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细胞内Ca^2+在轮状病毒感染对Caco-2细胞NHE3蛋白调控中的作用
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作者 王鹏 牛美兰 +4 位作者 陈长英 李玲 范媛媛 王世广 孙艺文 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期94-99,共6页
目的研究轮状病毒(rotavirus,RV)感染对Caco-2细胞表面钠-氢(Na^+-H^+)交换蛋白3(NHE3)水平和生物活性的影响及其调控机制。方法构建表达NHE3的Caco-2细胞模型,分为对照组(CTL组)、RV组、细胞内Ca^2+络合剂BAPTA-AM组和BAPTA-AM+RV组,用... 目的研究轮状病毒(rotavirus,RV)感染对Caco-2细胞表面钠-氢(Na^+-H^+)交换蛋白3(NHE3)水平和生物活性的影响及其调控机制。方法构建表达NHE3的Caco-2细胞模型,分为对照组(CTL组)、RV组、细胞内Ca^2+络合剂BAPTA-AM组和BAPTA-AM+RV组,用BCECF-AM法和细胞表面NHE3生物素化法测定Na^+-H^+交换蛋白活性和细胞表面NHE3蛋白水平,Western blot测定细胞Cdc42蛋白水平。结果与CTL组相比,RV感染可引起细胞Na^+-H^+交换蛋白活性以及细胞表面NHE3蛋白水平明显降低,此抑制作用可被BAPTA-AM拮抗,此外RV感染可引起Cdc42蛋白水平升高,这一作用也可被BATPA-AM拮抗。结论RV感染对NHE3蛋白水平及生物活性的调控可能与细胞内Ca^2+介导的Cdc42依赖性内吞途径有关。 展开更多
关键词 轮状病毒 钠-氢交换蛋白3 内吞途径 细胞内CA^2+ Cdc42蛋白 CACO-2细胞
结肠癌Caco-2细胞株无血清培养技术研究 预览
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作者 陈小燕 吴应强 +1 位作者 赵逵 朱蓉 《现代医药卫生》 2019年第2期176-178,共3页
目的探索人结肠癌Caco-2细胞株肿瘤干细胞的分选方法。方法应用无血清悬浮培养法培养Caco-2细胞,产生肿瘤细胞球,并对肿瘤细胞球从形态学、分化、自我更新及交替培养等方面进行鉴定。结果Caco-2细胞在无血清培养基(SFM)中可存活,24h后... 目的探索人结肠癌Caco-2细胞株肿瘤干细胞的分选方法。方法应用无血清悬浮培养法培养Caco-2细胞,产生肿瘤细胞球,并对肿瘤细胞球从形态学、分化、自我更新及交替培养等方面进行鉴定。结果Caco-2细胞在无血清培养基(SFM)中可存活,24h后可产生少量体积较小松散的悬浮肿瘤球,肿瘤球体积随时间延长而增大;将肿瘤球接种于完全培养基中12h后细胞贴壁生长,细胞形态与传统培养形成的单细胞层无明显差异,重新消化贴壁细胞后再次悬于SFM中24~72h后仍可形成悬浮细胞球,其形态与原代相同。结论结肠癌Caco-2细胞在SFM中可生成悬浮肿瘤细胞球,采用无血清悬浮培养法可达到富集肿瘤干细胞的目的。 展开更多
关键词 培养基 无血清 结肠肿瘤 肿瘤干细胞 CACO-2细胞
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木犀草素和异荭草素对Caco-2细胞中α-葡萄糖苷酶及葡萄糖吸收的影响
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作者 王俊博 陈龙浩 +2 位作者 黄涛阳 陈新 蒋琳兰 《中药材》 CAS 北大核心 2019年第2期405-408,共4页
目的:研究木犀草素和异荭草素对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶的抑制作用及对葡萄糖吸收的影响。方法:取对数生长期的Caco-2细胞,分别加入不同浓度的木犀草素和异荭草素孵育,CCK-8法检测细胞的存活率,酶标仪检测α-葡萄糖苷酶抑制率,RT-PCR法... 目的:研究木犀草素和异荭草素对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶的抑制作用及对葡萄糖吸收的影响。方法:取对数生长期的Caco-2细胞,分别加入不同浓度的木犀草素和异荭草素孵育,CCK-8法检测细胞的存活率,酶标仪检测α-葡萄糖苷酶抑制率,RT-PCR法和Western blot法检测Caco-2细胞钠依赖性葡萄糖转运蛋白1(SGLT1)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的mRNA和蛋白表达。结果:100μmol/L木犀草素和异荭草素对α葡萄糖苷酶的抑制作用与阿卡波糖差异无统计学意义(P>0.05);50、100μmol/L木犀草素和100μmol/L异荭草素能显著抑制SGLT1、GLUT2 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论:木犀草素和异荭草素通过抑制Caco-2细胞的α-葡萄糖苷酶和SGLT1、GLUT2的mRNA和蛋白表达来延缓对碳水化合物水解和影响葡萄糖吸收,具有潜在的降血糖作用。在相同浓度下,木犀草素的效果要优于异荭草素。 展开更多
关键词 木犀草素 异荭草素 CACO-2细胞 Α-葡萄糖苷酶 SGLT1 GLUT2
清肠栓对LPS诱导Caco-2细胞损伤的保护作用
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作者 史琲 黄傲霜 +3 位作者 胡鸿毅 郑嘉岗 卞慧 林江 《上海中医药杂志》 2019年第6期69-74,共6页
目的探讨清肠栓(QCS)含药血清对脂多糖(LPS)诱导Caco-2细胞损伤模型的保护作用。方法收集对数生长期细胞,分为5个组,即正常对照组、LPS组,以及QCS低剂量组(2.5%含药血清)、中剂量组(5%含药血清)、高剂量组(10%含药血清)。采用MTT法检测... 目的探讨清肠栓(QCS)含药血清对脂多糖(LPS)诱导Caco-2细胞损伤模型的保护作用。方法收集对数生长期细胞,分为5个组,即正常对照组、LPS组,以及QCS低剂量组(2.5%含药血清)、中剂量组(5%含药血清)、高剂量组(10%含药血清)。采用MTT法检测细胞活力;ELISA法测定培养细胞上清液IL-8、IL-17和PGE2含量,以及MDA、GSH和SOD水平;划痕实验检测细胞体外迁移能力;Western blot技术检测RhoA、Rac1蛋白的表达。结果 QCS能拮抗LPS诱导的Caco-2细胞活性下降;与LPS组比较,QCS可显著减少LPS诱导的IL-8、IL-17和PGE2分泌(P<0.05),并减少LPS诱导的MDA释放,增加GSH和SOD的分泌(P<0.01);划痕实验48 h时QCS组的划痕宽度明显变小,细胞迁移能力增强(P<0.001),划痕的修复加快,且呈浓度依赖性改变;Western blot结果显示,QCS能有效逆转LPS所致RhoA、Rac1蛋白表达的抑制(P<0.05)。结论 QCS含药血清对LPS诱导的Caco-2细胞损伤有保护作用,可通过抑制炎症因子、抗氧化应激和促进结肠上皮细胞迁移来提高Caco-2的生存率。 展开更多
关键词 清肠栓 CACO-2细胞 脂多糖 RHOA RAC1 细胞培养
皮蛋蛋白水提物在肠道系统中的抗炎作用研究 预览
5
作者 赵燕 徐明生 +5 位作者 姚瑶 李建科 王淑珍 汪雄 王小强 涂勇刚 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第6期36-45,共10页
皮蛋是我国独创的一种传统大宗蛋制品,也是一种良好的“清热去火”食品。以“去大肠火”为导向,运用TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症反应模型和DSS诱导的小鼠结肠炎模型考察皮蛋蛋白水提物的体内、外抗肠炎活性。结果表明:皮蛋蛋白水提物(5... 皮蛋是我国独创的一种传统大宗蛋制品,也是一种良好的“清热去火”食品。以“去大肠火”为导向,运用TNF-α诱导的Caco-2细胞炎症反应模型和DSS诱导的小鼠结肠炎模型考察皮蛋蛋白水提物的体内、外抗肠炎活性。结果表明:皮蛋蛋白水提物(5和10mg/mL)显著抑制Caco-2细胞IL-8的分泌,下调促炎细胞因子IL-8、TNF-α、IL-6和IL-1β基因的表达,并上调抗炎因子IL-10基因的表达。皮蛋蛋白水提物(150或300mg/kgBW)可以有效缓解DSS诱导的结肠炎小鼠体重减轻和炎症临床症状,降低促炎细胞因子TNF-α和IL-6的分泌,并下调结肠中促炎细胞因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、MCP-1和IL-17A基因的表达。体内、外试验结果说明皮蛋蛋白水提物具有抗肠炎活性,可有效保护肠道健康。 展开更多
关键词 皮蛋 水提物 抗炎 CACO-2细胞 结肠炎
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柚叶总黄酮对LPS所致Caco-2结肠上皮细胞间高通透性的保护作用 预览
6
作者 宋家乐 钱波 +3 位作者 王程强 曾榛 吴华 高扬 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第2期287-292,299共7页
探讨柚叶总黄酮(PLTFE)对脂多糖(LPS,2μg/m L)诱发Caco-2高通透性细胞模型的保护作用。Caco-2模型细胞以不同浓度的PLTFE(0、10、50、100、150μg/m L)处理培养24 h进行后续实验。MTT法测定细胞生存率,细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrog... 探讨柚叶总黄酮(PLTFE)对脂多糖(LPS,2μg/m L)诱发Caco-2高通透性细胞模型的保护作用。Caco-2模型细胞以不同浓度的PLTFE(0、10、50、100、150μg/m L)处理培养24 h进行后续实验。MTT法测定细胞生存率,细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平依说明书使用试剂盒测定。酶联法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定白介素(interlukin-1β,IL-1β)、IL-8和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌水平。跨上皮细胞电阻(trans epithelial electrical resistance,TEER)值和异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD40)透过度用于评估细胞通透性水平。实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测细胞IL-1β、IL-8、TNF-α、闭锁蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(claudin-1)、封闭小带蛋白(ZO-1)和肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的m RNA表达。结果表明,柚叶总黄酮能显著提高受损细胞生存率至86.1%,抑制受损细胞中LDH的溢出(p <0.05)。同时还能有效抑制受损细胞中炎性细胞因子(IL-1β、IL-8、TNF-α)的分泌及m RNA转录。此外,柚叶总黄酮可增强细胞紧密连接因子(Occludin、claudin-1、ZO-1)的m RNA转录,抑制MLCK的m RNA转录,改善细胞间高通透性q RT-PCR法检测细胞中相关因子的m RNA转录水平。结果提示,柚叶总黄酮具有较强的抗炎活性,能通过上调细胞内细胞紧密连接相关因子的m RNA转录显著改善LPS造成的Caco-2细胞间高通透性的发生(p <0.05)。 展开更多
关键词 柚叶总黄酮 脂多糖 肠上皮 屏障完整性 Caco-2细胞
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白及有效部位中主要成分在Caco-2细胞中的吸收特性研究
7
作者 杨淑婷 潘洁 +4 位作者 陆苑 梅朝叶 刘亭 黄勇 王永林 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期167-174,共8页
为研究白及有效部位中主要成分在Caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明白及有效部位的口服吸收机制。该实验采用Caco-2细胞单层细胞吸收模型,通过UPLC-Q-TOF分析白及有效部位在Caco-2细胞中的摄取成分,并建立UPLC-TQD分析方法测定白及有效... 为研究白及有效部位中主要成分在Caco-2细胞中的吸收特性,初步阐明白及有效部位的口服吸收机制。该实验采用Caco-2细胞单层细胞吸收模型,通过UPLC-Q-TOF分析白及有效部位在Caco-2细胞中的摄取成分,并建立UPLC-TQD分析方法测定白及有效部位主要成分在Caco-2细胞中的含量,分别考察时间、浓度、pH和P-gp抑制剂对各成分的吸收影响。经过UPLC-Q-TOF指认白及有效部位中的主要成分B6,B12,B14,B17,B19,B23,研究发现该6个成分能够摄取进入Caco-2细胞中,并且在Caco-2细胞中的吸收呈现浓度依赖性。其中B12,B14的吸收在0~180 min为上升趋势,未呈现饱和,B6,B17,B19,B23在60 min后吸收趋于饱和;各成分在偏酸性或酸性条件下吸收较好,其中B6在pH 6.0环境中吸收较好,其余成分B12,B14,B17,B19,B23在pH 4.0环境中吸收较好;且加入维拉帕米P-gp抑制剂后和空白相比,B6,B12的吸收无差异,而B14,B17,B19,B23的Caco-2细胞摄取量增加,但无显著性差异,说明B6等6个成分的摄取过程中没有P-gp的参与,即B6等6个成分不是P-gp底物。由此结果可知白及有效部位主要成分进入Caco-2细胞以被动扩散为主,且吸收过程不受P-糖蛋白的外排作用影响。 展开更多
关键词 白及 CACO-2细胞 UPLC-Q-TOF UPLC-TQD 被动扩散 P-GP
副干酪乳杆菌L1的安全性及益生性评价 预览
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作者 田原 季子非 +3 位作者 郭浩南 冯琳琳 许云贺 张莉力 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第12期120-127,共8页
副干酪乳杆菌L1是分离于自然发酵甘薯酸浆中的优势乳酸菌,进行安全性和益生性评价。本实验通过耐药性实验、有害代谢产物实验及动物实验来评价副干酪乳杆菌L1的安全性,通过对外界环境耐受性及生理功能特性实验,评价该株菌的益生性。结... 副干酪乳杆菌L1是分离于自然发酵甘薯酸浆中的优势乳酸菌,进行安全性和益生性评价。本实验通过耐药性实验、有害代谢产物实验及动物实验来评价副干酪乳杆菌L1的安全性,通过对外界环境耐受性及生理功能特性实验,评价该株菌的益生性。结果表明,常见的8种抗生素中该菌对红霉素和阿奇霉素表现为抗性,对青霉素表现为敏感,其他均不敏感且不含质粒;有害代谢产物检测结果均为阴性,也不会产生溶血现象;小鼠在7 d和30 d喂养期间一切生命活动正常,说明该菌不会引起急性毒性和亚慢性毒性;在酸性和胆盐环境下L1的总体活菌数始终在107 CFU/mL以上,高盐环境下,L1的总体活菌数始终在1010 CFU/mL以上;L1孵育1 h的自聚集性为15.8%±1.2%,L1的疏水性为9.7%±0.8%;对Caco-2细胞黏附率为22.37%±1.44%。由此可知,副干酪乳杆菌L1具有良好的安全性和益生性,为生产安全健康的地瓜淀粉絮凝剂奠定基础并且为实际生产应用提供科学依据。 展开更多
关键词 副干酪乳杆菌L1 动物实验 安全性 益生性 CACO-2细胞
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玉米蛋白水解物对Caco-2细胞的抗氧化作用研究
9
作者 马瑞 刘晓兰 +1 位作者 刘祥 林巍 《食品工业》 CAS 北大核心 2019年第4期180-183,共4页
试验以挤压膨化蒸煮后的玉米蛋白粉为原料,经双酶(复合蛋白酶-碱性蛋白酶)顺次水解后,得到抗氧化活性良好的玉米蛋白水解物;模拟体外胃肠消化情况,分析其经胃蛋白酶和胰蛋白酶作用后消化液的抗氧化活性变化。结果表明,经胃肠消化后,抗... 试验以挤压膨化蒸煮后的玉米蛋白粉为原料,经双酶(复合蛋白酶-碱性蛋白酶)顺次水解后,得到抗氧化活性良好的玉米蛋白水解物;模拟体外胃肠消化情况,分析其经胃蛋白酶和胰蛋白酶作用后消化液的抗氧化活性变化。结果表明,经胃肠消化后,抗氧化活性明显增强,亚铁离子螯合能力提高81.52%,·DPPH自由基清除率提高12.63%;将玉米蛋白水解物直接作用Caco-2细胞,通过200μmol/L H2O2作用细胞4 h,研究作用后细胞内的ROS含量。试验结果表明, Caco-2细胞经玉米蛋白水解物作用150 min后,细胞内活性氧含量均降低,当玉米蛋白水解物蛋白浓度为5μg/mL时,细胞内ROS荧光值从32 235降低到11 168.5,明显清除了细胞内ROS含量。 展开更多
关键词 玉米蛋白水解物 胃肠消化 CACO-2细胞 活性氧(ROS) 保护作用
不同培养基条件下黄芪和附子及其配伍对Caco-2细胞毒性的影响
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作者 季苗苗 蔣且英 +3 位作者 梁新丽 黄国勇 孔小强 廖正根 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期261-264,共4页
目的观察培养条件对MTT法评价细胞毒性结果的影响,同时观察黄芪、附子及其配伍对细胞活性的影响。方法取对数生长期的Caco-2细胞接种于96孔板,待细胞生长稳定后,分别采用完全培养基和DMEM培养基培养,以MTT法考察黄芪、附子及其配伍在不... 目的观察培养条件对MTT法评价细胞毒性结果的影响,同时观察黄芪、附子及其配伍对细胞活性的影响。方法取对数生长期的Caco-2细胞接种于96孔板,待细胞生长稳定后,分别采用完全培养基和DMEM培养基培养,以MTT法考察黄芪、附子及其配伍在不同给药时间下对Caco-2细胞毒性的影响。结果在完全培养基条件下,黄芪、附子及其配伍对细胞毒性的影响呈现出剂量依赖性关系,而在DMEM培养基的条件下黄芪和附子对细胞毒性影响不规律;与单独使用附子相比,黄芪-附子配伍能显著提高细胞存活率。结论完全培养基条件下MTT法能较好的反映药物对细胞毒性的影响;黄芪能降低附子的毒性。 展开更多
关键词 黄芪 附子 CACO-2细胞 MTT法
富硒长双歧杆菌DD98菌株的黏附特性及黏附机制初步研究 预览
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作者 周艳 祁艳 +2 位作者 纪瑞 谭俊 陈代杰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第13期84-88,共5页
利用Caco-2细胞作为体外黏附模型,通过细菌黏附率评价一株新的长双歧杆菌菌株DD98(Bifidobacterium longum DD98,DD98)富硒前后的黏附能力,测定细菌自动聚集能力与表面疏水性,采用荧光定量PCR技术检测细菌表面Tuf蛋白mRNA表达量差异。... 利用Caco-2细胞作为体外黏附模型,通过细菌黏附率评价一株新的长双歧杆菌菌株DD98(Bifidobacterium longum DD98,DD98)富硒前后的黏附能力,测定细菌自动聚集能力与表面疏水性,采用荧光定量PCR技术检测细菌表面Tuf蛋白mRNA表达量差异。结果表明,与DD98相比,富硒DD98(Selenium-enriched Bifidobacterium longum DD98,Se-DD98)黏附于Caco-2细胞的数量从(39.12±17.57)CFU/100cells上升到(581.17±62.79)CFU/100cells,Se-DD98对Caco-2细胞的黏附能力极显著升高(p<0.01)。相比DD98,Se-DD98自动聚集能力略有上升,且其表面疏水性从5.12%±0.16%上升到20.25%±2.14%,极显著性升高(p<0.01);荧光定量PCR结果表明,与Caco-2细胞共孵育2h后,Se-DD98菌体表面Tuf黏附蛋白表达显著上调(p<0.05)。表明DD98经富硒培养后,黏附能力显著提升,其黏附能力的增强可能与细菌表面Tuf黏附蛋白的改变有关。 展开更多
关键词 富硒长双歧杆菌DD98 CACO-2细胞 黏附 Tuf蛋白
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羊栖菜组分多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用 预览
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作者 丁浩淼 孙弢 +5 位作者 夏彭奎 汤倩 王忠华 汪财生 陈海敏 钱国英 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期297-304,共8页
为高效利用羊栖菜组分多糖(SFPSⅠ),以SFPSⅠ为原料,α-葡萄糖苷酶作为靶标,研究SFPSⅠ对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其结构的影响,建立具有α-葡萄糖苷酶活性的Caco-2细胞模型,并对Caco-2细胞模型上α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果进行研... 为高效利用羊栖菜组分多糖(SFPSⅠ),以SFPSⅠ为原料,α-葡萄糖苷酶作为靶标,研究SFPSⅠ对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其结构的影响,建立具有α-葡萄糖苷酶活性的Caco-2细胞模型,并对Caco-2细胞模型上α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果进行研究。结果表明,SFPSⅠ对α-葡萄糖苷酶有明显的抑制作用,使得α-葡萄糖苷酶活力下降一半时的抑制剂浓度,即半抑制(IC50)为0.31 mg·mL^-1。SFPSⅠ对α-葡萄糖苷酶的抑制作用是一个可逆过程,抑制类型为混合型抑制。动力学分析结果表明,SFPSⅠ对α-葡萄糖苷酶的抑制常数(Ki)为0.143μmol·L^-1。荧光测定结果表明,SFPSⅠ结合会引起α-葡萄糖苷酶三级结构的明显变化。随着SFPSⅠ浓度的升高,其对Caco-2细胞模型上α-葡萄糖苷酶抑制效果越好。本研究结果为进一步探讨和设计新型α-葡萄糖苷酶抑制剂奠定了科学基础,同时也为开发具有降血糖功能的功能性药品与保健品提供了新资源。 展开更多
关键词 羊栖菜 组分多糖 Α-葡萄糖苷酶 抑制动力学 荧光分析 CACO-2细胞
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Caco-2/EAhy926细胞串联复合模型用于Fe3O4纳米粒跨膜转运机制的研究
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作者 杨岸蒲 卫备 +6 位作者 宋佳芳 郭相孚 成羽溪 何冰 张华 王学清 张强 《中国药学:英文版》 CAS CSCD 2018年第7期478-489,共12页
为了模拟肠道小肠上皮-血管屏障,我们建立了一个基于肠道生理结构的Caco-2/EAhy926串联复合模型。基于此模型,我们对纳米粒的跨膜转运进行了研究,并且与传统小肠上皮细胞模型做了比较。本研究中,使用粒径为30 nm左右的Fe3O4纳米粒作为... 为了模拟肠道小肠上皮-血管屏障,我们建立了一个基于肠道生理结构的Caco-2/EAhy926串联复合模型。基于此模型,我们对纳米粒的跨膜转运进行了研究,并且与传统小肠上皮细胞模型做了比较。本研究中,使用粒径为30 nm左右的Fe3O4纳米粒作为模式制剂开展研究,它有着均匀的粒径分布和很好的单分散性。在孵育浓度下,此制剂对Caco-2细胞和EAhy926细胞几乎没有毒性。Caco-2/EAhy926串联复合模型是通过将Caco-2细胞单层和EAhy926细胞单层连接建立的。基于FD4渗透和跨膜电阻(TEER)的研究表明,在一定的培养时间范围内,所有的细胞模型都能保持完整。使用Claudin-4和VE Cadherin,验证了紧密连接的存在。F-actin微丝蛋白的完整性表明了存在着良好的细胞内连接。研究表明,与Caco-2模型和EAhy926模型相比,串联模型对FD4和Fe3O4纳米粒的转运造成了更大的阻碍。并且发现,EAhy926细胞单层有着很好的渗透性,串联模型对纳米材料的阻碍主要是由于Caco-2细胞单层。总的来说,此串联复合模型使我们能够同时对纳米粒在小肠上皮层和内皮层的转运进行评价,提供了一个研究小肠生物-纳米相互作用的好方法。 展开更多
关键词 CACO-2细胞 EAhy926细胞 串联细胞模型 四氧化三铁纳米粒 跨膜转运 转运机制
乳杆菌微小膜蛋白对肠上皮细胞Caco-2的细胞毒性研究
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作者 屈潇 尹明明 +2 位作者 沈通一 严雪冰 秦环龙 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2018年第7期745-749,共5页
目的利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激模拟体外炎症环境,观察不同浓度下乳杆菌微小膜蛋白(micro integral membrane protein,MIMP)对肠上皮细胞Caco-2的生物学影响,评估其细胞毒性作用。方法首先通过CCK-8实验检测在LPS刺激... 目的利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激模拟体外炎症环境,观察不同浓度下乳杆菌微小膜蛋白(micro integral membrane protein,MIMP)对肠上皮细胞Caco-2的生物学影响,评估其细胞毒性作用。方法首先通过CCK-8实验检测在LPS刺激后不同浓度MIMP(0.01、0.1和1ng/mL)对Caco-2细胞增殖活性的影响,并利用Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抑制剂作为阳性对照。其次利用流式细胞术检测不同浓度下MIMP对Caco-2细胞凋亡及细胞周期的影响。结果在12h的特定孵育时间内,单独应用不同浓度MIMP及TLR4抑制剂对Caco-2细胞增殖活性无显著影响(P〉0.05),但是MIMP可以拮抗LPS对Caco-2细胞的促增殖作用(P〈0.05)。不同浓度的MIMP对Caco-2细胞的周期和凋亡无明显影响(P〉0.05)。结论不同浓度MIMP对Caco-2细胞的增殖、凋亡及细胞周期无明显影响,并可以拮抗LPS的促细胞增殖作用,因此具有较高的安全性,有望用于炎症性肠病的治疗。 展开更多
关键词 脂多糖 微小膜蛋白 CACO-2细胞 炎症性肠病 肠道细胞功能
益生菌对非酒精性脂肪肝相关细胞的作用 预览
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作者 王斌 蔡敏 +3 位作者 黄玲 姜子廷 童敏思 李力 《药学实践杂志》 CAS 2018年第5期409-416,共8页
目的探讨益生菌对非酒精性脂肪肝相关的肠上皮细胞、肝Kupper细胞和肝实质细胞的作用及其作用机制。方法将人肠上皮细胞Caco-2、大鼠肝Kupper细胞和小鼠肝实质细胞AML12分别分成空白对照组、脂多糖(LPS)组、嗜酸乳杆菌组、LPS+嗜酸... 目的探讨益生菌对非酒精性脂肪肝相关的肠上皮细胞、肝Kupper细胞和肝实质细胞的作用及其作用机制。方法将人肠上皮细胞Caco-2、大鼠肝Kupper细胞和小鼠肝实质细胞AML12分别分成空白对照组、脂多糖(LPS)组、嗜酸乳杆菌组、LPS+嗜酸乳杆菌组、粪肠球菌组、LPS+粪肠球菌组、双歧杆菌组、LPS+双歧杆菌组,孵育培养6h。分别检测人肠上皮细胞Caco-2紧密连接相关因子表达情况及细胞通透性、大鼠肝Kupper细胞功能表型相关因子和IκB及p-IκB变化水平、小鼠肝实质细胞AML12脂代谢基因水平和脂类吸收情况。结果益生菌可显著抑制由LPS刺激引起的人肠上皮细胞Caco-2紧密连接相关因子Occludin、Claudin-1、JAM、ZO-1表达的下降和细胞通透性的增加;明显抑制LPS刺激引起的大鼠肝Kupper细胞表达TNF-α、IFN-γ和IL-6的增加,同时抑制IL-4、IL-10、IL-13的降低和p-IκB蛋白表达的增加;显著抑制由LPS刺激引起的小鼠肝实质细胞AML12脂代谢基因ACACA、SREBF1、FAS、FABP3、FABP4、DGAT1的上调和脂类吸收的增加。结论益生菌可以通过促进肠上皮细胞紧密连接相关因子的表达,降低细胞通透性,抑制肝Kupper细胞NF-κB通路活性,降低促炎性细胞因子、增加抑炎性细胞因子表达水平,抑制肝实质细胞脂代谢基因表达和脂类吸收等多种途径,保护非酒精性脂肪肝。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪肝 益生菌 Caco-2细胞 细胞通透性 KUPFFER细胞 p-IκB AML12细胞 脂类吸收
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3种纳米氧化锌对不同分化状态Caco-2细胞的毒性作用研究
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作者 熊雾 梁春来 +1 位作者 于洲 徐海滨 《毒理学杂志》 CSCD 2018年第2期87-92,共6页
目的探讨不同粒径纳米氧化锌(Zn O)对不同分化状态人结肠腺癌细胞(Caco-2)的毒性作用。方法将Caco-2细胞接种于96孔板培养24 h(未分化细胞)或21 d(分化细胞),选用3种尺寸纳米氧化锌,分别为Zn O-20(25.3±5.8 nm)、Zn O-L... 目的探讨不同粒径纳米氧化锌(Zn O)对不同分化状态人结肠腺癌细胞(Caco-2)的毒性作用。方法将Caco-2细胞接种于96孔板培养24 h(未分化细胞)或21 d(分化细胞),选用3种尺寸纳米氧化锌,分别为Zn O-20(25.3±5.8 nm)、Zn O-L(25.6±5.7 nm)和Zn O-100(96.7±42.7 nm),设置不同的剂量(6.25、12.5、25、50和100μg/ml)与未分化或分化的Caco-2细胞共培养24、48或72 h后,采用CCK-8法检测细胞活性,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率以及碱性磷酸酶(ALP)活性。结果浓度为100μg/ml处理72 h,3种纳米氧化锌可使未分化细胞活性分别下降81.3%、68.1%和55.1%,分化细胞活性分别下降69.3%、55.1%和49.0%,染毒24 h,在50μg/ml的浓度条件下LDH释放率分别升高至70.6%、68.4%和54.7%,影响细胞膜结构的完整性。并且对ALP表达均有抑制作用,上述作用均存在剂量反应关系。纳米氧化锌粒径越小毒性越大,毒性强弱顺序为Zn O-20〉Zn O-L〉Zn O-100,粒径相近时,毒性仍有差别,可能与颗粒的形状等其他性质有关。此外,对于同一种纳米材料毒性作用,未分化细胞的敏感性较分化细胞强。结论纳米氧化锌对Caco-2细胞的毒性作用与其粒径、形状等理化性质以及细胞分化状态均相关。 展开更多
关键词 纳米氧化锌 CACO-2细胞 细胞毒性
穿心莲内酯总磺化物在细胞模型上的转运研究
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作者 何雯 马正 +1 位作者 金方 朱华 《中国药学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期531-537,共7页
目的 建立穿心莲内酯总磺化物反相高效液相色谱含量测定方法,研究其注射液中2种主要成分在calu-3和Caco-2细胞模型上的转运情况,评价将其应用于肺部给药和口服给药的安全性和有效性。方法 细胞毒性实验筛选安全给药浓度。安全浓度以内... 目的 建立穿心莲内酯总磺化物反相高效液相色谱含量测定方法,研究其注射液中2种主要成分在calu-3和Caco-2细胞模型上的转运情况,评价将其应用于肺部给药和口服给药的安全性和有效性。方法 细胞毒性实验筛选安全给药浓度。安全浓度以内的穿心莲内酯总磺化物注射液作用于Calu-3和Caco-2细胞模型,一定时间内取样,高效液相色谱法测定,考察浓度及时间对转运的影响,测定其主成分的表观渗透系数。结果 药物浓度小于500 μg·mL-1时,Calu-3和Caco-2细胞存活率接近100%。建立的细胞模型显示出优良的紧密性和完整性。在Calu-3细胞模型上,17-氢-9-去氢穿心莲内酯-19-硫酸酯钠和17-氢-9-去氢穿心莲内酯双侧转运表观渗透系数均为1×10-5数量级,在Caco-2细胞模型上,均为1×10-6数量级。在2种细胞模型上,其外排比均小于2。结论 穿心莲内酯总磺化物注射液主成分不是P糖蛋白的底物,在胃肠道中具有中等吸收,在呼吸道吸收良好,即肺部给药安全性和有效性更佳。 展开更多
关键词 穿心莲内酯总磺化物 高效液相色谱法 calu-3细胞 CACO-2细胞 转运
小檗碱对内毒素刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用 预览 被引量:1
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作者 李鑫 王洪岩 +1 位作者 迟程 徐有青 《实用肝脏病杂志》 CAS 2018年第1期34-37,共4页
目的探讨小檗碱(BBR)对脂多糖(LPS)刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用。方法体外培养肠上皮细胞Caco-2,分为四组:①对照组(培养基);@LPS组(培养基+LPS2μg/m1);③BBR组(培养基+BBR10μM);@BBR/LPS组(培养基+L... 目的探讨小檗碱(BBR)对脂多糖(LPS)刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用。方法体外培养肠上皮细胞Caco-2,分为四组:①对照组(培养基);@LPS组(培养基+LPS2μg/m1);③BBR组(培养基+BBR10μM);@BBR/LPS组(培养基+LPS2μg/ml+BBR10μM)。在倒置显微镜下直接观察细胞生长形态,采用荧光黄透过率检测细胞间通透性,采用Western—blot法检测细胞间紧密连接主要结构蛋白occludin、细胞膜Toll样受体-4(TLR4)表达,采用免疫荧光法检测细胞TLR4下游分子MyD88表达。结果在倒置显微镜下可见对照组和BBR组细胞连接完整,LPS组细胞间出现锯齿样断裂,但在BBR/LPS组细胞间连接毛糙,但无明显片状中断;对照组和BBR组荧光黄透过浓度分别为(683.3±98.9)μg/ml和(849.0±89.7)μg/rob以及细胞occludin、TLR4和MyD88蛋白表达差异均无统计学意义(p〉0.05);与对照组比,LPS组透过荧光黄浓度(1886±176.0μg/m1)显著增加,TLR4蛋白表达增加,occludin表达减少,胞浆MyD88荧光信号增强;与LPS组比,BBR/LPS组透过荧光黄浓度(1071.0±65.9μg/m1)显著下降,TLR4蛋白表达减弱,occludin表达增加,胞浆MyD88荧光信号减弱。结论BBR通过减弱TLR4/MyD88活性,增加occludin表达,进而减轻LPS刺激致Caco-2细胞间高通透性。 展开更多
关键词 CACO-2细胞 小檗碱 内毒素 紧密连接
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柑橘黄烷酮对β-胡萝卜素胶束化的影响 预览
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作者 聂梅梅 张钟元 +3 位作者 刘春泉 李大婧 王晓燕 黄午阳 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2018年第23期31-36,共6页
采用体外消化法结合细胞吸收模型,以胶束化率为指标,研究了4种柑橘黄烷酮对β-胡萝卜素胶束化的影响。结果表明,β-胡萝卜素的胶束化率随胆盐浓度升高而增加,当胆盐浓度为15 mmol/L时,添加卵磷脂能显著增加β-胡萝卜素胶束化率(p <0.... 采用体外消化法结合细胞吸收模型,以胶束化率为指标,研究了4种柑橘黄烷酮对β-胡萝卜素胶束化的影响。结果表明,β-胡萝卜素的胶束化率随胆盐浓度升高而增加,当胆盐浓度为15 mmol/L时,添加卵磷脂能显著增加β-胡萝卜素胶束化率(p <0.05)。橙皮苷对β-胡萝卜素胶束化的促进作用显著(p <0.05),橙皮素、柚皮素次之,柚皮苷作用不显著(p> 0.05)。4种柑橘黄烷酮增加了β-胡萝卜素胶束极性,降低了胶束颗粒粒径,提高了胶束稳定性。在调控β-胡萝卜素的生物可利用率和细胞吸收方面,橙皮苷显著提高β-胡萝卜素的生物可利用率(p <0.05),橙皮苷、橙皮素、柚皮素均显著促进β-胡萝卜素的细胞吸收(p <0.05),而柚皮苷对β-胡萝卜素的细胞吸收促进作用不显著(p> 0.05)。由此可见,类黄酮的加入会提高β-胡萝卜素的生物利用率。 展开更多
关键词 柑橘黄烷酮 Β-胡萝卜素 胶束化 体外消化 CACO-2细胞 生物利用率
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不同浓度葛根芩连水煎液对Caco-2细胞P-糖蛋白及多药耐药蛋白转运体表达的影响 被引量:1
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作者 李雪莲 王嘉馨 +3 位作者 王静 李森 董月柳 董玲 《中国中药杂志》 CSCD 北大核心 2018年第15期3135-3139,共5页
为了检测葛根芩连水煎液对人结肠腺癌上皮细胞Caco-2 P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药蛋白(multi-drug resistanceprotein,MRP)mRNA表达的影响,将不同浓度的葛根芩连水煎液作用于Caco-2细胞,采用Real-time PCR检测不同浓... 为了检测葛根芩连水煎液对人结肠腺癌上皮细胞Caco-2 P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药蛋白(multi-drug resistanceprotein,MRP)mRNA表达的影响,将不同浓度的葛根芩连水煎液作用于Caco-2细胞,采用Real-time PCR检测不同浓度葛根芩连水煎液对Caco-2细胞P-糖蛋白及多药耐药蛋白转运体MDR1及MRP1-6 mRNA的表达量。药液作用12 h后,当质量浓度为5.00 g·L^-1时,可显著下调MDR1和MRP1-6的表达;2.50 g·L^-1时,可显著下调MDR1,MRP1,MRP2,MRP4,MRP5和MRP6 mRNA的表达;1.00 g·L^-1时,仅对MRP2和MRP5 mRNA的表达有显著性影响。结果证明,葛根芩连水煎液可以显著下调Caco-2细胞MDR1及MRP1-6 mRNA表达,且有浓度依赖性。葛根芩连汤可能通过下调Caco-2细胞转运蛋白的mRNA的表达而降低药物外排,增加药物作用时间,从而增大化疗药物的生物利用度。 展开更多
关键词 Caco-2细胞 葛根芩连汤 荧光定量聚合酶链反应 P-糖蛋白 多药耐药蛋白
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