为50000的反应定位于叶绿体内,而成熟叶片中LSU由53000裂解为50000的反应可能定位于叶绿体外。 展开更多
关键词 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶(Rubisco EC 4.1.1.39) 蛋白质降解 细胞定位 叶衰老 小麦
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转录后基因沉默系统研究烟草rbcS基因功能 预览 被引量:1
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作者 周晓馥 麻鹏达 +3 位作者 王仁厚 朱筱娟 刘宝 王兴智 《遗传学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期 586-593,共8页
初步建立了利用病毒载体诱导转录后基因沉默系统研究烟草(Nicotiana benthamiana)1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基(Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxylase small subunit,rbcS)基因功能的模式.用携带与1,5-二磷酸核酮糖... 初步建立了利用病毒载体诱导转录后基因沉默系统研究烟草(Nicotiana benthamiana)1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基(Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxylase small subunit,rbcS)基因功能的模式.用携带与1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因同源的cDNA片段的烟草脆裂病毒载体(pTV.rbcS)侵染烟草(Nicotiana benthamiana),诱导内源rbcS基因沉默并在此基础上建立了研究rbcS基因功能的模式:初步进行了rbcS基因沉默后的表型分析、转录水平分析、蛋白质表达水平分析以及利用HPLC方法定量分析rbcS基因沉默后的光合色素变化.结果表明:病毒诱导基因沉默瞬时表达体系中烟草最佳侵染时期为苗龄21~24 d,用于侵染的重组农杆菌的最佳浓度的OD值为1~1.5;烟草Rubisco小亚基的表达量可能调节Rubisco大亚基的表达量;烟草rbcS基因与光合作用中的光能收集无关.对rbcS基因沉默的烟草叶片及对照烟草叶片的部分重要光合作用指标分析表明,运用烟草脆裂病毒载体诱导转录后基因沉默系统研究烟草rbcS基因功能具有可行性,为进一步深入研究rbcS基因功能奠定了基础. 展开更多
关键词 1 5-二磷酸羧化酶/加氧酶小亚基 转录后基因沉默
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