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家蚕眠期血淋巴酚氧化酶活性变化及其基因表达分析 预览
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作者 杨伟克 刘增虎 +1 位作者 钟健 董占鹏 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期391-396,共6页
【目的】探究酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)及酚氧化酶在家蚕眠期血淋巴中的变化规律,为深入解析家蚕眠期酚氧化酶的功能及其基因表达特征提供新线索。【方法】以家蚕四龄将眠、四龄眠(头壳刚开裂)0h、四龄眠6h、四龄眠12h、四龄眠24h和... 【目的】探究酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)及酚氧化酶在家蚕眠期血淋巴中的变化规律,为深入解析家蚕眠期酚氧化酶的功能及其基因表达特征提供新线索。【方法】以家蚕四龄将眠、四龄眠(头壳刚开裂)0h、四龄眠6h、四龄眠12h、四龄眠24h和五龄起蚕为试验材料,采用实时荧光定量PCR检测其血淋巴PPO1和PPO2基因的表达情况,并分析血淋巴酚氧化酶活性的变化规律。【结果】家蚕血淋巴PPO1和PPO2基因在四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期均有一定程度的表达,且两者的变化规律一致,表现为四龄将眠最高、五龄起蚕最低,总体上呈先减后增再减的变化趋势。在家蚕四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期血淋巴酚氧化酶活性整体上也呈先降低后急剧升高再降低的变化趋势,四龄将眠为5.99U/mg,五龄起蚕为6.02U/mg,与酚氧化酶原基因表达模式基本一致。【结论】家蚕四龄将眠至五龄起蚕不同发育时期血淋巴酚氧化酶活性变化规律与酚氧化酶原基因(PPO1和PPO2)的转录表达模式基本一致,说明酚氧化酶在家蚕眠期即发挥免疫防御功能,又参与蚕体新旧表皮的更替过程。 展开更多
关键词 家蚕 酚氧化酶 酚氧化酶原基因 眠期 血淋巴 变化规律
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不同饲料饲育的家蚕幼虫肠道细菌的多样性分析 预览
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作者 郝长富 李刚 +5 位作者 孙熙 唐健 钱荷英 赵国栋 邓祥元 徐安英 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期61-72,共12页
【目的】为研究饲料对不同家蚕Bombyx mori品种肠道微生物菌群的影响。【方法】以筛选到的家蚕广食性品种GS和普通品种1015为研究对象,收集从收蚁开始分别饲育桑叶(GS.m和C1015.m组)和人工饲料(GS.b组)至4龄盛时期的家蚕肠道样本,采用... 【目的】为研究饲料对不同家蚕Bombyx mori品种肠道微生物菌群的影响。【方法】以筛选到的家蚕广食性品种GS和普通品种1015为研究对象,收集从收蚁开始分别饲育桑叶(GS.m和C1015.m组)和人工饲料(GS.b组)至4龄盛时期的家蚕肠道样本,采用高通量测序的方法对其肠道微生物16S rDNA的V3-V4区进行测序分析,比较它们之间肠道微生物的差异。【结果】在门水平上,所测家蚕肠道样本的优势菌为厚壁菌门(Firmicutes)和变形杆菌门(Proteobacteria);在科水平上,所测样本主要优势菌为明串珠菌科(Leuconostocaceae)、乳酸杆菌科(Lactobacillaceae)、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)等;在属水平上,所测样本主要的优势菌为魏斯氏属Weissella、乳酸菌属Lactobacillus、布赫纳氏菌属Buchnera、甲基杆菌属Methylobacterium、叶瘤菌属Phyllobacterium、肠球菌属Enterococcus和脆弱拟杆菌属Bacteroides等。家蚕品种GS经桑叶和人工饲料饲育后,甲基杆菌属Methylobacterium、布赫纳氏菌属Buchnera等菌属仅在桑叶饲育的GS肠道内出现,而魏斯氏菌Weissella、短芽孢杆菌属Brevibacillus等菌属只在人工饲料饲育的GS肠道内出现。同是桑叶饲育的家蚕品种GS和1015,其肠道内相同的优势菌有叶瘤菌属Phyllobacterium、脆弱拟杆菌属Bacteroides、不动细菌属Acinetobacter等。相较于广食性蚕品种GS的肠道菌群,肠球菌属Enterococcus、草螺菌属Herbaspirillum、丝硫菌属Thiothrix等菌属仅在普通蚕品种1015肠道中被检测到。GS.b组家蚕肠道细菌的物种多样性低于GS.m和C1015.m。GS.m肠道中丰度差异显著性最高的菌群为变形菌门(Proteobacteria),GS.b肠道中丰度差异显著性最高的菌群为杆菌纲(Bacilli)和乳杆菌目(Lactobacillales),而C1015.m肠道中丰度差异显著性最高的菌群为粪肠球菌属Enterococcus和肠球菌科(Enterococcaceae)。【结论】经桑叶饲育的不同蚕品种(GS和1015)的肠道微生物比人工饲料 展开更多
关键词 家蚕 高通量测序 16SrDNA 肠道菌群 物种多样性
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吡虫啉对家蚕的毒性试验 预览
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作者 张芬 杨一平 +4 位作者 陈伟国 钱秋杰 林蔚红 戴建忠 孙海燕 《蚕桑通报》 2019年第2期8-10,共3页
10%吡虫啉可湿性粉剂对家蚕3龄起蚕的急性食下毒性(LC50)为1.2841mg/L,对家的毒性等级为高毒;晚秋蚕期用10%吡虫啉可湿性粉剂稀释液喷雾的桑叶喂饲3龄起蚕,1500倍(66.67mg/L)处理区约在35d时不再出现中毒死亡,750倍(133.33mg/L)到39d时... 10%吡虫啉可湿性粉剂对家蚕3龄起蚕的急性食下毒性(LC50)为1.2841mg/L,对家的毒性等级为高毒;晚秋蚕期用10%吡虫啉可湿性粉剂稀释液喷雾的桑叶喂饲3龄起蚕,1500倍(66.67mg/L)处理区约在35d时不再出现中毒死亡,750倍(133.33mg/L)到39d时仍有38.89%的蚕死亡,表明吡虫啉在桑叶上的残留毒性较长,但未见桑叶内吸传导毒性。吡虫啉对家蚕的中毒症状主要表现为胸部膨大、摇头、吐液、爬动,头尾向背弯曲呈“U”或“O”字形。 展开更多
关键词 吡虫啉 家蚕 毒性
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家蚕幼虫BmToll9基因对肽聚糖和金黄色葡萄球菌的响应表达 预览
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作者 黄燕玲 黄诗怡 +3 位作者 李树强 何艳影 陈泽敏 刘吉升 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期398-406,共9页
【目的】Toll信号通路是昆虫中重要的免疫信号通路,其中Toll受体在保持Toll通路的正常免疫应答、抵抗外源病原体中起到关键的作用。本研究旨在探究肽聚糖和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus对家蚕Bombyx mori Toll受体基因BmToll9-1... 【目的】Toll信号通路是昆虫中重要的免疫信号通路,其中Toll受体在保持Toll通路的正常免疫应答、抵抗外源病原体中起到关键的作用。本研究旨在探究肽聚糖和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus对家蚕Bombyx mori Toll受体基因BmToll9-1和BmToll9-2表达的影响。【方法】将革兰氏阳性菌细胞壁主要成分肽聚糖和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌分别注射感染家蚕5龄第1天幼虫,诱导其发生免疫反应;采用实时荧光定量PCR分析注射后不同感染时间点BmToll9-2和BmToll9-1基因在家蚕幼虫中肠、表皮、脂肪体和丝腺中的相对表达水平。【结果】往家蚕5龄幼虫中注射肽聚糖或金黄色葡萄球菌后,BmToll9-2基因出现了时间和组织的差异性表达。注射肽聚糖和金黄色葡萄球菌均能诱导5龄幼虫中肠BmToll9-2基因的表达上调,注射肽聚糖和金黄色葡萄球菌分别在3和6h时对基因表达的诱导效果最好,且注射金黄色葡萄球菌比注射肽聚糖对基因表达的诱导效果更好。注射金黄色葡萄球菌能引起5龄幼虫表皮、脂肪体和丝腺中BmToll9-2基因的表达上调,分别于注射后24,6和24h时诱导效果最好。注射金黄色葡萄球菌亦能诱导同源的BmToll9-1基因的上调表达。【结论】家蚕幼虫BmToll9基因在肽聚糖或金黄色葡萄球菌注射处理后均能在不同组织中发生上调表达,推测BmToll9基因参与了家蚕对肽聚糖和金黄色葡萄球菌的免疫反应。 展开更多
关键词 家蚕 TOLL受体 BmToll9 肽聚糖 金黄色葡萄球菌 基因表达
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利用体腔显微注射法实现非编码RNA在家蚕头部稳定过表达 预览
5
作者 路一平 霍春月 +4 位作者 马田田 杨宗霖 申雅文 阚云超 李丹丹 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期779-786,共8页
【目的】通过体腔显微注射非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)过表达载体,研究注射后ncRNA在家蚕Bombyx mori幼虫不同组织中的表达情况,探索研究家蚕ncRNA功能的便捷方法。【方法】利用显微注射仪(玻璃显微注射针)在家蚕5龄第3天幼虫第7-... 【目的】通过体腔显微注射非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)过表达载体,研究注射后ncRNA在家蚕Bombyx mori幼虫不同组织中的表达情况,探索研究家蚕ncRNA功能的便捷方法。【方法】利用显微注射仪(玻璃显微注射针)在家蚕5龄第3天幼虫第7-8腹节褶皱处分别注射家蚕ncRNA Bm-15和Bm-152过表达载体piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-15]和piggyBac[A3-EGFP-A3-Bm-152],注射48 h后提取家蚕幼虫头、胸、尾部、腹部背板、腹部腹板和丝腺总RNA,荧光定量PCR检测Bm-15和Bm-152在家蚕幼虫不同组织中的表达情况。【结果】采用玻璃显微注射针造成的创伤面小,注射后家蚕出现感染和死亡的比例低于10%。注射ncRNA Bm-15过表达载体后,在家蚕幼虫头部和尾部都检测到Bm-15的显著性过表达,头部中Bm-15表达量较注射piggyBac[A3-EGFP]空载体时上升了17倍,在其他4个组织中Bm-15表达量与正常饲养组家蚕对照相比变化不显著。注射Bm-152过表达载体后,同样在家蚕幼虫头部和尾部都检测到Bm-152的显著过表达,其中头部中的表达量较注射piggyBac[A3-EGFP]空载体时上升了6.6倍。腹部背板和丝腺中Bm-152过表达效果也较明显,分别是注射piggyBac[A3-EGFP]空载体时表达量的3.4和4.5倍。【结论】体腔显微注射ncRNA过表达载体可以实现ncRNA在家蚕头部中稳定过表达。本研究为后续研究神经相关ncRNA的功能提供了较好的思路和方法。 展开更多
关键词 家蚕 非编码RNA 组织 过表达载体 体腔显微注射
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虫类药治疗银屑病的体会 预览
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作者 乔民 苗德光 《中国中医药现代远程教育》 2019年第6期26-27,36共3页
虫类药物性攻逐走窜,可通经达络,搜剃疏利而无所不至;同时,虫类药为血肉有情之品。对于银屑病的治疗,可以充分发挥其祛邪及补虚两个方面的优势。已故国医大师朱良春教授善用虫类药物,本文在对朱老运用虫类药物经验继承的基础上,在运用... 虫类药物性攻逐走窜,可通经达络,搜剃疏利而无所不至;同时,虫类药为血肉有情之品。对于银屑病的治疗,可以充分发挥其祛邪及补虚两个方面的优势。已故国医大师朱良春教授善用虫类药物,本文在对朱老运用虫类药物经验继承的基础上,在运用部分虫类药物治疗银屑病的体会进行了初步归纳与总结。 展开更多
关键词 僵蚕 蝉蜕 地龙 蜈蚣 全蝎 银屑病
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240 g/L虫螨腈悬浮剂对桑螟防效及对家蚕毒性测定 预览
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作者 杨一平 林蔚红 +4 位作者 戴建忠 张芬 钱秋杰 孙海燕 陈伟国 《蚕桑通报》 2019年第1期15-19,共5页
实验室测定,240g/L虫螨腈悬浮剂对3龄起蚕添毒24 h的LC50>3750 mg/L,连续添毒48 h和72 h的LC50分别为1858.2552 mg/L、1207.4615 mg/L,表明240 g/L具有累积效应。田间试验表明,240 g/L虫螨腈悬浮剂750倍(320 mg/L)和1500倍(160 mg/L... 实验室测定,240g/L虫螨腈悬浮剂对3龄起蚕添毒24 h的LC50>3750 mg/L,连续添毒48 h和72 h的LC50分别为1858.2552 mg/L、1207.4615 mg/L,表明240 g/L具有累积效应。田间试验表明,240 g/L虫螨腈悬浮剂750倍(320 mg/L)和1500倍(160 mg/L)对桑螟幼虫的防效显著优于77.5%敌敌畏乳油750倍+40%辛硫磷乳油1500倍。240 g/L虫螨腈悬浮剂320 mg/L和160 mg/L喷于桑树后1 d采叶,对3龄起蚕均无中毒症状和死亡现象,但连续饲养至5龄,茧层率有所下降。240 g/L虫螨腈悬浮剂320 mg/L和160 mg/L喷药的桑叶应间隔7 d后采叶养蚕,以免影响蚕茧质量。 展开更多
关键词 虫螨腈 桑螟 防效 家蚕 急性毒性 残毒期
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家蚕热休克蛋白HSP60相互作用蛋白筛选与鉴定 预览
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作者 董战旗 蒋亚明 潘敏慧 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期376-384,共9页
【目的】HSP60是热休克蛋白中重要的一员,在昆虫先天性免疫过程中起重要作用,同时也是昆虫生长发育的必要因子。前期研究证明家蚕BmHSP60参与家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)入侵细胞过程,本研究通过鉴定Bm... 【目的】HSP60是热休克蛋白中重要的一员,在昆虫先天性免疫过程中起重要作用,同时也是昆虫生长发育的必要因子。前期研究证明家蚕BmHSP60参与家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)入侵细胞过程,本研究通过鉴定BmHSP60相互作用蛋白,为其在家蚕先天性免疫中作用机制研究打下基础。【方法】利用免疫共沉淀和银联-质谱分析技术(LC-MS/MS),首先构建BmHSP60过表达载体并融合Flag标签,转染到家蚕细胞中48 h后,收集蛋白,进行免疫共沉淀,用Flag抗体孵育磁珠调取相互作用蛋白,银染处理后,能够检测到明显的差异条带,把差异条带切胶保存在-80℃,然后质谱分析差异条带的多肽;根据质谱结果和差异条带的大小与NCBI数据库进行比对,筛选到候选相互作用蛋白。最后,构建候选相互作用蛋白的克隆载体并融合HA标签,分别和BmHSP60表达载体共转到家蚕细胞,免疫共沉淀和荧光共定位验证BmHSP60和候选蛋白之间的相互作用。并通过Mito-Tracker-Green分析BmHSP60候选相互作用蛋白与线粒体的共定位。【结果】免疫共沉淀银染结果显示BmHSP60相互作用蛋白在110、90、75、60和35 kD附近有5条明显的差异条带,将这5条条带混成蛋白池进行质谱分析,通过银联-质谱分析结果和家蚕基因组数据库以及NCBI数据库进行比对分析共鉴定到32个差异蛋白,根据多肽数量和蛋白分子量的大小共筛选到5个相互作用候选蛋白与银染结果差异条带一致,分别为ADP/ATP translocase(ANT)、Actin、Alpha-tubulin、Elongation factor 1-alpha(EF1α)和HSP90。构建BmHSP60候选相互作用蛋白克隆表达载体并融合HA标签,与BmHSP60共同转染到家蚕细胞,免疫共沉淀immunoprecipitated(IP)用α-Flag抗体孵育,immunoblotting(IB)再用α-Flag抗体孵育,均能够检测到BmHSP60表达。而IB用α-HA抗体孵育显示只有BmANT和BmHSP90能够检测到相应的条带,而Alpha-tubulin和EF1 展开更多
关键词 家蚕 BmHSP60 相互作用蛋白 免疫共沉淀 BmANT1 BmHSP90
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一个二化性家蚕醛酮还原酶基因的克隆及序列与表达分析
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作者 陈艳荣 朱娟 +4 位作者 蒋涛 谭志承 陈艳花 唐顺明 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期187-194,共8页
醛酮还原酶(aldo-keto reductase,AKR)超级家族成员以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸作为其辅酶,将醛酮类化合物还原成相应的醇类,其作用底物范围广泛,包括糖类、脂肪醛和甾体类激素等,在许多重要生物学反应中发挥关键作用。以二化性... 醛酮还原酶(aldo-keto reductase,AKR)超级家族成员以还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸作为其辅酶,将醛酮类化合物还原成相应的醇类,其作用底物范围广泛,包括糖类、脂肪醛和甾体类激素等,在许多重要生物学反应中发挥关键作用。以二化性家蚕品系秋丰为材料,利用RT-PCR分别从滞育命运组和非滞育命运组克隆出AKR蛋白的cDNA序列。AKR蛋白序列由343个氨基酸组成,与黑腹果蝇和人的AKR分别有43%和38%的序列一致性。基于蛋白质序列构建的系统发育树显示,家蚕AKR蛋白属于AKR2E亚家族,其氨基酸序列与该家族成员序列一致性超过30%,故命名为AKR2E-like。将akr2e-like基因的cDNA序列克隆进表达载体pET-28a(+)中进行原核重组表达,SDS-PAGE电泳和Western blot分析显示重组蛋白被成功表达。qRT-PCR分析表明,ark2e-like基因表达受发育环境调节:在滞育诱导条件下,该基因在家蚕化蛹早期的表达量持续增加,在化蛹后第4天mRNA丰度达到最高值;而在非滞育诱导条件下,化蛹后ark2e-like基因表达量并无明显波动。上述结果表明,ark2e-like基因有可能在家蚕二化性品系的滞育准备期起关键作用。 展开更多
关键词 醛酮还原酶 滞育准备 家蚕 表达
家蚕整合素β2的表达、纯化及其免疫功能 预览
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作者 张奎 李重阳 +3 位作者 苏晶晶 谈娟 徐曼 崔红娟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期181-190,共10页
【目的】分析家蚕(Bombyx mori)整合素β2的序列和结构特征及其在家蚕感染病原菌后血细胞中的表达变化,检测其重组蛋白对不同病原相关模式分子识别和病原菌的凝聚作用,为进一步探究家蚕整合素β2的蛋白功能打下基础。【方法】利用生物... 【目的】分析家蚕(Bombyx mori)整合素β2的序列和结构特征及其在家蚕感染病原菌后血细胞中的表达变化,检测其重组蛋白对不同病原相关模式分子识别和病原菌的凝聚作用,为进一步探究家蚕整合素β2的蛋白功能打下基础。【方法】利用生物信息学对整合素β2的序列和结构特征进行分析,利用实时荧光定量PCR检测家蚕分别注射大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)后整合素β2在血细胞中的表达变化。通过PCR技术扩增获得整合素β2完整的胞外域片段,构建至pET22b原核表达载体后转化至E.coli Rosetta(DE3)表达菌株。经IPTG诱导获得重组蛋白,利用Ni-NTA亲和层析得到纯化的体外重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western blot对纯化获得的体外重组蛋白的纯度和质量进行检测。利用ELISA检测重组蛋白与两种不同病原相关分子模式LPS和PGN的结合情况,运用Western blot检测重组蛋白与不同病原微生物的结合情况,通过凝集试验检测重组蛋白对金黄色葡萄球菌的凝集能力,最后在个体水平探索重组蛋白在体内细菌清理中的作用。【结果】家蚕整合素β2具有典型的β整合素亚基保守结构特征,即由一个较长的胞外域、一个单次跨膜结构域和一个较短的胞内域构成。家蚕整合素β2具有金属离子结合位点MIDAS、EGF结构域、半胱氨酸重复基序和NPxY等整合素典型的结构特征。实时荧光定量PCR检测结果表明家蚕在受到细菌感染后,整合素β2的表达发生显著变化。通过原核表达和蛋白纯化获得纯度较高的重组蛋白,SDS-PAGE和Western blot检测结果表明纯化的重组蛋白纯度较高,可以用于后续试验。ELISA试验表明重组蛋白对LPS和PGN等病原相关分子模式具有较强的结合能力。细菌结合试验结果显示重组蛋白能够结合多种细菌,但与革兰氏阳性菌的结合能力要高于革兰氏阴性菌。细菌凝聚试验 展开更多
关键词 家蚕 整合素β2 细菌感染 原核表达 细菌凝聚
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球孢白僵菌毒素对家蚕糖代谢水平的影响
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作者 耿涛 赫荣帆 +4 位作者 潘波 武华周 王娜玉 郭锡杰 王树昌 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期2585-2595,共11页
为明确球孢白僵菌毒素对宿主昆虫糖代谢水平的作用,本研究检测了家蚕幼虫感染球孢白僵菌和注射球孢白僵菌毒素之后组织中海藻糖和糖原含量的变化,以及糖代谢相关基因表达水平的变化;分析了注射毒素和添食海藻糖之后对家蚕幼虫存活率的... 为明确球孢白僵菌毒素对宿主昆虫糖代谢水平的作用,本研究检测了家蚕幼虫感染球孢白僵菌和注射球孢白僵菌毒素之后组织中海藻糖和糖原含量的变化,以及糖代谢相关基因表达水平的变化;分析了注射毒素和添食海藻糖之后对家蚕幼虫存活率的影响、以及添加毒素之后对BmN细胞的损伤作用。结果表明,家蚕幼虫感染球孢白僵菌和注射毒素后海藻糖和糖原含量显著降低;Bombyxin A2和BmIBP2基因显著上调表达,而糖代谢酶系基因则显著下调表达。注射毒素显著降低家蚕5龄幼虫的存活时间,而补充海藻糖能够延长家蚕幼虫的存活时间。添加毒素能够使家蚕BmN细胞发生凝集作用而最终崩解死亡,并诱导Bombyxin A2和BmIBP2基因显著上调表达以及糖代谢酶系基因显著下调表达。以上结果说明,球孢白僵菌可能通过分泌毒素,作用于家蚕类胰岛素信号通路,调节家蚕自身糖类物质的代谢与合成,破坏家蚕能量代谢与储存平衡,引起家蚕组织细胞凋亡并最终导致家蚕死亡。本研究结果对农林害虫的生物防治、家蚕等经济昆虫僵病防治技术的研究以及球孢白僵菌毒素用于新型降糖药物的筛选和中药僵蚕的开发利用均具有重要意义。 展开更多
关键词 家蚕 球孢白僵菌 真菌毒素 家蚕素 糖代谢
转录因子ZnF-706在鳞翅目昆虫中的进化格局及在家蚕中的功能 预览
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作者 崔勇 朱亚楠 +4 位作者 黄悦莹 谭丽庄 冯启理 王文 相辉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期9-20,共12页
【目的】探讨家蚕Bombyx mori的潜在驯化基因--转录因子ZnF-706在鳞翅目(Lepidoptera)昆虫进化过程及家蚕驯化过程中的分子进化格局;并基于CRISPR/Cas9家蚕基因组编辑平台,探讨ZnF-706基因在家蚕中的功能。【方法】首先分析了家蚕ZnF-70... 【目的】探讨家蚕Bombyx mori的潜在驯化基因--转录因子ZnF-706在鳞翅目(Lepidoptera)昆虫进化过程及家蚕驯化过程中的分子进化格局;并基于CRISPR/Cas9家蚕基因组编辑平台,探讨ZnF-706基因在家蚕中的功能。【方法】首先分析了家蚕ZnF-706序列特征,并利用已发表芯片数据调研该基因在家蚕幼虫组织中的表达格局;利用Phylogenetic Analysis by Maximum Likelihood(PAML)分支检验方法,分析该基因在鳞翅目不同类群中的分子进化格局。基于已发表的家蚕-野桑蚕Bombyx mandarina群体基因组多态性数据,对ZnF-706进行基因区域人工选择信号分析;对ZnF-706基因上游2 kb的调控区域进行单核苷酸多态性位点频率检测,发掘在家蚕群体中固定下来的突变位点;针对突变位点所在区域进行转录因子结合活性预测。利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除ZnF-706基因,获得纯和突变体;以野生型家蚕为对照,检测突变体的茧重及蛹重变化。【结果】家蚕ZnF-706的编码蛋白具有典型的锌指蛋白结构域。ZnF-706在家蚕5龄第3天幼虫各组织中广泛表达,尤其表皮、脂肪体和生殖腺中有很高的表达量;该基因在鳞翅目、蚕蛾总科(Bombycoidea)及天蚕Antherea yamamai 3个分支中均呈现快速进化信号,在家蚕中有强烈的人工选择信号。该基因所在基因组区域的家蚕-野桑蚕种群分歧度参数Fst明显升高,家蚕群体中的群体多样性π明显降低,表明它位于一个选择扫荡区域内;该基因在家蚕-野桑蚕中的9个SNP位点存在于上游调控区,并位于转录因子结合活性区域内。该基因的纯合家蚕突变体ΔZnF-706生存力减弱,并且茧重以及蛹重与野生型家蚕相比都显著降低。但与黑腹果蝇Drosophila melanogaster中不同的是,家蚕中该基因的突变并不致死。【结论】ZnF-706可能在鳞翅目尤其是泌丝昆虫中进化,并在家蚕驯化过程中受到选择压力,提示其对于特征性状茧丝� 展开更多
关键词 鳞翅目 家蚕 泌丝昆虫 驯化基因 转录因子 CRISPR/Cas9
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重离子射线辐照家蚕生殖腺诱发后代幼虫斑纹突变
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作者 屠振力 小林泰彦 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期300-303,共4页
为解明高能重离子射线辐照家蚕生殖腺所产生的突变效应,以不同剂量的12C^5+射线分别辐照家蚕幼虫不同发育时期、不同性别的生殖腺部位,以次代幼虫斑纹突变为依据鉴定辐照后代的突变率。结果显示,高能12C^5+射线辐照家蚕幼虫生殖腺部位,... 为解明高能重离子射线辐照家蚕生殖腺所产生的突变效应,以不同剂量的12C^5+射线分别辐照家蚕幼虫不同发育时期、不同性别的生殖腺部位,以次代幼虫斑纹突变为依据鉴定辐照后代的突变率。结果显示,高能12C^5+射线辐照家蚕幼虫生殖腺部位,可以高效诱发后代突变,对于同一发育阶段的幼虫,在1~9 Gy剂量范围内,造卵数及产卵数随幅照剂量增加而减少,而后代斑纹突变率在1~5 Gy剂量范围内随辐照剂量增加而升高;与熟蚕相比,4龄第3天幼虫辐照后诱发的后代突变率较高;家蚕幼虫辐照后诱发的突变率存在性别差异,雄性的突变率高于雌性。结果表明,对家蚕生殖腺部位进行重离子射线辐照是获得家蚕突变体的有效方法。 展开更多
关键词 家蚕 生殖腺 重离子射线 辐照 诱变 斑纹
hsc70-4基因促进家蚕核型多角体病毒复制增殖
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作者 陈鹏 包希艳 +4 位作者 董战旗 康涛涛 朱艳 潘敏慧 鲁成 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1275-1284,共10页
【目的】热休克应答(heat shock response, HSR)是机体细胞应对环境压力的一种重要防御策略,鉴定热休克蛋白在杆状病毒侵染宿主过程中的功能,并揭示其作用的分子机制,为探明宿主与病毒相互作用的分子基础提供理论依据。【方法】通过分... 【目的】热休克应答(heat shock response, HSR)是机体细胞应对环境压力的一种重要防御策略,鉴定热休克蛋白在杆状病毒侵染宿主过程中的功能,并揭示其作用的分子机制,为探明宿主与病毒相互作用的分子基础提供理论依据。【方法】通过分子克隆技术对Bmhsc70-4基因进行克隆,并利用BioEdit及GeneDoc对其进行多序列比对分析;分别通过真核表达和基于CRISPR/Cas9的基因编辑系统对Bmhsc70-4基因进行过表达和敲除;利用荧光定量PCR技术检测相应基因的表达量;通过对Caspase-9和Caspase-3/7活性的检测确定Bmhsc70-4基因对细胞凋亡的影响;通过免疫荧光验证BmHSC70-4和BmlAP的共定位情况,并进一步通过免疫共沉淀验证它们的相互作用。【结果】Bmhsc70-4基因开放阅读框为1950 bp,编码649个氨基酸,在昆虫间具有较高的保守性;BmNPV能够诱导Bmhsc70-4基因上调表达,过表达Bmhsc70-4基因能够促进BmNPV的增殖,敲除Bmhsc70-4基因能够抑制BmNPV的增殖,表明Bmhsc70-4基因的表达利于BmNPV的增殖;Bmhsc70-4基因具有抑制家蚕细胞凋亡的功能;荧光共定位显示BmHSC70-4和BmlAP共定位于细胞质中,免疫共沉淀结果表明两者可以相互作用;BmNPV侵染过程中Bmhsc70-4基因能够促进B加ap基因的表达。【结论】Bmhsc70-4基因具有抑制家蚕细胞凋亡的功能,在BmNPV侵染家蚕细胞过程中,能够与BmlAP相互作用,并促进BmNPV复制增殖。 展开更多
关键词 家蚕 BMNPV 热休克应答 细胞凋亡 Bmhsc70-4 Bmiap
家蚕感染BmCPV相关未知功能蛋白LOC101742613的基因克隆及表征特征分析
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作者 汪羚 杨娟 +5 位作者 李斌 尚梦珂 高坤 侯成香 唐旭东 郭锡杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期46-53,共8页
在感染家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrovirus,BmCPV)的家蚕中肠组织中发现一个表达量明显下调的未知蛋白LOC101742613,与棉铃虫(Helicoverpa armigera)的未知蛋白LOC110378285的序列一致性为51%。利用PCR技术克... 在感染家蚕质型多角体病毒(Bombyx mori cytoplasmic polyhedrovirus,BmCPV)的家蚕中肠组织中发现一个表达量明显下调的未知蛋白LOC101742613,与棉铃虫(Helicoverpa armigera)的未知蛋白LOC110378285的序列一致性为51%。利用PCR技术克隆获得了编码该蛋白质的cDNA,其序列全长为1114bp,最大开放阅读框(ORF)为993bp,编码的蛋白质由330个氨基酸残基组成,预测蛋白质分子质量为36.6kD,等电点为4.31。实时荧光定量PCR分析发现目的基因主要在家蚕的脂肪体、精巢、卵巢和头部组织中表达,且家蚕中肠感染BmCPV后48h和72h其mRNA的表达量显著下调,分别为对照组的7.3%和2.1%。通过构建重组表达载体pET28a/BGIBMGA014203对去掉信号肽的目的蛋白进行原核表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析发现重组蛋白主要在包涵体中,分子质量约为37kD。研究结果为进一步阐明目的基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 家蚕 质型多角体病毒 实时荧光定量PCR 原核表达
膨大弯颈孢SCKDC10菌株的杀虫活性及培养条件 预览
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作者 苏基平 王帆 +5 位作者 胡军华 王娟 陈若霓 陈仕江 卿玉玲 秦少容 《湖南农业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期281-287,共7页
采用室内毒力测定方法,测定了膨大弯颈孢(Tolypocladiuminflatum)SCKDC10菌株对家蚕4龄幼虫、蚕蛹及柑橘全爪螨雌成螨的毒力,并比较了不同培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基、综合马铃薯培养基、淀粉琼脂培养基、察... 采用室内毒力测定方法,测定了膨大弯颈孢(Tolypocladiuminflatum)SCKDC10菌株对家蚕4龄幼虫、蚕蛹及柑橘全爪螨雌成螨的毒力,并比较了不同培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基、综合马铃薯培养基、淀粉琼脂培养基、察氏培养基、萨氏培养基、高氏一号培养基、L–broth培养基)、不同碳源(可溶性淀粉、甘露醇、肌醇、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、甘油、蔗糖)、不同氮源(硝酸钾、尿素、蛋白胨、硝酸铵、甘氨酸、赖氨酸、氯化铵)、不同温度(10、15、20、25、28、30、35、40℃)、pH值(4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0)、紫外线照射时长(0、20、40、60、80、100、120min)以及常用杀虫剂(螺螨酯悬浮剂、甲氰菊酯乳油、丁氟螨酯悬浮剂、四螨嗪悬浮液、噻螨酮乳油)、杀菌剂(戊唑醇悬浮液、吡哆嘧菌酯乳油、咪鲜胺乳油、多菌灵可湿性粉剂、唑醚·代森联水乳剂)对SCKDC10菌株生长、产孢和孢子萌发的影响。结果显示:SCKDC10菌株对家蚕幼虫及蚕蛹的LC50分别为1.47×10^8个孢子/mL和4.25×10^8个孢子/mL,LT50值分别为6.51 d和7.87 d;对柑橘全爪螨雌成螨的LC50为9.26×10^7个孢子/mL,LT50值为6.34d;萨氏培养基和马铃薯葡萄糖琼脂培养基分别为SCKDC10菌株最适生长和产孢培养基;葡萄糖和甘氨酸更有利于该菌的生长和产孢;SCKDC10菌株的最佳生长和产孢温度均为28℃;最适pH值均为7.0;紫外线照射时长对孢子萌发产生较大影响;紫外线照射时长对孢子萌发产生较大影响,随紫外线照射时间延长,菌株生长速率、产孢量以及孢子萌发率逐渐降低,紫外线照射100min后,孢子完全不能萌发。SCKDC10菌株与杀虫剂相容性较好,对杀菌剂比较敏感。 展开更多
关键词 家蚕 柑橘全爪螨 膨大弯颈孢 杀虫活性 培养条件
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13种生物农药对家蚕的急性毒性与安全性评价
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作者 王永强 闫浩浩 +2 位作者 徐淑兵 寿延伟 王红艳 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期456-460,共5页
从植物源农药、生物化学农药、微生物农药、农用抗生素这4类生物农药中选择常见的13种生物农药制剂,采用浸液法测定其对家蚕的急性毒性,比较毒性强弱并进行风险性等级评价。参试药剂包括苦参碱的单剂与混剂、氨基寡糖素·盐酸吗啉胍... 从植物源农药、生物化学农药、微生物农药、农用抗生素这4类生物农药中选择常见的13种生物农药制剂,采用浸液法测定其对家蚕的急性毒性,比较毒性强弱并进行风险性等级评价。参试药剂包括苦参碱的单剂与混剂、氨基寡糖素·盐酸吗啉胍的2种剂型、芸苔素内酯的2种剂型及其他7种常规生物农药。结果表明,05%苦皮藤素烟剂和5%春雷霉素·中生菌素可湿性粉剂对家蚕为高毒,96 h致死中浓度(LC50)分别为13465 mg/L与5908 mg/L;2%苦参碱水剂和1%苦参碱·血根碱微乳剂对家蚕为中等毒性;其他生物农药对家蚕均为低毒。 展开更多
关键词 生物农药 家蚕 急性毒性 中毒症状 安全性评价
家蚕IAP互作蛋白的筛选、鉴定及其对BmNPV增殖的影响 预览
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作者 陈鹏 包希艳 +4 位作者 康涛涛 董战旗 朱艳 潘敏慧 鲁成 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期558-567,共10页
【目的】细胞凋亡作为昆虫免疫应答的重要组成部分,在病毒与宿主相互作用的过程中扮演着重要角色,以细胞凋亡相关基因为研究对象对阐明其在病毒感染过程中的作用具有重要的参考价值。本研究旨在筛选家蚕凋亡抑制蛋白(Bombyx mori inhibi... 【目的】细胞凋亡作为昆虫免疫应答的重要组成部分,在病毒与宿主相互作用的过程中扮演着重要角色,以细胞凋亡相关基因为研究对象对阐明其在病毒感染过程中的作用具有重要的参考价值。本研究旨在筛选家蚕凋亡抑制蛋白(Bombyx mori inhibitor of apoptosis protein,BmIAP)的相互作用蛋白,并验证其在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)侵染过程中与Bmiap的相互调控关系及在BmNPV增殖过程中的作用,为探明宿主与BmNPV相互作用的分子机制提供理论依据。【方法】利用免疫共沉淀技术筛选在BmNPV侵染家蚕细胞过程中与BmIAP相互作用的蛋白,对获得的特异性差异条带进行LC-MS/MS蛋白质谱分析,根据蛋白分子量大小并利用生物信息学方法对获得的蛋白进行鉴定,确定候选基因;通过分子克隆技术对候选基因进行克隆,利用SMART在线工具及BioEdit分别对候选基因的结构域进行预测及多序列比对分析;通过免疫荧光试验验证BmIAP和候选蛋白的细胞共定位情况,并进一步利用免疫共沉淀验证它们的相互作用;分别通过真核表达和基于CRISPR/Cas9的基因编辑系统对候选基因进行过表达和敲除,利用qRT-PCR技术检测相应基因的表达情况,以确定Bmiap和Bmpp5在BmNPV侵染过程中的调控关系;同样,在过表达和敲除Bmpp5后检测杆状病毒Vp39的表达量,以确定Bmpp5对BmNPV增殖的影响。【结果】通过免疫共沉淀获得7个可能与BmIAP相互作用的宿主蛋白和1个BmNPV蛋白,进一步分析确定1个与凋亡相关的候选基因Bmpp5;Bmpp5的开放阅读框为1 473 bp,编码490个氨基酸,预测的蛋白分子量约为56 kD,含3个TRP结构域和1个PP2Ac结构域,在昆虫间具有较高的保守性;免疫荧光检测证明BmIAP和BmPP5共定位于细胞质中,免疫共沉淀结果表明两者可以相互作用;在BmNPV侵染过程中,过表达Bmiap后,Bmpp5的表达量显著上调,而敲除Bmiap后,Bmp 展开更多
关键词 家蚕 凋亡抑制蛋白 互作蛋白 家蚕核型多角体病毒 BmPP5
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用于细胞水平家蚕转录调控元件研究的简单基础启动子的构建 预览
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作者 顾健健 刘红玲 +7 位作者 李凯荣 孟紫旺 王慧娟 沈关望 张宇靖 阮杨 林英 夏庆友 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期391-397,共7页
【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的... 【目的】本研究致力于构建一种能够在家蚕Bombyx mori细胞水平稳定表达的简单基础启动子,从而更准确地反映单一转录调控元件对基因启动子活性的影响,为研究家蚕乃至其他昆虫的基因转录调控奠定基础。【方法】本研究在本课题组已报道的能在家蚕细胞中稳定表达且基本不含上游转录调控元件的BmVgP78M启动子的基础上,通过PCR技术在其上游添加一定长度的间隔序列和能够应答20-羟基蜕皮激素(20E)且增强启动子活性的BrC-Z2转录因子结合基序(BrC-Z2Element,BrC-Z2E);通过基因克隆技术构建细胞转染载体;通过细胞转染技术和双荧光素酶报告基因系统检测启动子活性的变化。【结果】通过在BmVgP78M启动子上游添加28bp间隔序列,成功构建了一个简单基础启动子,命名为VgP78ML,并证明其为可用于研究目标转录调控元件的简单基础启动子。经实验验证表明,该简单基础启动子不仅可以在家蚕细胞中稳定表达,且其本身活性不受20E及转录因子BrC-Z2的影响;当该启动子上游连接BrC-Z2E时,可以显著地应答20E及BrC-Z2转录因子,从而调控报告基因的表达。【结论】VgP78ML能够作为简单基础启动子应用于细胞水平对家蚕基因转录调控进行研究。同时,其构建方法也为其他物种构建研究转录调控的简单基础启动子提供了参考。 展开更多
关键词 家蚕 细胞 简单基础启动子 双荧光素酶报告基因系统 转录调控 转录元件
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60份家蚕品种资源主要数量性状的遗传多样性分析
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作者 钱荷英 刘明珠 徐安英 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期338-345,共8页
研究家蚕品种资源数量性状的遗传多样性,有利于家蚕新品种选育过程的优良亲本选配及性状改良。以60份家蚕品种资源的11项数量性状调查数据为原始数据,将各项性状的成绩分成10个等级,并分析各性状的分布频率,发现仅有全茧量在10个等级上... 研究家蚕品种资源数量性状的遗传多样性,有利于家蚕新品种选育过程的优良亲本选配及性状改良。以60份家蚕品种资源的11项数量性状调查数据为原始数据,将各项性状的成绩分成10个等级,并分析各性状的分布频率,发现仅有全茧量在10个等级上均有分布,而茧层量、一日孵化率、解舒率和单蛾产卵数量等4个性状在9个等级上有分布,其余6个性状仅在8个等级上有分布。而且这些性状绝大部分的分布频率主要集中在第6~7等级上,呈现出近似的正态分布。变异系数分析显示,在所有性状中幼虫生命率的变异系数最小,其次是良卵率、一日孵化率和全龄经过,死笼率的变异系数最大。Shannon-Weaver多样性指数分析显示,全龄经过的多样性指数最小,而良卵率、死笼率、幼虫生命率及对BmCPV抵抗性的多样性指数次之,一日孵化率、茧层量及全茧量的多样性指数较高,解舒率、单蛾产卵数量及茧层率的多样性指数最高,说明家蚕的这6个数量性状在供试60份品种资源所组成的群体中蕴藏着丰富的遗传多样性信息。使用R语言程序,用Manhattan算法计算各品种间的遗传距离,将60份家蚕品种资源分成4大类群,基本与家蚕品种的地理系统分类相一致,印证了用数量性状研究家蚕种质资源亲缘关系具有一定的可靠性。 展开更多
关键词 家蚕品种资源 数量性状 表型观察值 遗传多样性 聚类分析
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