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表达NDV HN和IBDV VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌的构建及其生物学特性分析 预览
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作者 贾艳艳 刘莎莎 +9 位作者 丁轲 何雷 余祖华 李静 郁川 廖成水 程相朝 李银聚 殷月兰 张春杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期567-572,共6页
为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌,并分析其生物学特性。本研究扩增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通过重叠延伸PCR扩增获得HN-VP2融合基因,构建重组质粒pYA-HN-VP2,将该重组... 为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)HN和传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2融合蛋白的重组减毒沙门菌,并分析其生物学特性。本研究扩增了NDVHN和IBDVVP2主要抗原基因片段,通过重叠延伸PCR扩增获得HN-VP2融合基因,构建重组质粒pYA-HN-VP2,将该重组质粒电转化至减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd中,获得表达HN-VP2融合蛋白的减毒重组菌SL1344ΔcrpΔcyaΔasd(pYA-HN-VP2),并分析其生化特性、遗传稳定性和毒力等生物学特性。Westernblot结果显示,重组减毒沙门菌可分泌表达HN-VP2融合蛋白,大小为84ku,且该融合蛋白分别能与相应特异性阳性血清发生反应;生物学特性结果显示,重组菌株失去了利用麦芽糖、山梨醇及乳糖等碳源的能力,其生长速度显著慢于野生菌株SL1344;毒力较野生菌株至少下降5个对数单位,且能够稳定遗传重组质粒pYA-HN-VP2。本研究为鸡新城疫-传染性法氏囊病-沙门菌病的三联口服疫苗研制奠定重要基础。 展开更多
关键词 减毒沙门菌 传染性法氏囊病 新城疫 构建 生物学特性
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质膜型唾液酸酶对前列腺癌荷瘤小鼠恶病质影响的研究 预览
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作者 李晓洁 姜俊 +3 位作者 周瑞芳 刁爱芹 郑涛 叶军 《川北医学院学报》 CAS 2019年第1期40-44,共5页
目的:观察质膜型唾液酸酶(human plasma membrane-associated sialidase,Neu3)对前列腺癌荷瘤小鼠恶病质的影响。方法:应用真核细胞转染技术,转染前列腺癌PC-3、LNCaP细胞。转染后,利用倒置显微镜观察细胞形态变化;利用MTT实验观察细胞... 目的:观察质膜型唾液酸酶(human plasma membrane-associated sialidase,Neu3)对前列腺癌荷瘤小鼠恶病质的影响。方法:应用真核细胞转染技术,转染前列腺癌PC-3、LNCaP细胞。转染后,利用倒置显微镜观察细胞形态变化;利用MTT实验观察细胞增殖变化;划痕实验观察细胞迁移能力的变化。通过显微外科手术建立原位肿瘤模型,随机分为4组,Mock组、AS组、pGCsi-Scramble组及pGCsi-Neu3组,每组6只小鼠,利用减毒沙门氏菌作为运载体,监测Neu3对裸鼠进食量、体重等恶病质指标的影响;利用IL-6小鼠ELISA试剂盒检测小鼠血清IL-6。结果:PC-3细胞和LNCaP细胞转染pGCsi-Neu3质粒后细胞透光性下降,伪足减少,细胞增殖能力下降,迁移能力下降,与Mock组及pGCsi-Scramble组相比,有统计学意义(P<0.01)。动态监测前列腺癌荷瘤小鼠体重和摄食量数据显示:Mock组、AS组和pGCsi-Scramble组,小鼠体重逐渐减轻,摄食量减小,试验结束时,与pGCsi-Neu3组相比体重、摄食量差异明显,有统计学意义(P<0.01)。pGCsi-Neu3组小鼠血清IL-6水平明显低于Mock组、AS组和pGCsi-Scramble组,有统计学意义(P<0.01)。结论:下调Neu3表达,在体内具有良好的延缓恶病质发生、发展作用,其可能机制是Neu3的表达水平下降抑制了前列腺癌PC-3、LNCaP细胞增殖和迁移,IL-6表达下降,食欲增加。Neu3可能成为治疗癌性恶病质新靶点。 展开更多
关键词 人质膜型唾液酸酶 前列腺癌 癌性恶病质 减毒沙门氏菌
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基于同源重组技术的表达CRE重组酶的减毒沙门菌的构建及功能初步研究
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作者 高兴 刘晶 +5 位作者 张赞 刘洋 许可 杨桂连 姜延龙 王春凤 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第10期1222-1227,共6页
为了构建表达Cre重组酶的减毒沙门菌,本试验首先将Cre重组酶表达框插入到自杀质粒pYA3599中,构建重组自杀质粒pYA3599-Cre,电转至感受态χ7232中,经酶切鉴定与测序后,电转至χ7213感受态中,得到含有自杀质粒pYA3599-Cre的重组菌χ7213... 为了构建表达Cre重组酶的减毒沙门菌,本试验首先将Cre重组酶表达框插入到自杀质粒pYA3599中,构建重组自杀质粒pYA3599-Cre,电转至感受态χ7232中,经酶切鉴定与测序后,电转至χ7213感受态中,得到含有自杀质粒pYA3599-Cre的重组菌χ7213。随后通过同源重组,经两步筛选,将Cre重组酶表达框整合至减毒沙门菌χ11802的基因组中,得到重组减毒沙门菌χ11802-Cre,通过Western-boltting技术检测重组酶Cre的表达,进而将报告质粒pYA4545-lox P电转至重组菌中验证Cre重组酶的功能。结果显示,成功构建了自杀质粒pYA3599-Cre,并基于同源重组技术成功将重组酶Cre表达框整合至χ11802基因组中,通过Western-blotting成功检测出重组酶Cre的表达,且报告质粒电转至重组菌中可被切除lox P位点之间序列。本试验成功构建出能表达重组酶Cre的减毒沙门菌,为后期以位点特异性重组酶Cre为基础的减毒沙门菌微环DNA疫苗的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 CRE 自杀质粒 同源重组 减毒沙门菌
携带DEV-gB/NP28重组减毒沙门氏菌诱导鸭的免疫应答研究 预览 被引量:2
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作者 鲜思美 李婷 +4 位作者 冯将 李鹏飞 包细明 张益 文明 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期330-335,共6页
为探究表达鸭肠炎病毒(DEV)gB/NP28双基因重组减毒沙门菌口服疫苗在鸭体内诱导免疫应答能力,本研究将构建的重组菌(pcDNA3.1-DEV-gB/NP28)/SL7207、DVE弱毒疫苗、重组质粒pcDNA3.1-DEV-gB/NP28及PBS分别免疫雏鸭,通过间接免疫荧光... 为探究表达鸭肠炎病毒(DEV)gB/NP28双基因重组减毒沙门菌口服疫苗在鸭体内诱导免疫应答能力,本研究将构建的重组菌(pcDNA3.1-DEV-gB/NP28)/SL7207、DVE弱毒疫苗、重组质粒pcDNA3.1-DEV-gB/NP28及PBS分别免疫雏鸭,通过间接免疫荧光法检测免疫鸭脾脏、胸腺、法氏囊、哈德氏腺组织中的抗原表达;双抗体夹心ELISA方法检测肠道黏膜sIgA;间接ELISA方法监测血清中DEV特异性抗体、外周血T淋巴细胞增殖及IFN-γ、IL-4细胞因子含量,对该口服疫苗进行免疫学评价。结果表明,重组菌能够诱导鸭产生良好的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫应答;攻毒试验显示,在DVE强毒攻击下重组菌免疫可提供75%以上的保护,表明重组菌免疫对DEV攻击具有一定的免疫保护作用。 展开更多
关键词 鸭病毒性肠炎病毒 GB基因 NP28基因 减毒沙门氏菌 免疫应答
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减毒沙门氏菌在消化系肿瘤中的研究进展 预览
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作者 朱晓舟 孔桂美 +4 位作者 万丹 孙国壮 焦红梅 阴银燕 李国才 《世界华人消化杂志》 CAS 2017年第16期1480-1485,共6页
消化系肿瘤在我国是最常见的恶性肿瘤,随着现代生活节奏的加快,消化系肿瘤的发病率有增高趋势,年轻化的趋势也愈加明显.减毒沙门氏菌作为一个胞内寄生菌,本省具有抗肿瘤特性,同时可以作为肿瘤基因治疗的载体进行抗肿瘤治疗.本文就减毒... 消化系肿瘤在我国是最常见的恶性肿瘤,随着现代生活节奏的加快,消化系肿瘤的发病率有增高趋势,年轻化的趋势也愈加明显.减毒沙门氏菌作为一个胞内寄生菌,本省具有抗肿瘤特性,同时可以作为肿瘤基因治疗的载体进行抗肿瘤治疗.本文就减毒沙门氏菌及作为治疗载体在肝癌、胃癌、大肠癌的体内外应用进展进行综述. 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 消化系肿瘤 靶向 治疗载体
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携带低氧诱导因子-1α及角质细胞生长因子的减毒沙门菌TPHK的构建及其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达 被引量:2
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作者 白燕青 徐倩 +2 位作者 曾通旭 曹荟哲 哈小琴 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第2期137-140,共4页
目的构建携带低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)的减毒沙门菌TPHK,并检测其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达。方法从质粒p IRES-KGF中PCR扩增获得KGF基... 目的构建携带低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)的减毒沙门菌TPHK,并检测其在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达。方法从质粒p IRES-KGF中PCR扩增获得KGF基因片段,经双酶切回收后,与p IRES-HIF质粒进行连接,获得双基因重组质粒p IRES-HIF-KGF,Ca Cl2法转化减毒沙门菌Ty21a,获得重组菌株TPHK。将TPHK菌液灌胃给予大鼠,10-9 cfu/(只·d),饲养7 d后,置模拟海拔6 000 m的高原低氧舱,舱内连续饲养7 d,采集大鼠胃及小肠组织,ELISA法检测HIF-1α及KGF的表达水平。结果重组质粒p IRES-HIF-KGF及重组菌株TPHK经双酶切及测序鉴定证明构建正确。给予TPHK菌液后可明显提高低氧应激大鼠胃及肠组织中HIF-1α及KGF的表达水平(P〈0.001)。结论成功构建了携带HIF-1α及KGF的减毒沙门菌TPHK,且其可提高HIF-1α及KGF在低氧应激大鼠胃肠组织中的表达。 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1Α 角质细胞生长因子 减毒沙门菌 大鼠
IL-24联合靶向减毒沙门菌载体SL7207/pBud-VP3对胃癌细胞的生长抑制作用 预览 被引量:3
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作者 曹红丹 张朝鸿 +3 位作者 吕琳 蔡佩璇 李燕燕 车小雯 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第19期2610-2613,共4页
目的探讨白细胞介素(IL)-24联合靶向减毒沙门菌载体SL7207/pBud-VP3对胃癌细胞生长的抑制作用及机制。方法构建pBud-VP3-IL-24真核双表达质粒,利用高压电穿孔法将pBud—Vp3-IL-24。质粒导入减毒沙门菌SL7207株中,构成SL7207/pBud... 目的探讨白细胞介素(IL)-24联合靶向减毒沙门菌载体SL7207/pBud-VP3对胃癌细胞生长的抑制作用及机制。方法构建pBud-VP3-IL-24真核双表达质粒,利用高压电穿孔法将pBud—Vp3-IL-24。质粒导入减毒沙门菌SL7207株中,构成SL7207/pBud—VP3-IL-24菌株。建立小鼠胃癌移植瘤模型,将模型随机分为生理盐水对照组、SL7207/pBud组、SL7207/pBud—VP3组及SL7207/pBud—VP3-IL-24组,菌株口服饲喂荷瘤小鼠,测量肿瘤体积并计算抑瘤率。采用蛋白质印迹法检测肿瘤组织中IL-24的表达;采用实时荧光定量-PCR(RT—PCR)检测干扰素-γ(IFN-γ)、IL-6及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用免疫组织化学法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果成功构建基于IL-24的减毒沙门菌载体系统SL7207/pBud—VP3-IL-24;治疗14d后,胃癌组织可检测到IL-24蛋白的表达;治疗28d后,SL7207/pBud-VP3-IL-24组与其他组比较,肿瘤体积缩小并能够明显抑制肿瘤生长,差异有统计学意义(P〈0.05)。RT—PCR及免疫组织化学显示,IL-24联合SL7207/pBud—VP3能够明显增加免疫因子IFN-7、IL-6及TNF-α的表达水平(P〈0.05),上调Caspase-3及下调VEGF的表达(P〈O.05)。结论IL-24联合SL7207/pBud-VP3可以协同发挥对胃癌细胞的生长抑制作用,其作用机制与肿瘤凋亡促进、肿瘤血管抑制、免疫调节等有关。 展开更多
关键词 胃癌细胞 白细胞介素-24 减毒沙门菌
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减毒沙门菌载体在应激性溃疡基因治疗中的研究现状 预览 被引量:1
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作者 白燕青 王娟 哈小琴 《医学综述》 2016年第19期3757-3760,共4页
近年来基因疗法发展迅速,减毒沙门菌介导的真核表达载体防治应激性溃疡的基因治疗方法已经逐步从实验及基础研究过渡到临床试用阶段,理论和技术层次上日趋成熟。而基于低氧诱导因子1α与角质细胞生长因子防治应激性溃疡的研究现状一... 近年来基因疗法发展迅速,减毒沙门菌介导的真核表达载体防治应激性溃疡的基因治疗方法已经逐步从实验及基础研究过渡到临床试用阶段,理论和技术层次上日趋成熟。而基于低氧诱导因子1α与角质细胞生长因子防治应激性溃疡的研究现状一直缺乏整理与总结,该文整理了携带双基因的重组减毒沙门菌的实现情况及存在问题,为进一步研究提供帮助。 展开更多
关键词 应激性溃疡 减毒沙门菌 低氧诱导因子1Α 角质细胞生长因子
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新型重组减毒鸡白痢沙门菌△cr p△asdC79-13(pcD-asd)平衡致死系统的构建及其特性
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作者 翟崇凯 郁川 +6 位作者 程相朝 余祖华 何雷 廖成水 张春杰 李银聚 田文静 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1829-1835,共7页
为开发新型重组减毒鸡白痢沙门菌口服活疫苗载体。本研究以pcDNA3.1-Zeo(+)质粒为基础,用沙门菌asd基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建不舍抗性基因的真核互补质粒pcD-asd;再将互补质粒pcD-asd电转入沙门菌△cr p△asd C79—13,构... 为开发新型重组减毒鸡白痢沙门菌口服活疫苗载体。本研究以pcDNA3.1-Zeo(+)质粒为基础,用沙门菌asd基因替代其氨苄抗性基因Amp,构建不舍抗性基因的真核互补质粒pcD-asd;再将互补质粒pcD-asd电转入沙门菌△cr p△asd C79—13,构建△cr p△asd C79—13(pcD-asd)平衡致死系统,研究其生物学特性,进一步将报告基因EG-FP克隆入pcD-asd,构建重组菌株△cr p△asd C79—13(pcD-asd—EGFP),感染鸡胚成纤维(CEF)细胞,Western blot分析该系统递呈外源抗原的能力。PCR、酶切及测序结果表明△cr p△asd C79—13(pcD-asd)平衡致死系统构建成功;生物学特性鉴定结果表明,其血清型与亲本株△cr p△asd C79—13及野生株C79—13保持一致;其生化特性与亲苯株基本相近,但与野毒株相比发生明显变化;生长速度也更为缓慢,对氨苄抗生素敏感;重组菌株△cr p△asd C79—13(peD-asd)的LD50较野生株C79—13降低了3.4×10^4倍;Western blot结果发现,重组菌株感染CEF细胞后,可表达大小约为27000EGFP蛋白。以上结果证实,本研究成功构建了新型重组减毒鸡白痢沙门菌△cr p△asdC79—13(pcD-asd)株,其能够有效递呈外源抗原,该重组菌株有潜力作为安全、稳定、高效表达外源基因的口服重组活疫苗载体。 展开更多
关键词 减毒沙门菌 无抗性基因 平衡致死系统 活疫苗载体
携带FMDVDNA疫苗重组减毒沙门氏菌的构建及其安全性和稳定性研究 预览
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作者 刘清源 向华 +4 位作者 黄元 陈晶 向蓉 郑海学 刘宇 《广东农业科学》 CAS 2015年第8期113-117,共5页
为探讨携带FMDV DNA疫苗重组沙门氏菌口服免疫可行性,PCR扩增O型FMDV主要抗原基因VP1,并连接到真核表达载体p IRES,将构建的质粒p IRES-VP1体外转染BHK-21细胞,间接免疫荧光检测VP1基因的表达。通过氯化钙转化法将重组质粒p IRES-VP1转... 为探讨携带FMDV DNA疫苗重组沙门氏菌口服免疫可行性,PCR扩增O型FMDV主要抗原基因VP1,并连接到真核表达载体p IRES,将构建的质粒p IRES-VP1体外转染BHK-21细胞,间接免疫荧光检测VP1基因的表达。通过氯化钙转化法将重组质粒p IRES-VP1转入减毒鼠伤寒沙门氏菌2266,构建2266(p IRES-VP1)重组菌,并以10^8、10^9、10^10CFU的剂量口服免疫小鼠,2周后以相同剂量加强免疫,以研究重组菌在小鼠体内的稳定性及安全性,并通过将重组菌进行体外传代,研究重组质粒在体外的稳定性。研究结果表明:10^8、10^9CFU剂量免疫小鼠成活率为100%,10^10CFU剂量口服小鼠出现扎堆现象,且行动迟缓。重组菌体外连传8代以及免疫小鼠后从脾脏和肝脏分离鉴定表明,重组菌2266(p IRES-VP1)在体内和体外均具有较好的安全性和稳定性。 展开更多
关键词 FMDV VP1基因 DNA疫苗 减毒沙门氏菌
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减毒沙门菌介导肝细胞生长因子基因治疗大鼠胃溃疡的实验研究
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作者 哈小琴 杨迎桂 +5 位作者 杨淑娟 张萍 薛荣利 张媛媛 郭文家 肖娜娜 《中国医药》 2015年第12期1778-1782,共5页
目的探讨减毒沙门菌介导的肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对大鼠实验性胃溃疡的效果。方法构建HGF真核表达载体pcKH,将pcKH和对照质粒pcK转入Ty21a减毒沙门菌中,构建携带pcKH和pcK的阳性工程菌TPH和TP。将40只Wistar大鼠随机分为正常... 目的探讨减毒沙门菌介导的肝细胞生长因子(HGF)基因治疗对大鼠实验性胃溃疡的效果。方法构建HGF真核表达载体pcKH,将pcKH和对照质粒pcK转入Ty21a减毒沙门菌中,构建携带pcKH和pcK的阳性工程菌TPH和TP。将40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、TP治疗组和TPH治疗组,每组10只;TP治疗组、TPH治疗组和模型对照组采用冰乙酸诱导方法制备大鼠乙酸性胃溃疡模型,造模后第5天分别给予5ml含1×10^9cfuTP和TPH的10%NaHCO3及同体积10%NaHCO3溶液灌胃,1次/d,共3次。治疗结束后第21天肉眼及镜下观察胃溃疡愈合情况,计算溃疡面积、测量胃黏膜上皮的爬行长度;检测HGF在胃溃疡黏膜组织中的表达水平。结果成功构建携带HGF基凶真核表达质粒的减毒沙门菌。治疗后21d,病理结果表明TPH治疗组大鼠胃黏膜上皮增生明显,增生黏膜腺体明显扩张,溃疡已由肉芽组织充填,且可见丰富的毛细血管;模型对照组和TP治疗组溃疡愈合不明显。TPH治疗组溃疡面积明显小于模型对照组和TP治疗组[(11±3)mm^2比(56±6)、(43±4)mm^2],差异有统计学意义(P〈0.05)。TPH治疗组黏膜上皮增生爬行长度明显大于模型对照组和TP治疗组[(879±8)mm比(821±10)、(817±14)mm],差异有统计学意义(P〈0.05),TPH治疗组胃溃疡黏膜组织中HGF表达水平明显高于模型对照组和TP治疗组[(0.88±0.18)μg/g蛋白比(0.51±0.08)、(0.34±0.15)μg/g蛋白],差异有统计学意义(P〈0.05)。结论携带HGF基因的减毒沙门菌可促进大鼠胃溃疡黏膜上皮增生,加快溃疡愈合。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 基因治疗 减毒沙门菌 胃溃疡
携带 pGRIM-19-si-survivin 共表达质粒的减毒沙门菌对前列腺癌移植瘤的体内抑制作用 预览
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作者 赵晓晖 芦丽莉 +3 位作者 葛贺 李冰 赵雪俭 刘艳波 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期961-967,共7页
目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫... 目的:探讨人减毒沙门菌携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒对人前列腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及相关机制。方法:复制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤模型,通过腹腔注射携带共表达质粒的减毒沙门菌进行治疗,实时监测肿瘤体积;运用免疫组织化学染色法、RT-PCR法和TUNEL法检测携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌对肿瘤抑制作用的相关机制。结果:与psi-survivin或pGRIM-19单基因治疗对照组比较,携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒减毒沙门菌组肿瘤体积明显缩小,其缩小率分别约为2.36和3.02倍;肿瘤组织内survivin mRNA及蛋白表达明显下降(P<0.05),GRIM-19 mRNA及蛋白表达明显增高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bcl-xL、Stat3、cyclin D1和c-Myc的mRNA表达明显降低(P<0.05),血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及Ki67蛋白表达降低而caspase-3 mRNA表达明显上调(P<0.05),同时细胞凋亡明显。结论:携带pGRIM-19-si-survivin共表达质粒的减毒沙门菌明显抑制裸鼠前列腺癌皮下移植瘤的生长,其发生机制与促进细胞凋亡及抑制肿瘤细胞增殖有关。 展开更多
关键词 RNA干扰 存活蛋白 GRIM-19 前列腺肿瘤 减毒沙门菌
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减毒沙门氏菌载体构建策略研究进展 预览
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作者 刘明荣 朱良全 《中国兽药杂志》 2014年第1期62-65,共4页
减毒沙门氏菌能诱导粘膜、体液及细胞免疫,不仅其自身能够产生免疫效应,而且还能携带外源基因诱导宿主特异性应答,是具有广泛应用前景的疫苗载体。本文从减毒致弱菌株构建、外源基因高效表达等方面综述了减毒沙门氏菌载体构建策略的... 减毒沙门氏菌能诱导粘膜、体液及细胞免疫,不仅其自身能够产生免疫效应,而且还能携带外源基因诱导宿主特异性应答,是具有广泛应用前景的疫苗载体。本文从减毒致弱菌株构建、外源基因高效表达等方面综述了减毒沙门氏菌载体构建策略的新进展,进而对减毒沙门氏菌活载体应用中待解决的科学问题进行了归纳。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 载体 构建策略
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细粒棘球蚴Eg95蛋白减毒沙门氏菌重组株的构建与免疫原性分析 预览 被引量:4
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作者 王志昇 吴璟 +5 位作者 林源 李红兵 刘强 王志辉 郎多勇 杨文 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期339-343,共5页
目的探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性。方法将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体p YA3341中,构建重组质粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定。将重组质粒先后电转入减毒... 目的探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)为载体构建细粒棘球蚴口服活载体疫苗的可行性。方法将细粒棘球蚴Eg95基因插入到表达载体p YA3341中,构建重组质粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鉴定。将重组质粒先后电转入减毒沙门氏菌X3770和X4550,获得重组菌株St-Eg95,蛋白质印迹(Western blotting)分析重组菌Eg95蛋白的表达情况。将重组菌St-Eg95体外培养传10代,每隔一代提取质粒,利用PCR鉴定重组质粒的稳定性。BALB/c小鼠30只,随机均分为6组,其中4组分别经口灌胃给予St-Eg95 1×10^9、1×10^10、1×10^11和1×10^12 cfu/ml,100μl/只,余下2组分别经口灌胃给予等体积野生型沙门氏菌1×10^7 cfu/ml和PBS,常规饲养30 d,观察生存情况。另取15只BALB/c小鼠,均分为3组,分别为St-Eg95免疫组、阴性对照组和空白对照组,St-Eg95组和阴性对照组按5×10^10cfu/ml剂量的重组菌和阴性菌分别经口灌胃免疫小鼠,0.5 ml/(只·次),共2次,间隔2周。分别于免疫前和末次免疫后2、4和6周采血,收集血清。用细粒棘球蚴Ig G抗体检测试剂盒(间接ELISA)检测Eg95蛋白的Ig G抗体滴度。于末次免疫后6周处死小鼠,用噻唑蓝(MTT)法检测特异性脾淋巴细胞增殖活性。结果经PCR和酶切鉴定表明,重组质粒p YA3341-Eg95构建成功,在重组菌St-Eg95中有目的蛋白Eg95的表达,相对分子质量(Mr)约为18 000,与预期大小一致。重组菌传10代后,PCR仍可扩增到约486 bp的Eg95基因片段。安全性实验结果显示,灌胃给予重组菌和PBS的小鼠30 d后均存活,活动正常;给予野生型沙门氏菌的小鼠均于4 d后死亡。间接ELISA检测结果显示,末次免疫后2周St-Eg95组小鼠特异性Ig G抗体水平即明显升高,显著高于阴性对照组和空白对照组(P〈0.05);末次免疫后4周抗体水平达到最高值,约1∶1 700。小鼠淋巴细胞增殖试验结果显示,末次免疫后6周,St-Eg95组小鼠的脾淋巴� 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 EG95 减毒沙门氏菌 免疫原性
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携带DEV—NP28/gB双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌的构建 被引量:1
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作者 王相金 文明 +3 位作者 周碧君 王开功 程振涛 汪德生 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期36-40,共5页
目的:构建携带pcDNA3.1-DEV—NP28/gB双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌。方法:大量培养含pcDNA3.1-DEV—NP28/gB大肠杆菌DH50t,提取重组质粒,转化至感受态减毒沙门氏菌SL7207中,培养后再提取重组质粒,通过双酶切、PCR和序列测序进... 目的:构建携带pcDNA3.1-DEV—NP28/gB双基因DNA疫苗减毒沙门氏菌。方法:大量培养含pcDNA3.1-DEV—NP28/gB大肠杆菌DH50t,提取重组质粒,转化至感受态减毒沙门氏菌SL7207中,培养后再提取重组质粒,通过双酶切、PCR和序列测序进行鉴定。结果:经对重组质粒双酶切和PCR后,均可得到与预期大小相一致的DNA片段(1062bp);测序发现重组质粒目的基因序列与预期设计一致。结论:成功构建了携带pcDNA3.1-DEV—NP28/gB的减毒沙门氏菌SL7207。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 NP基因 GB基因 DNA疫苗 减毒沙门氏菌 构建
减毒沙门菌在肿瘤基因治疗中的应用
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作者 李鹏飞 孙君重 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2013年第10期748-751,共4页
沙门菌是一类胞内侵袭性兼性厌氧菌,减毒后仍保留其抗原性,现在广泛作为DNA疫苗的载体。沙门菌携带相关抗原基因对多种肿瘤有显著的抑制效果,而且携带修复基因对放化疗后的机体损伤有着明确的修复作用。
关键词 减毒沙门菌 肿瘤 疫苗载体 损伤修复
改善沙门菌载体疫苗效能的若干策略
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作者 房有荣(综述) 陈科达 阎辉(审校) 《中国疫苗和免疫》 CAS 2012年第4期367-371,共5页
沙门菌是一种侵袭性胞内菌,利用其侵袭性,可将其减毒后改造为疫苗载体,携带异源抗原基因到细胞内,表达相应的异源抗原,从而引发免疫保护反应。然而成功研制沙门菌载体疫苗必需解决一些关键问题,包括:选择合适的保护性异源抗原和... 沙门菌是一种侵袭性胞内菌,利用其侵袭性,可将其减毒后改造为疫苗载体,携带异源抗原基因到细胞内,表达相应的异源抗原,从而引发免疫保护反应。然而成功研制沙门菌载体疫苗必需解决一些关键问题,包括:选择合适的保护性异源抗原和表达载体,确定抗原在载体内的表达方式(即体细胞内膜结合型或分泌型表达)和宿主细胞内的定位(内体或细胞质)等。针对上述问题,从筛选适当的沙门菌载体菌株、确定最优启动子、增强质粒稳定性、抗原表达后准确定位、提高抗原的免疫原性和优化疫苗接种制度六个方面,讨论近年来改善减毒沙门菌载体疫苗的研究策略。 展开更多
关键词 减毒沙门菌 疫苗载体 优化策略
减毒沙门氏菌作为口服活疫苗载体的研究进展 预览 被引量:2
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作者 马全英 安芳兰 +6 位作者 刘萍 祝秀梅 吕志慧 王凡 刘学荣 黄银君 牟克斌 《贵州畜牧兽医》 2012年第5期16-20,共5页
文章就沙门氏菌相关基因的特点、减毒沙门氏菌载体激发的免疫应答、进入机体免疫系统的机制、减毒沙门氏菌的应用、载体疫苗的优越性及潜在危险性几方面综述了减毒沙门氏菌作为口服疫苗载体的研究进展,为新型菌苗的研制提供一种新的思路。
关键词 减毒沙门氏菌 活载体疫苗 基因减毒 免疫机制
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DNA疫苗的运送载体——减毒霍乱沙门氏菌 被引量:2
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作者 惠锋明 茆达干 蒋进 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期722-725,共4页
霍乱沙门氏菌是人兽共患病原菌,遗传背景清楚,利用它作为载体表达外源抗原基因已得到较广泛的研究并取得了一定的效果。本文从沙门氏菌的侵入途径、减毒重组菌对基因疫苗的呈递及诱发免疫应答的机制、作为载体的优势以及免疫存在的问题... 霍乱沙门氏菌是人兽共患病原菌,遗传背景清楚,利用它作为载体表达外源抗原基因已得到较广泛的研究并取得了一定的效果。本文从沙门氏菌的侵入途径、减毒重组菌对基因疫苗的呈递及诱发免疫应答的机制、作为载体的优势以及免疫存在的问题等方面就减毒霍乱沙门氏菌作为运送DNA疫苗的载体作简要概述。 展开更多
关键词 减毒沙门氏菌 霍乱沙门氏菌 基因免疫
利用减毒沙门菌递送的柯萨奇病毒A16型VP1基因重组质粒的构建和鉴定 被引量:3
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作者 刘泽 白冰珂 +4 位作者 高蓉 蔡少平 胡燕 沈宏辉 貌盼勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 501-503,共3页
目的:构建能够稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌并鉴定目的抗原的表达,研发利用减毒沙门菌递送的口服疫苗。方法:利用DNA重组技术,构建表达CoxA16 VP1蛋白的真核表达质粒,体外转染Vero细胞后检测VP1蛋... 目的:构建能够稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌并鉴定目的抗原的表达,研发利用减毒沙门菌递送的口服疫苗。方法:利用DNA重组技术,构建表达CoxA16 VP1蛋白的真核表达质粒,体外转染Vero细胞后检测VP1蛋白表达情况及抗原活性,并将该质粒通过电转化构建重组减毒伤寒沙门菌。结果:构建了表达CoxA16 VP1蛋白的重组质粒,转染vero细胞后检测到CoxA16 VP1蛋白的表达并具有抗原活性;获得能稳定携带该质粒的重组减毒伤寒沙门菌。结论:成功构建稳定携带柯萨奇病毒A16型(CoxA16)VP1基因的重组减毒伤寒沙门菌,为口服CoxA16疫苗的研究打下了基础。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A16型 口服DNA疫苗 减毒伤寒沙门菌
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