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基因权利保护和基因技术应用行为的法律规制研究 预览
1
作者 贾元 《北方民族大学学报:哲学社会科学版》 CSSCI 北大核心 2019年第2期144-150,共7页
对基因技术应用行为进行管理,是社会秩序管理的需要,也是保护公民基因权利的需要,是人权保护在现代发展的延伸。基于基因技术应用行为可能侵犯的权利对象、内涵及法律规制具体措施的讨论,提出我国法律规制可能的切入点,即随着个人信息... 对基因技术应用行为进行管理,是社会秩序管理的需要,也是保护公民基因权利的需要,是人权保护在现代发展的延伸。基于基因技术应用行为可能侵犯的权利对象、内涵及法律规制具体措施的讨论,提出我国法律规制可能的切入点,即随着个人信息保护越来越受到重视,对基因信息的保护可以成为我国基因立法的良好开端,并在此基础上延伸出对基因治疗、基因编辑等领域的规范。 展开更多
关键词 基因权利 基因治疗 基因编辑 个人信息
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通过编辑人类胚胎CCR5基因预防艾滋病事件的反思 预览
2
作者 卢光琇 《医学与哲学》 2019年第2期7-11,共5页
基因治疗虽已有较长的发展历史,当前已发展到基因编辑阶段。但是无论从国际上还是我国的探索都显示基因编辑在安全性和有效性方面还没有得到充分的证明,特别是编辑CCR5基因预防艾滋病就目前研究表明还存在技术风险。基因编辑对于遗传病... 基因治疗虽已有较长的发展历史,当前已发展到基因编辑阶段。但是无论从国际上还是我国的探索都显示基因编辑在安全性和有效性方面还没有得到充分的证明,特别是编辑CCR5基因预防艾滋病就目前研究表明还存在技术风险。基因编辑对于遗传病基因治疗是很有价值的,反思基因编辑预防艾滋病临床应用这一突破伦理与法律底线的事件,建议重大新技术的临床应用,需要在国家层面进行广泛听证,接受国家层面的严格监督,并进行大量的临床前试验和各方面安全性、有效性评估后方可实施。 展开更多
关键词 基因编辑 基因治疗 生殖细胞 CCR5基因 艾滋病1型 CRISPR/Cas9
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人体胚胎基因编辑的伦理及法律问题研究--以“基因编辑婴儿”事件为分析对象 预览
3
作者 陈伟伟 杨胜果 刘毅 《科技与法律》 CSSCI 2019年第2期61-65,73共6页
基因编辑婴儿事件引发学界对基因编辑技术的重新审视,在依据现有法律框架和伦理原则从技术、目的、后果三方面对事件进行评析的基础上,针对该事件所暴露的现有伦理审查制度的不足、基因编辑婴儿未来人权保障、科学不端行为的法律规制缺... 基因编辑婴儿事件引发学界对基因编辑技术的重新审视,在依据现有法律框架和伦理原则从技术、目的、后果三方面对事件进行评析的基础上,针对该事件所暴露的现有伦理审查制度的不足、基因编辑婴儿未来人权保障、科学不端行为的法律规制缺陷等问题进行探讨,并提出相关的完善建议。 展开更多
关键词 基因编辑 基因增强 基因治疗 伦理 法律
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通过优化gRNA设计提高CRISPR/Cas9系统中基因编辑效率的方法
4
作者 李秋月 王小柯 +3 位作者 张亚飞 孙珍珠 王旭 江东 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期3274-3282,共9页
CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于动物、植物、真菌、细菌的新一代基因定点编辑技术,如何提高g RNA的编辑效率是该技术的关键点也是许多研究者关注的焦点。本研究利用CRISPR/Cas9技术对番茄miR167a前体序列进行基因编辑,根据番茄miR167... CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于动物、植物、真菌、细菌的新一代基因定点编辑技术,如何提高g RNA的编辑效率是该技术的关键点也是许多研究者关注的焦点。本研究利用CRISPR/Cas9技术对番茄miR167a前体序列进行基因编辑,根据番茄miR167a前体序列在线设计候选g RNA,同时结合体外编辑检测的方法筛选出能够在体外成功编辑的g RNA-G1,把其连接到含有荧光标记的pP1C.1C表达载体,转化番茄子叶,产生愈伤组织数116个,得到5个含有表达载体的材料,经测序发现,其中3个材料发生了编辑。结果表明,通过体外检测和在线软件设计相结合的方法来快速检测g RNA的编辑效率,能筛选出最优的g RNA用于载体的构建,与未采用体外编辑检测来设计g RNA的方法相比,显著提高了CRISPR/Cas9的编辑效率。本研究通过优化g RNA,创新了一种高效利用CRISPR/Cas9进行基因编辑的方法。 展开更多
关键词 gRNA设计 CRISPR/Cas9 体外检测 基因编辑
CRISPR/Cas9技术在基因功能研究中的应用 预览
5
作者 周芮 张辟 《生物化工》 2019年第1期142-145,148共5页
CRISPR/Cas系统是存在于几乎所有细菌和古细菌中的一种获得性免疫防御系统。2012年起,CRISPR/Cas9系统被发展成为基因编辑工具,并以其高效、快速、便捷等优点被广泛应用于多项科研领域。同时,研究者也将CRISPR/Cas9系统扩展应用于高通... CRISPR/Cas系统是存在于几乎所有细菌和古细菌中的一种获得性免疫防御系统。2012年起,CRISPR/Cas9系统被发展成为基因编辑工具,并以其高效、快速、便捷等优点被广泛应用于多项科研领域。同时,研究者也将CRISPR/Cas9系统扩展应用于高通量筛选、基因表达调控、表观遗传修饰等方面。基因功能研究一直是人类面临的一大课题,CRISPR/Cas9技术的出现加速了该项研究进程。本文综述了CRISPR/Cas9系统在基因功能研究领域的应用进展,并对CRISPR/Cas9技术目前存在的问题及改善方向进行简要总结。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas Cas9 基因编辑 基因功能
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关于基因编辑的伦理反思 预览
6
作者 孙伟平 戴益斌 《重庆大学学报:社会科学版》 CSSCI 北大核心 2019年第4期1-9,共9页
基因编辑是一项新兴的复杂的前沿科学技术,它如果得到安全、合理的利用,无疑具有重要的积极效应;但关键是它目前并不成熟,在缺乏严格的科学评估、安全性存在不可预知风险的情况下,贸然使用可能导致人类基因谱系发生改变等问题,甚至带来... 基因编辑是一项新兴的复杂的前沿科学技术,它如果得到安全、合理的利用,无疑具有重要的积极效应;但关键是它目前并不成熟,在缺乏严格的科学评估、安全性存在不可预知风险的情况下,贸然使用可能导致人类基因谱系发生改变等问题,甚至带来难以预料的灾难性后果。即使今后基因编辑技术成熟了,如何合理地运用它,而不偏离正确的轨道,也需要更审慎地进行伦理反思,努力形成基本的伦理共识。为了促进基因编辑技术的健康发展,令其更好地兴利除弊,为人类造福,基因编辑技术的研究、应用必须遵循人本原则、公正原则、公开透明原则、知情同意原则、责任原则等基本的伦理原则。 展开更多
关键词 基因 基因编辑 伦理反思 伦理后果 伦理原则 科学伦理
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亨廷顿病基因治疗的进展与挑战
7
作者 裴中 吴腾腾 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期520-525,共6页
亨廷顿病是一种常染色体显性遗传病,基因治疗是控制病情进展甚至实现根治的有效手段。随着反义核苷酸疗法在亨廷顿病基因治疗中获得初步成功,针对基因组水平及mRNA水平的各项技术也正在积极开发、改良,在不久的将来相继开展临床试验。... 亨廷顿病是一种常染色体显性遗传病,基因治疗是控制病情进展甚至实现根治的有效手段。随着反义核苷酸疗法在亨廷顿病基因治疗中获得初步成功,针对基因组水平及mRNA水平的各项技术也正在积极开发、改良,在不久的将来相继开展临床试验。本文围绕亨廷顿病基因治疗的现状、发展方向及临床挑战,开展相关研究状况的综述。 展开更多
关键词 亨廷顿病 基因治疗 反义寡核苷酸 基因编辑
遗传性神经系统离子通道病基因治疗的研究进展
8
作者 王小艺 苏文娜 +1 位作者 薛天阔 朱雨岚 《中国综合临床》 2019年第4期381-384,共4页
目的遗传性神经系统离子通道病现有的治疗方法往往难以控制病情或者患者耐受度较低,因此探索新的治疗方法势在必行。基因治疗在多项研究中显示可能应用于神经系统疾病,并可能成为未来遗传性神经系统离子通道病的有效治疗手段。同时,光... 目的遗传性神经系统离子通道病现有的治疗方法往往难以控制病情或者患者耐受度较低,因此探索新的治疗方法势在必行。基因治疗在多项研究中显示可能应用于神经系统疾病,并可能成为未来遗传性神经系统离子通道病的有效治疗手段。同时,光遗传学、化学遗传学方法、基因编辑技术的不断进步也为遗传性神经系统离子通道病的基因治疗提供了良好的发展基础。我们将就遗传性神经系统离子通道病基因治疗的方法机制、转导载体、启动子及给药途径作一综述。 展开更多
关键词 离子通道病 基因治疗 基因编辑 CRISPR/Cas9
基于CRISPR/Cas9技术的基因敲入/敲除策略
9
作者 张雪梅 高旭 马宁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期1-6,共6页
成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥... 成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR)基因编辑系统,因其设计简单操作方便和无种属限制,已成为一种广泛应用的基因组定点编辑工具,在复杂的基因组编辑,例如基因的人源化改造以及条件等位基因的构建中有所应用。在自然界中,CRISPR系统拥有多种类别。其中,CRISPR/Cas9系统是研究最深入、应用最成熟的一种。本文针对CRISPR/Cas9系统,分别从基因敲入/敲除片段的大小、同源臂长短、构型即递送方式等技术环节进行综述,阐述不同设计及操作条件下由CRISPR/Cas9系统介导的基因敲入/敲除的效率差异。 展开更多
关键词 基因编辑 成簇的规律间隔性短回文序列(CRISPR) 基因敲入 同源模板
基因编辑技术对法医学鉴定的影响和挑战
10
作者 刘鑫 安香玉 《中国法医学杂志》 CSCD 2019年第1期12-15,共4页
近年来基因编辑技术发展突飞猛进,已经出现第三代CRISPR/Cas9基因编辑技术。世界各国的法律对人类胚胎基因干预性研究从严管理。基因编辑在人类胚胎层面开展研究,甚至会导致基因编辑婴儿出生,改变人类的基因顺序等信息也由可能走向现实... 近年来基因编辑技术发展突飞猛进,已经出现第三代CRISPR/Cas9基因编辑技术。世界各国的法律对人类胚胎基因干预性研究从严管理。基因编辑在人类胚胎层面开展研究,甚至会导致基因编辑婴儿出生,改变人类的基因顺序等信息也由可能走向现实,这对法医学同一认定、亲缘关系鉴定等造成负面影响。同时,犯罪分子也可能利用基因编辑技术改变自己的基因信息,从而避开犯罪基因信息库中的信息。这一生物遗传学技术的进步和实践应用趋势,应当引起法医学鉴定人员警惕,国家相关部门也应当加强监管。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 同一认定 亲缘鉴定 犯罪基因信息库
利用CRISPR/Cas9技术产生肌肉特异表达Cas9的小鼠胚胎 预览
11
作者 李昊 陈胜男 +3 位作者 李松美 朴善花 安铁洙 王春生 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期271-277,共7页
目的通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础。方法设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将Rosa26sg... 目的通过CRISPR/Cas9技术获得肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为建立肌肉特异表达Cas9小鼠动物模型奠定基础。方法设计小鼠Rosa26位点sgRNA并通过体外酶切验证活性,同时使用同源重组构建肌肉特异性同源打靶载体;通过显微注射将Rosa26sgRNA与Cas9蛋白注射到小鼠胚胎,通过PCR及测序检测胚胎的编辑情况,同时移植到假孕母鼠体内,待其生产;将同源打靶载体与Rosa26sgRNA和Cas9一起注射到小鼠胚胎,通过PCR检测整合情况。结果体外酶切实验表明,体外转录的sgRNA与Cas9蛋白联合可对靶位点产生编辑作用;成功构建了肌肉特异性同源打靶载体Donor-SP-px459;通过原核注射获得Rosa26基因编辑胚胎,经移植获得Rosa26基因编辑小鼠;注射同源打靶载体后,成功获得肌肉特异表达Cas9蛋白的基因打靶小鼠胚胎。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功获得Rosa26基因编辑胚胎和小鼠,并获得了肌肉特异性表达Cas9蛋白小鼠胚胎,为利用基因打靶构建肌肉特异表达Cas9的小鼠动物模型奠定基础。 展开更多
关键词 Rosa26 Cas9 基因编辑 肌肉特异 基因打靶
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基因编辑技术及其在疾病治疗中的研究进展 预览
12
作者 牛煦然 尹树明 +2 位作者 陈曦 邵婷婷 李大力 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期582-598,共17页
基因编辑是一种基于人工核酸酶的遗传操作技术,能精确地对DNA或RNA进行高效改造。基因编辑除了在基础研究、生物育种和药物筛选等方面展现了巨大前景之外,在疾病治疗(特别是基因遗传病)领域的前景与进展尤为引人注目。本文在介绍基因编... 基因编辑是一种基于人工核酸酶的遗传操作技术,能精确地对DNA或RNA进行高效改造。基因编辑除了在基础研究、生物育种和药物筛选等方面展现了巨大前景之外,在疾病治疗(特别是基因遗传病)领域的前景与进展尤为引人注目。本文在介绍基因编辑技术的发展及其在疾病治疗中不同策略的基础上,重点围绕遗传疾病的基因治疗研究,综述了基因编辑技术(包括单碱基编辑和表观调控等技术)在血液系统、肝脏、肌肉和神经系统等疾病治疗的研究进展,并对基因编辑治疗疾病的未来发展进行了展望。 展开更多
关键词 基因编辑 基因治疗 遗传病
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生殖细胞基因编辑与基因治疗的问题与展望——以CCR5基因为例 预览
13
作者 肖莉 传军 +4 位作者 罗迪贤 李文 张佳 李凯 廖端芳 《中南医学科学杂志》 CAS 2019年第1期1-6,共6页
医学科学研究和医学临床实践,需要遵守人类的国际准则和国家的具体法规。最近报道的基因编辑婴儿,是一起破坏人类医学伦理底线的非法行医事件的结果。本文以CCR5基因为例,探讨基于基因编辑或基因治疗受精卵的技术局限性和未来需要发展... 医学科学研究和医学临床实践,需要遵守人类的国际准则和国家的具体法规。最近报道的基因编辑婴儿,是一起破坏人类医学伦理底线的非法行医事件的结果。本文以CCR5基因为例,探讨基于基因编辑或基因治疗受精卵的技术局限性和未来需要发展的技术路径。 展开更多
关键词 基因编辑 人类免疫缺陷病毒 CCR5 基因治疗
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利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎 预览
14
作者 尉翔栋 吕晨晨 +7 位作者 朱肖亭 冯亚杰 辛晓玲 施巧婷 梁瑞清 徐照学 王二耀 滑留帅 《河南农业科学》 北大核心 2019年第2期131-136,共6页
为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎。从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证... 为了给双肌肉牛品种的培育提供新的遗传素材,拟利用CRISPR-Cas9基因编辑技术制备牛MSTN基因编辑胚胎。从采集到的86对牛卵巢中收集卵母细胞进行成熟培养以及体外受精,并使用在线软件设计能够在体外高效编辑牛MSTN基因的gRNA序列,将验证后所得的体外切割活性最高的gRNA与Cas9mRNA的混合物显微注射牛的受精卵,培养至囊胚后,利用T7EI核酸内切酶法检测囊胚中MSTN基因的编辑情况,然后将基因编辑阳性的囊胚样品进行测序验证。结果表明,牛胚胎体外培养平均囊胚率为21.28%;在设计的多条gRNA序列中,gRNA5的体外切割活性最高,为96.00%;将Cas9mRNA和gRNA5的混合物显微注射受精卵并培养至囊胚后,T7EI核酸内切酶检测表明囊胚MSTN基因切割阳性率为15.40%;对MSTN基因编辑囊胚阳性样品测序表明,在gRNA5靶位点存在部分片段缺失。综上,说明利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功获得了牛MSTN基因编辑胚胎。 展开更多
关键词 MSTN基因 基因编辑 CRISPR-Cas9 胚胎
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基因编辑与基因治疗
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作者 马云青 常兴 《生命的化学》 CAS CSCD 2019年第1期21-27,共7页
基因编辑是直接对生物体内源基因进行精准定点修饰的技术,已经在生物科学研究领域得到广泛应用。基因编辑技术主要包括锌指核酸酶(zinc finger nucleases, ZFNs)、类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nu... 基因编辑是直接对生物体内源基因进行精准定点修饰的技术,已经在生物科学研究领域得到广泛应用。基因编辑技术主要包括锌指核酸酶(zinc finger nucleases, ZFNs)、类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nucleases, TALENs)和规律成簇间隔短回文重复(clustered regularly interspaced short palindromic repeat, CRISPR)/CRISPR相关酶9(CRISPR-associated nuclease 9, Cas9)。本文就这三大靶向基因编辑系统的原理及在基因治疗方面的最新研究进展进行总结和讨论。 展开更多
关键词 基因编辑技术 ZFN TALEN CRISPR/Cas9 基因治疗
CRISPR/Cas9系统在植物基因功能研究中的应用进展
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作者 霍晋彦 李姣 +2 位作者 荆雅峰 冯宝民 于宗霞 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期241-246,共6页
随着基因组时代到来,涌现出海量基因数据,仅依靠传统过量表达、RNA干扰(RNAi)等手段难以满足大量基因功能分析的需求。依赖于微生物的CRISPR/Cas系统依靠其操作简便、基因编辑效率高、适用范围广的特点,迅速成为研究植物、动物、微生物... 随着基因组时代到来,涌现出海量基因数据,仅依靠传统过量表达、RNA干扰(RNAi)等手段难以满足大量基因功能分析的需求。依赖于微生物的CRISPR/Cas系统依靠其操作简便、基因编辑效率高、适用范围广的特点,迅速成为研究植物、动物、微生物基因功能的重要手段。本文主要介绍了CRISPR/Cas系统的产生、发展和作用机理,并重点介绍了CRISPR/Cas9在植物基因功能研究方面的应用,从而为该系统的进一步优化和多元化应用提供参考。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 基因编辑 植物基因功能
从基因编辑婴儿事件看当前科学伦理问题 预览
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作者 李东风 《科学与社会》 CSSCI 2019年第2期23-30,共8页
基因编辑婴儿事件引起了社会各界的广泛关注。本文在归纳了科技界对基因编辑伦理问题的讨论的基础上,对涉及人类安全新技术的应用如何监管进行了反思,并提出了政策建议。
关键词 基因编辑 人类生殖细胞 伦理 制度
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CD8^+T细胞PD-1基因CRISPR/Cas9编辑体系电穿孔条件的优化 预览
18
作者 王淑敏 张代群 +1 位作者 李峰 张毅 《郑州大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2019年第3期327-332,共6页
目的:通过优化电穿孔递送条件,提高基于CRISPR/Cas9编辑体系对T细胞PD-1基因编辑效率。方法:在前期研究基础上,通过优化电转缓冲液和脉冲条件组合,对CD8^+T细胞的PD-1基因进行敲除编辑,检测电穿孔后CD8^+T细胞凋亡、分化、增殖和PD-1表... 目的:通过优化电穿孔递送条件,提高基于CRISPR/Cas9编辑体系对T细胞PD-1基因编辑效率。方法:在前期研究基础上,通过优化电转缓冲液和脉冲条件组合,对CD8^+T细胞的PD-1基因进行敲除编辑,检测电穿孔后CD8^+T细胞凋亡、分化、增殖和PD-1表达情况。结果:与传统电穿孔方案(P3电转染缓冲液+EO115脉冲)相比,优化方案(P2电转染缓冲液+EH100脉冲)能显著提高PD-1敲除效率,但不影响T细胞存活、分化状态以及增殖。结论:P2电转染缓冲液+EH100脉冲的组合对T细胞PD-1基因的编辑效率较高。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 基因编辑 T细胞 免疫抑制受体 PD-1
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利用CRISPR/Cas9敲除葡萄VviPDS1基因的研究
19
作者 郭晔 万东艳 +2 位作者 柴壮壮 王跃进 文颖强 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期623-634,共12页
选择葡萄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase)基因VviPDS1为靶标,利用CRISPR/Cas9系统构建基因敲除载体,瞬时转化葡萄叶片原生质体,检测到不同类型的突变。通过农杆菌介导转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织,筛选获得卡那霉素抗性植... 选择葡萄八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase)基因VviPDS1为靶标,利用CRISPR/Cas9系统构建基因敲除载体,瞬时转化葡萄叶片原生质体,检测到不同类型的突变。通过农杆菌介导转化‘无核白’葡萄胚性愈伤组织,筛选获得卡那霉素抗性植株71株。经PCR鉴定,其中53株为阳性植株,阳性率为74.64%。测序结果表明,共有20株在靶点发生不同类型的突变,编辑效率为37.74%;其中9株产生了双等位基因突变。对其进行氨基酸序列预测,在第202位氨基酸之后发生了不同程度的变异。利用CRISPR/Cas9系统敲除VviPDS1获得的突变体植株呈现整体矮化,其叶片出现不同程度白化。表明CRISPR/Cas9系统可以通过细胞中的瞬时或稳定表达进行基因编辑,可以实现在葡萄编辑植株中产生纯合敲除。 展开更多
关键词 葡萄 CRISPR/Cas9 PDS1 基因编辑
重组人骨形态发生蛋白-2质粒转染诱导人脐血间充质干细胞软骨分化研究 预览
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作者 李大伟 孙一 +2 位作者 姜翠萍 丛文斌 张海宁 《中华老年骨科与康复电子杂志》 2019年第2期75-81,共7页
目的探究从人脐血中提取间充质干细胞,重组质粒pIRES2-EGFP-hBMP-2转染干细胞并诱导其成软骨化的可能性。方法采用密度梯度离心方法获取脐带血中细胞,依据贴壁时间不同获得间充质干细胞,流式细胞仪检测表面抗原表达鉴定细胞;然后把重组... 目的探究从人脐血中提取间充质干细胞,重组质粒pIRES2-EGFP-hBMP-2转染干细胞并诱导其成软骨化的可能性。方法采用密度梯度离心方法获取脐带血中细胞,依据贴壁时间不同获得间充质干细胞,流式细胞仪检测表面抗原表达鉴定细胞;然后把重组有pIRES2-EGFP-hBMP-2的质粒导入间充质干细胞,观察EGFP的表达;ELISA方法检测在不同时间收集的培养基上清中hBMP-2蛋白含量,采用免疫荧光和RT-PCR方法检测目的蛋白和基因表达。转染成功后继续培养细胞2 w,免疫组化检测细胞Ⅱ型胶原的表达和RT-PCR检测软骨特异性标志物软骨连接蛋白(CRLT1)的表达。结果两种方法可以获取人脐血间充质干细胞,流式细胞术鉴定发现CD90、CD105、CD146高表达,CD34、CD45、Anti-HLA-DR不表达。非脂质载体包裹重组质粒pIRES2-EGFP-hBMP-2可成功导入脐血间充质干细胞,转染率为(27.7±7.6)%。ELISA检测实验组和对照组hBMP-2的表达结果有统计学差异(t=3.355,P<0.01)。RT-PCR结果表明h BMP-2基因稳定转录,免疫荧光标记hBMP-2蛋白呈红色荧光。Ⅱ型胶原免疫组化染色示部分细胞被染成棕黄色,RT-PCR结果表明加入转染后的干细胞组CRLT1的表达量比未转染的干细胞组高(t=59.700,P<0.05)。结论重组hBMP-2基因可以成功转染人脐血间充质干细胞并在胞内稳定表达,且有hBMP-2分泌,并可促进其表达Ⅱ型胶原蛋白及软骨连接蛋白,可向软骨细胞化诱导。 展开更多
关键词 重组人骨形态发生蛋白-2 间充质干细胞 基因编辑 脂质体
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