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持续压力负荷离体兔脊柱运动节段软骨终板的应力变化 预览
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作者 韩涛 展嘉文 +2 位作者 朱立国 冯敏山 尹逊路 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第27期4286-4290,共5页
背景:研究表明软骨组织的改变将会影响椎间盘的功能。目的:观察持续压力负荷对离体兔脊柱运动节段软骨终板的影响。方法:将16只新西兰白兔处死后在无菌条件下取出脊柱运动节段,随机分为对照组(无压力)与压力组(持续29.4N压力),利用离体... 背景:研究表明软骨组织的改变将会影响椎间盘的功能。目的:观察持续压力负荷对离体兔脊柱运动节段软骨终板的影响。方法:将16只新西兰白兔处死后在无菌条件下取出脊柱运动节段,随机分为对照组(无压力)与压力组(持续29.4N压力),利用离体加载和培养装置进行离体培养,于培养前及培养后第3,7,14天,取2组兔终板软骨组织各10个样本,苏木精-伊红染色进行组织学观察,免疫组织化学检测基质金属蛋白酶13、Ⅱ型胶原、蛋白多糖表达。结果与结论:①压力组培养至14d时椎间盘终板软骨组织中基质染色不均匀,数量减少,软骨组织有退变趋势,与对照组相比有明显改变;②培养14 d,与培养前相比压力组增强了终板内基质金属蛋白酶13蛋白的表达,基质金属蛋白酶13蛋白平均吸光度值显著高于对照组(P <0.05);③培养3 d,压力组Ⅱ型胶原平均吸光度值显著高于对照组(P<0.05);培养7,14d,压力组Ⅱ型胶原染色较培养前强度明显降低,但与对照组相比无显著差异;④培养3,7,14 d,2组蛋白多糖染色变浅(P <0.05);培养7 d压力组蛋白多糖平均吸光度值显著低于对照组(P <0.05);⑤结果说明,持续压力会导致离体培养椎间盘模型终板退变,这一结果会为椎间盘退变过程中软骨损伤及早期防治提供有意义的数据。 展开更多
关键词 脊柱 椎间盘 软骨 椎间盘模型 运动终板 软骨终板 压力负荷 应力变化
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山羊正常腰椎椎体、软骨终板和髓核弥散特性的DCE-MRI研究 预览
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作者 尹思 杜恒 +4 位作者 赵为公 麻少辉 张明 管民 刘淼 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第7期975-980,共6页
目的利用不同对比剂通过动态增强MRI(DCE-MRI)研究山羊正常腰椎椎体、软骨终板和髓核弥散的途径及特性。方法选取8只成年雌性山羊,麻醉后静脉推注钆贝葡胺(Gd-BOPTA)行DCE-MRI扫描,剂量均为0.3 mmol/kg,观察山羊腰椎椎体、软骨终板和髓... 目的利用不同对比剂通过动态增强MRI(DCE-MRI)研究山羊正常腰椎椎体、软骨终板和髓核弥散的途径及特性。方法选取8只成年雌性山羊,麻醉后静脉推注钆贝葡胺(Gd-BOPTA)行DCE-MRI扫描,剂量均为0.3 mmol/kg,观察山羊腰椎椎体、软骨终板和髓核中的感兴趣区域(ROI)的信号强度变化。参加上述实验的山羊饲养1周后,采用同样方法和剂量进行钆双胺(Gd-DTPA-B)DCE-MRI扫描。分别测量山羊腰椎椎体、软骨终板和髓核增强前及增强后0 min,5 min,10 min,30 min,1 h,1.5 h,2 h,2.5 h的ROI信号强度值,绘制时间-增强率曲线并进行分析对比。结果静注Gd-BOPTA 0 min后,椎体信号强度上升至5 min时达到高峰(增强率216.1%±23.3%),然后缓慢下降,于1.5-2.5 h时再次缓慢上升;软骨终板区时间-增强率曲线与椎体大致相同,至5 min时上升至最高峰(增强率168.7%±39.4%),而后下降趋势较为平缓;髓核时间-增强率曲线呈缓慢上升趋势,至2 h时达到最高峰(增强率102.4%±21.4%),其后迅速下降。静注Gd-DTPA-B后,椎体信号强度从0 min开始迅速上升,上升幅度较Gd-BOPTA低,5 min时达到高峰(增强率119.1%±6.81%),其后缓慢下降,2.5 h时趋于平缓;软骨终板区信号强度从0 min开始上升,10 min时上升至最高峰(增强率81.6%±16.8%),其后下降趋势较为平缓;髓核区信号强度在5 min内显示为负值,之后缓慢上升,2.5 h时达到最高峰(增强率88.5%±7.56%)。两组对比剂在山羊椎体、软骨终板中增强率的最高峰值之间差异有统计学意义(P<0.01),而在山羊腰椎髓核中增强率的最高峰值之间差异无统计学意义(P=0.11)。结论利用DCE-MRI技术可以动态模拟山羊腰椎椎体、软骨终板和髓核弥散的途径,而且溶质的剂量、电磁性和分子量都是影响终板弥散过程的重要因素。 展开更多
关键词 动态增强MRI 软骨终板 弥散 对比剂 钆贝葡胺 钆双胺
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鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠软骨终板细胞增殖和CollagenⅠ、CollagenⅡ、IL-6 mRNA表达的影响 预览
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作者 李文超 林一峰 +5 位作者 梁祖建 沈国喜 原超 朱辉 池利业 刘洪江 《中医学报》 CAS 2019年第7期1454-1459,共6页
目的:观察不同浓度的鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞增殖和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,CollagenⅠ)、CollagenⅡ、白细胞介素(interleukin-6,IL-6) mRNA表达的影响。方法:选取健康SD大鼠(1个月龄),取其脊柱椎间盘软骨终板... 目的:观察不同浓度的鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞增殖和Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,CollagenⅠ)、CollagenⅡ、白细胞介素(interleukin-6,IL-6) mRNA表达的影响。方法:选取健康SD大鼠(1个月龄),取其脊柱椎间盘软骨终板细胞,并培养至第3代软骨终板细胞进行实验。空白对照组不做任何处理,诱导组只加入10μg·L-1的IL-1β,给药组在培养基中加入10μg·L-1的IL-1β和不同质量浓度的鹿茸多肽(分别为10 mg·L-1、30 mg·L-1、50 mg·L-1)。用MTT比色法检测3个时间点(24 h、48 h、72 h)各组椎间盘软骨终板细胞的增殖情况;qP CR法检测CollagenⅠ、CollagenⅡ及IL-6 mRNA的表达。结果:MTT法检测结果:鹿茸多肽10 mg·L-1组的软骨终板细胞增殖与诱导组比较,差异无统计学意义(P> 0. 05);鹿茸多肽30 mg·L-1组和鹿茸多肽50 mg·L-1组能促进软骨终板细胞的增殖,与诱导组比较,差异有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01)。qP CR检测结果:IL-1β诱导组的CollagenⅡmRNA的表达降低,CollagenⅠ、CollagenⅡ、IL-6的mRNA的表达升高,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P <0. 05);不同质量浓度的鹿茸多肽均能增强CollagenⅡmRNA的表达,降低CollagenⅠ和IL-6 mRNA的表达,差异均有统计学意义(P <0. 05,P <0. 01),30 mg·L-1、50 mg·L-1鹿茸多肽效果更加显著(P <0. 01)。结论:一定浓度的鹿茸多肽能减轻IL-1β对软骨终板细胞增殖的抑制,升高CollagenⅡmRNA的表达,降低CollaoenⅠ、IL-6 mRNA的表达,从而延缓椎间盘的退变。 展开更多
关键词 鹿茸多肽 软骨终板 椎间盘退变 白细胞介素-1Β 白细胞介素-6 大鼠
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鹿茸多肽对IL-1β诱导退变的椎间盘终板软骨细胞保护作用
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作者 李文超 林一峰 +5 位作者 沈国喜 原超 朱辉 池利业 张文财 刘洪江 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2019年第9期47-51,共5页
目的:观察不同浓度的鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠椎间盘终板软骨细胞的影响,分析其对终板软骨细胞保护的作用机制。方法:选取1月龄的健康SD大鼠,并对其椎间盘终板软骨细胞进行分离与培养,诱导组单加入10μg/L的IL-1β,药物处理组分3组,... 目的:观察不同浓度的鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠椎间盘终板软骨细胞的影响,分析其对终板软骨细胞保护的作用机制。方法:选取1月龄的健康SD大鼠,并对其椎间盘终板软骨细胞进行分离与培养,诱导组单加入10μg/L的IL-1β,药物处理组分3组,分别在培养基中加入10μg/L的IL-1β和10、30、50μg/mL的鹿茸多肽,MTT比色法检测3个时间节点(24、48、72 h)各组椎间盘终板软骨细胞的增殖情况;流式细胞仪检测大鼠椎间盘终板软骨细胞的凋亡;qPCR法检测Collagen Ⅱ、Collagen X、caspase-3、MMP-13、Bax、Bcl-2基因的表达水平。结果:在24、48、72 h时间点,MTT法检测10μg/mL鹿茸多肽组在各时间点终板软骨细胞增殖情况与IL-1β诱导组比较,差异不具有统计学意义(P>0.05);而30μg/mL组和50μg/mL组均能拮抗IL-1β对软骨终板细胞増殖的抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);流式分析结果表明,不同浓度的鹿茸多肽均能够降低IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞的凋亡比例(P<0.05,P<0.01);qPCR检测结果表明,IL-1β诱导组的Cllagen Ⅱ、Bcl-2基因的表达减弱,Collagen X、caspase-3、Bax、MMP-13基因的表达增强,与空白对照组对比差异具有统计学意义(P<0.05);各浓度鹿茸多肽组均能够上调Cllagen Ⅱ、Bcl-2基因的表达(P<0.05,P<0.01),下调Collagen X、caspase-3、Bax、MMP-13基因的表达(P<0.05,P<0.01),以50μg/mL组效果最为显著(P<0.01)。结论:一定浓度的鹿茸多肽通过抑制软骨终板细胞的凋亡,促进其増殖,调控其相关基质蛋白及基质降解酶、凋亡因子等基因的表达,起到了对退变的椎间盘终板软骨细胞的保护作用。 展开更多
关键词 鹿茸多肽 软骨终板 椎间盘退变 基质金属蛋白酶 基质蛋白
血府逐瘀汤对大鼠颈椎间盘退变中软骨终板IL-1β影响
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作者 刘汝专 张磊 +6 位作者 魏纪湖 唐晓菊 黄立 龚德飞 刘锐 王智群 班正涛 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2019年第10期28-31,共4页
目的:观察血府逐瘀汤对大鼠颈椎间盘退变中软骨终板IL-1β的影响。方法:选取健康SPF级6周龄SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、血府逐瘀汤实验组,每组各大鼠12只。模型组和实验组建立大鼠颈椎动力平衡失衡模型,诱导颈椎间盘退变... 目的:观察血府逐瘀汤对大鼠颈椎间盘退变中软骨终板IL-1β的影响。方法:选取健康SPF级6周龄SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、血府逐瘀汤实验组,每组各大鼠12只。模型组和实验组建立大鼠颈椎动力平衡失衡模型,诱导颈椎间盘退变;假手术组仅作颈背后正中皮肤切开缝合。造模1周后实验组予以血府逐瘀汤中药灌胃1月,余组灌胃等量生理盐水。在术后第9周、18周、36周随机处死每组4只老鼠,用酶联免疫吸附试验(ELisa)检测椎间盘软骨终板中白细胞介素-1β含量;HE染色观察大鼠颈椎间盘组织形态学改变;TUNEL法检测大鼠颈椎间盘软骨终板细胞凋亡。结果:Elisa检测结果显示,与假手术组相比,模型组和血府逐瘀汤实验组3个时间点软骨终板IL-1β含量均明显高于假手术组(P<0.01),其中,模型组软骨终板IL-1β的含量高于血府逐瘀汤实验组(P<0.05);HE染色显示软骨终板软骨细胞数量、密度模型组和实验组低于假手术组,并随着时间延长逐渐降低,其中模型组软骨细胞数量减少更加明显;TUNEL法检测结果显示模型组椎间盘软骨终板细胞凋亡数量明显增加,且随着时间的延长而逐渐增多,血府逐瘀汤能延缓椎间盘软骨终板细胞凋亡的速度。结论:血府逐瘀汤可抑制椎间盘软骨终板炎性因子白介素-1β含量的增加,保护椎间盘软骨终板软骨细胞,抑制软骨终板细胞的凋亡,对椎间盘具有保护作用。 展开更多
关键词 椎间盘 软骨终板 血府逐瘀汤 白细胞介素-1Β
益气活血方对静水压下兔椎间盘软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响 预览
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作者 刘志超 祝永刚 +5 位作者 肖辉灯 郭菲宇 张万翔 卢通 齐磊 柳根哲 《环球中医药》 CAS 2019年第10期1470-1475,共6页
目的观察兔椎间盘软骨细胞代谢及炎性因子表达与静水压强度、作用时间、药物的关系,揭示益气活血方延缓椎间盘退变可能的调控机制及作用靶点。方法选用3月龄新西兰兔处死后无菌条件下取出腰椎间盘,分离出软骨细胞后分组,包括对照组、模... 目的观察兔椎间盘软骨细胞代谢及炎性因子表达与静水压强度、作用时间、药物的关系,揭示益气活血方延缓椎间盘退变可能的调控机制及作用靶点。方法选用3月龄新西兰兔处死后无菌条件下取出腰椎间盘,分离出软骨细胞后分组,包括对照组、模型组和中药治疗组,将3组软骨细胞培养至第3代椎间盘软骨细胞后,加入益气活血方含药血清中,在体外静水压加载系统1Mpa压力下作用24小时后,利用倒置相差显微镜观察软骨细胞传代过程中细胞形态的变化,使用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR法)检测相关炎症因子环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)及蛋白酶[基质金属蛋白酶-3(Matrix Metalloproteinase-3,MMP-3)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1,TIMP-1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan,AGC)]的基因表达程度,运用蛋白印迹法(Western Blot法)检验3组软骨细胞中Wnt配体(Wingless4,Wnt4)、β-连环蛋白(β-catenin,β-CAT)表达水平及相关蛋白[蛋白多糖(Proteoglycans,PG)、胶原蛋白(Collagen,COII)]的表达。结果与对照组比较,持续静水压下模型组Wnt4、β-catenin含量表达明显增高(P<0.05),MMP-3、COX-2及相关蛋白表达也表现出分解代谢倾向;与模型组比较,中药组Wnt4、β-catenin含量表达明显降低,TIMP-1和相关蛋白表达水平升高,COX-2水平下降(P<0.05),延缓椎间盘软骨细胞的退变。结论益气活血汤可以提高静水压下椎间盘软骨细胞增殖率,减少软骨细胞的坏死和凋亡,可能经过下调Wnt/β-catenin信号通路,降低兔椎间盘终板软骨中Wnt4、β-catenin蛋白含量表达,从而延缓椎间盘退行性改变。 展开更多
关键词 静水压 益气活血方 软骨终板 WNT/Β-CATENIN信号通路
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鹿茸多肽对软骨终板细胞基质蛋白及其降解酶基因表达的影响
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作者 李文超 林一峰 +6 位作者 梁祖建 沈国喜 原超 朱辉 池利业 张文财 刘洪江 《中国中医骨伤科杂志》 CAS 2019年第1期6-10,16共6页
目的:观察鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞的增殖及基质蛋白(Ⅱ,Ⅹ型胶原)、基质降解酶(金属蛋白酶-13)基因表达的影响。方法:选取1月龄的健康SD大鼠,对其椎间盘软骨终板细胞进行分离与培养,取第3代软骨终板细胞实验,空... 目的:观察鹿茸多肽对IL-1β诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞的增殖及基质蛋白(Ⅱ,Ⅹ型胶原)、基质降解酶(金属蛋白酶-13)基因表达的影响。方法:选取1月龄的健康SD大鼠,对其椎间盘软骨终板细胞进行分离与培养,取第3代软骨终板细胞实验,空白对照组不做任何处置,诱导组单加入10μg/L的IL-1β,药物处理组分三组,分别在培养基中加入10μg/L的IL-1β和10μg/mL,30μg/mL,50μg/mL的鹿茸多肽。MTT比色法检测三个时间节点(24h,48h,72h)各组椎间盘软骨终板细胞的增殖情况;qPCR检测法对软骨终板细胞中基质Ⅱ,Ⅹ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶-13基因的表达情况。结果:在24h,48h,72h时间点,MTT法检测10μg/mL鹿茸多肽组在各时间点软骨终板细胞增殖情况与IL-1β组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而30μg/mL组和50μg/mL组均能减轻IL-1β对软骨终板细胞増殖的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。qPCR检测结果显示:IL-1β诱导组的Ⅱ型胶原蛋白基因的表达减弱,Ⅹ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶-13基因的表达增强,与空白组对比差异有统计学意义(P<0.05);鹿茸多肽各浓度组均能上升Ⅱ型胶原蛋白基因的表达,下调Ⅹ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶-13基因的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01),以50μg/mL组效果显著,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:一定浓度的鹿茸多肽(50μg/mL组)能有效地拮抗IL-1β对软骨终板细胞增殖的抑制作用,上升Ⅱ型胶原蛋白基因的表达,下调Ⅹ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶-13基因的表达,改善了基质的代谢,起到延缓椎间盘软骨终板退变的作用。 展开更多
关键词 鹿茸多肽 软骨终板 椎间盘退变 白介素-1Β 基质金属蛋白酶-13
甲状旁腺素(1-34)对卵巢切除大鼠椎间盘软骨终板Ⅰ型胶原及Ⅹ型胶原表达的影响 预览 被引量:1
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作者 骆阳 齐璨 +1 位作者 罗鹏远 梁少博 《河北医科大学学报》 CAS 2018年第2期155-159,共5页
目的探讨甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)(1-34)对卵巢切除(ovariectomy,OVX)大鼠椎间盘软骨终板Ⅰ型胶原及Ⅹ型胶原表达的影响。方法30只3月龄雌性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、卵巢切除组(OVX)及卵巢切除+甲状旁腺素(1-34)... 目的探讨甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)(1-34)对卵巢切除(ovariectomy,OVX)大鼠椎间盘软骨终板Ⅰ型胶原及Ⅹ型胶原表达的影响。方法30只3月龄雌性SD大鼠随机分为3组:假手术组(Sham)、卵巢切除组(OVX)及卵巢切除+甲状旁腺素(1-34)组(OVX+PTH)。OVX组及OVX+PTH组行双侧卵巢切除术后12周,OVX+PTH组大鼠给予皮下注射PTH(1-34)(30μg·kg-1·d-1)。连续用药12周后,处死大鼠并收集标本。各组大鼠软骨终板行van Gieson染色及组织学观察,Ⅰ型胶原及Ⅹ型胶原行免疫组织化学染色分析。结果软骨终板经van Gieson染色显示,Sham组软骨终板形态正常,而OVX组软骨终板内可见大量骨样组织形成,并且在骨样组织中可见髓腔形成及血细胞的出现,OVX+PTH组软骨终板内可见少量骨样组织形成及少量髓腔出现。免疫组织化学染色显示,OVX组软骨终板内Ⅰ型胶原及Ⅹ型胶原表达显著高于Sham组(P<0.05),而OVX+PTH组Ⅰ型胶原及Ⅹ型胶原表达显著低于OVX组(P<0.05)。结论皮下注射甲状旁腺素(1-34)可有效抑制OVX大鼠椎间盘软骨终板Ⅰ型胶原及Ⅹ型胶原的表达。 展开更多
关键词 椎间盘 软骨终板 胶原Ⅰ型 胶原Ⅹ型 甲状旁腺素
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压应力对人软骨终板细胞MMP-1、3、13和TIMP-1表达的影响研究 预览 被引量:1
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作者 丁亮 唐果 +3 位作者 薛锋 肖海军 何志敏 沈玉春 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2018年第1期8-12,共5页
目的观察压应力对体外培养人软骨终板细胞分泌基质金属蛋白酶-1、3、13(MMP-1、MMP-3、MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的影响.方法将6个月意外流产胎儿软骨终板,进行软骨终板细胞的分离、培养.将第2代软骨细胞按实... 目的观察压应力对体外培养人软骨终板细胞分泌基质金属蛋白酶-1、3、13(MMP-1、MMP-3、MMP-13)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的影响.方法将6个月意外流产胎儿软骨终板,进行软骨终板细胞的分离、培养.将第2代软骨细胞按实验要求种板培养,分别施加周期性压应力(压力大小0.8MPa,频率为0.1Hz),分别连续加载2h、6h和12h.根据压应力作用时间分为2h组、6h组和12h组,以空白组为对照,测定各组细胞上清液中MMP-1、MMP-3、MMP-13和TIMP-1的表达.结果贴壁后的软骨终板细胞成短梭形、三角形以及多边形,呈典型的“铺路石”状.随着细胞加压时间延长,长梭形细胞数目明显增加,去分化现象明显,老化速度加快,坏死细胞明显增多.施加压应力第3天,6h组和12h组MMP-1、MMP-3、MMP-13表达明显增高,TIMP-1明显下降,且加压时间越长,改变越明显.24h组分别与各组相比较有统计学意义(P〈0.05).结论长期压应力可使MMP-1、MMP-3、MMP-13表达增高,TIMP-1表达降低,并抑制细胞增殖,同时MMP-1、MMP-3、MMP-13表达水平与压应力作用时间相关. 展开更多
关键词 压应力 软骨终板 基质金属蛋白酶 基质金属蛋白酶组织抑制因子
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Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白在不同损伤类型动物模型椎间盘组织内的含量变化规律 被引量:2
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作者 赵小丹 刘浩 +2 位作者 黄富国 刘熹 邓宇骁 《华西医学》 CAS 2018年第9期1146-1152,共7页
目的通过对损伤动物模型椎间盘软骨终板细胞内Ⅰ、Ⅱ型胶原m RNA的水平进行定量测定,明确椎间盘软骨细胞在椎间盘损伤后纤维化修复过程中的细胞学功能变化规律。方法建立兔椎间盘损伤模型,选用健康新西兰大白兔40只,随机分为纤维环穿刺... 目的通过对损伤动物模型椎间盘软骨终板细胞内Ⅰ、Ⅱ型胶原m RNA的水平进行定量测定,明确椎间盘软骨细胞在椎间盘损伤后纤维化修复过程中的细胞学功能变化规律。方法建立兔椎间盘损伤模型,选用健康新西兰大白兔40只,随机分为纤维环穿刺组、上位软骨终板单次穿刺组、上下位软骨终板多次穿刺组、假手术对照组,分别于建模手术术后第2天及第2、8、12、24周在每组中随机选取2只实验动物获取椎间盘标本,逆转录聚合酶链反应测定椎间盘软骨终板细胞Ⅰ、Ⅱ型胶原m RNA水平。首先提取椎间盘软骨终板组织的RNA,通过核酸测定仪测定RNA浓度及RNA浓度与蛋白浓度比值,采用Revertaid M-Mulv逆转录酶进行逆转录,设计Ⅰ、Ⅱ型胶原引物,建立聚合酶链反应体系,用0.5×TBE电泳缓冲液配制2%的琼脂糖凝胶电泳(120 V,40 min),紫外灯下观察扩增结果,测定不同电泳条带的灰度值。结果术后各手术组Ⅰ型胶原m RNA水平在术后8周后呈现进行性上升的趋势,上升的幅度与损伤程度相关。Ⅱ型胶原的m RNA水平在纤维环穿刺组及上位终板单次穿刺组中开始2周内出现一过性的上升,随后开始进行性下降;而在上下位软骨终板多次穿刺组则从术后开始一直呈现下降的趋势。结论损伤椎间盘髓核组织内软骨细胞Ⅰ型胶原的合成量随时间呈现持续升高的趋势,而Ⅱ型胶原的合成量在小幅升高后开始进行性下降。Ⅰ、Ⅱ型胶原在损伤椎间盘软骨细胞内的形成变化规律有别于自然退变。 展开更多
关键词 损伤 软骨终板 Ⅰ、Ⅱ型胶原 逆转录聚合酶链反应
桃仁-红花药对对动静力失衡性大鼠椎间盘软骨终板细胞老化及凋亡的影响 预览 被引量:1
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作者 王艺儒 梁倩倩 +3 位作者 唐德志 徐浩 赵永见 郑为超 《环球中医药》 CAS 2018年第4期497-501,共5页
目的 观察桃仁-红花药对对动静力失衡性大鼠退变椎间盘软骨终板细胞老化及凋亡的影响。方法 选取50只雄性Wistar大鼠,清洁级,随机分为五组,分别为对照组、假手术组、模型组、桃仁-红花药对组、美洛昔康组,每组10只。采用动静力失衡性大... 目的 观察桃仁-红花药对对动静力失衡性大鼠退变椎间盘软骨终板细胞老化及凋亡的影响。方法 选取50只雄性Wistar大鼠,清洁级,随机分为五组,分别为对照组、假手术组、模型组、桃仁-红花药对组、美洛昔康组,每组10只。采用动静力失衡性大鼠椎间盘退变模型手术造模方法,对模型组、桃仁-红花药对组以及美洛昔康组进行手术造模,假手术组切开皮肤后不进行任何操作即缝合。造模3月后,桃仁-红花药对组、美洛昔康组分别给予桃仁-红花药对煎剂、美洛昔康悬浊液,每日一次灌胃;对照组、假手术组及模型组给予等量的生理盐水,每日一次灌胃,连续给药4周后一次性处死全部大鼠。取出大鼠完整C 4/5、C 6/7椎间盘,C 4/5椎间盘固定、切片,ABHO染色观察椎间盘组织形态学改变,免疫组化检测P21的表达,TUNEL荧光法检测软骨终板细胞凋亡;C 6/7椎间盘提取总mRNA,反转录后实时定量PCR检测P21 mRNA表达。结果 模型组大鼠椎间盘组织形态学有明显退行性改变;对比于模型组,桃仁-红花药对组椎间盘软骨细胞凋亡数量显著减少(P<0.01);免疫组化及实时定量PCR检测显示,桃仁-红花药对组老化相关因子P21表达较模型组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 桃仁-红花药对可通过有效抑制老化相关基因P21表达,同时抑制椎间盘软骨终板细胞的凋亡,从而抑制椎间盘软骨的退变。 展开更多
关键词 细胞凋亡 软骨终板 椎间盘退变 P21核糖核酸 细胞老化
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TNF-α椎间盘注射对软骨终板β-catenin与Adamts-5表达影响 预览
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作者 魏平洋 夏炳江 +2 位作者 沈钦荣 胡松峰 侯明生 《中国现代医生》 2018年第17期24-27,共4页
目的探讨TNF-α椎间盘注射对大鼠软骨终板β-catenin与Adamts-5蛋白表达的影响与意义。方法取SPF级12周龄SD大鼠30只,随机分成空白对照组(A组)、假手术组(B组)、TNF-α椎间盘注射组(C组),每组10只(n=10)。C组大鼠在X线透视下穿刺椎间盘... 目的探讨TNF-α椎间盘注射对大鼠软骨终板β-catenin与Adamts-5蛋白表达的影响与意义。方法取SPF级12周龄SD大鼠30只,随机分成空白对照组(A组)、假手术组(B组)、TNF-α椎间盘注射组(C组),每组10只(n=10)。C组大鼠在X线透视下穿刺椎间盘并注射TNF-α25μL(10 ng/μL),B组大鼠椎间盘穿刺成功后注射生理盐水25μL,A组大鼠椎间盘不做任何干预。术后4周采用组织病理学观察软骨终板退变情况,并采用Western-Blot检测软骨终板β-catenin与Adamts-5蛋白表达。结果HE染色显示C组大鼠椎间盘软骨终板出现明显退行性改变。Western-Blot检测显示C组大鼠椎间盘软骨终板β-catenin与Adamts-5表达均显著上调,与A组及B组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α椎间盘注射可诱发椎间盘软骨终板退变,同时上调软骨终板β-catenin及Adamts-5表达,提示TNF-α上调β-catenin及Adamts-5表达在软骨终板退变中可能发挥了重要作用。 展开更多
关键词 TNF-Α 软骨终板 Β-CATENIN Adamts-5
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椎间盘炎后不同类型抗生素在椎间盘内渗透情况与椎间盘弥散功能的相关性研究 预览
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作者 巫一鸣 陆康生 +1 位作者 冯新民 张亮 《中华临床医师杂志(电子版)》 CAS 2018年第8期462-467,共6页
目的观察头孢唑林钠及克林霉素在感染椎间盘内的渗透情况,研究椎间盘内抗生素浓度与椎间盘弥散功能的相关性。方法取新西兰兔60只,制作椎间盘炎动物模型。在椎间隙感染后1、2、4、8、12周,每次随机取椎间盘炎模型兔12只,行连续动态增强... 目的观察头孢唑林钠及克林霉素在感染椎间盘内的渗透情况,研究椎间盘内抗生素浓度与椎间盘弥散功能的相关性。方法取新西兰兔60只,制作椎间盘炎动物模型。在椎间隙感染后1、2、4、8、12周,每次随机取椎间盘炎模型兔12只,行连续动态增强磁共振成像(MRI)检测,测定椎间盘的弥散功能。将12只椎间盘炎模型兔随机分成2组,分别注射头孢唑林钠和克林霉素,每隔一个药物半衰期注射一次,共计给药5次,末次给药后间隔一个药物半衰期后抽取血样,并处死实验动物获取椎间盘髓核样本,采用高效液相-二级质谱联用方法测定血清和髓核药物浓度。同一时间点不同抗生素对感染及正常髓核组织的渗透率采用两样本t检验进行比较,椎间盘弥散功能比较、同一抗生素在不同时间点对感染及正常髓核组织渗透率的比较采用单因素方差分析和LSD法。采用直线相关检验分析正常及感染髓核中头孢唑林钠、克林霉素浓度与MRI增强后信号增强强度值之间的相关性。结果头孢唑林钠及克林霉素对感染椎间盘髓核组织的渗透率与对正常椎间盘髓核组织的渗透率比较,在椎间盘炎早期(感染后第1周、第2周、第4周)均增高,差异具有统计学意义[(头孢唑林钠:t=2.05,P=0.032;t=7.71,P<0.001;t=9.70,P<0.001),(克林霉素:t=2.68,P=0.015;t=4.25,P<0.001;t=7.42,P<0.001)],且均在感染第4周时达到最佳渗透率。在椎间盘炎中晚期﹙感染后第8周、第12周﹚,头孢唑林钠及克林霉素对感染椎间盘髓核组织的渗透率逐渐下降。头孢唑林钠对感染椎间盘髓核组织的渗透率与对正常椎间盘髓核组织的渗透率比较,第8周时差异无统计学意义(t=0.70,P=0.183),第12周时明显降低(t=-3.88,P<0.001)。克林霉素对感染椎间盘髓核组织的渗透率与对正常椎间盘髓核组织的渗透率比较,第8周(t=-2.57,P=0.010)和第12周时(t=-3.13,P=0.010)均明显降低,差异具� 展开更多
关键词 椎间盘炎 软骨终板 弥散功能 头孢唑林钠 克林霉素
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高迁移率蛋白-1在大鼠腰椎软骨终板退变中的作用及相关机制
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作者 李磊 邢文华 +5 位作者 李峰 吉德民 胡宝阳 辛大齐 祝勇 杨学军 《中国脊柱脊髓杂志》 CSCD 北大核心 2018年第11期1026-1033,共8页
目的:观察高迁移率蛋白-1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)在大鼠腰椎软骨终板退变中的作用,探讨其相关机制.方法:选取4周龄SD大鼠处死,在显微镜下取出腰椎软骨终板,消化后提取细胞,再进行培养、分离、纯化,免疫荧光染色检测... 目的:观察高迁移率蛋白-1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)在大鼠腰椎软骨终板退变中的作用,探讨其相关机制.方法:选取4周龄SD大鼠处死,在显微镜下取出腰椎软骨终板,消化后提取细胞,再进行培养、分离、纯化,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原鉴定软骨终板细胞(cartilage endplate cell,CEC).用不同浓度的FBS分别培养CEC 24h、48h,MTT法检测细胞活性.在第三代CEC中加入HMGB1后,分别在3h、6h、12h、24h时检测金属基质蛋白酶-3(proteins of the matrix metalloproteinase,MMP-3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的mRNA表达,6h、12h、24h时检测蛋白表达量;CEC中加入100ng/ml HMGB1后分别在0、5、10、30、60和120min,使用Western blot检测细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化的表达;继而将CEC分为6组:对照组、HMGB1 (100ng/ml)组、FPSMZ1 (HMGB1抑制剂)组、HMGB1 +FPSMZ1组、U0126(ERK抑制剂)组、HMGB1+U0126组),使用Western blot分别检测MMP-3、VEGF和ERK信号转导途径磷酸化的表达及Elisa检测IL-10的表达.全部结果均为重复独立3次实验,计算其均数±标准差.结果:分离纯化的细胞Ⅱ型胶原抗体表达呈阳性,为CEC细胞;10%FBS培养48h为CEC增殖最佳的时间点和浓度;HMGB1能够诱导ERK和JNK信号转导途径磷酸化,从开始到10min逐渐升高,10min时达峰值.HMGB1上调了MMP-3 (P=0.039)和VEGF的mRNA (P=0.042)表达,下调IL-10 (P=0.025)的mRNA表达,三种因子蛋白表达与mRNA有相同的规律;HMGB1 +FPSZM1组与HMGB1组相比,ERK信号转导途径的磷酸化明显减少;在CEC中加入U0126后,MMP-3 (P=0.041)和VEGF(P=0.042)蛋白表达明显降低,而IL-10(P=0.004)蛋白表达明显增高;在CEC中加入FPSMZ1后,HMGB1对ERK信号转导途径磷酸化表达的作用明显降低(P=0.031).结论:HMGB1可增加大鼠腰椎CEC中的MMP-3和VEGF的表达,降低IL-10的表达,其可能是通过ERK信号转导� 展开更多
关键词 高迁移率蛋白-1 ERK信号转导途径 软骨终板 大鼠
退变性腰椎滑脱软骨终板改变的影像学研究 预览
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作者 王文哲 葛鹏 申才良 《安徽医科大学学报》 北大核心 2017年第9期1365-1369,共5页
目的通过磁共振成像研究退变性腰椎滑脱与软骨终板退变的关系。方法对所有受检者的L4/L5、L5/S1椎间盘行正中矢状位T2加权磁共振扫描,测量每个软骨终板的前半倾角和后半倾角,计算出前半倾角与后半倾角的比值作为该终板的变异率。分别比... 目的通过磁共振成像研究退变性腰椎滑脱与软骨终板退变的关系。方法对所有受检者的L4/L5、L5/S1椎间盘行正中矢状位T2加权磁共振扫描,测量每个软骨终板的前半倾角和后半倾角,计算出前半倾角与后半倾角的比值作为该终板的变异率。分别比较滑脱组与正常组对应阶段的软骨终板变异率的差异。结果 L4滑脱组:L4/L5椎间盘上、下终板与正常组之间差异均有统计学意义(t=11.280、-3.765,P=0.000)。L5滑脱组:L5/S1椎间盘上、下终板与正常组之间差异有统计学意义(t=3.736、-3.835,P=0.001、0.000);L5/S1椎间盘自身上、下终板之间差异有统计学意义(t=4.633,P=0.000)。所有受检者中L4/L5椎间盘自身上、下终板之间差异有统计学意义(t=17.377、3.137、2.199,P=0.000、0.005、0.035)。其余各对比差异均无统计学意义。结论腰椎滑脱可致滑脱阶段软骨终板退变,且前、后半终板的退变程度不对称:椎间盘上终板的后半终板比前半终板退变严重,下终板的前半终板退变比后半终板严重;对非滑脱阶段软骨终板的退变无明显影响。 展开更多
关键词 软骨终板 退变性腰椎滑脱 磁共振
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软骨终板干细胞动物体内成骨/软骨的初步研究 预览 被引量:1
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作者 刘兰涛 朱瑜洁 +2 位作者 黄博 李长青 周跃 《局解手术学杂志》 2016年第4期235-239,共5页
目的观察软骨终板干细胞在动物体内成骨/软骨的能力。方法临床获取腰椎退变椎间盘软骨终板,采用琼脂糖筛选软骨终板干细胞后进行传代扩增,扩增后的软骨终板干细胞与羟基磷灰石复合后植入裸鼠皮下,7周后处死裸鼠取出复合物,分别进行特殊... 目的观察软骨终板干细胞在动物体内成骨/软骨的能力。方法临床获取腰椎退变椎间盘软骨终板,采用琼脂糖筛选软骨终板干细胞后进行传代扩增,扩增后的软骨终板干细胞与羟基磷灰石复合后植入裸鼠皮下,7周后处死裸鼠取出复合物,分别进行特殊染色和免疫组化染色分析。同时,将扩增的干细胞注入兔子退变椎间盘中,16周后行MRI检测,观察退变椎间盘修复情况。结果软骨终板干细胞羟基磷灰石复合物切片经甲苯胺蓝染色后有异染性,提示有软骨基质形成;同时Mallory染色显示羟基磷灰石空隙中有蓝染存在,说明有成熟的骨基质形成。免疫组织化学结果提示,所形成的基质主要为Ⅰ型和Ⅹ型胶原,同时有少量Ⅱ型胶原表达。MRI结果提示植入退变椎间盘的终板干细胞在动物体内可以分化为类软骨样细胞,从而修复退变椎间盘。结论软骨终板干细胞可以在动物体内向成骨/软骨方向分化。 展开更多
关键词 椎间盘 干细胞 软骨终板 诱导
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兔椎间失稳后弹性内固定软骨终板Ⅱ型胶原蛋白变化的实验研究 预览 被引量:2
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作者 张昭 杨学军 +3 位作者 宋雄英 邢文华 霍洪军 刘春杨 《河北医科大学学报》 CAS 2015年第7期775-778,F0002共5页
目的观察兔软骨终板在椎间失稳环境下,经弹性内固定重建椎间稳定,软骨终板Ⅱ型胶原蛋白的变化,为腰腿痛疾病的治疗提供新的思路和方法。方法选取36只6个月龄日本大耳白兔,雄雌不限,体质量(2.5±0.15)kg,随机分为对照组和实验组各1... 目的观察兔软骨终板在椎间失稳环境下,经弹性内固定重建椎间稳定,软骨终板Ⅱ型胶原蛋白的变化,为腰腿痛疾病的治疗提供新的思路和方法。方法选取36只6个月龄日本大耳白兔,雄雌不限,体质量(2.5±0.15)kg,随机分为对照组和实验组各18只。先将实验所用36只兔制作成L6/7椎间手术失稳模型;实验组在手术失稳2个月后用椎弓根螺丝钉和张力钢丝弹性内固定的方法进行L6/7的稳定性重建,术后2、4、6个月分别取2组兔椎间盘软骨终板(每个时点6只),用免疫组织化学的方法检测Ⅱ型胶原蛋白,用JD801图像分析系统进行图像分析,综合判断软骨终板的退行性变过程及机制。结果实验组手术进行椎间失稳张力钢丝弹性内固定稳定性重建后,2、4、6个月短期内椎间软骨终板厚度较对照组明显变厚,软骨细胞显著增加。实验组Ⅱ型胶原蛋白灰度术后2~6个月逐渐下降,实验组Ⅱ型胶原蛋白灰度术后2~6个月均低于对照组(P〈0.01);实验组Ⅱ型胶原蛋白光密度术后2~6个月逐渐升高,实验组Ⅱ型胶原蛋白光密度术后2~6个月均高于对照组(P〈0.01)。结论弹性内固定能有效阻止软骨终板Ⅱ型胶原蛋白的退行性变;而且有部分恢复的征象,为进一步进行其他治疗创造了必要条件。 展开更多
关键词 椎间盘退行性变 软骨终板 胶原Ⅱ型 内固定
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兔椎间失稳弹性内固定后软骨终板蛋白多糖含量变化的实验研究 预览
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作者 张昭 杨学军 +3 位作者 宋雄英 霍洪军 邢文华 刘春杨 《中国医药导报》 2015年第24期4-8,共5页
目的探讨椎间失稳环境下软骨终板蛋白多糖的变化。方法选取48只6月龄日本大耳白兔.体重(2.50±0.15)kg,均在相同环境条件下喂养,随机分为对照组和实验组,每组各24只;两组兔均进行椎间手术失稳。实验组在手术失稳2个月后用... 目的探讨椎间失稳环境下软骨终板蛋白多糖的变化。方法选取48只6月龄日本大耳白兔.体重(2.50±0.15)kg,均在相同环境条件下喂养,随机分为对照组和实验组,每组各24只;两组兔均进行椎间手术失稳。实验组在手术失稳2个月后用椎弓根螺丝钉和张力钢丝弹性内固定的方法进行L67的稳定性重建,对照组不进行稳定性重建。两组分别在内固定术后2.4、6个月取材对椎间盘软骨终板蛋白多糖进行检测,比较不同时间软骨终板蛋白多糖水平变化。结果①组内比较,两组术后2、4、6个月蛋白多糖灰度及光密度值比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。对照组术后4个月蛋白多糖灰度低于同组术后2个月,光密度值高于术后2个月,差异均有高度统计学意义(P〈0.01);对照组术后6个月蛋白多糖灰度低于同组术后4个月,光密度值高于术后4个月,差异均有高度统计学意义(P〈0.01)。实验组术后4个月蛋白多糖灰度高于同组术后2个月,光密度值低于术后2个月,差异均有高度统计学意义(P〈0.01);实验组术后6个月蛋白多糖灰度高于同组术后4个月,光密度值低于术后4个月,差异均有高度统计学意义(P〈0.01)。②组间比较,实验组术后6个月蛋白多糖灰度高于对照组,光密度值低于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论弹性内固定能有效地阻止椎间盘软骨终板蛋白多糖的退变,而且有部分恢复的征象,它为进一步进行其他治疗创造了必要条件。 展开更多
关键词 兔椎间盘 软骨终板 蛋白多糖 弹性内固定
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兔椎间失稳软骨终板退变后弹性内固定作用的电镜实验研究 被引量:1
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作者 张昭 杨学军 +3 位作者 宋雄英 霍洪军 邢文华 刘春杨 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期1422-1426,共5页
[目的]通过电镜观察研究弹性内固定重建椎间稳定的方法对软骨终板变化的作用机制,为椎间盘退变的临床治疗提供新的思路和方法。[方法]选取48只6个月龄日本大耳白兔,随机分组,分为实验失稳对照组和实验弹性内固定组,两组均为24只兔,将所... [目的]通过电镜观察研究弹性内固定重建椎间稳定的方法对软骨终板变化的作用机制,为椎间盘退变的临床治疗提供新的思路和方法。[方法]选取48只6个月龄日本大耳白兔,随机分组,分为实验失稳对照组和实验弹性内固定组,两组均为24只兔,将所有实验用兔进行手术椎间失稳;仅实验弹性内固定组在手术失稳2个月后用椎弓根螺钉和张力钢丝弹性内固定的方法进行L6、7的稳定性重建,均分别在内固定术后2、4、6个月取材。对椎间盘软骨终板用透射电镜观察,以判断软骨终板的退变过程。[结果]弹性内固定能明显阻止椎间盘软骨终板胶原纤维的退变,并可见软骨终板胶原纤维结构有部分恢复。[结论]弹性内固定能有效地阻止椎间盘软骨终板的退变;能有效促进软骨终板的修复。 展开更多
关键词 椎间盘 软骨终板 弹性内固定 退变机理 电镜
腰椎间盘退变对软骨终板生物力学特性影响的有限元分析 被引量:7
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作者 赵亮 闫广华 +3 位作者 瞿东滨 赵卫东 史占军 张美超 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第4期455-460,共6页
目的 研究腰椎终板不同位点的压应力分布规律,分析腰椎间盘退变对软骨终板压应力的影响。方法 选取一青壮年男性新鲜尸体的腰椎运动节段标本,螺旋CT机对腰椎运动节段进行连续CT扫描,利用有限元分析方法,建立L4/5运动节段有限元分析模型... 目的 研究腰椎终板不同位点的压应力分布规律,分析腰椎间盘退变对软骨终板压应力的影响。方法 选取一青壮年男性新鲜尸体的腰椎运动节段标本,螺旋CT机对腰椎运动节段进行连续CT扫描,利用有限元分析方法,建立L4/5运动节段有限元分析模型,在此基础上建立椎间盘退变模型。模拟椎间盘正常状态和椎间盘退变状态,在L4、L5椎体终板上选择具有代表性的结点,分别代表椎体终板正中部、左右侧边缘、后中部和前中部,对上下软骨终板压应力分布进行有限元分析。结果 椎间盘退变组较正常组的终板压应力均显著增大,上下终板在轴向加载、前屈、后伸、左旋和右旋加载时椎间盘退变组较正常状态时应力分布均显著增大,具有统计学意义(P〈0.05)。结论 腰椎椎间盘退变因素对终板的应力分布有明显影响,随着椎间盘退变,椎间盘软骨终板应力显著增大。 展开更多
关键词 腰椎 软骨终板 腰椎间盘退变 生物力学
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