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替诺福韦与恩替卡韦治疗乙型肝炎E抗原阳性慢性乙型肝炎的效果比较
1
作者 余力 陈英俊 鲍坚志 《中国基层医药》 CAS 2019年第1期56-59,共4页
目的比较替诺福韦(TDF)与恩替卡韦(ETV)治疗乙型肝炎E抗原(HBeAg)阳性慢性乙型肝炎(CHB)的临床效果及安全性。方法选取天台县人民医院2014年6月至2016年6月收治的HBeAg阳性初治CHB患者104例为观察对象,采用随机数字表法分为TDF组和ETV组... 目的比较替诺福韦(TDF)与恩替卡韦(ETV)治疗乙型肝炎E抗原(HBeAg)阳性慢性乙型肝炎(CHB)的临床效果及安全性。方法选取天台县人民医院2014年6月至2016年6月收治的HBeAg阳性初治CHB患者104例为观察对象,采用随机数字表法分为TDF组和ETV组各52例。TDF组给予TDF300mg/d治疗,ETV组给予ETV0.5mg/d治疗,均连续治疗12个月。比较两组治疗前后血清HBVDNA、HBeAg、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平变化及临床疗效、不良反应发生情况。结果治疗前,两组血清HBVDNA、HBeAg、ALT水平差异均无统计学意义(t=0.12、1.51、1.62,均P>0.05)。治疗后,两组血清HBVDNA、HBeAg、ALT水平均下降,且TDF组血清HBVDNA水平下降幅度大于ETV组,差异有统计学意义(t=3.54,P<0.05),但两组血清HBeAg、ALT水平差异均无统计学意义(t=0.04、0.79,均P>0.05)。TDF组总有效率为92.31%(48/52),ETV组总有效率为76.92%(40/52),TDF组总有效率明显高于ETV组(χ^2=4.73,P<0.05)。治疗期间TDF组不良反应总发生率为7.69%(4/52),低于ETV组的11.54%(6/52),但差异无统计学意义(χ^2=0.44,P>0.05)。结论与ETV相比,TDF治疗HBeAg阳性初治CHB的疗效更佳,可能与其显著抑制HBVDNA复制有关。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 慢性 肝炎e抗原 乙型 丙氨酸转氨酶 脱氧核糖核酸酶类 替诺福韦 恩替卡韦 药物疗法 临床对照试验
乙型肝炎病毒共价闭合环状核糖核酸检测的临床意义及方法研究进展 被引量:1
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作者 甘楚林 莫穆隆 李剑鹏 《中国医师进修杂志:综合版》 2018年第4期359-362,共4页
乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状核糖核酸(cccDNA)是HBV在肝细胞内复制的起始模板,是HBV持续感染的关键因素,能直接反映机体内HBV感染状态及复制情况.HBV cccDNA检测可作为评价抗乙肝病毒药物的有效指标.HBV cccDNA是判断HBV是否感... 乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状核糖核酸(cccDNA)是HBV在肝细胞内复制的起始模板,是HBV持续感染的关键因素,能直接反映机体内HBV感染状态及复制情况.HBV cccDNA检测可作为评价抗乙肝病毒药物的有效指标.HBV cccDNA是判断HBV是否感染肝外组织的客观指标之一.血清中发现HBV cccDNA为肝细胞受损的一个重要的早期标志.HBV cccDNA定性检测主要有套式聚合酶链式反应(PCR)、选择性PCR、Southern印迹杂交法等;其定量检测的方法包括实时荧光定量PCR检测法、竞争PCR检测法、入侵者检测法等.现阶段临床检测方法普遍存在一定的不足和缺陷,尚未形成统一标准的HBV cccDNA敏感度、特异度检测体系;需进一步展开深入的研究与探讨,寻求理想检测手段,为临床诊疗提供更加可靠的参考依据.血清HBV RNA的水平可能是反映患者肝细胞内cccDNA存在和转录的最好指标. 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 脱氧核糖核酸酶类 检测方法 研究进展
脱氧核糖核酸酶抑制肺炎链球菌青霉素耐药基因转移的研究 预览 被引量:1
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作者 徐核 谭艾娟 吕世明 《重庆医学》 2018年第32期4119-4122,4125共5页
目的 探讨脱氧核糖核酸酶(DNase)抑制肺炎链球菌(SP)青霉素耐药基因转移的作用。方法 提取青霉素耐药SP(PRSP)的DNA,并进行相关试验鉴定;用PRSP的DNA转化SP标准菌株,转化后进行Optochin和苯唑西林药敏试验;用DNase抑制PRSP的DNA转化SP... 目的 探讨脱氧核糖核酸酶(DNase)抑制肺炎链球菌(SP)青霉素耐药基因转移的作用。方法 提取青霉素耐药SP(PRSP)的DNA,并进行相关试验鉴定;用PRSP的DNA转化SP标准菌株,转化后进行Optochin和苯唑西林药敏试验;用DNase抑制PRSP的DNA转化SP标准菌株,抑制转化后进行Optochin和苯唑西林药敏试验。结果 提取DNA阶段,Optochin试验均显示阳性,苯唑西林药敏试验均显示青霉素不敏感,相关DNA检测均阳性;转化实验后,实验组和对照组的Optochin试验均显示阳性,实验组和对照组的苯唑西林药敏纸片抑菌环直径分别为(23.3±2.2)mm和(33.5±3.0)mm,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);抑制转化实验后,实验组和对照组的Optochin试验均显示阳性,实验组和对照组的苯唑西林药敏纸片抑菌环直径分别为(29.6±4.7)mm和(17.6±9.4)mm,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DNase具有抑制SP青霉素耐药基因转移的作用。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 青霉素耐药基因 基因转移 脱氧核糖核酸酶
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乙型肝炎相关性肝癌患者围手术期HBV DNA的变化及其影响因素 预览 被引量:6
4
作者 郑盛 唐映梅 杨晋辉 《中国肝脏病杂志(电子版)》 CAS 2014年第2期38-43,共6页
目的:探讨乙型肝炎相关性肝癌患者围手术期HBV DNA水平变化的影响因素,比较抗病毒治疗与未抗病毒治疗对患者术后肝功能恢复的影响。方法选择65例未达到抗病毒治疗标准的乙型肝炎相关性肝癌患者,定量检测其术前和术后第3天的HBV DNA... 目的:探讨乙型肝炎相关性肝癌患者围手术期HBV DNA水平变化的影响因素,比较抗病毒治疗与未抗病毒治疗对患者术后肝功能恢复的影响。方法选择65例未达到抗病毒治疗标准的乙型肝炎相关性肝癌患者,定量检测其术前和术后第3天的HBV DNA载量及白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-27的水平。根据术后HBV DNA载量,将患者分成HBV DNA升高(激活)组和不变组。升高组给予抗病毒治疗。记录所有患者术前、术后肝功能指标。用SPSS 17.0进行统计学分析。结果入组患者HBV激活率为37%(24/65),术前HBV DNA<1×104 IU/ml的患者,术后HBV激活率为75%(18/24)。Logistic回归分析显示肿瘤直径(P =0.006)及肝切缘无水酒精注射(P =0.004)是引起HBV再激活的独立危险因素。ELISA结果示术后IL-10升高与HBV再激活有关(P =0.001),IL-6升高及IL-27降低与HBV不变有关(P=0.000)。术后HBV DNA升高且行抗病毒治疗的患者,术后肝功能恢复情况与其他患者比较差异无统计学意义(P >0.05)。结论肝癌切除术可能引起患者HBV再激活,围手术期内应监测HBV DNA载量的变化。肿瘤直径、术中行肝切缘无水酒精注射术是HBV再激活的独立危险因素。患者术后IL-10、IL-6水平的变化可能与HBV DNA的变化有关。术后HBV再激活近期不会加重肝功能损伤,术后抗病毒治疗对患者近期肝功能的恢复无明显促进作用。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 脱氧核糖核酸酶类 肝细胞 抗病毒药
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核酶和脱氧核酶靶向治疗肿瘤的研究进展
5
作者 任艳艳 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2010年第12期889-892,共4页
近年来,高转导率新载体的应用,使核酶(Rz)及脱氧核酶(DRz)成为无任何不良反应、极高效的抗肿瘤疗法.目前已发现许多高疗效的肿瘤靶点,使Rz和DRz靶向治疗有诱导肿瘤凋亡,强烈抑制肿瘤增殖、迁移、血管生成等多重效应.
关键词 核糖核酸酶类 脱氧核糖核酸酶类 肿瘤
小鼠DNA酶真核表达质粒在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达
6
作者 谭国珍 郭庆 +2 位作者 尹若菲 米向斌 曾凡钦 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期220-222,I0001共4页
目的将构建好的小鼠DNA酶(DNaseI)真核表达质粒转染到小鼠骨髓间充质干细胞中,观察目的基因在细胞内的表达及分泌情况。方法采用脂质体法将已构建好的小鼠DNaseI的真核表达质粒转染入小鼠骨髓间充质干细胞中,用Western blotting法检... 目的将构建好的小鼠DNA酶(DNaseI)真核表达质粒转染到小鼠骨髓间充质干细胞中,观察目的基因在细胞内的表达及分泌情况。方法采用脂质体法将已构建好的小鼠DNaseI的真核表达质粒转染入小鼠骨髓间充质干细胞中,用Western blotting法检测DNaseI基因在骨髓间充质干细胞内的表达及DNA-甲基绿比色法检测培养上清液中DNaseI的活性。结果小鼠DNaseI的真核表达质粒能够转染入小鼠骨髓间充质干细胞中,转染效率约为30%。转染后的小鼠骨髓间充质干细胞可以表达DNaseI蛋白且分泌出具有活性的DNaseI。结论脂质体法能够将小鼠DNaseI的真核表达质粒转染入小鼠骨髓间充质干细胞中,小鼠DNaseI基因在小鼠骨髓间充质干细胞中成功表达并分泌具有生物活性的DNaseI。 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸类 间质干细胞 质粒 小鼠
局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶-3和其激活的DNA酶与神经元损伤的关系及半胱氨酸蛋白酶-3抑制剂的保护作用
7
作者 杨春晓 金永华 +3 位作者 刘玮 蔡文进 梁庆成 朱丹 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期546-550,共5页
目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶.3(caspase-3)及由半胱氨酸蛋白酶激活的DNA酶(caspase—activateddeoxyribonuclease,CAD)的表达变化与神经元损伤的关系,研究caspase-3特异性抑制剂Ac—DEVD—CHO对缺血神经元... 目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后半胱氨酸蛋白酶.3(caspase-3)及由半胱氨酸蛋白酶激活的DNA酶(caspase—activateddeoxyribonuclease,CAD)的表达变化与神经元损伤的关系,研究caspase-3特异性抑制剂Ac—DEVD—CHO对缺血神经元的保护作用。方法实验设干预组和模型组,线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞Ih后再通模型,干预组于侧脑室给予Ac-DEVD—CHO,模型组给予二甲基亚砜(DMSO)。应用HE、免疫组织化学、TUNEL染色及电镜观察大鼠大脑中动脉栓塞1h后再灌注6、12、24、48、72h时caspase-3和CAD蛋白的表达及神经元损伤程度的变化。结果HE染色和电镜观察下,模型组和干预组差异不明显;TUNEL染色阳性细胞数除6h外,两组间其余时间点相比差异具有统计学意义;模型组和干预组caspase-3蛋白表达24h达高峰,分别为2.360±0.318与0.804±0.206(t=10.039,P〈0.01),12~48h与模型组同期相比差异均有统计学意义;模型组和干预组CAD蛋白表达于48h达高峰,分别为3.061±0.567与0.812±0.240(t=8.960,P〈0.01),12—72h与模型组同期相比差异均有统计学意义。结论caspase-3-CAD—DNA降解途径是鼠脑缺血再灌注神经元损伤的重要途径,caspase-3抑制剂具有一定程度的神经保护作用。 展开更多
关键词 脑缺血 再灌注 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3 脱氧核糖核酸酶类 寡肽类 细胞凋亡
蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质 预览 被引量:1
8
作者 张建林 刘志贞 +6 位作者 王晓媛 姚建强 罗佳 王建华 杨利军 杨琦 牛勃 《北京大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期 519-523,共5页
目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质。方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等... 目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质。方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法。结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%。EDNase的相对分子质量约为63000。Mg^2+,Mn^2+和Ca^2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性。在pH4.4~5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8。该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性。EDNase的等电点为6.20。在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52g/L,Vmax为4.89mg/(mL·min)。该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用。结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶。 展开更多
关键词 脱氧核糖核酸酶类 分离和提纯 寡毛目
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一种蚯蚓脱氧核糖核酸酶分离纯化和性质研究 预览
9
作者 姚建强 王晓媛 +4 位作者 康慧芳 刘志贞 樊慧杰 杨利军 牛勃 《药物生物技术》 CAS CSCD 2008年第3期 185-190,共6页
蚯蚓组织的NaAc抽提液经过热变性、酸变性和丙酮分段沉淀,再经过DEAE-Sepharose和CM-Sepharose层析纯化,从中分离纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(EWD2),经SDS-PAGE电泳、基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)、毛细管... 蚯蚓组织的NaAc抽提液经过热变性、酸变性和丙酮分段沉淀,再经过DEAE-Sepharose和CM-Sepharose层析纯化,从中分离纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(EWD2),经SDS-PAGE电泳、基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)、毛细管等点聚焦电泳法测定,此DNase的相对分子质量测定为69100,明显大于已发现的DNase Ⅰ和DNase Ⅱ。该酶的等电点为6.05,温度稳定性、pH稳定性、激动剂和抑制剂等各项参数,与已发现的各种DNase相比较有明显差别。结果提示,蚯蚓组织中发现的这种脱氧核糖核酸酶具有特殊的酶学性质,可能是一种新型脱氧核糖核酸酶,其作用机理和分类还有待于进一步的研究。 展开更多
关键词 蚯蚓 脱氧核糖核酸酶类 纯化 酶学性质
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蚯蚓新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量测定 预览
10
作者 罗佳 姚建强 +4 位作者 王晓媛 李方 杨利军 王建华 牛勃 《中国药物与临床》 CAS 2007年第12期 893-895,共3页
目的测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰氨凝胶电泳法(SDS—PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)3种方法测定一种新型蚯蚓脱氧... 目的测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰氨凝胶电泳法(SDS—PAGE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)3种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD3)的相对分子质量。结果凝胶过滤层析法、SDS—PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为55080、58270和63460。结论凝胶过滤层析法和SDS—PAGE法可以常规粗略测定蛋白的相对分子质量,质谱法可以比较准确测定蛋白的相对分子质量,EWD3为单亚基蛋白.其相对分子质量约在55000~65000之间。 展开更多
关键词 地龙 脱氧核糖核酸酶类 分子量 色谱法 凝胶 电泳 聚丙烯酰胺凝胶 光谱法 质量 基质辅助激光解吸电离
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研究蚯蚓DNase的干琼脂糖薄膜覆盖法 预览
11
作者 樊慧杰 康慧芳 +3 位作者 罗佳 王建华 杨利军 牛勃 《中国药物与临床》 CAS 2007年第11期 813-814,共2页
目的研究蚯蚓脱氧核糖核酸酶(DNase)的测定方法。方法应用干琼脂糖薄膜覆盖法(DAFO)检测蚯蚓DNase。结果DAFO用于蚯蚓DNase的种类、数量的确定,新DNase类的筛选以及DNase活性的测定。结论DAFO是研究脱氧核糖核酸酶的一种重要方法... 目的研究蚯蚓脱氧核糖核酸酶(DNase)的测定方法。方法应用干琼脂糖薄膜覆盖法(DAFO)检测蚯蚓DNase。结果DAFO用于蚯蚓DNase的种类、数量的确定,新DNase类的筛选以及DNase活性的测定。结论DAFO是研究脱氧核糖核酸酶的一种重要方法。为蚯蚓DNase及其他DNase的测定提供了可行的实验方法。 展开更多
关键词 地龙 脱氧核糖核酸酶类 酶活性测定
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三种方法测定蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD2)的分子量 预览
12
作者 姚建强 王晓媛 +4 位作者 罗佳 李方 张建林 杨利军 牛勃 《山西医科大学学报》 CAS 2007年第11期 968-971,共4页
目的用不同方法测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶分子量。方法采用凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWDz)的分子量。结果凝胶过滤层析法... 目的用不同方法测定蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶分子量。方法采用凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法(MALDI-TOF)三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWDz)的分子量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其分子量分别为62.16kD、62.08kD和69.075kD。结论EWDz为单亚基脱氧核糖核酸酶,其分子量在60-70kD。 展开更多
关键词 色谱法 蚯蚓 脱氧核糖核酸酶 分子量 SDS-PAGE法 基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法
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锤头状核酶抑制Raji细胞表面主要组织相容性复合物Ⅱ类抗原的表达 被引量:1
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作者 郭荣 邹萍 +6 位作者 金中奎 陆华中 范华骅 高峰 崔磊 曹谊林 张敏 《中华器官移植杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期 160-163,共4页
目的探讨抗主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子转录激活因子的锤头状核酶对Raji细胞表面经典MHCⅡ类抗原表达的抑制作用.方法设计并克隆针对MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)第134、218、464位点的3个核酶片段(Rz134、Rz218、Rz464)及其... 目的探讨抗主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子转录激活因子的锤头状核酶对Raji细胞表面经典MHCⅡ类抗原表达的抑制作用.方法设计并克隆针对MHCⅡ类分子转录激活因子(CⅡTA)第134、218、464位点的3个核酶片段(Rz134、Rz218、Rz464)及其相应的CⅡTA靶基因,分别插入pGEM-T载体,进行细胞外切割活性筛选.将切割作用明显的Rz464亚克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP,成为pIRES2-EGFP-Rz464(pRz464),将pRz464稳定转染Raji细胞株,流式细胞术检测Raji细胞表面MHCⅡ类抗原(HLA-DR、DP、DQ)的表达,并用逆转录聚合酶链反应分析Raji细胞CⅡTA mRNA的表达.结果转染pRz464的Raji细胞表面HLA-DR、DP、DQ抗原表达抑制率分别为95.93%、94.14%及98.32%,同时其CⅡTA mRNA的表达显著下调(P<0.05).结论Rz464可抑制Raji细胞表面MHCⅡ类抗原的表达. 展开更多
关键词 RAJI细胞 表达 CⅡTA 锤头状核酶 MHCⅡ类抗原 主要组织相容性复合物 DQ EGFP T载体 RNA
我国部分地区学龄儿童抗DNA酶B正常值水平探讨 被引量:3
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作者 陈剑光 董太明 +4 位作者 黄震东 陈志红 吴红穗 苏健 卓绮玲 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2004年第7期 417-419,共3页
目的探讨我国部分地区学龄儿童抗DNA酶B抗体正常值水平.方法从1994年9月至1995年8月,对我国不同地理位置4个省的学龄儿童[年龄8~13岁,平均(11.0±2.3)岁],包括湖北103名、广东589名、四川283名、吉林215名,共1190名(男618名,女572... 目的探讨我国部分地区学龄儿童抗DNA酶B抗体正常值水平.方法从1994年9月至1995年8月,对我国不同地理位置4个省的学龄儿童[年龄8~13岁,平均(11.0±2.3)岁],包括湖北103名、广东589名、四川283名、吉林215名,共1190名(男618名,女572名),每3个月抽血1次,用微量法统一测定血清抗DNA酶B抗体水平.结果①抗DNA酶B的几何均值(GMT)水平:各地区间均差异有显著性(P<0.01),以湖北最高(198 U/ml),其次是广东(140 U/ml)、四川(122 U/ml),吉林最低(85 U/ml).GMT水平较高的季节多在冬、春和秋季,夏季普遍较低.男女间差异无显著性(P>0.05).②抗DNA酶B正常值上限:我国不同地区学龄儿童正常值上限为200~320 U/ml,4省合计为240 U/ml.其中湖北最高(320 U/ml),广东次之(240 U/ml),吉林和四川相同(200U/ml).结论正常值上限(240 U/ml)基本反映了我国不同地区学龄儿童抗DNA酶B正常水平,结果可信,可作正常值供临床和科研工作者参考. 展开更多
关键词 学龄儿童 抗DNA酶B 抗脱氧核糖核酸酶B 湖北 广东 四川 吉林 抗体 测定
脱氧核酶在转基因肝癌细胞中对HCV5′-非编码区的抑制活性 被引量:5
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作者 于乐成 王升启 +3 位作者 顾长海 陈忠斌 毛青 刘鸿凌 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期 82-85,共4页
目的观察特异性脱氧核酶(DRz)在丙型肝炎病毒(HCV)5'-非编码区(5'-NCR)转基因肝癌细胞株中对靶RNA的抑制活性.方法采用5'-GGCTAGCTACAACGA-3'基序为活性中心,分析HCV 5'-NCR中符合5'…R↓Y…3'(R=A/G,Y=U/C... 目的观察特异性脱氧核酶(DRz)在丙型肝炎病毒(HCV)5'-非编码区(5'-NCR)转基因肝癌细胞株中对靶RNA的抑制活性.方法采用5'-GGCTAGCTACAACGA-3'基序为活性中心,分析HCV 5'-NCR中符合5'…R↓Y…3'(R=A/G,Y=U/C)特征的位点及5'-NCR的二级结构以确定靶位,设计并合成HCV靶向性脱氧核酶DRz-232、DRz-127、DRz-84、DRz1以及对应的两端被硫代修饰的DRz(TDRz)和活性中心区人工突变的硫代DRz(MDRz).用脂质体转染法将导入HCV 5'-NCR及部分C区(5'-NCR-C)的转基因肝癌细胞株HepG2.9706中,作用一定时间后,用化学发光法检测荧光素酶活性的变化,计算抑制率.选择抑制率较高者进行时效关系的观察和不同浓度抑制效果的比较.结果各DRz和对应TDRz的活性无明显差别.DRz-127/TDRz-127和DRz1/TDRz1的抑制活性相对较高,终浓度为0.5μmol/L作用24 h抑制率分别达53.2%/50.6%和44.7%/43.3%.各DRz/TDRz的抑制率均高于对应的MDRz,其中DRz-127/TDRz-127与MDRz-127(41.2%)相比抑制率有显著性差异,P<0.05.在0.25~0.75 μmol/L范围,抑制率随药物浓度的升高而增高.在所观察的时间点中,加药后24 h抑制率最高,3 d后抑制率显著下降;DRz抑制率的下降快于TDRz.结论靶位合适的HCV特异性脱氧核酶在转基因肝癌细胞中对靶RNA可能既存在反义抑制作用,又存在剪切活性,可能是一种有希望的抗病毒基因治疗手段.经适当硫代修饰的TDRz在细胞内可能更稳定. 展开更多
关键词 脱氧核酶 转基因肝癌细胞 HCV5′ 非编码区 抑制活性 基因疗法 肝癌
赤子爱胜蚓DNase活性测定方法 预览 被引量:2
16
作者 赵虹 于保锋 +2 位作者 解军 张悦红 牛勃 《山西医科大学学报》 CAS 2004年第3期 298-299,共2页
目的研究赤子爱胜蚓-地龙组织提取物DNase活性测定方法.方法应用单相酶扩散法和紫外吸收法分别对其酶解底物DNA测定.结果和结论两种方法同时应用可扩大其测定酶活力范围,且两方法的数据结果间存在稳定的函数关系,为赤子爱胜蚓DNase以及... 目的研究赤子爱胜蚓-地龙组织提取物DNase活性测定方法.方法应用单相酶扩散法和紫外吸收法分别对其酶解底物DNA测定.结果和结论两种方法同时应用可扩大其测定酶活力范围,且两方法的数据结果间存在稳定的函数关系,为赤子爱胜蚓DNase以及其他DNase的活力测定提供了可行的实验方法. 展开更多
关键词 寡毛目 赤子爱胜蚓 脱氧核糖核酸酶类 酶活性测定
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抽动障碍患儿A族溶血性链球菌抗体的测定 被引量:11
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作者 金嵘 徐惠琴 +5 位作者 黄文武 陈宏 郑荣远 邵蓓 黄海波 叶好好 《中华精神科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期 231-233,共3页
目的探讨A族溶血性链球菌感染在抽动障碍发病中的作用.方法采用抗DNA酶B微量法,测定46例抽动障碍患者和46名健康对照的抗DNA酶B抗体.结果抽动障碍患者抗DNA酶B的几何平均滴度(0.19 U/L)高于健康对照(0.12 U/L;t=2.17, P<0.05);抗DNA酶... 目的探讨A族溶血性链球菌感染在抽动障碍发病中的作用.方法采用抗DNA酶B微量法,测定46例抽动障碍患者和46名健康对照的抗DNA酶B抗体.结果抽动障碍患者抗DNA酶B的几何平均滴度(0.19 U/L)高于健康对照(0.12 U/L;t=2.17, P<0.05);抗DNA酶B的阳性率(52%,24/46)也高于健康对照组(30%,14/46),差异有显著性(χ2=4.48,OR=2.49,P<0.05).抽动障碍患者抗DNA酶B滴度与耶鲁抽动症整体严重度量表评分间呈正相关(r=0.35,P<0.05).结论 A族溶血性链球菌感染可能与抽动障碍发病有关. 展开更多
关键词 抽动障碍 A族溶血性链球菌抗体 测定 脱氧核糖核酸酶类
自切割核酶介导的转基因淋巴细胞有效抑制猴免疫缺陷病毒的感染和致病 被引量:1
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作者 邓文生 杨希才 +2 位作者 康良仪 张奉学 符林春 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期 222-226,共5页
目的 获得抗猕猴免疫缺陷病毒(SIV)转基因的淋巴细胞。方法 将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶,人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在pBluescript SK的XhoI-SalI位点,通过连续4次克隆获得10拷贝核酶基因... 目的 获得抗猕猴免疫缺陷病毒(SIV)转基因的淋巴细胞。方法 将锤头型核酶切割的一段靶序列连接在核酶下游构成自切割核酶,人工合成的自切割核酶基因扩增并克隆在pBluescript SK的XhoI-SalI位点,通过连续4次克隆获得10拷贝核酶基因的载体。转染前测定自切割核酶的体外活性并将之转移至哺乳动物表达载体上,脂质体法转染含核酶基因的表达载体,转染细胞在含400 mg/L G418 的培养介质中筛选。转基因细胞对猴免疫缺陷病毒的抗性通过免疫荧光测定来估测。结果 37℃孵育15 min后85%的十体核酶自切割成单体核酶。在初始25 min的反式切割反应中尽管10体核酶摩尔数不足单体核酶十分之一,但十体核酶平均超过单体核酶13.31%的切割产物。Northern 点杂交证明单体核酶基因和十体核酶基因已经转入细胞并在细胞中获得表达。SIV攻毒试验表明,SIV接种6 d后转染单体核酶基因的细胞生长正常,不出现融合细胞,绝大多数转染十体基因的细胞生长良好,只发现极少数的融合细胞;转染单体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率达到100%,转染十体核酶基因细胞的SIV抗原阳性细胞抑制率为91.2%, 转空表达载体细胞为48%。结论 转自切割核酶基因的细胞对SIV的感染和致病均表现较强的抗性,但单体核酶比10体核酶对SIV的感染和致病表现出更好的抑制效果。 展开更多
关键词 免疫缺陷病毒感染 自切割核酶介导 转基因淋巴细胞 基因治疗
尿嘧啶DNA糖苷酶防止PCR产物污染及其对核酸杂交的影响 预览 被引量:1
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作者 王省良 周东耀 《第一军医大学学报》 CSCD 2000年第4期 319-321,共3页
目的 采用PCR微板核酸杂交ELISA分析脲嘧啶DN糖苷酶(UNG/UDG)防止PCR产物污染及其对PCR扩增效率的影响。探讨在不同A/T含量的微生物中含尿嘧啶的PCR产物对核酸杂交的影响。方法 以3组dUTP含量不... 目的 采用PCR微板核酸杂交ELISA分析脲嘧啶DN糖苷酶(UNG/UDG)防止PCR产物污染及其对PCR扩增效率的影响。探讨在不同A/T含量的微生物中含尿嘧啶的PCR产物对核酸杂交的影响。方法 以3组dUTP含量不同的PCR产物作模板,抗污染组用UNG处理,直接进行再次扩增。用微板核酸杂交ELISA检测第二次PCR扩增的结果。结果 抗污染组中含dUTP的PCR产物作模板,结果为阴性,而以不含dU 展开更多
关键词 尿嘧啶DNA糖苷酶 聚合酶链反应 核酸杂交
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抗DNA酶B在风湿热流行病学研究中的应用 被引量:5
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作者 陈剑光 黄震东 《中华风湿病学杂志》 CAS CSCD 2000年第6期 367-370,共4页
目的 探索预测某一地区风湿热(RF)流行状况简便的方法。方法 对广东216名在乡学龄儿童血清抗DNA酶B和抗链球菌深血素“O”(ASO)水平进行为期1周的动态观察;另外在5个不同地区中,各抽取100名学龄儿童在同一季... 目的 探索预测某一地区风湿热(RF)流行状况简便的方法。方法 对广东216名在乡学龄儿童血清抗DNA酶B和抗链球菌深血素“O”(ASO)水平进行为期1周的动态观察;另外在5个不同地区中,各抽取100名学龄儿童在同一季节进行抗DNA酶B水平横贯面的调查,结果与同期风湿热/风湿性心脏病(RF/RHD)发患病率对照研究。结果 抗DNA酶B水平呈秋、冬、春季高,夏季低的季节性变化,与RF发病率的季节性分布规律一致(r=0.913,P〈0.05)。抗DNA酶B水平高的地区,其RF/RHD发患病率高,反之则低(r=0.952,P〈0.05)。结论 测定某一地区学龄儿童血清抗DNA酶B水平,可作为该地区RF/RHD流行水平的初步估测和进一步研究的参考。 展开更多
关键词 风湿热 抗DNA酶B 流行病学 RF
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