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羊口疮病毒OV-HLJ05株及其VEGF毒力因子的遗传特征
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作者 于永忠 段旭阳 +6 位作者 刘圆圆 赵蕊 李岩 马金柱 宋佰芬 连正兴 崔玉东 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期622-632,共11页
羊口疮在我国呈区域流行态势,各地分离株基因型混杂不清,严重制约该病的区域性防控。本研究针对黑龙江大庆地区某小型私营羊场出现的疑似羊口疮病例,采集发病的波尔山羊痂皮病料,通过病毒的分离、电镜形态学观察、本体动物回归试验、血... 羊口疮在我国呈区域流行态势,各地分离株基因型混杂不清,严重制约该病的区域性防控。本研究针对黑龙江大庆地区某小型私营羊场出现的疑似羊口疮病例,采集发病的波尔山羊痂皮病料,通过病毒的分离、电镜形态学观察、本体动物回归试验、血清学检测和分子生物学鉴定,获得一株羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),命名为OVHLJ05株。进而,病毒分子遗传学研究发现,OV-HLJ05在其主要的囊膜蛋白编码基因F1L上,与近年来国内众多分离株相差不大;同源性达95%~98.5%。而在其毒力因子编码基因VEGF方面,OV-HLJ05与9个国内外代表毒株相比,则出现了较大分歧。OV-HLJ05株与OV-SA00(USA)、OV-GO(China)和OV-SJ1(China)等3个毒株亲缘关系密切;同源性分别是93.2%、91.9%和87.2%。而与NZ2(New Zealand)、IA82(USA)、B029(Germany)、D1701(Germany)OV-YX(China)和OV-NA-1-11(China)距离较远。但是,VEGF分子同源建模及其功能性结构域VHD分析表明,各毒株毒力因子仅在Loop3处差别明显,Loop3多态性是否决定ORFV毒力的多样性有待于进一步比较研究。本研究结果说明ORFV不同基因型在我国南北分布的复杂性,这为羊口疮分子流行病学和羊口疮的区域防控研究提供了参考。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱(orf) 羊口疮病毒(ORFV) 分离鉴定 F1L基因 VEGF基因 遗传特征
SOE-PCR技术在羊口疮病毒真核表达质粒构建中的应用
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作者 钱林 李婷 +8 位作者 鲜思美 曹熠 张友 徐松平 陈元翠 张益 包细明 饶体宇 吴伯梅 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期95-98,共4页
为了构建羊口疮病毒B2L和F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L,探讨制备安全可靠羊口疮病毒核酸双基因疫苗的可行性,试验通过Primer Premier 5.0软件设计B2L和F1L融合基因2对引物,应用SOE-PCR技术将B2L和F1L连接起来,用限制性内切酶... 为了构建羊口疮病毒B2L和F1L基因融合真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L,探讨制备安全可靠羊口疮病毒核酸双基因疫苗的可行性,试验通过Primer Premier 5.0软件设计B2L和F1L融合基因2对引物,应用SOE-PCR技术将B2L和F1L连接起来,用限制性内切酶消化后插入pVAX1真核表达载体中,构建B2L-F1L融合基因表达质粒,再转入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,对真核表达质粒进行PCR鉴定、双酶切鉴定及序列测定。结果表明:利用SOE-PCR技术成功扩增出B2L-F1L融合基因;对真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L进行PCR鉴定和双酶切鉴定后,均可得到与预期大小一致的DNA片段;测序发现,真核表达质粒目的基因序列与预期设计一致。说明真核表达质粒pVAX1-B2L-F1L构建成功。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 基因融合 SOE-PCR F1L基因 B2L基因 真核表达质粒
羊口疮病毒疫苗株和野毒株F1L基因的比较分析 预览
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作者 王文莉 魏楠楠 +5 位作者 徐守兴 卢炳洲 张大俊 张克山 郑海学 刘湘涛 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期83-87,共5页
羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,ORFV F1L基因编码肝素结合蛋白。为比较分析ORFV疫苗株和野毒株编码的F1L基因的特征,本试验对疫苗株和野毒株的F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学... 羊口疮(Orf)是由羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)引起的人兽共患传染病,ORFV F1L基因编码肝素结合蛋白。为比较分析ORFV疫苗株和野毒株编码的F1L基因的特征,本试验对疫苗株和野毒株的F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,并应用生物信息学相关软件及方法,对两者的F1L基因在核酸水平和氨基酸水平的变异情况及其二、三级蛋白结构变化情况进行了比较分析。结果显示,此次测定的ORFV疫苗株与野毒株F1L基因核苷酸序列相似性为95.9%,氨基酸序列相似性为94.5%。本研究结果为揭示ORFV异源宿主致弱的机制积累了资料。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 疫苗株 野毒株 F1L基因
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羊IL-2和OrfV-F1L基因疫苗联合免疫小鼠的免疫应答研究
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作者 李婷 包细明 +7 位作者 鲜思美 张益 饶体宇 吴伯梅 张友 刘嫒 李鹏飞 闵德省 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期924-931,共8页
为评价pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答,分别将pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L、pVAX1空载体、PBS对照组通过后腿肌肉注射的方式免疫KM系小鼠,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(I... 为评价pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠诱导的体液和细胞免疫应答,分别将pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2、pVAX1-F1L、pVAX1空载体、PBS对照组通过后腿肌肉注射的方式免疫KM系小鼠,采用ELISA方法检测免疫小鼠血清中OrfV特异性抗体以及Th1型(IL-2、IFN-γ和TNF-α)、Th2型(IL-4、IL-6和IL-10)细胞因子;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结果显示,pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清抗体效价及IL-2、IFN-γ和TNF-α细胞因子水平均显著高于pVAX1-F1L组,与pVAX1组、PBS组相比差异极显著(P<0.01);pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2联合免疫组小鼠血清IL-4、IL-6和IL-10细胞因子水平均显著高于pVAX1组和PBS组,与pVAX1-F1L组相比差异不显著(P>0.05);且pVAX1-F1L+pVAX1-IL-2免疫组的脾淋巴细胞增殖水平高于pVAX1-F1L组、pVAX1组和PBS组(P<0.01)。结果表明,pVAX1-IL-2和pVAX1-F1L联合免疫小鼠,能诱导小鼠产生OrfV特异性体液免疫和细胞免疫,pVAX1-IL-2诱导的免疫反应以细胞免疫应答为主,且能促进Th1型细胞因子的分泌。 展开更多
关键词 IL-2 OrfV F1L基因 核酸疫苗 免疫应答
羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的遗传变异分析
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作者 曾显成 陈珍珍 +6 位作者 林心宇 程洁 张晨凯 刘平 池雪林 罗树红 修金生 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期860-866,共7页
采用羊胚胎鼻甲(OFTu)细胞对湖北某山羊养殖场疑似羊口疮(Orf)的病羊唇部痂皮组织进行病毒分离,通过病理组织学、电镜形态观察及PCR试验等方法对分离的病毒进行鉴定,证实分离毒株为羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),命名为HuB13。分析HuB13 ... 采用羊胚胎鼻甲(OFTu)细胞对湖北某山羊养殖场疑似羊口疮(Orf)的病羊唇部痂皮组织进行病毒分离,通过病理组织学、电镜形态观察及PCR试验等方法对分离的病毒进行鉴定,证实分离毒株为羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),命名为HuB13。分析HuB13 F1L基因序列,结果F1L基因全长为1 017 bp,编码339个氨基酸,G+C含量为64.70%。遗传进化树显示,HuB13与8株山羊和6株绵羊来源的ORFV同源性分别为97.50%~99.41%和97.15%~97.35%,与牛痘病毒(PCPV)和牛丘疹性皮炎病毒(BPSV)同源性分别为88.0%~88.69%和75.15%。Bioedit软件分析发现宿主为山羊和绵羊的ORFV存在1个高变异区(148~171 bp)和6个特异性位点G186C、T187G、A541G、A765G、G856A和G982A。研究结果为开发宿主特异的Orf疫苗及致病机理研究提供参考依据。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 电镜观察 F1L基因 遗传变异
羊口疮病毒榆林株B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统的表达 预览
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作者 冯平 李云章 +2 位作者 孙丰廷 屈雷 闫海龙 《西北农林科技大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第6期1-8,共8页
【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基... 【目的】克隆分析羊口疮病毒(ORFV)榆林株(ORFV-Yulin)的F1L基因序列,通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因,测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因(r B2L)和F1L融合基因(c F1L),利用碱基linker连接,通过重叠PCR方法扩增获得ORFV r B2L-linker-c F1L重组基因(r B2Lc F1L),将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-rB2LcF1L。将pBac-rB2LcF1L包装出杆状病毒,侵染sf9细胞,通过SDS-PAGE、Western-blotting以及质谱鉴定等方法验证目的基因r B2Lc F1L的表达。【结果】克隆获得了1 029bp的F1L全长基因,该基因高度保守,与FJ-MH2015株的序列相似性最高,核苷酸和氨基酸的相似性分别为99.0%和99.4%。系统进化分析表明,ORFV-Yulin株与XP(KU199840.1)、FJ-MH2015(KM675409.1)以及Shanxi(HQ221964.1)株同处于一个分支。PCR扩增获得了855bp的c F1L基因、1 180bp的r B2L基因及1 983bp的r B2Lc F1L基因,成功构建了pBacrB2LcF1L载体,并包装出相应的杆状病毒。B2L和F1L串联基因通过昆虫杆状病毒表达系统获得成功表达,表达产物的分子质量为80ku,且有部分重组蛋白能分泌到细胞培养基中。【结论】ORFV-Yulin株的B2L和F1L串联基因在昆虫杆状病毒系统表达成功。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 F1L%PLUS%B2L串联表达 昆虫杆状病毒 基因表达
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羊口疮病毒上海流行株的分离鉴定及其保护性抗原基因遗传进化分析 被引量:3
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作者 陈晓 李丽 +6 位作者 葛雷 李垚 戴建军 王书全 张树山 吴彩凤 张德福 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期655-661,共7页
为了解上海地区羊口疮病毒(ORFV)流行毒株的分子生物学特性与遗传变异情况,采集疑似0RFV感染的羔羊唇部结痂组织,应用PCR、MDBK细胞分离培养、电子显微镜观察、间接免疫荧光技术等方法,进行分离鉴定,并对这2个分离毒株保护性抗原... 为了解上海地区羊口疮病毒(ORFV)流行毒株的分子生物学特性与遗传变异情况,采集疑似0RFV感染的羔羊唇部结痂组织,应用PCR、MDBK细胞分离培养、电子显微镜观察、间接免疫荧光技术等方法,进行分离鉴定,并对这2个分离毒株保护性抗原基因F1L、B2L进行克隆与序列分析。结果表明,成功分离到2株ORFV,将其分别命名为ORFuF416、ORFV-F429。其中,2株分离株F1L基因与参考毒株核苷酸序列同源性分别为95.2%~99.4%,推导氨基酸序列与参考毒株氨基酸序列同源性分别为94.4%~99.4%,遗传进化树分析均显示2株均属于同一分支,且与福建株FJ—YX(KC568410)亲缘关系最近。但与相关参考毒株相比,分离株FIL基因编码的氨基酸在44~66位不存在核苷酸的缺失,表明上海流行株与FJ—YX株存在一定的变异。2株分离株B2L基因与参考毒株核苷酸序列同源性为96.7%~99.6%,氨基酸序列同源性为94.7%~98.9%,且在遗传进化树上均与广西株GX—YB(JQ904793)有较近的亲缘关系,但与中国疫苗株(JQ904789)亲缘关系较远。表明从上海地区分离得到的2个毒株与流行于中国南方地区的0RFV毒株有较近的亲缘关系,但分离株的FIL基因和B2L基因存在一定变异。 展开更多
关键词 ORFV 分离鉴定 F1L基因 B2L基因 进化分析
山羊口疮病毒四川分离株F1L基因分子特征分析及抗原表位预测 预览
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作者 孙正楠 毛从剑 张焕容 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第7期1942-1948,共7页
为明确山羊口疮病毒(ORFV)四川分离株F1L基因分子特征并预测抗原表位,本试验利用生物信息学软件分析四川分离株ORFVF1L基因,并预测其编码蛋白的二、三级结构和B细胞表位。将F1L基因克隆转化后测序,用Mega 7.0软件比对分析该基因与其... 为明确山羊口疮病毒(ORFV)四川分离株F1L基因分子特征并预测抗原表位,本试验利用生物信息学软件分析四川分离株ORFVF1L基因,并预测其编码蛋白的二、三级结构和B细胞表位。将F1L基因克隆转化后测序,用Mega 7.0软件比对分析该基因与其他地区来源的ORFV F1L基因的变异情况,利用SOPMA服务器预测F1L蛋白的二级结构,以DNAStar软件预测其亲水性、表面可及性、柔韧性及抗原性,以ABCpred方案作为验证并输出B细胞表位,在SWISS-MODEL服务器预测三级结构后,进一步在建模区域再验证抗原表位,最终回归蛋白质序列比对。结果显示,四川分离株ORFVF1L基因大小为1 029bp,编码342个氨基酸,基因及其编码蛋白较其他地区来源毒株有一定变异;F1L蛋白预测分析存在9个可能B细胞表位,综合三级结构预测,其122—137肽段为最优表位;所预测的四川分离株ORFV F1L蛋白优势抗原表位较其他地区具有一定特异性,较多地区在124、131、137位氨基酸出现不同。本研究结果为四川地区ORFV基因工程疫苗及特异性检测方法的研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 山羊口疮病毒(ORFV) F1L基因 蛋白结构 B细胞抗原表位
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羊口疮病毒的分离鉴定及其遗传进化分析 预览 被引量:7
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作者 王勇 殷冬冬 +6 位作者 杨侃侃 白彩霞 潘飞 梅跃辉 赵玉洁 徐前明 李永东 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 北大核心 2017年第2期10-14,共5页
为确定安徽肥东某山羊场发生的疑似羊口疮(ORF)的病原,利用MDBK细胞从送检的病羊唇部痂皮中分离获得病毒,通过PCR鉴定确定病原为羊口疮病毒(ORFV),并将其命名为ORFV/AH-FD/2016/China株。然后对分离株的B2L基因和F1L基因进行克隆、... 为确定安徽肥东某山羊场发生的疑似羊口疮(ORF)的病原,利用MDBK细胞从送检的病羊唇部痂皮中分离获得病毒,通过PCR鉴定确定病原为羊口疮病毒(ORFV),并将其命名为ORFV/AH-FD/2016/China株。然后对分离株的B2L基因和F1L基因进行克隆、测序,并与其他ORFV序列进行遗传进化分析。结果表明:ORFV/AH-FD/2016/China株的B2L基因长1 137bp,编码279个氨基酸,F1L基因长1 023bp,编码341个氨基酸。与GenBank中收录的其他ORFV流行株相比,B2L基因的核苷酸同源性为96.9%-99.5%,推导的氨基酸同源性为95.5%-98.9%;F1L基因的核苷酸同源性为95.3%-98.3%,推导的氨基酸同源性为94.9%-99.1%。利用软件构建系统进化树,根据B2L基因遗传进化分析结果表明,该分离株与甘肃分离株的亲缘关系最近;根据F1L基因遗传进化分析结果表明,该分离株与福建分离株亲缘关系最近。基于B2L基因和F1L基因的遗传进化分析,其分离得到的病毒株与国内不同地区分离毒株的遗传差异不大。该研究为ORFV的后续研究提供了临床试验材料和流行病学依据。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 B2L基因 F1L基因 遗传进化分析
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福建省羊传染性脓疱病毒F1L、B2L和VIR基因的遗传变异分析 预览 被引量:2
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作者 林裕胜 江锦秀 +2 位作者 江斌 游伟 胡奇林 《动物医学进展》 北大核心 2017年第2期1-6,共6页
为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株oRFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFVF1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列... 为探明2014年-2015年在福建省流行的羊传染性脓疱病毒(ORFV)遗传变异情况,对10株oRFV流行毒株的F1L、B2L和VIR基因进行克隆、测序及分析。结果表明,10株ORFVF1L基因之间的核苷酸序列同源性为97.6%~100%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.8%~99.79/6,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.3%~97.1%;同NZ2参考株比较,FJ-YT2014缺失2个氨基酸;10株ORFVB2L基因之间核苷酸序列同源性为97.59/5~99.9%,与国内株的核苷酸序列同源性为96.7%~99.5%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为96.7%~97.7%;10株ORFVVIR基因之间的核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,与国内株的核苷酸序列同源性为94.6%~99.6%,与NZ2参考株的核苷酸序列同源性为94.6%~96.4%。基于基因核苷酸序列的遗传进化分析表明,10株ORFVF1L基因与福建省分离株、山西株和新疆株亲缘关系较近;10株oRFVB2L基因与新疆、山西、德国毒株亲缘关系较近;10株ORFVVIR‘基因与台湾、新疆株亲缘关系较近。结果提示,当前福建省流行的ORFVF1L、B2L和VIR基因尚未出现明显变异,但是其F1L、B2L和VIR基因核苷酸序列之间普遍存在异质性。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 F1L基因 B2L基因 VIR基因 变异分析
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羊口疮病毒重庆株F1L基因克隆与生物信息学分析 预览 被引量:3
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作者 李鹏飞 冯将 +4 位作者 刘嫒 包细明 张益 李婷 鲜思美 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1281-1288,共8页
旨在分析OrfV-CQ株F1L基因的分子特点,预测其编码蛋白的生物学功能。对OrfV-CQ株F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,利用生物信息学相关软件进行序列分析并对其编码蛋白的二级结构、B细胞表位、T细胞表位、保守结构域、跨膜结构域和... 旨在分析OrfV-CQ株F1L基因的分子特点,预测其编码蛋白的生物学功能。对OrfV-CQ株F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定,利用生物信息学相关软件进行序列分析并对其编码蛋白的二级结构、B细胞表位、T细胞表位、保守结构域、跨膜结构域和信号肽进行预测。结果表明,OrfV-CQ株F1L基因长1 023bp,编码340个氨基酸,与Shanxi株F1L基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%和95.0%。OrfV-CQ株F1L基因编码蛋白的α-螺旋、β-片层、β-转角、无规则卷曲分别为11.21%、10.3%、2.73%、75.76%;可能存在5个B细胞优势抗原表位,3个CTL表位,4个Th细胞表位,无跨膜结构域和信号肽。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 克隆 生物信息学分析
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重庆株山羊口疮病毒的分离鉴定与F1L基因片段的克隆及序列分析 被引量:1
12
作者 许国洋 付利芝 +3 位作者 杨金龙 沈克飞 杨珏 张素辉 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期155-158,298共5页
为了对重庆地区山羊口疮病毒进行分离鉴定,初步分析克隆病毒F1L基因全长序列的结构与功能,试验采用MDBK细胞培养技术,分离纯化羊口疮病毒,并对其进行间接免疫荧光和扫描电镜分析,同时依据NCBI中公布的山羊口疮病毒基因序列设计引... 为了对重庆地区山羊口疮病毒进行分离鉴定,初步分析克隆病毒F1L基因全长序列的结构与功能,试验采用MDBK细胞培养技术,分离纯化羊口疮病毒,并对其进行间接免疫荧光和扫描电镜分析,同时依据NCBI中公布的山羊口疮病毒基因序列设计引物,利用PCR技术扩增F1L全长基因序列,测序后应用生物学软件进行分析。结果表明:扩增的F1L基因全长为1023bp,共编码340个氨基酸,与shanxi株(登录号HQ221964)同源性最高(98.4%),在遗传进化树中也与其聚为一簇,其对应的氨基酸序列中,α螺旋和β折叠结构较少,β转角和无规则卷曲结构较多;亲水性区域较多,抗原指数高,存在多处优势抗原表位。 展开更多
关键词 山羊口疮病毒 分离鉴定 F1L基因 克隆 序列分析 进化树
羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒构建及其在MDBK细胞中的表达 预览 被引量:10
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作者 刘嫒 冯将 +3 位作者 鲜思美 刘宗胜 李鹏飞 罗代兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1124-1128,共5页
目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和... 目的为构建羊口疮病毒F1L和B2L基因真核表达质粒,同时验证其在MDBK细胞中的表达。方法本试验以pVAX1为真核表达载体,在前期构建的克隆质粒pMD18-T-B2L和pMD18-T-F1L基础上,构建真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L,对其分别进行双酶切和测序鉴定,将鉴定正确的真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L转染至MDBK细胞,采用RT-PCR和间接免疫荧光试验(IFA)检测目的基因表达。结果双酶切鉴定和序列测定表明真核表达质粒pVAX1-F1L和pVAX1-B2L构建成功,RT-PCR和IFA同时验证目的基因在MDBK细胞浆中能瞬时表达。结论本试验构建成功的真核表达质粒为下一步羊口疮病毒核酸疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 B2L基因 真核表达
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羊口疮病毒湖北株F1L基因克隆与遗传进化分析 预览 被引量:2
14
作者 郭锐 田永祥 +7 位作者 周丹娜 段正赢 杨克礼 刘泽文 袁芳艳 刘威 刑崔昱 裴小英 《中国草食动物科学》 CAS 2015年第6期31-34,共4页
为了分析羊口疮病毒湖北株(ORFV-HB-YX株)F1L基因遗传变化规律,参照Gen Bank公布的ORFV-F1L基因序列设计特异性引物,对ORFV-HB株F1L基因进行PCR扩增、克隆、测序以及遗传进化分析。结果显示:F1L基因PCR扩增产物大小为999 bp,编码333... 为了分析羊口疮病毒湖北株(ORFV-HB-YX株)F1L基因遗传变化规律,参照Gen Bank公布的ORFV-F1L基因序列设计特异性引物,对ORFV-HB株F1L基因进行PCR扩增、克隆、测序以及遗传进化分析。结果显示:F1L基因PCR扩增产物大小为999 bp,编码333个氨基酸,系统进化树显示HB-YX株与Gen Bank参考毒株的核苷酸序列同源性为95.0%-98.0%,与福建FJ-GO株同源性高达98%,亲缘关系最近,属于同一分支。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 克隆 遗传进化分析
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羊口疮病毒贵州株F1L基因克隆及生物信息学分析 预览 被引量:9
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作者 刘嫒 杨钰 +4 位作者 鲜思美 刘宗胜 吴健 罗波 陈永翠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第1期53-60,共8页
为分析羊口疮病毒贵州株(ORFV-GZ株)F1L基因的分子特点,预测编码蛋白的生物学功能,本试验对ORFV-GZ株F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定。应用生物信息学相关软件及方法,对ORFV-GZ株F1L基因进行列分析并对其编码蛋白进行了二级结构... 为分析羊口疮病毒贵州株(ORFV-GZ株)F1L基因的分子特点,预测编码蛋白的生物学功能,本试验对ORFV-GZ株F1L基因进行PCR扩增、克隆及序列测定。应用生物信息学相关软件及方法,对ORFV-GZ株F1L基因进行列分析并对其编码蛋白进行了二级结构、B细胞表位、保守结构域、跨膜结构域和信号肽预测。结果显示,F1L基因PCR扩增产物大小为1 029bp,编码342个氨基酸;与OV-SA00株、NZ2株、OV-IA82株和D1701株相应序列核苷酸同源性分别为98.4%、97.9%、97.8%和96.8%,氨基酸的同源性分别为98.3%、97.6%、97.3%和95.3%;系统进化树显示,ORFV-GZ株F1L基因与FJ-GT株亲缘关系最近;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲所占比例较大,预测此蛋白可能存在7个B细胞优势抗原表位,两个跨膜区域,无信号肽区域。本试验结果将为贵州省ORFV免疫诊断及核酸疫苗研究提供理论依据。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 F1L基因 克隆 生物信息学分析
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口疮病毒XC13株的分离鉴定 被引量:2
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作者 邓宇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期469-473,共5页
采用MDBK细胞对西昌市某山羊场疑似患有口疮的山羊病料进行分离培养,经动物回归试验、PCR、遗传进化分析等对分离毒株进行鉴定。结果表明,病料在MDBK细胞上产生致细胞病变;接种病料的山羊出现典型的传染性脓疱;PCR从分离毒株中扩增出F1... 采用MDBK细胞对西昌市某山羊场疑似患有口疮的山羊病料进行分离培养,经动物回归试验、PCR、遗传进化分析等对分离毒株进行鉴定。结果表明,病料在MDBK细胞上产生致细胞病变;接种病料的山羊出现典型的传染性脓疱;PCR从分离毒株中扩增出F1L基因片段,该基因片段序列与口疮病毒(ORFV)参考株FJ-SL2、FJ-SL1的核苷酸序列的同源性分别为99.8%、99.5%,亲缘关系较近,遗传进化分析处于同一分支上。本研究从疑似口疮病料中成功分离鉴定出1株口疮病毒,遂将其命名为ORFV XC13。 展开更多
关键词 口疮病毒 分离鉴定 F1L基因
重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达 预览 被引量:7
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作者 杨钰 冯杰 +5 位作者 刘嫒 张素辉 许国洋 冯将 刘宗胜 鲜思美 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1396-1401,共6页
本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建... 本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重组质粒pET-32a-F1L,转化至大肠杆菌BL21菌株后,对阳性菌株进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。结果表明,所获得的毒株为ORFV,其F1L基因在大肠杆菌中的表达产物大小约为57.4ku,主要以包涵体形式存在,5h为最佳诱导表达时间,并具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 F1L基因 原核表达
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羊口疮病毒的分离与鉴定 预览 被引量:4
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作者 庞方圆 高日明 +4 位作者 李旭东 闫聪 李浩 王艳杰 张七斤 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第2期467-471,共5页
本试验利用犊牛睾丸细胞、羔羊睾丸细胞、MDBK、BHK-21细胞对采自内蒙古赤峰的疑似羊口疮发病羊群的唇部痂皮组织进行接种传代,分离出1株病毒,通过透射电镜负染观察和PCR检测对该分离株进行鉴定。参照GenBank中羊口疮病毒(0rfvirus,... 本试验利用犊牛睾丸细胞、羔羊睾丸细胞、MDBK、BHK-21细胞对采自内蒙古赤峰的疑似羊口疮发病羊群的唇部痂皮组织进行接种传代,分离出1株病毒,通过透射电镜负染观察和PCR检测对该分离株进行鉴定。参照GenBank中羊口疮病毒(0rfvirus,ORFV)ORF059(FIL)基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,成功地对分离株的F1L基因进行克隆、测序,并与多株参考毒株进行了同源性比对分析,结果显示经透射电镜负染观察到典型的副痘病毒粒子,与参考毒株序列相比均具有较高的同源性,均为96%以上,结果表明该分离株为ORFV,命名为OV/nm—hd。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 分离鉴定 F1L基因 序列分析
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陕西关中某羊场羊口疮病毒的分离鉴定与基因序列分析 预览 被引量:5
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作者 尚辰 黄勇 +5 位作者 张秀娟 董峰 杜谦 赵晓民 张文龙 童德文 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第12期25-32,共8页
羊口疮疫病的暴发可严重影响畜牧的经济效益,为探明陕西地区该病的发病原因。本研究从陕西关中地区某羊场出现特征症状病羊嘴部痂皮中分离病原,经过感染MDBK细胞系,获得1株病毒,经形态学、理化学、PCR检测及病理组织学等方法鉴定,该病... 羊口疮疫病的暴发可严重影响畜牧的经济效益,为探明陕西地区该病的发病原因。本研究从陕西关中地区某羊场出现特征症状病羊嘴部痂皮中分离病原,经过感染MDBK细胞系,获得1株病毒,经形态学、理化学、PCR检测及病理组织学等方法鉴定,该病毒分离株为羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV),命名为ORFV-SXGZ。依据GenBank中发表的ORFV特异性B2L、F1L及VIR基因的核酸序列,设计并合成3对引物,应用PCR方法成功对ORFV-SXGZ毒株的B2L、F1L及VIR基因进行克隆,并将其基因序列及推导的氨基酸序列与其他不同来源ORFV分离株进行比较分析。序列分析结果表明,ORFV-SXGZ毒株的B2L、F1L和VIR基因与其他已发表ORFV毒株之间的核苷酸同源性分别为96.7%~99.6%、95.8%~97.9%和95.0%~99.3%,氨基酸同源性分别为95.3%~99.7%、95.8%~98.2%和95.5%~98.4%。系统进化树分析结果显示,ORFV-SXGZ毒株与国内新疆和甘肃等西北部地区分离株的亲缘关系更近,证实陕西关中地区养殖场中存在羊口疮病毒感染。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒 分离鉴定 B2L基因 F1L基因 VIR基因 序列分析
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表达ORFV F1L基因的重组山羊痘病毒的构建及初步鉴定 被引量:3
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作者 张倩 王震 +4 位作者 倪伟 付强 李瑞芳 张辉 陈创夫 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期68-72,共5页
目的:研制安全有效的预防羊口疮的重组山羊痘病毒活载体疫苗。方法:采用PCR技术扩增ORFV的F1L基因,将其与载体pUC—T1l2连接,同时酶切插入LacZ报告基因和Pb56双向启动子,构建重组转移载体pUC—TKl2-LacZ—F1L,将其转染至已感染山... 目的:研制安全有效的预防羊口疮的重组山羊痘病毒活载体疫苗。方法:采用PCR技术扩增ORFV的F1L基因,将其与载体pUC—T1l2连接,同时酶切插入LacZ报告基因和Pb56双向启动子,构建重组转移载体pUC—TKl2-LacZ—F1L,将其转染至已感染山羊痘病毒疫苗株的BHK-21细胞,进行同源重组。通过蓝白斑筛选,收获重组病毒并进行PCR初步鉴定。结果:获得了全长为1023bp的F1L基因,测序结果与GenBank公布的标准序列同源性为99.9%。构建了重组转移载体pTL—nL,转染BHK-21细胞后,获得了重组山羊痘病毒蓝色蚀斑。结论:该研究成功获得了含有羊传染性脓疱病毒FIL基因的重组山羊痘病毒疫苗候选株rGPV—F1L,为羊传染性脓疱病基因工程活载体疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱病毒(ORFV) F1L基因 山羊痘病毒 rGPV—F1L
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