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禽弱毒疫苗中REV低剂量污染检测方法的比较
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作者 任志浩 栾怀彪 +4 位作者 李阳 王一新 崔治中 常爽 赵鹏 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期1041-1045,共5页
使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批... 使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗是REV感染途径之一,而通常弱毒疫苗中REV的污染剂量较低,难以检测,本研究对不同方法在检测弱毒疫苗中REV低剂量污染进行了比较研究。将定量好的REV以不同剂量分别人为污染一批商品化新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗,提取核酸后分别以TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测、常规RT-PCR检测以及PCR产物结合核酸宽点杂交检测等不同方法进行检测。结果显示常规RT-PCR检测仅可检测到10TCID50/羽份的REV污染,而另外两种方法均检测到1TCID50/羽份的低剂量REV污染。将人为污染1TCID50/羽份和2TCID50/羽份REV的NDV弱毒疫苗各接种10只SPF鸡,定期针对REV抗体及其核酸进行检测,结果显示在免疫污染疫苗后7周内REV抗体全部为阴性,而核酸检测均可以检测到一定比例的阳性,提示通过接种SPF鸡检测弱毒疫苗中REV污染时,仅仅通过抗体判定可能会对一些剂量较低的REV污染造成漏检,通过结合对病原的检测有助于降低漏检率。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 污染 REAL-TIME RT-PCR 核酸斑点杂交
慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白载体转染大鼠心肌成纤维细胞 被引量:1
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作者 朱占占 侯宾 +3 位作者 孙雯雯 院慧芳 张永春 蔡新华 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期43-47,共5页
目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GF... 目的探讨慢病毒-基质细胞衍生因子-1α-绿色荧光蛋白(LV-SDF-1α-GFP)对心肌成纤维细胞影响,最佳感染条件及目的蛋白表达和分泌特点。方法差速贴壁法分离培养乳大鼠心肌成纤维细胞,观察和免疫荧光鉴定。不同滴度及条件的LV-SDF-1α-GFP转染心肌成纤维细胞,观察荧光表达,探索最佳转染条件。LV-SDF-1α-GFP目的基因病毒以及阴性对照CON145病毒的转染心肌成纤维细胞,绘制生长曲线,探索转染对心肌成纤维细胞的增殖有无明显影响。利用最佳转染剂量组转染心肌成纤维细胞,斑点印迹法(Dot blotting)检测SDF-1α目的蛋白分泌。计量资料进行统计学分析。结果心肌成纤维细胞具很高活性,传至4代纯度高,折光度好,无自发性搏动。LV-SDF-1α-GFP最佳转染感染复数(MOI)值为10,添加感染增强液,聚凝胺组感染效果最好,效率达80%。LV-SDF-1α-GFP组以及阴性对照CON145组对心肌成纤维细胞毒性作用小,细胞形态无明显变化,与非转染组生长曲线相似,差异无统计学意义(P〉0.05)。转染LV-SDF-1α-GFP的心肌成纤维细胞培养至第4天SDF-1α蛋白分泌量达最高值,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论 LV-SDF-1α-GFP载体对心肌成纤维细胞具很高的转染效率,细胞毒性小,并能够分泌SDF-1α目的蛋白。 展开更多
关键词 心肌成纤维细胞 慢病毒-基质细胞衍生因子-1α绿色荧光蛋白载体 转染 斑点印迹法 乳大鼠
DNA原位杂交法及斑点杂交法检测卡氏肺孢子虫的实验研究 预览
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作者 常志尚 王冰 +2 位作者 吕锐 张艳丽 赵蓉 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第24期3393-3394,3399共3页
目的探讨DNA原位杂交法及斑点杂交法在卡氏肺孢子虫检测中的应用。方法设计合成卡氏肺孢子虫特异性寡核苷酸探针,建立卡氏肺孢子虫大鼠动物模型,分别于第6、8、10周处死动物,取肺组织提取DNA及石蜡切片进行斑点杂交及DNA原位杂交,结果... 目的探讨DNA原位杂交法及斑点杂交法在卡氏肺孢子虫检测中的应用。方法设计合成卡氏肺孢子虫特异性寡核苷酸探针,建立卡氏肺孢子虫大鼠动物模型,分别于第6、8、10周处死动物,取肺组织提取DNA及石蜡切片进行斑点杂交及DNA原位杂交,结果同瑞氏-吉氏染色法比较。结果DNA原位杂交法和斑点杂交法第6周检出阳性结果,检出率均为(30/30),高于瑞氏-吉氏染色法(25/30)。结论 DNA原位杂交法及斑点杂交法是高效准确的卡氏肺孢子虫检测方法。 展开更多
关键词 卡氏肺孢子虫 诊断 DNA原位杂交 斑点杂交
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α-乳白蛋白单克隆抗体的制备及斑点印迹定性检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 龙彩云 郑义成 +2 位作者 程芬芬 杨安树 陈红兵 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期185-188,共4页
以α-乳白蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗α-乳白蛋白单克隆抗体;采用碳二亚胺法,并通过工艺优化,将单抗与量子点高效偶联;在此基础上,建立了基于斑点印迹技术定性检测乳制品中过敏原α-乳白蛋白的方法... 以α-乳白蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗α-乳白蛋白单克隆抗体;采用碳二亚胺法,并通过工艺优化,将单抗与量子点高效偶联;在此基础上,建立了基于斑点印迹技术定性检测乳制品中过敏原α-乳白蛋白的方法。结果表明:采用杂交瘤技术制备的单克隆抗体特异性好,与牛奶中其他蛋白无交叉反应;当量子点、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)、单抗摩尔比为1:10:6:4时,量子点与单抗有较好的偶联效果;以量子点标记单抗建立的斑点印迹方法可直观、快速的定性分析乳制品中过敏原0l-乳白蛋白。因此.该方法具有一定的实用价值。 展开更多
关键词 Α-乳白蛋白 单克隆抗体 量子点 斑点印迹 定性检测
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地高辛标记探针检测重组人p43蛋白宿主DNA残留量的研究 被引量:9
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作者 黄相红 胡立德 +2 位作者 梁文璐 谭小钉 刘大涛 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期356-359,共4页
目的:建立重组人p43蛋白原液中宿主DNA残留量的检测方法。方法:以重组人p43工程菌基因组DNA为模板,制备地高辛标记的探针,并以此探针与阳性对照品及供试品进行杂交及显色反应。结果:3批次重组人p43蛋白原液中每人份剂量的宿主DNA残... 目的:建立重组人p43蛋白原液中宿主DNA残留量的检测方法。方法:以重组人p43工程菌基因组DNA为模板,制备地高辛标记的探针,并以此探针与阳性对照品及供试品进行杂交及显色反应。结果:3批次重组人p43蛋白原液中每人份剂量的宿主DNA残留量均小于10 ng。结论:该方法灵敏度高,特异性强,重复性好,操作安全简便,可用于重组人p43制备过程中的原液检定及质量监控。 展开更多
关键词 DNA残留量 地高辛 重组人p43蛋白 斑点杂交
点杂交分析小鼠CRBN基因组织表达 预览
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作者 唐文惠 周蓉 陈佩林 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第4期 857-859,共3页
为研究CRBN(Cereblon)基因与常染色体隐性遗传非综合征轻型精神发育迟缓(Autosomal reces-sive nonsyndromic mental retardation,ARNSMR)的关系,探讨了小鼠CRBN基因mRNA在不同组织中的表达分布,应用点杂交(Dot blotting)和反转... 为研究CRBN(Cereblon)基因与常染色体隐性遗传非综合征轻型精神发育迟缓(Autosomal reces-sive nonsyndromic mental retardation,ARNSMR)的关系,探讨了小鼠CRBN基因mRNA在不同组织中的表达分布,应用点杂交(Dot blotting)和反转录聚合酶链式反应(Reverse transcriptase-Polymerase chainreaction,RT-PCR)技术,分析了小鼠CRBN基因在肺、肝、心脏、肾和大脑中的表达情况。结果表明,小鼠CRBN基因mRNA在肺、大脑中的表达量较高,在心脏中的表达量最低。说明小鼠CRBN基因可广泛地表达于不同的器官组织中,除了学习、记忆功能外,可能还有其他功能存在。 展开更多
关键词 CRBN基因 斑点杂交 反转录聚合酶链式反应
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重庆麻鸭乙型肝炎病毒感染率流行病学调查研究 预览
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作者 刘英果 姚云清 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期 724-726,共3页
目的:调查研究重庆地区成年麻鸭鸭乙型肝炎病毒(Duck hepatitis B virus,DHBV)感染率及其季节差异性,为优化DHBV研究模型奠定基础。方法:2009年春季与夏季随机采集重庆麻鸭血清560份,采用随机引物法地高辛素标记DHBV DNA探针,斑点... 目的:调查研究重庆地区成年麻鸭鸭乙型肝炎病毒(Duck hepatitis B virus,DHBV)感染率及其季节差异性,为优化DHBV研究模型奠定基础。方法:2009年春季与夏季随机采集重庆麻鸭血清560份,采用随机引物法地高辛素标记DHBV DNA探针,斑点杂交检测麻鸭血清DHBV DNA感染率。结果:重庆地区麻鸭春季DHBV感染率为1.82%,夏季DHBV感染率为5.26%,后者显著高于前者(P〈0.05)。结论:重庆地区成年麻鸭DHBV感染率夏季高于春季,但均低于国内其他地区鸭DHBV感染率。 展开更多
关键词 鸭乙肝病毒 流行病学 斑点杂交
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禽白血病病毒斑点杂交检测方法的建立 预览 被引量:6
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作者 周刚 牛成明 +1 位作者 司昌德 韩凌霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期 53-55,70,共4页
为建立禽白血病病毒(ALV)斑点杂交检测方法,本研究采用RT-PCR技术扩增ALV群特异性p27抗原基因的部分片段,并以纯化的p27PCR产物为模板,合成地高辛标记探针,以此建立了ALV的斑点杂交检测方法。用该方法对4份疑似感染ALV的现地病鸡... 为建立禽白血病病毒(ALV)斑点杂交检测方法,本研究采用RT-PCR技术扩增ALV群特异性p27抗原基因的部分片段,并以纯化的p27PCR产物为模板,合成地高辛标记探针,以此建立了ALV的斑点杂交检测方法。用该方法对4份疑似感染ALV的现地病鸡组织样品和18枚鸡胚进行检测,结果表明所有样品均为阳性,而且与PCR检测结果的符合率达到100%。该方法具有良好的特异性和敏感性,适应于ALV临床大规模检测。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 杂交检测 斑点 RT-PCR技术 地高辛标记探针 PCR产物 ALV 抗原基因
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核酸探针检测山东省鸡群中马立克病毒、传染性贫血病毒、网状内皮增生病病毒和呼肠孤病毒的流行状况 预览 被引量:4
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作者 张玉霞 徐怀英 +2 位作者 欧阳文军 袁小远 秦卓明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第7期 140-143,共4页
为对山东家禽业免疫抑制病的流行情况进行调查,从烟台、滨州、临沂、泰安、聊城、青岛大型养殖场共随机收集600只病死鸡的肝脏和脾脏病例组织样品,用斑点杂交的方法检测样品中鸡马立克病毒(Marek's disease virus,MDV)、传染性贫血... 为对山东家禽业免疫抑制病的流行情况进行调查,从烟台、滨州、临沂、泰安、聊城、青岛大型养殖场共随机收集600只病死鸡的肝脏和脾脏病例组织样品,用斑点杂交的方法检测样品中鸡马立克病毒(Marek's disease virus,MDV)、传染性贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)、网状内皮增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)和呼肠孤病毒(reovirus,REOV)的感染情况。结果发现,MDV、CAV、REV、REOV的感染率分别为5.17%、8.17%、1.17%、2.5%,检出率较以前的研究报道有降低趋势,有多种双重感染和三重感染,表明山东家禽业在免疫抑制病方面总体控制较好,但不同的养殖场发病情况差异极显著,管理水平参差不齐,个别地区发病情况严重,检出率超过其他地区的总和。 展开更多
关键词 马立克病毒 传染性贫血病毒 网状内皮增生病病毒 呼肠孤病毒 斑点杂交
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地高辛标记的DNA探针制备及其应用于溶藻弧菌的检测 预览 被引量:5
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作者 周凤丽 简纪常 吴灶和 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期 459-462,共4页
从基因库中获取溶藻弧菌的胶原蛋白酶基因序列和外膜蛋白基因序列,根据基因的保守性用DNAStar分别设计2对引物,分别对溶藻弧菌基因组进行PCR扩增,用地高辛标记扩增的特异DNA片段以制备探针。分别用胶原蛋白酶DNA探针和外膜蛋白DNA探... 从基因库中获取溶藻弧菌的胶原蛋白酶基因序列和外膜蛋白基因序列,根据基因的保守性用DNAStar分别设计2对引物,分别对溶藻弧菌基因组进行PCR扩增,用地高辛标记扩增的特异DNA片段以制备探针。分别用胶原蛋白酶DNA探针和外膜蛋白DNA探针对实验室保种的溶藻弧菌以及鱼排分离的溶藻弧菌进行斑点杂交检测,检测结果表明,胶原蛋白酶基因探针与保种的溶藻弧菌以及鱼排分离的溶藻弧菌DNA产生较强的阳性反应,而与霍乱弧菌、哈氏弧菌和副溶血弧菌DNA等均无反应,表明该胶原蛋白酶DNA探针的特异性较强;而外膜蛋白基因探针与保种的溶藻弧菌以及鱼排分离的溶藻弧菌DNA产生较强的阳性反应,但与哈氏弧菌和副溶血弧菌DNA也出现了较强的阳性反应,与霍乱弧菌DNA则无反应,表明该外膜蛋白DNA探针的特异性较低。说明所构建的溶藻弧菌胶原蛋白酶DNA探针斑点杂交检测方法具有特异性强.简便易行,可应用于溶藻弧菌的快速检测。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 胶原蛋白酶DNA探针 外膜蛋白DNA探针 斑点杂交
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斑点杂交技术用于蛙钩端螺旋体病的流行病学调查研究
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作者 王兆芬 蒋秀高 李秀文 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS CSCD 2009年第4期341-343,共3页
目的用Dotblotting杂交技术检测蛙类钩端螺旋体(钩体),为动物钩体的流行病学监测和调查提供一种比较理想的方法。方法根据钩体赖株DNA合成1对flaB引物,用PCR技术对钩体菌株、疫区现场蛙肾材料等进行flaB基因扩增,用地高辛(DIG)标... 目的用Dotblotting杂交技术检测蛙类钩端螺旋体(钩体),为动物钩体的流行病学监测和调查提供一种比较理想的方法。方法根据钩体赖株DNA合成1对flaB引物,用PCR技术对钩体菌株、疫区现场蛙肾材料等进行flaB基因扩增,用地高辛(DIG)标记flaB基因探针,用斑点杂交技术进行检测。结果结果表明用DIG标记的flaB探针可以检测到5fg及以下的DNA扩增产物。疫区70份蛙肾标本,斑点杂交检测阳性19份,阳性率为27.14%。而钩体细菌分离阳性者只有8份,阳性率11.43%,PCR扩增阳性者14份,阳性率20.00%。结论Dotblotting杂交是一种灵敏、特异、快速的钩体检测方法,可用于两栖类钩体的流行病学监测和调查。 展开更多
关键词 斑点核酸杂交 钩端螺旋体 流行病学
芽孢杆菌三种抗菌素基因的杂交检测 预览 被引量:5
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作者 连玲丽 谢荔岩 +1 位作者 林奇英 谢联辉 《激光生物学报》 CAS CSCD 2008年第1期 81-85,共5页
以三对特异引物PCR合成表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturin)和抗菌蛋白TasA的地高辛标记探针,采用斑点杂交技术对24个菌株的相关基因加以检测,并用竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析阳... 以三对特异引物PCR合成表面活性素(surfactin)、伊枯草菌素(iturin)和抗菌蛋白TasA的地高辛标记探针,采用斑点杂交技术对24个菌株的相关基因加以检测,并用竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析阳性菌株中表面活性素基因的表达情况。结果表明:以阳性质粒为模板,获得1200bp、1479bp和790bp的3个特异性探针,其检测灵敏度分别为2ng、20ng和0.1ng;从24个菌株中检测到10个菌株含有表面活性素合成相关基因,10个菌株含有伊枯草菌素合成相关基因和4个菌株中存在tasA基因;ELISA结果表明:从10个阳性菌株的KMB发酵液中均检测到表面活性素,其中菌株EN1和菌株SB1的产量较高,分别达32.9mg/L和41.0mg/L。 展开更多
关键词 斑点杂交 酶联免疫吸附试验 表面活性素 伊枯草菌素 检测
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斑点免疫印迹法快速测定4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量
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作者 王厚伟 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1619-1621,共3页
目的:测定4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量,并建立斑点免疫印迹法在中药材药效成分含量的测定方法。方法:以兔抗溶茧酶多抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量作定性检测,杂交信号应用Quantityone软件作定量分析。... 目的:测定4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量,并建立斑点免疫印迹法在中药材药效成分含量的测定方法。方法:以兔抗溶茧酶多抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量作定性检测,杂交信号应用Quantityone软件作定量分析。结果:4品种家蚕蛾下颚的个体溶茧酶平均含量分别为6.41、8.09、7.62、1.88ug/头。结论:不同品种家蚕蛾间下颚溶茧酶含量差异显著。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于类似中药材药效物质的含量测定与品质评价。 展开更多
关键词 家蚕蛾 溶茧酶 斑点印迹
斑点免疫印迹法快速测定地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物 预览 被引量:4
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作者 王厚伟 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期 1652-1655,共4页
目的 测定参环毛蚓、秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓和天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物,建立斑点免疫印迹法评价相应牛药村药敏成分明确的中药炮制品质量新方法。方法以兔抗蚓激酶单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对地龙炮制品中蚓激酶... 目的 测定参环毛蚓、秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓和天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物,建立斑点免疫印迹法评价相应牛药村药敏成分明确的中药炮制品质量新方法。方法以兔抗蚓激酶单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity One软件作定量分析。结果现行中药树参环毛蚓与山东产地方品种:秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓、大锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物的质量分数分别为125.23、118.34、87.05、72.13μg/g。结论 秉氏环毛蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物与现行地龙炮制品参环毛蚓无显著差异,理论上可作为广地龙的替代品。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需火型设备,可用于地龙与类似中药材炮制品的品质评价。 展开更多
关键词 地龙 斑点印迹 蚓激酶
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斑点免疫印迹法快速测定水蛭炮制品中水蛭素水解产物含量 预览 被引量:4
15
作者 王厚伟 田景振 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期 2193-2195,共3页
目的:测定4批次水蛭炮制品水蛭素水解产物含量,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法:以鼠抗水蛭素单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对水蛭炮制品中水蛭素水解产物作定性检测,杂交信号应用Quan... 目的:测定4批次水蛭炮制品水蛭素水解产物含量,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法:以鼠抗水蛭素单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对水蛭炮制品中水蛭素水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantityone软件作定量分析。结果:4批次水蛭炮制品所含水蛭素水解产物的质量分数分别为296.51,165.47,95.58,298.05μg·g^-1。结论:不同批次水蛭炮制品之间水蛭素水解产物含量差异显著,斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于水蛭与类似中药材炮制品的品质评价。 展开更多
关键词 水蛭 斑点印迹 水蛭素
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苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌亲缘关系研究 预览 被引量:6
16
作者 宋树森 金莉莉 +3 位作者 王芳 李强 孟凡彪 王秋雨 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期 321-323,共3页
目的探讨苏云金芽孢杆菌(Bt)与蜡状芽孢杆菌(Bc)的亲缘关系。为Bt鉴定、安全性评价及降低其致病风险等提供科学依据。方法采用肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术。对6株苏云金芽孢杆菌和3株蜡状芽孢杆菌及对照菌株的基... 目的探讨苏云金芽孢杆菌(Bt)与蜡状芽孢杆菌(Bc)的亲缘关系。为Bt鉴定、安全性评价及降低其致病风险等提供科学依据。方法采用肠杆菌基因间重复一致序列-PCR(ERIC-PCR)技术。对6株苏云金芽孢杆菌和3株蜡状芽孢杆菌及对照菌株的基因组DNA进行扩增,对其指纹图谱进行分析;回收并克隆重复性好的苏云金芽孢杆菌基因组DNA扩增片段,以其为探针,分别与供试菌株基因组DNA进行杂交。结果与蜡状芽孢杆菌相比,苏云金芽孢杆菌菌株间基因组DNA指纹图谱较一致;所有供试苏云金芽孢杆菌菌株均扩增产生一条250bp左右的片段;苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌均可扩增产生600bp左右的共有DNA片段。此外,以苏云金芽孢杆菌500bp片段为探针与苏云金芽孢杆菌基因组DNA杂交有很好的特异性。结论肠杆菌基因间重复一致序列-PCR指纹图谱可以正确反映苏云金芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌亲缘关系:500bD片段可以作为苏云金芽孢杆菌鉴定探针。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 蜡状芽孢杆菌 亲缘关系 肠杆菌基因间重复一致序列-PCR 斑点杂交
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Mini-Ti质粒在农杆菌菌株间的转移 预览
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作者 冯翠莲 曾艳波 +1 位作者 蔡文伟 张树珍 《分子植物育种》 CAS CSCD 2006年第z1期 36-39,共4页
用农杆菌介导法将外源基因导入植物是植物遗传转化的一种首选方法.为了获得较高的转化率,往往需要选择对转化目标植物敏感的农杆菌菌株.本实验利用冻融法将农杆菌LBA4404/pCG-Ⅱ中的目的片段转移到农杆菌EHA105中,通过PCR扩增、斑点杂... 用农杆菌介导法将外源基因导入植物是植物遗传转化的一种首选方法.为了获得较高的转化率,往往需要选择对转化目标植物敏感的农杆菌菌株.本实验利用冻融法将农杆菌LBA4404/pCG-Ⅱ中的目的片段转移到农杆菌EHA105中,通过PCR扩增、斑点杂交和测序,证明了农杆菌LBA4404/pCG-Ⅱ中的目的片段已成功转移到农杆菌EHA105中.利用该方法更换农杆菌菌株,可满足不同植物对不同农杆菌菌株的要求. 展开更多
关键词 农杆菌 感受态细胞 Mini-Ti质粒 转化 冻融 PCR 点杂交
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三株酵母的抗热激性与tps1基因表达的关系 预览 被引量:3
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作者 马向东 郭永豪 +2 位作者 余华顺 张凡 李知洪 《郑州大学学报:理学版》 CAS 2005年第1期 30-33,共4页
海藻糖是酵母细胞重要的抗逆因子,三个生长特性各异的酵母菌株在不同的热激条件下,编码海藻糖-6-磷酸合成酶的基因tps1具有不同的表达丰度.WFB和FHS在经受温和热激的条件下,即大量表达TPS1,YY则在48 ℃达到最高.克隆其tps1后,比对基因... 海藻糖是酵母细胞重要的抗逆因子,三个生长特性各异的酵母菌株在不同的热激条件下,编码海藻糖-6-磷酸合成酶的基因tps1具有不同的表达丰度.WFB和FHS在经受温和热激的条件下,即大量表达TPS1,YY则在48 ℃达到最高.克隆其tps1后,比对基因序列的差异,分析相应蛋白序列的突变,研究YY耐高温的可能机理,以此推断海藻糖对三个菌株抗逆性的影响. 展开更多
关键词 表达 蛋白序列 量表 突变 基因序列 酵母细胞 关系 S1基因 抗热 抗逆性
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菲降解菌的筛选鉴定及其降解酶基因的研究 预览 被引量:10
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作者 马迎飞 刘训理 邵宗泽 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期 218-221,共4页
经过富集从活性污泥中筛选出两株菲降解菌WSCⅡ和WSCⅢ,经16S rDNA鉴定,它们分别属于鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)和假单胞菌属(Pseudomonas sp.),在28℃下4 d内对菲(0.6g/L)的降解率分别达到了70.9%和78.1%;在LB、萘和菲为碳源的... 经过富集从活性污泥中筛选出两株菲降解菌WSCⅡ和WSCⅢ,经16S rDNA鉴定,它们分别属于鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas sp.)和假单胞菌属(Pseudomonas sp.),在28℃下4 d内对菲(0.6g/L)的降解率分别达到了70.9%和78.1%;在LB、萘和菲为碳源的培养条件下,测得菌体的双加氧酶比活力不同.在菲的诱导下,两株菌的双加氧酶比活力最高,而以LB和萘为碳源时酶的比活力较低,其中WSCⅡ在萘中不能生长;这表明该酶在两菌中皆为底物诱导表达.以其它菌的萘双加氧酶基因大亚基片段做模板制备异源探针,与两菌总DNA进行斑点杂交;结果表明,这两株菌可能含有不同的菲双加氧酶基因.利用简并引物进行PCR扩增菲双加氧酶,结果仅能从WSCⅢ的总DNA中扩增得到目的片段,序列分析证明,该基因与已报道的(P. putida NCIB 9816-4,AF491307)双加氧酶同源性最高为98%.图5参10 展开更多
关键词 生物降解 16S RDNA 双加氧酶 斑点杂交
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8-Br—cAMP对Eca—109细胞凋亡的影响 预览
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作者 王红梅 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 王一菱 宫璀璀 《郑州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2004年第2期 232-235,共4页
目的:探讨8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化.方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡相关基因及凋... 目的:探讨8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化.方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响.结果:8-Br-cAMP作用48 h后可显著诱导Eca-109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl-2、c-myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas-IR减弱.结论:8-Br-cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca-109细胞的凋亡.其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用. 展开更多
关键词 细胞凋亡 8—Br—cAMP Eca—109细胞系 原位杂交 斑点印迹
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