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产气荚膜梭菌β毒素蛋白抗原表位预测及CPB-N蛋白免疫原性分析 预览
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作者 王玉建 商红旗 +3 位作者 朱琳 徐煜琳 胡莉萍 朱瑞良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期188-191,共4页
为获得具有与β毒素蛋白相同免疫原性的新蛋白,本研究对产气荚膜梭菌β毒素蛋白的氨基酸序列进行综合分析,预测其抗原表位并筛选出有效的新蛋白。采用生物信息学方法综合分析β毒素蛋白二级结构、亲水性、可塑性、抗原性、跨膜区域以及... 为获得具有与β毒素蛋白相同免疫原性的新蛋白,本研究对产气荚膜梭菌β毒素蛋白的氨基酸序列进行综合分析,预测其抗原表位并筛选出有效的新蛋白。采用生物信息学方法综合分析β毒素蛋白二级结构、亲水性、可塑性、抗原性、跨膜区域以及信号肽,同时参考ElliPro服务器在线预测。最终预测aa108~aa320区段为优势抗原表位,在此基础上建立β毒素蛋白三维结构模型,标记特殊位点并筛选出B型产气荚膜梭菌新蛋白(CPB-N)。诱导表达CPB-N后通过SDS-PAGE和western blot鉴定,结果显示在约24 ku处有明显条带。采用间接ELISA方法对免疫小鼠的血清和肠道灌洗液样品进行检测,结果表明CPB-N与β毒素蛋白的免疫原性基本相同。CPB-N蛋白的筛选及预防产气荚膜梭菌引起的疾病奠定了重要的研究基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 β毒素蛋白 抗原表位 免疫原性
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C型产气荚膜梭菌致病机理研究进展 被引量:2
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作者 李凡飞 张云 +3 位作者 李强 赵泽慧 何小丽 许立华 《动物医学进展》 北大核心 2016年第12期82-85,共4页
C型产气荚膜梭菌能够引起人类和一些动物的坏死性肠炎。该菌能产生α外毒素和β外毒素,大部分该菌菌株也能分泌出产气梭菌细胞溶素O(PFO)和TpeL。试验证明β外毒素是C型产气荚膜梭菌的主要致病毒素。在兔子肠襻和小鼠模型试验中发现... C型产气荚膜梭菌能够引起人类和一些动物的坏死性肠炎。该菌能产生α外毒素和β外毒素,大部分该菌菌株也能分泌出产气梭菌细胞溶素O(PFO)和TpeL。试验证明β外毒素是C型产气荚膜梭菌的主要致病毒素。在兔子肠襻和小鼠模型试验中发现,通过细胞中同源基因C型产气荚膜梭菌β毒素敲除基因突变株而导致该菌株失去毒力。当野生型β毒素基因补充这些突变体时毒素的活力将会复活。大多数C型产气荚膜梭菌产生的所有毒素(除TpeL外)都易与肠癌(Caco-2)细胞紧密结合并发生反应,比它在体外生长更加迅速。VirS/virR双组分调节系统(TCRs)被证明是在Coca-2细胞中导致β毒素和PFO产生快速上调。当virR基因被抑制时,pfoA和β毒素基N的表达也会受阻,这种系统是可逆的,virR表达时会恢复。通过β毒素作用于动物模型的试验研究,来寻找有效的预防措施。 展开更多
关键词 C型产气荚膜梭菌 Β毒素 致病机制 坏死性肠炎
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表达产气荚膜梭菌α—β融合蛋白基因工程菌株的构建 预览 被引量:2
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作者 卫广森 许崇波 《中国兽药杂志》 2001年第5期 5-9,共5页
用PCR从含产气荚膜梭菌a毒素基因的质粒pXETA1中扩增出a毒素基因,用NcoI和BamHI双酶切该a毒素基因,回收0.95kb的a毒素基因片段,再用NcoI和BamHI双酶切含产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pXETB2,与上述回收的a毒素基因片段连接,转化至受体菌BL... 用PCR从含产气荚膜梭菌a毒素基因的质粒pXETA1中扩增出a毒素基因,用NcoI和BamHI双酶切该a毒素基因,回收0.95kb的a毒素基因片段,再用NcoI和BamHI双酶切含产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pXETB2,与上述回收的a毒素基因片段连接,转化至受体菌BL21(DE3)中.经NcoI、BamHI、NotI酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实,获得了理想重组质粒pX-CPAB2,该重组质粒含有a-β融合基因.重组菌株BL21(DE3)(pXCPAB2)经IPTG诱导后,其表达产物经ELISA检测和SDS-PAGE分析,结果表明重组菌株可以高效表达a-β融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的22.14%.用从IPTG诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原免疫小鼠,免疫小鼠至少能抵抗2MLD的C型产气荚膜梭菌的攻击.这表明构建的工程菌株BL21(DE3)(pXCPAB2)可以作为预防仔猪红痢基因工程菌苗的候选株. 展开更多
关键词 气荚膜梭菌 α-β融合蛋白 基因工程 菌株 动物 坏死性肠
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产气荚膜梭菌α—β融合基因的构建 预览
4
作者 许崇波 赵宝华 +2 位作者 卫广森 王卓 蒋玉文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期 341-343,共3页
用PCR从含产气荚膜梭菌β毒素基因的质粒pXETB2中扩增出β毒素基因,NcoⅠ和BamHⅠ双酶切该β毒素基因,回收0.93kb的β毒素基因片段,再用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切含产气荚膜梭菌α毒素基因质粒pXETA1,与上述回收的β毒素基因片段连接,... 用PCR从含产气荚膜梭菌β毒素基因的质粒pXETB2中扩增出β毒素基因,NcoⅠ和BamHⅠ双酶切该β毒素基因,回收0.93kb的β毒素基因片段,再用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切含产气荚膜梭菌α毒素基因质粒pXETA1,与上述回收的β毒素基因片段连接,转化至受体菌BL21(DE3)中。经NcoⅠ、BamHⅠ、NotⅠ酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实,获得的重组质粒pXCPAB1含有α-β融合基因。重组菌株BL21(DE3)(pXCPAB1)表达产物经ELISA检测和SDS-PAGE分析,表明重组菌株可以表达α-β融合蛋白。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素基因 β毒素基因 融合基因 基因克隆 动物 坏死性肠炎
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OEPR法构建含不同破伤风毒素T细胞表位的CPB表达质粒及其产物的初步鉴定 预览
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作者 董令赢 彭小兵 +2 位作者 彭国瑞 李旭妮 蒋玉文 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第7期33-38,I0004共7页
为了提高产气荚膜梭菌β毒素(CPB)亚单位疫苗的免疫效果,试验将不同破伤风毒素辅助性T细胞表位引入该蛋白前,用OEPR(Overlap Extension PCR and Recombination)法构建了8个重组表达质粒(即p Cold-CPB、p Cold-P2-CPB、p Cold-P21-P... 为了提高产气荚膜梭菌β毒素(CPB)亚单位疫苗的免疫效果,试验将不同破伤风毒素辅助性T细胞表位引入该蛋白前,用OEPR(Overlap Extension PCR and Recombination)法构建了8个重组表达质粒(即p Cold-CPB、p Cold-P2-CPB、p Cold-P21-P30-P2-CPB、p Cold-P32-P23-P21-P30-P2-CPB和p ET22b-CPB、p ET22b-P2-CPB、p ET22b-P21-P30-P2-CPB、p ET22bP32-P23-P21-P30-P2-CPB)。将阳性重组质粒转入到大肠杆菌中,以自诱导培养基表达目的蛋白。SDS-PAGE分析结果表明,8个重组菌均成功表达出目的蛋白,且大小均与预期一致。Western Blotting检测结果表明,重组蛋白均可被C型产气荚膜梭菌阳性血清识别。毒性试验结果表明,重组蛋白均可致死小鼠。本研究首次用OEPR法成功构建了8个含不同破伤风毒素T细胞表位的产气荚膜梭菌β毒素表达质粒,并成功表达了目的蛋白,为探索破伤风毒素辅助性T细胞表位对产气荚膜梭菌β毒素免疫效果的影响及进一步开发亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌β毒素 破伤风毒素T细胞表位 OEPR法
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C型产气荚膜梭菌β毒素基因克隆与核苷酸序列分析 预览 被引量:7
6
作者 许崇波 王玉炯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期 111-114,共4页
用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pB12中扩增出了0.95Kb的β毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamH I和EcoR I对其进行双酶切处理,最后其其定向连接在事先经同样内切酶处理的载体pTE-28... 用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pB12中扩增出了0.95Kb的β毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamH I和EcoR I对其进行双酶切处理,最后其其定向连接在事先经同样内切酶处理的载体pTE-28c(+)中的相位位点上,转化至受体菌BL21(DE3)中。经BamH I和CcoRI双酶切分析和核苷酸序列分析,证明重组质粒pXETB2含有产气荚膜梭菌β毒素基因,确定了其全部的核苷酸 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 β毒素基因 基因克隆 核苷酸序列
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表达CPB—ST融合蛋白工程菌株的免疫原性研究 预览 被引量:3
7
作者 王玉炯 许崇波 《中国兽医科技》 CSCD 1998年第12期 20-22,共3页
已构建的能表达产气荚膜菌β-毒素和大肠埃希氏菌ST融合蛋白的基因工程菌株BL21(DE3,pECB-ST1)及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从IPTG诱导的工程菌株中提取的包涵体和经甲醛灭活的工艺菌株全菌体... 已构建的能表达产气荚膜菌β-毒素和大肠埃希氏菌ST融合蛋白的基因工程菌株BL21(DE3,pECB-ST1)及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从IPTG诱导的工程菌株中提取的包涵体和经甲醛灭活的工艺菌株全菌体制备抗原免疫小白鼠,攻毒试验结果表明,免疫小白鼠能分别抵抗1MLD的B型产气荚膜梭菌强毒株和产ST的大肠埃希氏菌工程菌株HB101(pSLM004)的攻击。 展开更多
关键词 β-毒素 工程菌 CPB-ST 融合蛋白 免疫原性
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产气荚膜梭菌β毒素抗体间接ELISA检测方法的建立 预览
8
作者 叶宝宏 鲍长磊 +1 位作者 付明哲 许信刚 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2016年第8期55-60,共6页
【目的】建立产气荚膜梭菌β毒素抗体间接ELISA检测方法。【方法】将原核表达重组质粒pET-28a-β转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后进行Western blot鉴定。用复性... 【目的】建立产气荚膜梭菌β毒素抗体间接ELISA检测方法。【方法】将原核表达重组质粒pET-28a-β转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG进行诱导表达,表达产物经镍柱亲和层析纯化、尿素梯度透析复性后进行Western blot鉴定。用复性的β毒素重组蛋白作为包被抗原,通过优化间接ELISA试验条件,建立其抗体间接ELISA检测方法,对该方法的特异性、敏感性和重复性进行考察,并用其对521份临床样本进行检测。【结果】通过诱导、纯化和复性,获得了纯度较高且具有良好反应原性的β毒素重组蛋白。间接ELISA条件为:抗原最佳包被质量浓度为5.0μg/mL,阳/阴性血清最佳稀释度为1∶50,酶标二抗最佳稀释度为1∶2 500,以含50g/L脱脂奶粉的PBST作为封闭液,37℃封闭1h,抗原抗体作用1h,TMB显色30min。间接ELISA的判定标准为OD450≥0.313为阳性,OD450〈0.313为阴性;建立的间接ELISA方法的特异性为96%,敏感性为98%;批内变异系数在3%-4%,批间变异系数在9%以下。利用间接ELISA检测方法对521份临床山羊血清样本的检测结果表明,抗体阳性率为72.5%。【结论】对产气荚膜梭菌β毒素进行了原核表达,成功建立了其抗体间接ELISA检测方法,为产气荚膜梭菌β毒素抗体检测试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Β毒素 原核表达 间接ELISA
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乳糖诱导剂及培养条件对C型产气荚膜梭菌茁β_2毒素基因表达影响
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作者 许崇利 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期112-116,共5页
本研究对已构建的含茁2毒素基因重组质粒pE TXB2进行限制性核酸内切酶酶切鉴定,并用SDS-PAGE检测在不同培养条件下茁2毒素基因的表达情况。经酶切鉴定证实pE TXB2重组质粒含有茁2毒素基因而且阅读框架和基因序列正确。同时,采用乳糖诱... 本研究对已构建的含茁2毒素基因重组质粒pE TXB2进行限制性核酸内切酶酶切鉴定,并用SDS-PAGE检测在不同培养条件下茁2毒素基因的表达情况。经酶切鉴定证实pE TXB2重组质粒含有茁2毒素基因而且阅读框架和基因序列正确。同时,采用乳糖诱导剂通过改变培养基的pH值、培养温度、诱导剂的加入量及诱导时间四个方面对茁2毒素基因表达进行调控,从而为茁2毒素基因工程菌的工业化生产提供了可靠的试验数据。 展开更多
关键词 C型产气荚膜梭菌 茁β2毒素基因 乳糖诱导剂 优化表达
新疆部分地区羊源性产气荚膜梭菌的分离及其主要毒力基因的检测 被引量:1
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作者 吴建勇 李建军 +4 位作者 李娜 段新华 杨学云 王登峰 王治才 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期796-801,共6页
为了解新疆部分地区羊源性产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的毒型分布,对疑似病例所采病料进行了菌株分离,用多重PCR方法对菌株进行了毒素分型,用PCR方法对β2毒素基因(cpb2)和肠毒素基因(cpe)进行了检测。结果,在分离的3... 为了解新疆部分地区羊源性产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的毒型分布,对疑似病例所采病料进行了菌株分离,用多重PCR方法对菌株进行了毒素分型,用PCR方法对β2毒素基因(cpb2)和肠毒素基因(cpe)进行了检测。结果,在分离的39株菌中,毒素A型占66.67%(26/39),毒素B型占2.56%(1/39),毒素D型占30.77%(12/39);66.67%(26/39)的菌cpb2基因阳性,A、D型菌cpb2基因阳性率分别为42.31%(11/26)和100%(12/12);cpe阳性率为51.28%(20/39),其中A型菌cpe阳性率为50.00%(13/26),D型菌cpe阳性率为58.33%(7/12);cpb2和cpe双阳性菌株占38.46%(15/39)。上述结果为防治新疆羊源性产气荚膜梭菌感染提供了基础资料。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 毒素型 多重PCR β2毒素 肠毒素
PCR-变性高效液相色谱技术检测食品中产气荚膜梭菌
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作者 郑秋月 傅俊范 +3 位作者 徐君怡 孙哲平 马惠蕊 曹际娟 《食品科技》 CAS 北大核心 2009年第5期277-280,共4页
目的:进行PCR结合DHPLC技术,快速检测食品中污染的产气荚膜梭菌的新方法研究。方法:采用DHPLC技术检测产气荚膜梭菌特异性PCR扩增产物,优化分析条件,并探讨其灵敏度、特异性和精密度。结果:建立产气荚膜梭菌PCR—DHPLC样品吸收特... 目的:进行PCR结合DHPLC技术,快速检测食品中污染的产气荚膜梭菌的新方法研究。方法:采用DHPLC技术检测产气荚膜梭菌特异性PCR扩增产物,优化分析条件,并探讨其灵敏度、特异性和精密度。结果:建立产气荚膜梭菌PCR—DHPLC样品吸收特征峰型图,样本检测的峰型图可用于定性或定量监测食品中产气荚膜梭菌的动态变化。结论:研究结果表明,所建立的食品中产气荚膜梭菌PCR—DHPLC方法具有特异性强、灵敏度高、快速等优点。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 变性高效液相色谱法 产气荚膜梭菌 β-毒素基因.
C型产气荚膜梭菌α、β1、β2毒素基因融合及免疫原性研究 预览 被引量:6
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作者 许崇波 陈向东 +2 位作者 许崇利 逄越 高凤山 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 379-384,共6页
为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白,利用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆质粒pETXA1中扩增出0.95kbα毒素基因,将其连接到经NcoⅠ单酶切并用碱性磷酸酶处理的含1.65kbβ1-β2融合基因的重组质粒pETXB1B2... 为了构建具有良好免疫原性的α-β1-β2融合蛋白,利用PCR技术,从含C型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆质粒pETXA1中扩增出0.95kbα毒素基因,将其连接到经NcoⅠ单酶切并用碱性磷酸酶处理的含1.65kbβ1-β2融合基因的重组质粒pETXB1B2上,构建含2.6kbα-β1-β2融合基因的表达质粒重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1B2).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1B2含有α-β1-β2融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的α-β1-β2融合蛋白能够被α、β1和β2毒素抗体识别.表达优化结果表明,以IPTG为诱导剂诱导α-β1-β2融合基因表达的优化条件是:培养基pH7.5,培养温度37℃,IPTG浓度0.4mmol·L^-1,菌体生长密度OD600达到1.0时加入IPTG,诱导时间5h,此时α-β1-β2融合蛋白表达量为31.2%.免疫试验结果表明,α-β1-β2融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD(最小致死量,minimum lethal dose)C型产气荚膜梭菌标准株C59—44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株. 展开更多
关键词 C型产气荚膜梭菌 Α毒素基因 β1毒素基因 β2毒素基因 融合蛋白 免疫原性
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C型产气荚膜梭菌β1、β2毒素基因的融合 预览 被引量:10
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作者 许崇波 曾瑾 +1 位作者 许崇利 王玉炯 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 205-208,共4页
利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出β1和β2毒素基因,构建了含β1-β2融合基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pETXB1-2).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pETXB1-2含有β1-β2融合基因,且基因序列和阅读框架正确.... 利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出β1和β2毒素基因,构建了含β1-β2融合基因表达质粒的重组菌株BL21(DE3)(pETXB1-2).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pETXB1-2含有β1-β2融合基因,且基因序列和阅读框架正确.经ELISA检测,重组菌株表达的β1-β2融合蛋白能够被β1、β2毒素抗体识别.免疫实验结果表明,用β1-β2融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的C型产气荚膜梭菌C59-44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株. 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 β1毒素 β2毒素 融合基因 基因表达
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从A型产气荚膜梭菌C57—1中发现β2毒素基因 预览 被引量:1
14
作者 陈小云 万建青 +2 位作者 程君生 关孚时 张存帅 《中国兽药杂志》 2005年第5期 6-9,共4页
为了进一步研究A型产气荚膜梭菌C57-1株的遗传学背景,应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从该菌株中扩增出大小为726 bp的β2毒素基因(cpb2基因)的部分序列,并将其克隆入pMD18-T载体中.转化至受体菌DH5α后,经Amp/IPTG/X-Gal选择培养,提取质... 为了进一步研究A型产气荚膜梭菌C57-1株的遗传学背景,应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从该菌株中扩增出大小为726 bp的β2毒素基因(cpb2基因)的部分序列,并将其克隆入pMD18-T载体中.转化至受体菌DH5α后,经Amp/IPTG/X-Gal选择培养,提取质粒,筛选阳性重组克隆.核苷酸序列分析证实,该基因片段与文献报道的β2毒素基因序列一致. 展开更多
关键词 A型产气荚膜梭菌 毒素基因 聚合酶链式反应 核苷酸序列分析 IPTG 重组克隆 基因序列 文献报道 基因片段 遗传学 T载体 受体菌 Gal Amp
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C型产气荚膜梭菌α、β1毒素基因的融合 预览 被引量:8
15
作者 许崇波 许崇利 +3 位作者 刘庆平 朱永宁 曾瑾 王玉炯 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期 71-74,84,共5页
利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出α和β1毒素基因,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建了含α-β1融合基因表达质粒重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1).经酶切鉴定和核苷酸序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1含有α-... 利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出α和β1毒素基因,通过分离、纯化、内切酶酶切、连接和转化,构建了含α-β1融合基因表达质粒重组菌株BL21(DE3)(pETXAB1).经酶切鉴定和核苷酸序列测定证实,构建的重组质粒pETXAB1含有α-β1融合基因,且基因序列和阅读框架均正确.经ELISA检测,重组菌株表达的α-β1融合蛋白能够被α、β1毒素抗体识别.免疫实验结果表明,α-β1融合蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的C型产气荚膜梭菌C59-44毒素攻击,表明构建的重组菌株可以作为预防仔猪红痢基因工程亚单位苗的候选菌株. 展开更多
关键词 C型产气荚膜梭菌 Α毒素 β1毒素 基因融合 PCR 仔猪 红痢 基因工程亚单位苗
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C型产气荚膜梭菌β2毒素基因的克隆与表达 预览 被引量:3
16
作者 许崇波 王玉炯 许崇利 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第5期 1-3,共3页
利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了0.72kb的β2毒素基因,将纯化的PCR产物与载体pGEM-T连接,转化至受体菌JM109中,经NcoI/BamHI和BamHI/EcoRI酶切鉴定及核苷酸序列测定证实,重组质粒pXCPB2中含有β2毒素基因.随后用NcoI... 利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了0.72kb的β2毒素基因,将纯化的PCR产物与载体pGEM-T连接,转化至受体菌JM109中,经NcoI/BamHI和BamHI/EcoRI酶切鉴定及核苷酸序列测定证实,重组质粒pXCPB2中含有β2毒素基因.随后用NcoI/BamHI酶切质粒pXCPB2,回收β2毒素基因片段,插入到事先经同样酶切处理的载体pET-28c中相应酶切位点,构建了表达质粒pETXB2,经NcoI/BamHI和NcoI/HindⅢ/BamHI酶切鉴定及核苷酸序列测定证实,表达质粒含有β2毒素基因且基因序列和阅读框架正确.重组菌株BL21(DE3)(pETXB2)表达产物经ELJSA检测和SDS-PAGE分析,重组菌株表达的β2毒素蛋白能够被β2毒素抗体识别,其表达量占菌体总蛋白相对含量的13.26%. 展开更多
关键词 C型产气荚膜梭菌 陡毒素基因 基因克隆 基因表达
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产气荚膜梭菌的β2毒素基因克隆及其核苷酸序列分析 预览 被引量:9
17
作者 王玉炯 邓光存 +2 位作者 曾瑾 许崇波 李芳 《宁夏大学学报:自然科学版》 CAS 2004年第1期 63-65,共3页
利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌中国标准株C59-44基因组DNA中扩增出了约0.7 kb的基因,并将其克隆到pGEM-T栽体上,经酶切鉴定及核苷酸序列分析表明,该基因片段的核苷酸序列与国外报道的β2毒素基因序列一致.
关键词 产气荚膜梭菌 β2毒素 基因克隆 核苷酸 序列分析
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C型产气荚膜梭菌β1毒素基因表达 预览 被引量:5
18
作者 许崇波 许崇利 +3 位作者 朱永宁 曹阳 刘哲 刘庆平 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第5期 17-18,共2页
利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出β1毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHI和EcoRI对其进行双酶切处理,回收0.95kb的β1毒素基因片段,最后将其定向克隆在事先经同样内切酶处理的载体pET-28c中相应位点上,转化至... 利用PCR技术,从C型产气荚膜梭菌染色体DNA中扩增出β1毒素基因,然后用限制性核酸内切酶BamHI和EcoRI对其进行双酶切处理,回收0.95kb的β1毒素基因片段,最后将其定向克隆在事先经同样内切酶处理的载体pET-28c中相应位点上,转化至受体菌B121(DE3)qh。经BamHI和Eco RI双酶切鉴定和核苷酸序列测定证实,构建的重组质粒pETXBl含有B毒素基因,并且具有正确的基因序列和阅读框架。重组菌株BI21(DE3)(pETXB1)经IPIG诱导后,其表达产物经ELISA检测和SDS-PAGE分析,结果表明重组菌株可以高效表达β1毒素蛋白,该蛋白占菌体总蛋白相对含量的12.24%。 展开更多
关键词 C型产气荚膜梭菌 β1毒素基因 基因表达
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产气荚膜梭菌α—β融合基因的高效表达 预览 被引量:4
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作者 许崇波 赵宝华 +2 位作者 卫广森 王卓 王文成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期 356-359,共4页
用PCR从含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒pXETA1中扩增出α毒素基因,用NcoI和BamHI双酶切该α毒素基因,回收0.95kb的α毒素基因片段,再用NcoI和Bam HI双酶切含产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pXCPAB2,与上述回收的α毒素基因片段连接,转化至... 用PCR从含产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒pXETA1中扩增出α毒素基因,用NcoI和BamHI双酶切该α毒素基因,回收0.95kb的α毒素基因片段,再用NcoI和Bam HI双酶切含产气荚膜梭菌β毒素基因质粒pXCPAB2,与上述回收的α毒素基因片段连接,转化至受体菌BL21(DE3)中.经NcoI、BamHI、NcoI酶切反应鉴定和核苷酸序列分析证实,获得了理想重组质粒pXCPAB2,该重组质粒含有α-β融合基因.重组菌株BL21(DE3)(pXCPAB2)经IPTG诱导后,其表达产物经ISA检测和SDS-PAGE分析,结果表明重组菌株可以高效表达α-β融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的22.14%. 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 Α毒素 Β毒素 融合基因 基因表达
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