期刊文献+
共找到11篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
小菜蛾中肠Polycalin蛋白的基因克隆、表达及与Cry1Ac毒素的结合特性分析 预览
1
作者 展恩玲 杜潇 +3 位作者 赵爱平 孙聪 刘同先 李怡萍 《昆虫学报》 CSCD 北大核心 2017年第10期1155-1167,共13页
【目的】Polycalin蛋白是一种新发现的Bt毒素受体,可能与昆虫对Bt的抗性有关。本研究旨在明确小菜蛾Plutella xylostella Polycalin蛋白与Bt Cry1Ac毒素的关系。【方法】本研究通过PCR结合RACE技术从小菜蛾3龄幼虫中肠克隆获得Polycali... 【目的】Polycalin蛋白是一种新发现的Bt毒素受体,可能与昆虫对Bt的抗性有关。本研究旨在明确小菜蛾Plutella xylostella Polycalin蛋白与Bt Cry1Ac毒素的关系。【方法】本研究通过PCR结合RACE技术从小菜蛾3龄幼虫中肠克隆获得Polycalin蛋白基因的全长cDNA序列,采用实时定量PCR技术研究Polycalin蛋白在小菜蛾不同发育阶段、4龄幼虫不同组织及用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂3龄幼虫后的表达量。提取小菜蛾幼虫中肠的刷状缘膜囊泡(BBMV),运用合成多肽的方法制备Polycalin 蛋白抗体,利用Western blot和Ligand blot技术对小菜蛾Polycalin蛋白进行鉴定,分析其与Cry1Ac毒素的结合特性。【结果】克隆得到的小菜蛾Polycalin蛋白基因的cDNA序列全长为9 102 bp(GenBank登录号: MF138149),其中,开放阅读框为8 778 bp,编码2 925个氨基酸;预测蛋白质分子量为326.38 kD,等电点为4.39;在推导的氨基酸序列中,前20个氨基酸为N-末端信号肽序列,含有14个N-糖基化位点,67个O-糖基化位点,6个脂质运载蛋白特征序列,6个脂质运载蛋白位点和13个类脂质运载蛋白结构域,并且在第20和21位(TSG-QVV)氨基酸之间存在一个裂解位点,在C-末端存在2个GPI结合位点,具有Bt毒素受体的特征。该蛋白在幼虫期的表达量较高,尤其在3龄幼虫体内表达量最高,在蛹和成虫中的表达量最低;在4龄幼虫的头、胸、腹中均有表达,在幼虫腹部中的表达量最高;3龄幼虫取食不同浓度的Cry1Ac毒素后,Polycalin蛋白的表达量下降,且Cry1Ac毒素浓度越高,下降越明显。通过Western blot检测到小菜蛾中肠刷状缘膜囊泡(BBMV)上存在大约300 kD的Polycalin 蛋白条带;Ligand blot实验证明了小菜蛾Polycalin蛋白能与Cry1Ac毒素结合。【结论】本研究首次初步明确了小菜蛾Polycalin蛋白具有与Bt毒素结合的特性,为研究Bt对昆虫的作用机理� 展开更多
关键词 小菜蛾 BT毒素 Polycalin 基因克隆 基因表达 Cry1Ac毒素
在线阅读 下载PDF
Cry1Ac毒素突变体的构建、表达及杀虫活性测定 预览 被引量:1
2
作者 袁晓曼 丁照鑫 +1 位作者 张淑臣 刘京国 《中国农学通报》 2017年第36期139-144,共6页
为了构建对敏感和类钙粘蛋白突变的抗性昆虫都具有高杀虫活性的毒素,将Cry1Ac毒素结构域I中α1和α2之间插入一个α胰凝乳蛋白酶作用位点,并分析突变体毒素在苏云金芽孢杆菌中形成伴孢晶体、目标蛋白的表达情况,以及鉴定突变体毒素的杀... 为了构建对敏感和类钙粘蛋白突变的抗性昆虫都具有高杀虫活性的毒素,将Cry1Ac毒素结构域I中α1和α2之间插入一个α胰凝乳蛋白酶作用位点,并分析突变体毒素在苏云金芽孢杆菌中形成伴孢晶体、目标蛋白的表达情况,以及鉴定突变体毒素的杀虫活性。结果发现:4个突变体蛋白都能在苏云金芽孢杆菌中表达产生约130 k Da的目标蛋白,但不能形成有规则的伴孢晶体。这可能是由于突变体蛋白在Bt生长的平稳期达到最高,在衰亡期开始被降解造成的。4个突变体中,Cry1Acm4在培养48 h时产量最高,而且其对甜菜夜蛾杀虫活性比野生型高1.6倍,但是其产量只有野生型毒素产量的十分之一。尽管由于Cry1Acm4的表达量较低而使其实际应用的价值不大,但这种构建突变体的方法对研究高毒力的Cry1Ac毒素提供一种新的思路。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 Cry1Ac毒素 突变体 杀虫活性
在线阅读 下载PDF
Cry1Ac毒素对小菜蛾幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响
3
作者 赵爱平 展恩玲 +2 位作者 孙聪 刘同先 李怡萍 《植物保护学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期713-720,共8页
为了明确Cry1Ac毒素对小菜蛾Plutella xylostella幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响,利用蛋白酶专性底物测定其中肠各蛋白酶活性在不同缓冲液中的最适pH,并用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后测定该毒素的致死中浓度LC_(50),观... 为了明确Cry1Ac毒素对小菜蛾Plutella xylostella幼虫中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的影响,利用蛋白酶专性底物测定其中肠各蛋白酶活性在不同缓冲液中的最适pH,并用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后测定该毒素的致死中浓度LC_(50),观察中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性的变化,分析Cry1Ac毒素与昆虫中肠酶活性间的关系。结果表明,小菜蛾幼虫中肠总蛋白酶在Tris-HCl、KH_2PO_4/NaOH和Glycine/NaOH三种缓冲液中最适pH均为11.0;强碱性胰蛋白酶的最适pH分别为10.0、10.5和10.5;弱碱性胰蛋白酶的最适pH均为8.5;胰凝乳蛋白酶的最适pH分别为8.5、9.0和9.0。Cry1Ac毒素对小菜蛾的致死中浓度LC_(50)为0.343μg/mL。用不同浓度Cry1Ac毒素饲喂小菜蛾幼虫后,其中肠各蛋白酶活性均随时间的变化而变化。弱碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活性明显升高,且随浓度升高呈上升趋势;在取食36~72 h期间低浓度处理组的羧酸酯酶活性与对照组间无显著差异,而高浓度处理组羧酸酯酶活性显著高于对照组。表明Cry1Ac毒素能够显著影响小菜蛾的中肠蛋白酶和羧酸酯酶活性。 展开更多
关键词 小菜蛾 蛋白酶 羧酸酯酶 Cry1Ac毒素 酶活性
亚洲玉米螟中肠类钙黏蛋白Cry1A毒素结合区对Cry1Ac毒素杀虫活性的影响 预览 被引量:1
4
作者 靳婷婷 王振营 何康来 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2015年第1期41-47,共7页
通过原核表达及亲和层析获得亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis中肠类钙黏蛋白Cry1A毒素结合区MPR及其在Cry1Ac抗性玉米螟中的突变体MPR-r2多肽片段。采用饲料混合法测定了MPR和MPR-r2及其分别与Cry1Ac毒素混合对亚洲玉米螟幼虫的杀虫效果... 通过原核表达及亲和层析获得亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis中肠类钙黏蛋白Cry1A毒素结合区MPR及其在Cry1Ac抗性玉米螟中的突变体MPR-r2多肽片段。采用饲料混合法测定了MPR和MPR-r2及其分别与Cry1Ac毒素混合对亚洲玉米螟幼虫的杀虫效果。结果表明,MPR和MPR-r2多肽片段对亚洲玉米螟幼虫都有一定的杀虫作用;当MPR多肽片段与Cry1Ac毒素混合时,杀虫活性具有加性效应,而MPR-r2多肽片段与Cry1Ac毒素混合的杀虫效果则没有显著提高。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 类钙黏蛋白 毒素结合区 Cry1Ac毒素 加性效应 等位基因突变
在线阅读 免费下载
利用基因工程抗体建立的新型双抗夹心 ELISA法检测Cry1Ac毒素 预览 被引量:1
5
作者 张留圈 张霄 +6 位作者 刘媛 徐重新 张存政 谢雅晶 颜春荣 寇莉萍 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期634-639,共6页
为明确新型双抗夹心ELISA方法检测Cry1Ac毒素的效果,分别用纯化后的抗Cry1Ac单链抗体和an-ti-Cry1Ac兔多克隆血清(Anti-Cry1Ac-PAbs)作为捕获抗体和检测抗体,通过方阵滴定确定其最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA法。再用优化后的双抗夹... 为明确新型双抗夹心ELISA方法检测Cry1Ac毒素的效果,分别用纯化后的抗Cry1Ac单链抗体和an-ti-Cry1Ac兔多克隆血清(Anti-Cry1Ac-PAbs)作为捕获抗体和检测抗体,通过方阵滴定确定其最佳工作浓度,建立双抗夹心ELISA法。再用优化后的双抗夹心ELISA方法对检测Cry1Ac毒素的敏感性、特异性和回收率进行鉴定。结果表明,新型双抗夹心ELISA法最低检测限为0.91 ng/ml,线性检测范围为1.04 ng/ml~3.49μg/ml。5种稻米中Cry1Ac毒素的平均回收率为69.42%~87.95%,变异系数为1.19%~6.50%。 展开更多
关键词 基因工程抗体 Cry1Ac毒素
在线阅读 下载PDF
基于磁珠和双抗夹心免疫分析的 Bt Cry1Ac 毒素单链抗体筛选与鉴定 预览
6
作者 张留圈 张霄 +5 位作者 刘媛 徐重新 张存政 谢雅晶 寇莉萍 刘贤金 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1802-1810,共9页
【目的】通过设计并优化生物素一亲和素标记磁珠筛选策略,建立针对CrylAc毒素的新型双抗夹心ELISA检测方法,为研究灵敏、快速的Bt毒素的检测方法建立一种新的检测模式。【方法】采用磁珠液相正负筛选方法,经过4轮筛选后,对每轮筛选... 【目的】通过设计并优化生物素一亲和素标记磁珠筛选策略,建立针对CrylAc毒素的新型双抗夹心ELISA检测方法,为研究灵敏、快速的Bt毒素的检测方法建立一种新的检测模式。【方法】采用磁珠液相正负筛选方法,经过4轮筛选后,对每轮筛选后抗CrylAc毒素特异性结合噬菌体抗体的富集效果进行鉴定,通过单克隆ELISA方法从第4轮筛选得到的次级库中获得特异性结合Crylhc的阳性克隆,并对其进行PCR鉴定和DNA测序,确定有完整插入的scFv片段后进行后期相关试验。将相对结合活性最好的阳性克隆scFv-A12替换宿主菌HB2151中进行可溶性诱导表达并纯化。利用纯化后的scFv-A12作为“捕获抗体”,Anti-CrylAc兔多克隆抗体作为“检测抗体”,建立针对CrylAc的双抗夹心ELISA检测方法。【结果】以生物素化的CrylAc蛋白为包被原,利用噬菌体抗体库对其进行了4轮液相筛选。结果显示,相对产出率随着筛选轮数的增加而提高,第4轮较第1轮提高了42倍;单克隆噬菌体ELIsA鉴定抗CrylAc噬菌体抗体,以试验孔OD450/阴性孔OD450大于2.1为阳性标准,从第4轮筛选后的培养皿中随机挑选了300个菌落,经单克隆ELISA鉴定出6个阳性克隆,分别命名为hsCrylAc-C5、hsCrylAc-D8、hsCrylAc-Cl2、hsCrylAc-A12、hsCrylAc-F9和hsCrylAc-F4。其中,hsCrylAc-A12具有相对较高的亲和力。对上述6个阳性克隆进行菌液PCR检测发现,在935bp处均有明显的目的条带,通过对其进行测序和氨基酸序列比对,最终得到4株不同氨基酸序列的阳性克隆。hsCrylAc-A12在成功替换宿主菌HB2151后,经1mm01·L-1 IPTG诱导表达,于30℃条件下培养过夜。其表达产物经HiSTrapHP镍亲和柱纯化后SDS-PAGE检测,hsCrylAc-A12蛋白分子量约为30kD。通过方阵滴定对抗体浓度进行优化后,利用单链抗体为“捕获抗体”,多抗为“检测抗体”,建立了CrylAc双抗� 展开更多
关键词 磁珠 Cry1Ac毒素 单链抗体 双抗夹心ELISA
在线阅读 下载PDF
时间分辨荧光免疫法测定土壤中Cry1Ac毒素 预览 被引量:2
7
作者 王耘 刘贤进 +3 位作者 刘媛 张存政 张霄 徐重新 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期1157-1162,共6页
为了建立快速监测土壤中Cry1Ac毒素的方法,本试验利用Cry1Ac多克隆抗体和铕标记的羊抗兔IgG,采用时间分辨荧光免疫分析技术(Time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)法快速检测5种典型土壤(黑土、黄壤、红壤、紫色土、潮土)... 为了建立快速监测土壤中Cry1Ac毒素的方法,本试验利用Cry1Ac多克隆抗体和铕标记的羊抗兔IgG,采用时间分辨荧光免疫分析技术(Time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)法快速检测5种典型土壤(黑土、黄壤、红壤、紫色土、潮土)中Cry1Ac毒素的回收率。结果表明,该方法最低检出限为0.3μg/L,线性检测范围为0.3~500.0μg/L,批内和批间变异系数均小于10.00%。5种土壤中Cry1Ac毒素的平均添加回收率为75.03%,其中有机质含量最高的黑土的添加回收率最低,且随着不同土壤中有机质含量的降低,添加回收率逐渐升高。间接时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)法与酶联免疫吸附(ELISA)法的测定结果高度相关,相关系数为0.996 7。因此,本试验建立的TRFIA方法可为土壤中Cry1Ac残留检测提供一个新的平台。 展开更多
关键词 土壤 Cry1Ac毒素 时间分辨荧光免疫分析
在线阅读 下载PDF
甜菜夜蛾低龄幼虫取食含Cry1Ac毒素的人工饲料对其生长发育和成虫繁殖的影响 被引量:4
8
作者 陈建 江幸福 +1 位作者 罗礼智 胡毅 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1119-1126,共8页
为了更全面地评价转Bt基因作物对甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hbner)(鳞翅目:夜蛾科)的影响,在室内研究了甜菜夜蛾低龄幼虫连续6d取食含不同浓度Cry1Ac毒素的人工饲料后转移到不含毒素的饲料上,其生长发育与成虫繁殖的变化。结果... 为了更全面地评价转Bt基因作物对甜菜夜蛾Spodoptera exigua(Hbner)(鳞翅目:夜蛾科)的影响,在室内研究了甜菜夜蛾低龄幼虫连续6d取食含不同浓度Cry1Ac毒素的人工饲料后转移到不含毒素的饲料上,其生长发育与成虫繁殖的变化。结果表明:低龄幼虫取食含Cry1Ac的饲料6d内,校正死亡率随Cry1Ac浓度的升高以及取食时间的延长而升高。与一直取食不含Cry1Ac饲料的对照相比,取食含Cry1Ac饲料的幼虫体重显著下降;幼虫历期、预蛹期及雌雄蛹期均显著延长,但雌雄蛹重均与对照无显著差异;幼虫化蛹率显著下降,但羽化率与对照无显著差异;成虫产卵前期显著延长,产卵期与对照无显著差异,仅在5μg/g处理下较对照显著延长1.3d;每雌产卵量以10μg/g处理最高(719粒),但各处理均与对照无显著差异;雌蛾寿命均显著延长,而雄蛾寿命仅在最高浓度80μg/g下显著延长2.4d。这表明,尽管含不同浓度Cry1Ac毒素的饲料对甜菜夜蛾低龄幼虫有明显的生长发育抑制作用或导致死亡,但转移至不含毒素的饲料上取食后,幼虫能迅速恢复生长,顺利化蛹、羽化并产卵。因此,在转Bt基因作物田生长后期,甜菜夜蛾低龄幼虫取食表达Cry1Ac蛋白的组织若能存活并完成世代发育和繁殖,这无疑将增加甜菜夜蛾对Bt作物产生抗性的风险,因此亟需制定Bt作物生态系统中甜菜夜蛾的治理策略。 展开更多
关键词 甜菜夜蛾 人工饲料 低龄幼虫 Cry1Ac毒素 生长发育 繁殖
一些化学物质对苏云金芽孢杆菌Cry1Ac毒素与昆虫离体细胞相互作用的影响 预览
9
作者 刘凯于 阎江洪 +2 位作者 康薇 郑进 洪华珠 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2005年第5期 540-543,共4页
为探讨苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)杀虫晶体蛋白与昆虫细胞的相互作用,以Bt Cry1Ac毒素和对该毒素敏感的粉纹夜蛾Trichoplusia ni离体细胞BTI-TN-5B1-4为材料,研究了一些化学物质对Cry1Ac毒素与昆虫离体细胞相互作用的影... 为探讨苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)杀虫晶体蛋白与昆虫细胞的相互作用,以Bt Cry1Ac毒素和对该毒素敏感的粉纹夜蛾Trichoplusia ni离体细胞BTI-TN-5B1-4为材料,研究了一些化学物质对Cry1Ac毒素与昆虫离体细胞相互作用的影响.结果表明:N-糖基化抑制剂衣霉素、蛋白质合成抑制剂放线菌酮、胞吞作用抑制剂莫能菌素和胰蛋白酶预处理,都能不同程度地提高BTI-TN-5B1-4细胞对Cry1Ac毒素的敏感性,其中胰蛋白酶预处理的作用最明显;而N-乙酰半乳糖胺不能抑制Cry1Ac毒素对这种离体细胞的毒力. 展开更多
关键词 Cry1Ac毒素 昆虫离体细胞 敏感性 昆虫离体细胞 苏云金芽孢杆菌 相互作用 化学物质 毒素 杀虫晶体蛋白 BACILLUS 合成抑制剂 酶预处理
在线阅读 下载PDF
Effects of transgenic Cry1A+CpTI cotton and Cry1Ac toxin on the parasitoid, Campoketis chlorideae (Hymenoptera:Ichneumonidae) 被引量:2
10
作者 XIAO-XIALIU CHANG-GUISUN QING-WENZHANG 《中国昆虫科学:英文版》 CAS CSCD 2005年第2期101-107,共7页
The effect oftransgenic double genes, Cry1A + CpTlcotton and Cry1Ac toxin on the parasitoid, Carnpoketis chlorideae Uchida of cotton bollworm, Helicoverpa armigera (Hübner), was investigated in the laboratory. He... The effect oftransgenic double genes, Cry1A + CpTlcotton and Cry1Ac toxin on the parasitoid, Carnpoketis chlorideae Uchida of cotton bollworm, Helicoverpa armigera (Hübner), was investigated in the laboratory. Helicoverpa armigera larvae when in the first,second and third instar could not survive if fed on transgenic cotton leaves. Consequently,C. chlorideae larvae could not complete their development if parasitizing on such hosts.After H. armigera larvae were reared on transgenic or traditional cotton leaves for 12-48 hours, they were parasitized by C. chlorideae females. Parasitized larvae continued to feed on transgenic or traditional cotton for 12-48 h. The present results showed that the body weight of larvae of the parasitoids were significantly reduced when parasitized hosts fed on transgenic cotton leaves compared to those fed on traditional cotton. Duration of egg and larvae stage were significantly prolonged, pupal and adult weight of C. chloridae was decreased when the host larvae fed on transgenic cotton leaves longer than 48 h. The development duration of C. chlorideae pupae on the hosts fed on transgenic cotton leaves in each treatment was not significantly different from those of controls. The longevity of parasitoid females and males fed with a solution containing Cry1Ac toxin was not significantly different with that of the control. 展开更多
关键词 转基因棉花 姬蜂科 寄生性天敌 抗虫基因 Cry1A基因 CpTl基因 Campoketis chlorideae Uchida Cry1Ac毒素
对Cry1Ac毒素敏感性不同的三种BT1—Tn—5B1细胞品系基因组DNA的RAPD及SSR分析 预览
11
作者 蒋才富 刘凯于 +2 位作者 洪华珠 彭建新 余泽华 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第1期 40-44,共5页
用Operon公司W系列和F系的40个随机引物列对BT1-Tn-5B1 Cry1Ac敏感细胞、抗性细胞和抗性衰退细胞的基因组DNA进行PCR扩增.经琼脂糖凝胶电泳和EB显色总共扩增出了259条清晰带,其中有250条带为三种细胞所共有,有9条为特异性扩增带.其中3... 用Operon公司W系列和F系的40个随机引物列对BT1-Tn-5B1 Cry1Ac敏感细胞、抗性细胞和抗性衰退细胞的基因组DNA进行PCR扩增.经琼脂糖凝胶电泳和EB显色总共扩增出了259条清晰带,其中有250条带为三种细胞所共有,有9条为特异性扩增带.其中3条特异性带为敏感细胞和抗性衰退细胞样品共有,3条特异性带为抗性细胞和抗性衰退细胞样品所特有,1条特异性带为抗性衰退细胞样品特有,2条特异性带为抗性细胞和敏感细胞样品共有,另外某些带在三种细胞之间还存在明显的强弱和宽窄差异.用三个微卫星引物序列分别对三种细胞的总DNA进行扩增,得到了14条清晰的扩增带,发现它们在带形上并无太大差异,但有1条带存在明显的强弱差异.这表明BT1-Tn-5B1细胞对Cry1Ac抗性的产生和衰退与基因组DNA的多态性有关. 展开更多
关键词 Cry1Ac毒素 敏感性 BT1-Tn-5B1细胞 基因组DNA RAPD SSR分析 抗性细胞 粉纹夜蛾
在线阅读 免费下载
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈