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金丝桃素对口蹄疫病毒的体外抗病毒实验 预览 被引量:12
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作者 王曙阳 梁剑平 +3 位作者 杨林西 崔颖 尚若峰 罗永江 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2006年第6期 6-9,共4页
本文报道了金丝桃素体外抗口蹄疫病毒(FMDV)的研究结果。采用双抗体捕获抗原法、病毒滴度测定、MTT法、组织细胞培养等方法均检测到抗病毒作用。结果显示:金丝桃素在BHK-21细胞感染FMDV前、后及同时加入,都有明显抑制细胞病变的作... 本文报道了金丝桃素体外抗口蹄疫病毒(FMDV)的研究结果。采用双抗体捕获抗原法、病毒滴度测定、MTT法、组织细胞培养等方法均检测到抗病毒作用。结果显示:金丝桃素在BHK-21细胞感染FMDV前、后及同时加入,都有明显抑制细胞病变的作用。金丝桃素使FMDV的TCID50从8.5下降到6.25。双抗体捕获抗原法检测到金丝桃素有效抑制FMDVBHK-21细胞的吸附、融合,抑制率可达59.72%。研究结果提示:金丝桃素在体外有抗口蹄疫病毒作用,抑制口蹄疫病毒与宿主细胞的吸附、融合是抗病毒的重要途径之一。 展开更多
关键词 金丝桃素 抗口蹄疫病毒 bhk-21细胞 细胞病变
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江苏省自然人群乙型脑炎抗体血清学监测 被引量:11
2
作者 陆培善 邓秀英 +2 位作者 胡莹 高君 马福宝 《实用预防医学》 CAS 2010年第3期490-492,共3页
目的了解江苏省正常人群流行性乙型脑炎(乙脑)免疫状况。方法采用蚀斑减少中和试验对2006-2009年收集的0~20岁血清标本3258份进行乙脑抗体检测。结果乙脑抗体总的阳性率为70.35%,GMT为1:13.56。结论江苏省3岁以上人群乙脑抗体有保... 目的了解江苏省正常人群流行性乙型脑炎(乙脑)免疫状况。方法采用蚀斑减少中和试验对2006-2009年收集的0~20岁血清标本3258份进行乙脑抗体检测。结果乙脑抗体总的阳性率为70.35%,GMT为1:13.56。结论江苏省3岁以上人群乙脑抗体有保护作用,其阳性率及效价随年龄增加而增加,0和1岁组抗体水平较低,应该加强该年龄段人群的保护。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎 蚀斑减少中和实验 血清学监测 bhk-21细胞
逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达 被引量:9
3
作者 李炯 刘艳红 +4 位作者 安芳兰 刘俊林 刘湘涛 尚佑军 殷宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期 376-382,共7页
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆... 为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 口蹄疫病毒 衣壳前体基因 绿色荧光蛋白基因 bhk-21细胞
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金丝桃素体外抗口蹄疫病毒与宿主细胞吸附作用研究 预览 被引量:6
4
作者 王曙阳 梁剑平 +4 位作者 陈积红 崔颖 尚若锋 王学红 华兰英 《中兽医医药杂志》 2009年第1期 5-8,共4页
对光活化金丝桃素体外抑制口蹄疫病毒与宿主细胞吸附作用进行实验。体外培养的BHK-21细胞加入金丝桃素,日光灯下光活化1h后感染FMDV。通过细胞病变观察、MTT法、双抗体捕获抗原法、扫描电子显微镜进行抑制FMDV与宿主细胞吸附、融合研... 对光活化金丝桃素体外抑制口蹄疫病毒与宿主细胞吸附作用进行实验。体外培养的BHK-21细胞加入金丝桃素,日光灯下光活化1h后感染FMDV。通过细胞病变观察、MTT法、双抗体捕获抗原法、扫描电子显微镜进行抑制FMDV与宿主细胞吸附、融合研究。结果表明金丝桃素有明显抑制细胞病变的作用。双抗体捕获抗原法检测金丝桃素有效抑制FMDV和BHK-21细胞的吸附、融合,抑制率可达59.72%。扫描电镜观察,金丝桃素组与病毒对照组相比,BHK-21细胞FMDV颗粒明显减少。提示金丝桃素在体外有显著抑制口蹄疫病毒与宿主细胞的吸附、融合作用。 展开更多
关键词 金丝桃素 bhk-21细胞 细胞病变 口蹄疫病毒 吸附
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蛋清溶菌酶对人单纯疱疹病毒Ⅰ型抑制作用的实验研究 被引量:6
5
作者 李亚男 刘洪臣 +2 位作者 杨丽 宫琦玮 李红梅 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2008年第6期517-519,共3页
目的:观察蛋清溶菌酶(HEWL)对人单纯疱疹病毒I型(hHSV-1)的抑制作用。方法:以HSV-1的敏感细胞BHK-21为实验细胞模型,以更昔洛韦为阳性对照药,以0.5%12-烷基磺酸钠(SDS)为阻断剂,采用细胞病变法(CPE)判定溶菌酶对hHSV-1的抑制... 目的:观察蛋清溶菌酶(HEWL)对人单纯疱疹病毒I型(hHSV-1)的抑制作用。方法:以HSV-1的敏感细胞BHK-21为实验细胞模型,以更昔洛韦为阳性对照药,以0.5%12-烷基磺酸钠(SDS)为阻断剂,采用细胞病变法(CPE)判定溶菌酶对hHSV-1的抑制效果。结果:HEWL对细胞的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)均〉1 000μg.mL^-1,HEWL对hHSV-1抑制作用的最小有效浓度(MIC)为104.17μg.mL^-1,半数有效浓度(IC50)为46.88μg.mL^-1,治疗指数(TI)为10.67。在平行对照试验中,更昔洛韦对BHK-21细胞的TC0和TC50均〉500μg.mL^-1。更昔洛韦对hHSV-1抑制作用的MIC为7.81μg.mL^-1,IC50为3.91μg.mL^-1,TI为64。0.5%SDS完全阻断了HEWL的抗病毒能力。结论:蛋清溶菌酶对HSV-1有较明显的抑制作用,作用强度与溶菌酶的浓度相关。 展开更多
关键词 胞壁质酶 bhk-21细胞 更昔洛韦 单纯疱疹病毒I型
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赤羽病病毒RT-PCR检测方法的建立 预览 被引量:6
6
作者 李健 陈沁 +2 位作者 杨燕青 李树清 胡永强 《畜牧与兽医》 北大核心 2004年第4期 26-28,共3页
利用BHK-21细胞繁殖赤羽病病毒(AKV)美国株,以30%蔗糖垫底超速离心浓缩病毒.根据病毒s RNA序列设计3对引物,初步建立了检测AKV的RT-PCR方法,850 bp扩增产物的序列与已知序列同源性99%以上.人工攻毒鼠检测特异灵敏.
关键词 赤羽病病毒 RT-PCR 检测方法 bhk-21细胞 阿卡斑病
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猪乙脑病毒CSF.XZ-2D株的分离鉴定及其体外培养特性研究 预览 被引量:5
7
作者 滕蔓 罗俊 +5 位作者 樊剑鸣 王兴涛 王方雨 柴书军 杨继飞 张改平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期 274-278,共5页
为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征,本研究对临床流产胎儿脑脊液进行病毒盲传分离,经RT-PCR等分子生物学方法及乳鼠感染试验,分离鉴定了1株基因Ⅲ型JEV株,命名为CSF.XZ-2D。采用BHK-21细胞对该分离株的体外培... 为了解河南省规模化猪场日本乙型脑炎病毒(JEV)流行株的特征,本研究对临床流产胎儿脑脊液进行病毒盲传分离,经RT-PCR等分子生物学方法及乳鼠感染试验,分离鉴定了1株基因Ⅲ型JEV株,命名为CSF.XZ-2D。采用BHK-21细胞对该分离株的体外培养特性进行研究,结果表明,在25 cm2细胞瓶中,用1.25×106个细胞/瓶的初始量制备细胞单层,以较低剂量的病毒液吸附细胞并洗涤弃去游离病毒粒子,可在感染后60 h达到最大增殖量,病毒效价为105.0TCID50/0.1 mL以上。本研究为其他JEV分离株的体外培养提供了参考。 展开更多
关键词 日本乙型脑炎病毒 分离鉴定 脑脊液 bhk-21细胞 体外培养
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羊口疮病毒ORF129基因重组质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达 预览 被引量:5
8
作者 白刚 贾怀杰 +4 位作者 何小兵 王盈盈 何妍萍 吴润 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期8-13,共6页
为研究羊口疮病毒(ORFV) ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建... 为研究羊口疮病毒(ORFV) ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-ORFV-ORF129真核表达质粒,经酶切、PCR鉴定及测序正确后转染BHK-21细胞,观察其在细胞中的表达情况.结果表明:ORFV ORF129基因在BHK-21细胞中获得稳定表达,并为进一步研究其编码蛋白在ORFV感染过程中的分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORF129基因 bhk-21细胞 融合表达
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伪狂犬病病毒吉林分离株感染BHK-21细胞的超微结构变化 被引量:5
9
作者 初小辉 常灵竹 +3 位作者 骆艳秋 贺文琦 陈克研 高丰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1663-1667,共5页
以猪伪狂犬病病毒(PRV)吉林分离株PRV-JL感染体外培养的BHK-21细胞为模型,通过透射电镜对PRV的形态发生学和宿主细胞超微结构的动态变化规律进行研究。结果显示,PRV能导致BHK-21细胞圆缩,并发生细胞融合,形成合胞体;电镜观察到的病毒... 以猪伪狂犬病病毒(PRV)吉林分离株PRV-JL感染体外培养的BHK-21细胞为模型,通过透射电镜对PRV的形态发生学和宿主细胞超微结构的动态变化规律进行研究。结果显示,PRV能导致BHK-21细胞圆缩,并发生细胞融合,形成合胞体;电镜观察到的病毒粒子呈球形或椭圆形,成熟的病毒粒子直径大小为140~210 nm,未成熟病毒粒子直径为90~150 nm,多呈中空状,部分呈致密核芯。病毒吸附于细胞后以膜融合的方式进入细胞,在胞核内复制,装配好的病毒粒子以出芽的方式离开细胞核,获得最初的囊膜,进入胞浆;在胞浆内的病毒粒子又利用高尔基体的膜结构合成第2层囊膜,形成完整的病毒粒子;最后包裹有完整病毒粒子的高尔基囊泡与细胞膜发生融合,将病毒粒子释放到细胞外。感染细胞超微结构变化主要表现为:细胞胞浆空泡增多,内质网扩张,线粒体增生、嵴肿胀、脱落,最后空泡化,整个细胞裂解、破碎。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病病毒 bhk-21细胞 超微结构
动物细胞大规模培养中细胞凋亡检测方法的研究 预览 被引量:4
10
作者 武发菊 刘学荣 +6 位作者 尚勇良 安芳兰 董文教 宋玉霞 董金杰 陈苗苗 牟克斌 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第12期 235-239,共5页
为了探讨动物细胞大规模培养中细胞凋亡的检测方法,以不同浓度氯化铵诱导BHK-21细胞凋亡,每隔12 h收集细胞,采用台盼兰形态学排染法、吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法、FITC-Annexin V/PI双染色荧光显微镜观察法、原位缺口末端标记法(T... 为了探讨动物细胞大规模培养中细胞凋亡的检测方法,以不同浓度氯化铵诱导BHK-21细胞凋亡,每隔12 h收集细胞,采用台盼兰形态学排染法、吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法、FITC-Annexin V/PI双染色荧光显微镜观察法、原位缺口末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳、流式细胞术(FCM)法进行细胞凋亡的检测。通过比较发现,不同方法检测结果都存在着显著性差异,但吖啶橙和溴化乙锭双重荧光染色法是一种简单、易行、准确、全面定性细胞凋亡的较为可靠的方法,而FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞仪能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞,是较为理想的凋亡定量检测方法。这2种方法的联合运用更适应于动物细胞大规模培养过程中细胞凋亡的检测。 展开更多
关键词 bhk-21细胞 大规模培养 细胞凋亡 检测方法
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BHK-21细胞稳定测定猪乙型脑炎病毒半数细胞感染量效价(TCID_(50))的条件优化及应用 被引量:4
11
作者 滕蔓 罗俊 +4 位作者 樊剑鸣 邢广旭 赵东 杨苏珍 张改平 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第6期 15-21,共7页
为建立BHK-21细胞测定乙型脑炎病毒(Japenese encephalitis virus,JEV)病毒效价的方法,对96孔细胞板中不同初始接种量BHK-21细胞在多种维持液中的生长状态进行探讨,发现当BHK-21细胞以1250~2500个/孔接种96孔板培养24 h后,更换含3%... 为建立BHK-21细胞测定乙型脑炎病毒(Japenese encephalitis virus,JEV)病毒效价的方法,对96孔细胞板中不同初始接种量BHK-21细胞在多种维持液中的生长状态进行探讨,发现当BHK-21细胞以1250~2500个/孔接种96孔板培养24 h后,更换含3%新生牛血清的DMEM后在37℃、5%CO2条件下可至少良好维持72~96 h。在此条件下并基于Reed-Muench法测定病毒效价的原理,本文建立了准确测定JEV TCID50的方法,利用该方法对JEV野毒分离株及商品疫苗进行测定,均获得稳定、准确的病毒效价。本实验为JEV的体外培养、病毒定量、疫苗评价等提供了一种准确、稳定、易判定的参考方法。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 bhk-21细胞 效价测定 TCID50
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微载体培养BHK-21细胞生产狂犬病毒Flury株的研究 预览
12
作者 刘艳霞 《现代畜牧兽医》 2018年第9期6-9,共4页
本文主要研究了利用生物反应器Tide-Cell微载体培养的BHK-21细胞生产狂犬病毒Flury株工艺.总数为1×1010个BHK-21细胞接入装有500 g BioNOCTM Ⅱ型载体的Tide-Cell培养系统, 最适条件下培养120 h.当细胞培养系统中葡萄糖消耗量达到8... 本文主要研究了利用生物反应器Tide-Cell微载体培养的BHK-21细胞生产狂犬病毒Flury株工艺.总数为1×1010个BHK-21细胞接入装有500 g BioNOCTM Ⅱ型载体的Tide-Cell培养系统, 最适条件下培养120 h.当细胞培养系统中葡萄糖消耗量达到8 g/ (L·h) 左右, 细胞数达到4×1011时, 按照MOI为1接入Flury株病毒.-批至少可以收获10次 (50 L/次) 毒价高于107.5TCID50/mL的抗原液, 其中包含5次毒价为108.0TCID50/mL的抗原液.提高抗原液病毒含量有助于提升狂犬病灭活疫苗效价, 从而降低生产成本. 展开更多
关键词 微载体 bhk-21细胞 狂犬病毒 Flury株
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人源性双亲性穿膜肽PKV14的合成及其对BHK-21细胞的影响
13
作者 陈莹 宋金春 刘岩松 《现代药物与临床》 CAS 2018年第10期2482-2486,共5页
目的合成人源性双亲性穿膜肽RRTLRRRRAAQRCG(PKV14),并研究其细胞穿膜效果和对细胞活性的影响。方法采用固相合成法合成PKV14,采用高效液相色谱和质谱对PKV14进行验证,使用荧光显微镜和酶标仪观察PKV14在BHK-21细胞系中的穿膜效果,采... 目的合成人源性双亲性穿膜肽RRTLRRRRAAQRCG(PKV14),并研究其细胞穿膜效果和对细胞活性的影响。方法采用固相合成法合成PKV14,采用高效液相色谱和质谱对PKV14进行验证,使用荧光显微镜和酶标仪观察PKV14在BHK-21细胞系中的穿膜效果,采用MTT实验法检测PKV14的细胞毒性。结果合成了PKV14肽段,并且PKV14对于BHK-21细胞系的穿膜效率极高,细胞毒性实验表明PKV14对BHK-21细胞活性无影响。结论 PKV14是具有高穿膜活性,安全低毒的新型人源性细胞穿膜肽,有作为药物载体的潜力。 展开更多
关键词 人源性双亲性穿膜肽 PKV14 穿膜活性 bhk-21细胞
鸭坦布苏病毒感染对BHK-21细胞分泌胞外体的影响 预览
14
作者 周晓雅 周祺 +5 位作者 殷冬冬 唐井玉 邢雪 董靖 刘红梅 王桂军 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期161-166,共6页
目的:探讨鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞对胞外体的影响,进一步研究鸭坦布苏病毒的致病机制。方法:利用鸭坦布苏病毒AH-F10株感染BHK-21细胞,并设置未感染病毒的对照组。用PEG法提取感染病毒的BHK-21细胞和对照组细胞上清中的胞外体,通... 目的:探讨鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞对胞外体的影响,进一步研究鸭坦布苏病毒的致病机制。方法:利用鸭坦布苏病毒AH-F10株感染BHK-21细胞,并设置未感染病毒的对照组。用PEG法提取感染病毒的BHK-21细胞和对照组细胞上清中的胞外体,通过电镜观察、Western blot检测对胞外体进行鉴定,并对提取的两组胞外体进行质谱鉴定分析。结果:电镜观察到纯度高的内部色浅、边缘浓染的杯状囊泡,直径30-160 nm。感染组胞外体的平均粒径大小大于对照组胞外体的平均粒径大小。Western blot试验中,均检测出CD9、CD63分子。应用液相质谱法从胞外体中鉴定出106种蛋白,其中感染坦布苏病毒组共检测出84种蛋白,对照组49种蛋白,有27种共同蛋白分子。结论:鸭坦布苏病毒感染BHK-21细胞会影响细胞胞外体的分泌,影响胞外体粒径大小及其蛋白组成成分。本试验为进一步研究坦布苏病毒的感染和致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 bhk-21细胞 胞外体 质谱分析
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日本脑炎病毒受体功能缺陷细胞的筛选和鉴定 预览 被引量:3
15
作者 任君萍 张伟 +4 位作者 黄庆生 高淑娴 宋建华 丁天兵 马文煜 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第2期 81-84,F0003,共5页
目的筛选并鉴定日本脑炎病毒(JEV)受体功能缺陷的BHK-21细胞突变株。方法用化学诱变剂ICR-191人工诱变JEV易感细胞系BHK-21,经JEV攻击,对存活细胞克隆化,RT-PCR筛选JEV RNA阴性细胞,用流式细胞术,免疫荧光和空斑实验鉴定其对JEV的敏... 目的筛选并鉴定日本脑炎病毒(JEV)受体功能缺陷的BHK-21细胞突变株。方法用化学诱变剂ICR-191人工诱变JEV易感细胞系BHK-21,经JEV攻击,对存活细胞克隆化,RT-PCR筛选JEV RNA阴性细胞,用流式细胞术,免疫荧光和空斑实验鉴定其对JEV的敏感性。结果筛选到1株JEV RNA阴性细胞3A10-3F。流式细胞术检测3A10-3F细胞与JEV的结合率为2.10%,免疫荧光和空斑实验证实其对JEV感染有相当程度的抵抗,在JEV感染复数MOI 1时3A10-3F细胞培养上清中JEV最高滴度比BHK-21细胞中JEV最高滴度下降2个数量级。结论用化学诱变法筛选到1株JEV受体功能缺陷细胞,为进一步鉴定JEV受体,深入研究JEV致病机理提供了有益线索。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒(JEV) 病毒受体 bhk-21细胞
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TPL2促进口蹄疫病毒在BHK-21细胞复制
16
作者 魏南南 徐守兴 +4 位作者 史喜娟 卢炳州 张克山 郑海学 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1204-1211,共8页
为研究肿瘤进行性位点2(TPL2)在仓鼠肾细胞(BHK-21)中对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,使用FMDV感染BHK-21细胞,通过qRT-PCR技术检测FMDV感染对内源性TPL2转录水平的影响;根据GenBank公布的TPL2基因序列(NM007746.2)设计构建TPL2... 为研究肿瘤进行性位点2(TPL2)在仓鼠肾细胞(BHK-21)中对口蹄疫病毒(FMDV)复制的影响,使用FMDV感染BHK-21细胞,通过qRT-PCR技术检测FMDV感染对内源性TPL2转录水平的影响;根据GenBank公布的TPL2基因序列(NM007746.2)设计构建TPL2的真核表达质粒以及设计并合成宿主TPL2的RNAi序列,利用脂质体方法转染BHK-21细胞,通过qRT-PCR和Western blotting技术分析TPL2在BHK-21细胞过表达和干扰对FMDV复制的影响。结果表明,FMDV感染BHK-21细胞后,TPL2转录水平显著上调;过表达TPL2能够促进FMDV在BHK-21细胞中复制,而下调表达内源性TPL2后FMDV的复制受到抑制,表明TPL2促进FMDV在BHK-21细胞中进行复制,本结果进一步拓展了我们对FMDV与天然免疫机制之间关系的认识,同时为TPL2的相关研究积累了科学资料。 展开更多
关键词 TPL2 口蹄疫病毒 FMDV bhk-21细胞 天然免疫 复制
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氨对悬浮培养幼仓鼠肾细胞(BHK-21)生长代谢的影响 预览 被引量:3
17
作者 武发菊 尚勇良 +7 位作者 安芳兰 董文教 宋玉霞 董金杰 陈苗苗 牟克斌 黄银君 刘学荣 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2011年第2期28-32,共5页
【目的】研究在幼仓鼠肾细胞(BHK-21)悬浮培养过程中,不同浓度氨对其生长代谢的影响。【方法】用添加0,1.8,2.5,5.5,8.0和15.0 mmol/L氨的培养基培养BHK-21细胞,每隔12 h取样1次,用细胞计数仪进行细胞计数,测定细胞活力,采用AO/EB双... 【目的】研究在幼仓鼠肾细胞(BHK-21)悬浮培养过程中,不同浓度氨对其生长代谢的影响。【方法】用添加0,1.8,2.5,5.5,8.0和15.0 mmol/L氨的培养基培养BHK-21细胞,每隔12 h取样1次,用细胞计数仪进行细胞计数,测定细胞活力,采用AO/EB双染色法和Annexin V-FITC/PI流式细胞仪2种方法检测细胞的凋亡情况,同时测定细胞培养过程中葡萄糖、氨和乳酸浓度的变化。【结果】在BHK-21细胞连续培养过程中,当氨的添加浓度低于1.8 mmol/L时,其对细胞的生长几乎不产生抑制作用,细胞活性、细胞总数与对照组差异不显著,未出现细胞聚集成团现象;当氨添加浓度达到15.0 mmol/L时,BHK-21细胞直接进入死亡期;当氨的添加浓度为2.5~8.0 mmol/L时,氨对细胞生长的抑制作用由弱变强,这种抑制作用在细胞培养至24 h开始出现。另外,随着氨添加浓度的增加,葡萄糖的消耗量减少,细胞代谢产生的乳酸和氨降低。【结论】氨对悬浮培养的BHK-21细胞的生长和代谢有显著影响。 展开更多
关键词 细胞培养 bhk-21细胞 氨抑制 细胞凋亡
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登革病毒感染C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞CPE的比较及病毒检测 被引量:1
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作者 杨佳佳 姜黎明 +3 位作者 罗佳 叶超 文送娇 孙强明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期362-365,371共5页
目的比较感染登革病毒(dengue virus,DV)的C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞的CPE情况,并进行病毒检测。方法将分离自云南西双版纳的Ⅲ型DV中国株D13053和广东省疾病预防控制中心惠赠的Ⅱ型中国株D10156,以5 MOI感染C6/36、Vero、BHK-2... 目的比较感染登革病毒(dengue virus,DV)的C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞的CPE情况,并进行病毒检测。方法将分离自云南西双版纳的Ⅲ型DV中国株D13053和广东省疾病预防控制中心惠赠的Ⅱ型中国株D10156,以5 MOI感染C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞,同时将Vero和C6/36细胞来源的DV,分别以5 MOI感染C6/36细胞,连续观察CPE至第10天,并利用DV通用引物,RT-PCR法鉴定细胞培养上清中的病毒。结果C6/36细胞对DV最敏感并有明显的病变,细胞几乎100%聚集、破碎并呈网格状;Vero、BHK-21细胞至第5天出现脱落、破碎和悬浮等病变,对DV有一定的敏感性;THP-1细胞至第10天未出现CPE。PCR核酸检测发现,感染DV的C6/36、THP-1、BHK和Vero细胞培养上清中可检测到DV,而Vero细胞来源DV感染的C6/36细胞未检测到DV。结论 DV对不同细胞系的感染能力和感染DV后CPE的表现形式存在较大差异。 展开更多
关键词 登革病毒 细胞病变 C6/36细胞 Vero细胞 bhk-21细胞 THP-1细胞
用乙基环丙沙星重建受猪鼻支原体污染的BHK-21细胞的研究 预览 被引量:3
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作者 高林 廖德芳 +4 位作者 姚俊 肖雷 李华春 张念祖 李志华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期 45-49,共5页
为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体... 为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体污染已被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受支原体污染的细胞提供了参考。 展开更多
关键词 乙基环丙沙星 猪鼻支原体 bhk-21细胞 清除污染
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Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞差异蛋白质点2-DE分析 被引量:3
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作者 刘永杰 张克山 +5 位作者 尚佑军 郭建宏 郑海学 田宏 卢国栋 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期145-149,共5页
为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二... 为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二维电泳图谱差异性分析。结果显示感染组有1 457个可见蛋白质点,而对照组可见的蛋白质点为1 427个。感染组蛋白点的表达量与对照组相比,二者具有统计学差异(P〈0.05)的蛋白质点472个,其中表达上调251个点,表达下调221个点,新合成蛋白点30个。结果表明FMDV感染BHK-21细胞后引起了细胞蛋白质组表达模式的改变,这种变化是病毒与细胞相互作用的结果。本研究首次利用蛋白质组学技术研究Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞后蛋白质组学差异,有助于深入研究Asia 1型FMDV和BHK-21细胞相互作用的分子机制。 展开更多
关键词 Asia1型FMDV bhk-21细胞 感染 差异蛋白质组
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