期刊文献+
共找到32篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
白蜡虫far3基因cDNA全长克隆、原核表达和酶活分析 预览
1
作者 赵遵岭 王雪庆 杨璞 《四川动物》 北大核心 2019年第2期149-156,共8页
脂酰辅酶A还原酶(FAR)可将脂酰辅酶A还原为相应的脂肪醇,在白蜡生物合成中起至关重要的作用。本研究通过cDNA末端快速扩增技术获得白蜡虫Ericerus pela far3基因cDNA全长,其开放阅读框(ORF)1 566 bp。对白蜡虫FAR3编码蛋白进行系统发育... 脂酰辅酶A还原酶(FAR)可将脂酰辅酶A还原为相应的脂肪醇,在白蜡生物合成中起至关重要的作用。本研究通过cDNA末端快速扩增技术获得白蜡虫Ericerus pela far3基因cDNA全长,其开放阅读框(ORF)1 566 bp。对白蜡虫FAR3编码蛋白进行系统发育分析,发现FAR3与人类Homo sapiens、小鼠Mus musculus、黑腹果蝇Drosophila melanogaster等物种的FAR聚为一支;成功构建pET-30a eGFP/EpelFAR3原核表达质粒,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21感受态细胞,在浓度为0.05 mmol·L^-1的异丙基硫代半乳糖苷诱导6 h后有较高的蛋白表达量;经Western blot验证,表达蛋白分子量与预估蛋白分子量符合;质谱分析蛋白质分值为3 900,肽段覆盖度74%,所得肽段与理论序列相符;利用底物C24脂酰辅酶A、C26脂酰辅酶A、C28脂酰辅酶A和C30脂酰辅酶A对原核表达蛋白进行活性分析,利用气相色谱进行蛋白活性验证,没有理论产物相应脂肪醇的生成。本研究中白蜡虫far3 cDNA ORF的获得及原核表达的实现,为进一步的功能和组织表达定位研究奠定了基础。 展开更多
关键词 白蜡虫 脂酰辅酶A还原酶 CDNA末端快速扩增技术 原核表达 酶活分析
在线阅读 免费下载
桃蛀螟基因的全长序列克隆、分子结构及系统发育分析 预览
2
作者 朱秀云 徐鹿 +3 位作者 王志强 陈耕 李进步 张亚楠 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第20期50-53,75共5页
气味结合蛋白( odorant binding protein,简称0 BP)能结合进入到触角内的脂溶性气味物质进行并运送到感 受神经元受体部位,被认为是昆虫嗅觉的第1 个生化步骤,其中性信息素结合蛋白(pheromone binding protein,简称 PBP)属于0 BP家... 气味结合蛋白( odorant binding protein,简称0 BP)能结合进入到触角内的脂溶性气味物质进行并运送到感 受神经元受体部位,被认为是昆虫嗅觉的第1 个生化步骤,其中性信息素结合蛋白(pheromone binding protein,简称 PBP)属于0 BP家族.利用cDNA末端快速扩增技术(rapid-amplification of cDNAends,简称RACE)在已有报道桃蛀 螟 CplmPSP2片段的基础上,设计特异性扩增引物获得该基因的全长CDNA序列.序列分析表明,基因具 有昆虫OBP典型特征,即6 个保守的半胱氨酸位点和信号肽序列.同源比对结果发现,CplmPSP2的氨基酸序列与其 他鳞翅目昆虫PBP2均具有较高的相似性.进一步进化分析结果表明, Cprn PSP能聚在鳞翅目昆虫PBP/GOBP超家 族内.本研究结果为进一步分析桃蛀螟PBP2的生理功能奠定了分子基础. 展开更多
关键词 桃蛀螟 基因 气味结合蛋白 性信息素结合蛋白 CDNA末端快速扩增技术 全长克隆 系统发育分析
在线阅读 下载PDF
普通小麦显性Kr1和隐性kr1基因的分子结构差异 预览 被引量:1
3
作者 蔡华 赵维萍 +3 位作者 许柱 江伟 姚运涛 赵怡然 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期841-849,共9页
Kr1基因是小麦远缘杂交不亲和的主效基因。为探究Kr1基因的特性,根据已公布的Kr1基因c DNA部分序列,采用染色体步移(Genome Walking)和c DNA末端快速扩增技术(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆小麦显性Kr1基因和隐性kr... Kr1基因是小麦远缘杂交不亲和的主效基因。为探究Kr1基因的特性,根据已公布的Kr1基因c DNA部分序列,采用染色体步移(Genome Walking)和c DNA末端快速扩增技术(rapid amplification of c DNA ends,RACE)克隆小麦显性Kr1基因和隐性kr1基因,并进行序列分析。结果表明,小麦Kr1基因全长4 006 bp,含有4个外显子和3个内含子,ORF全长1 671 bp,编码557个氨基酸,可形成一条完整肽链,有基因活性,Kr1蛋白三级结构与植物S位点受体激酶具有较高的相似性。kr1基因全长3 945bp,第3、第4外显子中因含有大量终止密码子,不能通读,表明kr1基因无基因活性。同时对小麦×黑麦、小麦×球茎大麦、小麦×玉米等不同远缘杂交系统的亲和性差异进行探讨,认为Kr1基因在小麦×玉米中失活可能与玉米转座子的插入有关。本研究结果为进一步阐明Kr1基因的功能及其作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 Kr1基因 远缘杂交不亲和 染色体步移 CDNA末端快速扩增技术
在线阅读 免费下载
红鳍东方鲀gsdf基因的克隆及表达模式分析 预览 被引量:1
4
作者 闫红伟 田雨顺 +4 位作者 姜丽楠 王连顺 刘洋 刘奇 刘圣聪 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期140-146,共7页
为研究红鳍东方纯Takifugu rubripes的性别决定因子(gonadal soma derivedfactor,GSDF),利用cD-NA末端快速扩增技术(RACE)首次克隆了红鳍东方纯舻妒基因(Trgsdf)的cDNA全长序列(GenBank登陆号:KR914667)。结果表明:Trgsdfc... 为研究红鳍东方纯Takifugu rubripes的性别决定因子(gonadal soma derivedfactor,GSDF),利用cD-NA末端快速扩增技术(RACE)首次克隆了红鳍东方纯舻妒基因(Trgsdf)的cDNA全长序列(GenBank登陆号:KR914667)。结果表明:TrgsdfcDNA序列全长为1734bp,其中5’端非编码区144bp,开放阅读框648bp,3’端非编码区942bp,共编码215个氨基酸;预测的氨基酸序列中存在1个长度为19个氨基酸的信号肽和相同长度的跨膜区,1个N-糖基化位点NST,1个TGF-β家族成员特有的保守结构域;BLAST同源性分析结果显示,红鳍东方纯GSDF氨基酸序列与其他鱼类的相似性为26%~58%;系统发育分析结果显示,鱼类GSDF单独聚为一支,与TGF-β超家族内的其他成员分开,红鳍东方纯与青鳐Oryzias latipes GSDF的亲缘关系最近,先聚为一支,后与三斑海猪鱼Halichoeres trimaculatus聚在一起,与矛尾鱼Latimeria menadoensi5的GSDF亲缘关系最远:应用RT-PCR技术检测TrgsdfmRNA在雌性和雄性红鳍东方纯成鱼不同组织中的表达,结果显示,TrgsdfmRNA在卵巢和精巢中高表达,在皮肤和肌肉组织中微量表达,在其他组织中无表达:采用相对实时荧光定量PCR方法比较了成鱼卵巢和精巢中TrgsdfmRNA的表达量,结果显示,TrgsdfmRNA在精巢中的表达量显著高于卵巢(P〈0.05),约为卵巢表达量的6倍。研究表明,鲈妒基因可能在红鳍东方纯的性腺尤其是精巢的分化和发育过程中起着重要的作用。 展开更多
关键词 红鳍东方鲀 性别决定因子 CDNA末端快速扩增技术 实时荧光定量PCR 基因表达
在线阅读 下载PDF
高丛蓝莓类黄酮3′-羟化酶基因F3′H的克隆及表达特性分析 被引量:2
5
作者 李艳芳 张凌云 《生命科学研究》 CAS CSCD 2015年第4期303-309,共7页
以高丛蓝莓(Highbush blueberry)"喜来(Sierra)"和"日出(Sunrise)"为研究材料,通过RACE(rapid amplification of c DNA end,RACE)技术获得蓝莓(Vaccinium ssp.)F3′H基因的全长c DNA序列,并使用生物信息学工具对该基因编... 以高丛蓝莓(Highbush blueberry)"喜来(Sierra)"和"日出(Sunrise)"为研究材料,通过RACE(rapid amplification of c DNA end,RACE)技术获得蓝莓(Vaccinium ssp.)F3′H基因的全长c DNA序列,并使用生物信息学工具对该基因编码蛋白的氨基酸组成及理化性质、二级和三级结构,以及氨基酸序列的相似性等进行了预测和分析。利用荧光定量PCR(RT-q PCR)手段来检测其在蓝莓果实不同发育时期表达情况。结果表明:Vs F3′H全长c DNA为1 871 bp,编码530个氨基酸,蛋白相对分子质量为58.33 k D,理论p I值为7.32;蛋白疏水性指数为0.004,属于疏水性蛋白,二三级结构预测可知其富含α-螺旋和无规则卷曲。RT-q PCR发现Vs F3′H主要在果实发育前期表达量较高,蓝果期表达量明显下调,且在不同品种中以蓝果期的表达量差异显著。这些研究结果为解析蓝莓果实色泽发育及果树分子育种奠定了理论基础。 展开更多
关键词 蓝莓 类黄酮3′-羟化酶 CDNA末端快速扩增技术 生物信息学 组织表达
大乳头水螅RACE cDNA文库的构建
6
作者 赵凤霞 杨好强 +1 位作者 钱小成 潘红春 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第4期647-650,共4页
目的:为筛选和克隆大乳头水螅发育调控相关基因的全长cDNA,构建大乳头水螅RACE cDNA文库。方法:提取大乳头水螅总RNA后从其中分离mRNA,运用SMART技术构建RACE cDNA文库。为鉴定所构建文库的质量,根据GenBank中大乳头水螅actin基因cDN... 目的:为筛选和克隆大乳头水螅发育调控相关基因的全长cDNA,构建大乳头水螅RACE cDNA文库。方法:提取大乳头水螅总RNA后从其中分离mRNA,运用SMART技术构建RACE cDNA文库。为鉴定所构建文库的质量,根据GenBank中大乳头水螅actin基因cDNA序列设计5'RACE和3'RACE的引物及用于扩增actin基因编码区全长序列的引物。结果:琼脂糖凝胶电泳结果表明,RACE cDNA文库中全长cDNA的长度集中在500-2 000 bp之间。5'RACE、3'RACE PCR及扩增actin基因编码区全长序列时均以本文构建的大乳头水螅RACE cDNA文库为模板,这3个PCR反应均能扩增出产物,产物大小与目标片段预计大小相似。PCR产物分别经T/A克隆及测序后证明为大乳头水螅actin基因cDNA的相应序列。结论:RACE cDNA文库的成功构建为通过RACE方法获得大乳头水螅功能基因cDNA全长序列奠定了基础。 展开更多
关键词 大乳头水螅 CDNA末端快速扩增技术 CDNA文库
小麦TaCIPK31基因的克隆及生物信息学分析 预览
7
作者 韩玲玲 江行玉 +4 位作者 李海霞 董中东 陈锋 崔党群 许海霞 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期262-267,共6页
根据小麦CIPK相关EST序列TC95390,采用eDNA末端快速扩增(RACE)技术,从耐盐性、耐旱性较好的小麦品种石4185中克隆出5’末端和3’末端,序列拼接后获得全长基因,同源比对后命名为TaClPK31(Gen-Bank登录号JX625142.1),并对该基... 根据小麦CIPK相关EST序列TC95390,采用eDNA末端快速扩增(RACE)技术,从耐盐性、耐旱性较好的小麦品种石4185中克隆出5’末端和3’末端,序列拼接后获得全长基因,同源比对后命名为TaClPK31(Gen-Bank登录号JX625142.1),并对该基因进行了生物信息学分析.结果表明,TaCIPK31编码区长1350bp,编码449个氨基酸;TaCIPK31的理论等电点为8.27,相对分子质量为50.9kD,是亲水性较强的氨基酸;TaCIPK31的N-端激酶催化域含有该家族基因的典型激活环,C-端调节域含有CIPK家族中高度保守的NAF结构域,具有丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶的结构特征;氨基酸序列同源性分析表明,TaCIPK31与已报道的大麦HvCIPK31、水稻OsCIPK3、玉米ZmCIPK31有较高的同源性. 展开更多
关键词 小麦 TaCIPK31 CDNA末端快速扩增技术 基因克隆 生物信息学分析
在线阅读 下载PDF
怀地黄液泡质子泵焦磷酸水解酶基因的克隆与生物信息学分析 预览 被引量:2
8
作者 周延清 张永华 +5 位作者 陈艳梅 张喻 李静云 陈娟娟 白妍妍 魏海方 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第3期107-111,114共6页
为了克隆地黄功能基因,根据NCBI GenBank核酸数据库中5种已知植物生长素诱导的器官膨大基因(ARGOS)碱基序列的保守区,利用CLUSTAL2.1和DNAMAN4.0软件设计简并引物,采用RT-PCR技术扩增出一个cDNA片段,测序表明,获得基因cDNA片... 为了克隆地黄功能基因,根据NCBI GenBank核酸数据库中5种已知植物生长素诱导的器官膨大基因(ARGOS)碱基序列的保守区,利用CLUSTAL2.1和DNAMAN4.0软件设计简并引物,采用RT-PCR技术扩增出一个cDNA片段,测序表明,获得基因cDNA片段序列长度为495bp。经过NCBI数据库BLAST分析,发现它与莲花、蓖麻、烟草、苜蓿、葡萄、碧桃、灰绿藜7种植物的液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因同源性很高,在83%~86%,因此获得的基因是地黄液泡膜质子泵焦磷酸水解酶基因。 展开更多
关键词 怀地黄 液泡质子泵焦磷酸水解酶 基因克隆 cDNA末端快速扩增技术 生物信息学分析
在线阅读 下载PDF
日本血吸虫视黄酸X受体2全长cDNA的克隆及初步分析
9
作者 邱春辉 刘升发 +5 位作者 洪炀 傅志强 张旻 魏梅梅 艾德宙 林矫矫 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2012年第4期440-444,共5页
目的克隆编码日本血吸虫视黄酸X受体2(SjRXR2)蛋白的全长cDNA,并对其进行初步研究。方法利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得SjRXR2蛋白全长编码cDNA。利用生物信息学技术,对基因结构进行初步分析。利用实时荧光定量(Real time)PC... 目的克隆编码日本血吸虫视黄酸X受体2(SjRXR2)蛋白的全长cDNA,并对其进行初步研究。方法利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得SjRXR2蛋白全长编码cDNA。利用生物信息学技术,对基因结构进行初步分析。利用实时荧光定量(Real time)PCR技术对该基因在日本血吸虫不同时期虫体中的转录情况进行分析。应用在线抗体表位预测软件获得SjRXR2配体结合区抗原性较强的一个多肽序列,合成该多肽片段,并免疫小鼠制备抗血清。利用Western blot技术分析该蛋白在日本血吸虫中的表达。结果采用RACE技术成功获得了SjRXR2蛋白全长编码cDNA,总长度为5 960bp,其完整开放阅读框为4 308 bp,编码1 435个氨基酸,预测分子量为159 kDa。生物信息学分析表明该基因编码的蛋白质序列具有核受体家族2的典型结构域特征,且与曼氏血吸虫RXR2有较高的相似性。Real time PCR分析表明,该基因在21、42 d龄日本血吸虫虫体内有较高的转录水平。Western blot分析表明,小鼠SjRXR2多肽免疫血清可特异性识别日本血吸虫虫体150 kDa蛋白。结论成功获得了编码SjRXR2蛋白的全长cDNA,并制备了针对该蛋白的特异性多克隆抗体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 视黄酸X受体2 CDNA末端快速扩增技术 核受体
人uca1基因新剪接变异体全长cdna序列的克隆 预览 被引量:4
10
作者 王宇 陈葳 李旭 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期共4页
目的 克隆新的uca1剪接变异体全长cdna序列,为研究其可变剪接机制奠定基础.方法 用电子克隆技术和cdna序列末端快速扩增技术(rapid amplification of cdna ends,race)扩增细胞系blz-211 cdna并进行产物测序和序列拼接.结果 新克隆的uca... 目的 克隆新的uca1剪接变异体全长cdna序列,为研究其可变剪接机制奠定基础.方法 用电子克隆技术和cdna序列末端快速扩增技术(rapid amplification of cdna ends,race)扩增细胞系blz-211 cdna并进行产物测序和序列拼接.结果 新克隆的uca1剪接变异体全长cdna序列为2 202 bp.结论 综合采用电子克隆技术与race技术是获得全长cdna序列的有效方法,为该基因的后续可变剪接机制的研究奠定了基础. 展开更多
关键词 uca1 电子克隆 CDNA末端快速扩增技术
在线阅读 下载PDF
Isolation of Functional RNA from Heavily Infested, Wilted and Necrotic Leaf Tissues of Tea with High Polyphenol Content 预览
11
作者 Tirthankar Bandyopadhyay Raju Bharalee +7 位作者 Bomali Gohain Sushmita Gupta Niraj Agarwala H. RanjitSingh Setu Chakrabarty Priyadarshini Bhorali Mohan C. Kalita Sudripta Das 《农业科学与技术:B》 2012年第1期 121-127,共7页
关键词 mRNA分离 RNA提取 植物组织 CDNA末端快速扩增技术 多酚含量 茶叶 枯萎 聚乙烯吡咯烷酮
在线阅读 下载PDF
几种主要的RACE技术及应用 预览 被引量:10
12
作者 徐烨 刘雅婷 +5 位作者 代文琼 朱晓媛 陈雪娇 仵发静 智龙 王曼君 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 81-87,共7页
cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)是一种对mRNA进行末端快速扩增的技术,具有快速、稳定、成功率高等优点。阐述了经典RACE、Adapter-Ligated RACE、RLM-RACE、Cap-switchingRACE、环形RACE和RCA-RACE的原理... cDNA末端快速扩增(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)是一种对mRNA进行末端快速扩增的技术,具有快速、稳定、成功率高等优点。阐述了经典RACE、Adapter-Ligated RACE、RLM-RACE、Cap-switchingRACE、环形RACE和RCA-RACE的原理、优缺点及目前的应用,并提出了应用RACE技术的建议及RACE技术的应用前景,为实验人员选择最合适的RACE技术提供参考。 展开更多
关键词 CDNA末端快速扩增技术 原理 应用
在线阅读 下载PDF
叶锈菌与'TcLr19'小麦互作体系中PR1基因的克隆及分析 预览 被引量:3
13
作者 王珅 王海燕 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期 1-6,共6页
利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE),从被小麦叶锈菌诱导的抗叶锈病近等基因系材料TcLr19中获得1个病程相关蛋白1(Pathogenesis-relatedproteins1,PRl)基因,暂命名为TcLrl9PRl。该基因长度为810bp,包含495bpORF区,编码16... 利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE),从被小麦叶锈菌诱导的抗叶锈病近等基因系材料TcLr19中获得1个病程相关蛋白1(Pathogenesis-relatedproteins1,PRl)基因,暂命名为TcLrl9PRl。该基因长度为810bp,包含495bpORF区,编码164个氨基酸,基因产物具有植物防御体系中病程相关蛋白SCP保守结构域,与多个植物病程相关蛋白l基因具有较高同源性。利用半定量分析表明,TcLrl9PRl基因受叶锈菌诱导后表达量变化明显,非亲和组合表达高于亲和组合。Southern杂交验证说明TcLrL9PRl在小麦基因组中为低拷贝。利用‘中国春’缺体一四体系成功将该基因定位在小麦7D染色体上,为进一步明确叶锈菌与‘TcLr19’小麦互作体系中病程相关蛋白1基因的抗叶锈相关性奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 叶锈菌 病程相关蛋白 CDNA末端快速扩增技术 基因表达分析
在线阅读 下载PDF
小麦NBS-LRR类抗病基因同源cDNA序列的分离与鉴定 被引量:5
14
作者 张立荣 杨文香 刘大群 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期431-436,共6页
利用抗病基因的保守结构设计引物,从抗叶锈病近等基因系材料TcLr24中扩增出一条703bp的条带RGA1,通过与GenBank比对,选取与RGA1高度同源的若干条带,在它们共有的保守序列位置设计引物,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增抗病同源基因... 利用抗病基因的保守结构设计引物,从抗叶锈病近等基因系材料TcLr24中扩增出一条703bp的条带RGA1,通过与GenBank比对,选取与RGA1高度同源的若干条带,在它们共有的保守序列位置设计引物,利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增抗病同源基因cDNA全长。扩增到3条全长cDNA,经BLASTp比较,这些序列都含有NBS保守结构域和多个LRR结构域,与很多已知植物抗病基因的功能相应区域一致。对FRGA-1、FRGA-2和FRGA-3实时定量PCR分析,表明这3个基因在小麦叶片中都是组成型表达。本研究在小麦材料TcLr24中得到3条抗病基因同源cDNA全长,为研究小麦抗病基因奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦抗叶锈病基因 CDNA末端快速扩增技术 生物信息学 同源基因
RLM-RACE法确定胰岛素降解酶基因的转录起始位点 预览 被引量:1
15
作者 左秀美 秦伟 +3 位作者 周爱红 王芬 魏翠柏 贾建平 《脑与神经疾病杂志》 2011年第6期 401-403,共3页
目的 精确定位胰岛素降解酶基因的转录起始位点,为今后研究该基因启动子区的转录调控及其参与疾病的发病机制奠定基础.方法采用5' cDNA末端快速扩增技术,得到多个胰岛素降解酶基因cDNA 5' 末端序列,连接至PUC19 T载体中,鉴定阳性克隆... 目的 精确定位胰岛素降解酶基因的转录起始位点,为今后研究该基因启动子区的转录调控及其参与疾病的发病机制奠定基础.方法采用5' cDNA末端快速扩增技术,得到多个胰岛素降解酶基因cDNA 5' 末端序列,连接至PUC19 T载体中,鉴定阳性克隆并测序.结果 根据两次实验结果,确认胰岛素降解酶基因的5' UTR序列长度为32bp.结论胰岛素降解酶基因存在单一的转录起始位点,位于翻译起始点上游32bp处,碱基为G. 展开更多
关键词 胰岛素降解酶基因 转录起始位点 5' CDNA末端快速扩增技术
在线阅读 下载PDF
编码日本血吸虫Argonaute 3蛋白全长cDNA的获得及初步研究 被引量:2
16
作者 陈晶 郭素霞 +4 位作者 杨燕萍 刘金明 林矫矫 李家奎 程国锋 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期310-314,共5页
目的获得日本血吸虫Argonaute3(Ago3)蛋白的全长编码cDNA并对其初步分析。方法利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得日本血吸虫Ago3蛋白全长编码cDNA,利用原核表达系统对此蛋白片段进行重组表达,采用亲和层析法纯化重组蛋白,并免疫... 目的获得日本血吸虫Argonaute3(Ago3)蛋白的全长编码cDNA并对其初步分析。方法利用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得日本血吸虫Ago3蛋白全长编码cDNA,利用原核表达系统对此蛋白片段进行重组表达,采用亲和层析法纯化重组蛋白,并免疫动物制备多克隆抗体。利用Western blot技术分析该蛋白在日本血吸虫中的表达。结果采用RACE获得了日本血吸虫Ago3蛋白编码全长cDNA,长度为2772bp;利用原核表达系统获得了该蛋白片段的重组融合蛋白,并制备了多克隆抗体;Western blot分析表明,该抗体与日本血吸虫全虫蛋白在分子量约为100kDa处具有特异性反应。结论获得了编码日本血吸虫Ago3蛋白的全长编码cDNA,并制备了多克隆抗体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 Argonaute蛋白 CDNA末端快速扩增技术 非编码小RNA
豌豆PsSGR基因cDNA的分离及其遗传功能分析 预览 被引量:1
17
作者 周茜 任国栋 +1 位作者 周霄 蒯本科 《复旦学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期309-314,322,F0003共8页
拟南芥滞绿基因AtNYE1是衰老过程中调控叶绿素降解的关键基因.利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,在豌豆(Pisum sativum)中分离获得了黄色子叶豌豆PsSGR基因和突变体绿色子叶豌豆Pssgr^Gr基因的全长cDNA.为了验证AtNYE1同源基因PsSGR... 拟南芥滞绿基因AtNYE1是衰老过程中调控叶绿素降解的关键基因.利用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,在豌豆(Pisum sativum)中分离获得了黄色子叶豌豆PsSGR基因和突变体绿色子叶豌豆Pssgr^Gr基因的全长cDNA.为了验证AtNYE1同源基因PsSGR的功能,将黄色子叶豌豆PsSGR和绿色子叶豌豆Pssgr^Л2775的编码区序列分别构建到带有花椰菜花叶病毒35S组成型强启动子和拟南芥叶片衰老特异诱导型启动子SAG12的植物表达载体上,经农杆菌介导、通过花序浸染法转化拟南芥滞绿突变体nye1-1.互补实验结果显示,PsSGR基因能够恢复拟南芥滞绿突变体nye1-1的滞绿表型,而Pssgr^Л2775基因则不能.这一结果表明,豌豆PsSGR是负责豌豆子叶中叶绿素降解的调控因子. 展开更多
关键词 叶绿素降解 滞绿 豌豆 NYE1 CDNA末端快速扩增技术 功能互补
在线阅读 免费下载
1个小麦NBS类抗病基因同源cDNA序列的克隆与鉴定 被引量:5
18
作者 王海燕 刘大群 +3 位作者 杨文香 李在峰 张立荣 张娜 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期 507-513,共7页
利用cDNA末端快速扩增技术对小麦抗叶锈病近等基因系TcLr35中所获得的抗病基因同源片段S2A25′端和3′末端序列进行扩增,并根据拼接序列设计特异性引物,进行全长基因的扩增,获得了1个通读的NBS类抗病同源基因S2A2cDNA序列,该序列全长为3... 利用cDNA末端快速扩增技术对小麦抗叶锈病近等基因系TcLr35中所获得的抗病基因同源片段S2A25′端和3′末端序列进行扩增,并根据拼接序列设计特异性引物,进行全长基因的扩增,获得了1个通读的NBS类抗病同源基因S2A2cDNA序列,该序列全长为3 476 bp,编码866个氨基酸序列。经BLASTp比较,该片段含有NB-ARC保守结构域和多个LRR结构域,与已知植物抗病基因I2C1-、L6、RPS2等相应区域相一致。半定量RT-PCR分析表明,该基因在小麦叶片中为低丰度组成型表达。本研究在TcLr35小麦中成功获得了抗病同源基因,这为最终克隆小麦抗叶锈病基因Lr35奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦抗叶锈病基因 CDNA末端快速扩增技术 同源序列
甘薯IbNPR1全长cDNA序列的分离与表达特性分析 预览 被引量:3
19
作者 陈观水 周以飞 +2 位作者 林生 张铮 潘大仁 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期 2218-2224,共7页
在植物系统获得性抗性(SAR)中,NPR1蛋白是水杨酸介导的基因表达中关键调控因子。本研究以青农2号为试验材料,利用同源序列法和RACE技术分离甘薯SAR途径的主要抗病信号元件NPR1(none expresser of PR gene)的全长cDNA序列。序列分析... 在植物系统获得性抗性(SAR)中,NPR1蛋白是水杨酸介导的基因表达中关键调控因子。本研究以青农2号为试验材料,利用同源序列法和RACE技术分离甘薯SAR途径的主要抗病信号元件NPR1(none expresser of PR gene)的全长cDNA序列。序列分析表明,IbNPR1基因全长2353bp,包含一个编码586个氨基酸残基的开放阅读框,包含有类似拟南芥NPR1蛋白中的BTB/POZ和锚蛋白重复氨基酸序列结构域。聚类分析显示IbNPR1与来源于番茄的NPR1蛋白关系最近。Southern杂交及半定量RT-PCR分析表明,甘薯NPR1基因属于低拷贝基因家族,表达模式为组成型表达,并且SA能提高其表达水平。由该结果推测,IbNPR1可能在甘薯抵御病原物的侵染中起重要的作用。 展开更多
关键词 甘薯 IbNPR1基因 抗病 CDNA末端快速扩增技术
在线阅读 免费下载
鸡局部黏着斑激酶基因5′UTR及启动子的克隆鉴定 预览
20
作者 李淑锋 王利祥 +1 位作者 张大鹏 华子春 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期 102-107,共6页
为了研究鸡局部黏着斑激酶(FAK)基因表达调控的分子机制,运用cDNA末端快速扩增技术确定了鸡胚成纤维细胞FAK基因的转录起始位点,并发现FAK基因mRNA的5′非翻译区(5′UTR)存在4种剪切形式。分析这4种剪切形式的5′端序列,发现它们都... 为了研究鸡局部黏着斑激酶(FAK)基因表达调控的分子机制,运用cDNA末端快速扩增技术确定了鸡胚成纤维细胞FAK基因的转录起始位点,并发现FAK基因mRNA的5′非翻译区(5′UTR)存在4种剪切形式。分析这4种剪切形式的5′端序列,发现它们都不影响蛋白的编码,但可能影响mRNA的翻译效率。另外,将启动子序列935 bp片段克隆构建到荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic中,转染鸡胚成纤维细胞,测定启动子的转录活性。通过启动子序列系列缩短的克隆,将核心启动子区定位在转录起始位点上游-662至+7的669 bp片段内,该启动子的典型特征是:没有TATA盒,而富含"GC"碱基。以上结果为FAK基因的表达调控研究提供了分子基础。 展开更多
关键词 局部黏着斑激酶基因(FAK) 5′非翻译区(5′UTR) 可变剪切 CDNA末端快速扩增技术
在线阅读 免费下载
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈