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柳树NAC基因的克隆与表达模式分析 认领
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作者 田雪瑶 周洁 +2 位作者 王保松 何开跃 何旭东 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期119-124,共6页
【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345'的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克... 【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345'的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克隆的两个柳树NAC转录因子基因分别命名为SlNAC1和SlNAC2。生物信息学分析表明:SlNAC1序列全长为1126 bp,编码产物含343个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于细胞核;SlNAC2序列全长为1139 bp,编码产物含291个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于叶绿体。两个基因均具有典型的NAM结构域及A、B、C、D、E 5个亚结构域,还包括共同的LPPG、YPNG和DEE保守基序及NAC抑制结构域。系统进化树分析显示,SlNAC1基因与木薯亲缘关系最近,SlNAC2基因与茄子亲缘关系最近。定量PCR结果显示SlNAC1和SlNAC2均在叶片表达,根中没有表达,为叶片特异性转录因子。定量PCR结果显示SlNAC1基因在脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)处理24 h后显著上调,SlNAC2基因在聚乙二醇(PEG)、ABA和GA胁迫后显著上调。【结论】柳树SlNAC1基因在非生物胁迫下表达较为稳定,受ABA和GA胁迫诱导;SlNAC2受干旱、ABA和GA胁迫诱导,受影响明显高于SlNAC1,不受乙烯剂(ETH)胁迫影响。推测SlNAC1和SlNAC2参与GA、ABA信号传导,可能不参与ETH的信号途径。 展开更多
关键词 柳树 NAC基因家族 基因克隆 基因表达
烟草BELL基因家族鉴定及其温室条件下的表达模式分析 认领
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作者 宋卫娜 赵森森 +6 位作者 武明珠 王根发 罗朝鹏 王晨 李泽锋 杨军 王中 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-11,共11页
BELL基因是植物中普遍存在的一类基因,其编码的同源异型结构域转录因子参与调控了植物叶片、花序等多个组织的发育过程。为明确烟草BELL基因的结构和功能,通过同源序列比对和功能域分析鉴定了普通烟草BELL基因,结合系统进化和基因表达... BELL基因是植物中普遍存在的一类基因,其编码的同源异型结构域转录因子参与调控了植物叶片、花序等多个组织的发育过程。为明确烟草BELL基因的结构和功能,通过同源序列比对和功能域分析鉴定了普通烟草BELL基因,结合系统进化和基因表达模式分析对烟草BELL基因的功能进行了初步预测。结果表明,从普通烟草基因组中共鉴定出28个NtBELLs基因,分布于15条不同的染色体上。系统进化分析表明,烟草NtBELLs基因可分为4组,每组参与调控烟草不同的发育过程。NtBELLs基因在6个烟草组织中呈现不同的表达模式,且具有明显的组织特异性。干旱和盐胁迫能显著诱导部分NtBELLs基因的表达,表明该基因家族可能参与了植物抵御非生物胁迫的过程。 展开更多
关键词 烟草 BEL1-like基因家族 基因结构 系统发育 基因表达
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家蝇三龄幼虫Mdctl基因原核表达及生物信息学分析 认领
3
作者 常振策 李忠旬 +3 位作者 贾利娜 修江帆 国果 吴建伟 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第2期145-150,共6页
目的:构建家蝇C型凝集素基因(Mdctl)原核表达体系,对Mdctl基因及编码蛋白进行生物信息学分析。方法:采用生物信息学方法,分析Mdctl基因及编码蛋白;将构建的pET28a(+)/Mdctl重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(I... 目的:构建家蝇C型凝集素基因(Mdctl)原核表达体系,对Mdctl基因及编码蛋白进行生物信息学分析。方法:采用生物信息学方法,分析Mdctl基因及编码蛋白;将构建的pET28a(+)/Mdctl重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白并通过SDS-PAGE对表达产物进行分析;Ni-IDA法纯化重组蛋白,Western-Blot对其鉴定。结果:生物信息学分析显示,Mdctl基因开放阅读框全长333 bp,共编码110个氨基酸,理论分子量为13.13 kDa,等电点为4.49,信号肽位于1~22位氨基酸之间;Mdctl蛋白中存在Clect结构域,属于C型凝集素超家族;Mdctl重组蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中主要以包涵体形式表达,重组蛋白的相对分子质量与Mdctl蛋白两端融合6×His标签后的总分子量相一致。结论:成功构建Mdctl原核表达系统,并获得重组蛋白。 展开更多
关键词 家蝇 Mdctl基因 原核表达 蛋白纯化 生物信息学 基因表达
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核桃TT1类转录因子的筛选及干旱响应分析 认领
4
作者 王艺 张尚昆 +4 位作者 赵翔 刘玉梅 赵焕元 杨桂燕 马凯恒 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期86-93,共8页
TT1基因(transparent testa1)在植物逆境响应中有重要作用。核桃是重要的经济树种,其产量和质量均受环境影响。为进一步探索核桃(Juglans regia)抗逆机制,以‘香玲’核桃为试验材料,克隆获得核桃JrTT1基因,并进行基因表达和生物信息学分... TT1基因(transparent testa1)在植物逆境响应中有重要作用。核桃是重要的经济树种,其产量和质量均受环境影响。为进一步探索核桃(Juglans regia)抗逆机制,以‘香玲’核桃为试验材料,克隆获得核桃JrTT1基因,并进行基因表达和生物信息学分析,预测该基因的基本生物功能。结果表明,JrTT1-1、JrTT1-2、JrTT1-3基因的开放阅读框(OFR)分别为1014、1023、1029 bp,蛋白分子量分别为37763.51、38492.94、38136.36 u,含有氨基酸数分别为337、340、342,理论等电点分别为7.88、7.19、8.89。与其他物种的同源TT1蛋白具有较近的进化关系。且其上游1200 bp启动子中含有多种与干旱逆境响应相关的顺式作用元件。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)发现,JrTT1-1、JrTT1-2、JrTT1-3基因在PEG 6000胁迫下能不同程度地被诱导表达,且在叶和根中的表达趋势不同。表明JrTT1基因可以响应干旱胁迫诱导,并具有组织表达特异性,推测其在核桃逆境响应中具有一定作用。 展开更多
关键词 核桃 TT1基因 基因表达 干旱胁迫
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闽侯野生蕉LDOX基因的克隆及表达特性 认领
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作者 车婧如 孙雪丽 +6 位作者 王少娟 易小燕 田娜 刘范 邓素芳 赖钟雄 程春振 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期246-254,共9页
为探讨闽侯野生蕉无色花青素双加氧酶基因(MiLDOX)的序列和表达特性,利用反转录PCR(RT-PCR)克隆MiLDOX基因cDNA序列,并对其进行系列生物信息学和不同组织器官中的表达特性分析.结果显示,MiLDOX基因包含1 083 bp完整的开放阅读框,可编码... 为探讨闽侯野生蕉无色花青素双加氧酶基因(MiLDOX)的序列和表达特性,利用反转录PCR(RT-PCR)克隆MiLDOX基因cDNA序列,并对其进行系列生物信息学和不同组织器官中的表达特性分析.结果显示,MiLDOX基因包含1 083 bp完整的开放阅读框,可编码分子量(Mr)为40.73×10~3、包含360个氨基酸的蛋白质. MiLDOX基因属于α-酮戊二酸依赖性双加酶基因家族,其编码蛋白为不含信号肽和跨膜结构的亲水性蛋白,理论等电点为5.71.MiLDOX二级结构中不规则卷曲和α-螺旋占比较大.亚细胞定位预测结果显示MiLDOX可能定位于细胞质中.系统进化树显示MiLDOX与小果野蕉MaLDOX和阿比西尼亚红脉蕉EvLDOX亲缘关系最近.实时荧光定量PCR结果显示MiLDOX在闽侯野生蕉不同组织部位都有表达,在雄花中的表达量最高,且与类黄酮和花色素苷含量呈显著正相关.此外,通过研究MiLDOX基因在不同转色阶段果皮中的表达情况,发现它的表达随着果皮色素积累逐步升高.本研究表明MiLDOX基因可能分别参与闽侯野生蕉类黄酮和花色素苷的积累,并在果皮转色等过程发挥着重要作用.(图9表1参37) 展开更多
关键词 闽侯野生蕉 无色花青素双加氧酶 基因克隆 基因表达 花色素苷
多花黄精几丁质诱导赤霉素应答基因(CIGR)克隆及其功能 认领
6
作者 吕煜梦 张舒婷 +4 位作者 王雪晶 张梓浩 程春振 王天池 赖钟雄 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期255-263,共9页
为探讨多花黄精几丁质诱导赤霉素应答基因(chitin-inducible gibberellin-responsive,CIGR)在不同光处理下的的作用机制,采用全长验证的方法获得多花黄精CIGR基因的cDNA序列、gDNA序列,并对其进行生物信息学分析,再对CIGR蛋白进行亚细... 为探讨多花黄精几丁质诱导赤霉素应答基因(chitin-inducible gibberellin-responsive,CIGR)在不同光处理下的的作用机制,采用全长验证的方法获得多花黄精CIGR基因的cDNA序列、gDNA序列,并对其进行生物信息学分析,再对CIGR蛋白进行亚细胞定位观察,同时对不同光质和光周期处理下CIGR基因的表达模式进行分析.结果显示,多花黄精CIGR基因cDNA序列和gDNA全长序列一致,完整的开放阅读框(ORF)长度为1 770 bp,共编码589个氨基酸,CIGR基因无内含子结构.生物信息学分析表明CIGR具有一个GRAS结构域,属于GRAS家族,是植物特有的转录因子,为碱性蛋白,无信号肽;Motif分析表明,CIGR蛋白在物种间比较保守,保守区主要位于中部至3′末端;氨基酸序列进化分析表明,多花黄精与石刁柏的CIGR亲缘关系最近,同源性达81%.进一步亚细胞定位显示CIGR蛋白定位于细胞核,与预测结果一致.实时荧光定量PCR(qPCR)结果显示,多花黄精CIGR基因具有器官表达特异性,在叶中表达量最高.在不同光质和光周期处理下,CIGR基因在蓝光下表达量较高,在远红光下表达量低;在光周期9 h/d的处理中出现峰值.本研究表明CIGR基因可能受蓝光及短光照周期调控从而影响多花黄精叶片的发育过程.(图9表1参49) 展开更多
关键词 多花黄精 CIGR基因 亚细胞定位 光质 光周期 基因表达
乳腺癌组织剪切波弹性成像弹性模量值及其与病理特征、增殖和侵袭基因蛋白表达的相关性 认领
7
作者 褚鑫 安晓夏 +1 位作者 严剑波 张红梅 《广西医学》 CAS 2020年第10期1215-1218,共4页
目的探讨乳腺癌组织的剪切波弹性成像(SWE)弹性模量值及其与病理特征,以及增殖、侵袭基因蛋白表达的相关性。方法选择乳腺癌42例患者和乳腺良性肿瘤30例患者,术前均进行SWE检查,测定弹性模量值。术后收集乳腺癌组织和乳腺良性肿瘤组织,... 目的探讨乳腺癌组织的剪切波弹性成像(SWE)弹性模量值及其与病理特征,以及增殖、侵袭基因蛋白表达的相关性。方法选择乳腺癌42例患者和乳腺良性肿瘤30例患者,术前均进行SWE检查,测定弹性模量值。术后收集乳腺癌组织和乳腺良性肿瘤组织,并测定增殖侵袭基因蛋白表达水平。结果乳腺癌的弹性模量值高于乳腺良性肿瘤(P<0.05)。肿瘤直径T3、临床分期Ⅲ期、伴淋巴结转移的乳腺癌患者弹性模量值分别高于T1~2、Ⅰ~Ⅱ期、不伴淋巴结转移者(均P<0.05)。乳腺癌组织中细胞周期蛋白D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达量高于乳腺良性肿瘤组织,且与弹性模量值呈正相关(均P<0.05);p21的表达量低于乳腺良性肿瘤组织,且与弹性模量值呈负相关(均P<0.05)。结论乳腺癌SWE参数弹性模量值较良性肿瘤增加,且与肿瘤病理特征改变、增殖和侵袭基因蛋白表达异常有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 剪切波弹性成像 超声检查 弹性模量 增殖基因 侵袭基因 蛋白表达 病理特征
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桂花OfFCA基因的克隆及在花芽分化时期的表达分析 认领
8
作者 吴琪 吴鸿飞 +4 位作者 周敏舒 徐倩霞 杨丽媛 赵宏波 董彬 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期195-200,共6页
【目的】桂花Osmanthus fragrans是著名的香化植物,其花芽分化受到环境温度影响。研究环境温度对桂花花芽分化的影响对桂花的花期调控具有重要的指导意义。【方法】以桂花品种‘堰虹桂’O.fragrans‘Yanhonggui’为材料,采用石蜡切片观... 【目的】桂花Osmanthus fragrans是著名的香化植物,其花芽分化受到环境温度影响。研究环境温度对桂花花芽分化的影响对桂花的花期调控具有重要的指导意义。【方法】以桂花品种‘堰虹桂’O.fragrans‘Yanhonggui’为材料,采用石蜡切片观察其花芽分化进程,运用聚合酶链式反应和实时荧光定量技术对影响温度FCA(FLOWERING LOCUS CA)基因分别进行克隆及表达特异性分析。【结果】克隆得到OfFCA cDNA序列长为1319 bp,其开放阅读框为864 bp,编码287个氨基酸。序列比对及进化分析发现:OfFCA与木犀科Oleaceae油橄榄Olea europaea和胡麻科Pedaliaceae芝麻Sesamum indicum的FCA相似度较高,同源性可达68%以上。在桂花花芽分化的不同时期,无论叶还是花芽中,19℃环境低温下OfFCA基因的表达水平均显著高于25℃常温生长条件下的表达水平。【结论】桂花OfFCA基因响应环境相对低温的变化,参与桂花的花芽分化,使桂花的花期提前。 展开更多
关键词 林木育种学 桂花 FCA基因 花芽分化 基因表达
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白菜S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶BrSAMDC基因的克隆、表达及生物信息学分析 认领
9
作者 唐文武 吴秀兰 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期3485-3492,共8页
S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)是生物体内亚精胺合成过程中的限速酶,在植物生长发育及抗逆境胁迫方面起到重要的调节作用。本研究通过RT-PCR技术从大白菜栽培种Chiifu-401中克隆得到一个BrSAMDC基因... S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)是生物体内亚精胺合成过程中的限速酶,在植物生长发育及抗逆境胁迫方面起到重要的调节作用。本研究通过RT-PCR技术从大白菜栽培种Chiifu-401中克隆得到一个BrSAMDC基因,并对其进行表达特性及其蛋白的结构与功能进行生物信息学分析。结果表明,BrSAMDC的cDNA扩增序列为1566 bp,CDS区为1107 bp,编码368个氨基酸。定量PCR结果显示,BrSAMDC基因在白菜的各个组织均有较高表达,其中角果中的表达量最高,其次为花、茎和根,而在叶片中的表达量最低。BrSAMDC蛋白分子量为40.52 kD,属于亲水、稳定蛋白;预测其分布于细胞核内,不存在信号肽和跨膜结构域;二级结构中以无规则卷曲和α-螺旋为主,三级结构同源建模成功。14种植物SAMDC蛋白的序列对比分析显示,均含有LSESSLF结构域和PEST结构域,且十分保守;十字花科的SAMDC蛋白同源性较高,且其氨基酸的进化与植物分化具有一致性。本研究为白菜SAMDC基因的功能研究及应用提供数据基础。 展开更多
关键词 白菜(Brassica rapa L.) BrSAMDC 基因克隆 基因表达 生物信息学
重金属胁迫对桉树(Eucalyptus)叶绿体基因表达的影响 认领
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作者 古诗婷 刘梦霜 +2 位作者 杨轶凤 吴晓媚 黄真池 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期3549-3554,共6页
通过检测重金属离子(Cu^2+,Zn^2+,Pb^2+,Hg^2+,Cd^2+)处理后‘广林9号桉’(’Eucalyptus Guanglin9’)4个叶绿体基因(Rbcl,Accd,Ndhf,Matk)的表达变化,探究重金属胁迫对叶绿体基因表达的影响。分别用5种重金属离子的低、中、高浓度溶液... 通过检测重金属离子(Cu^2+,Zn^2+,Pb^2+,Hg^2+,Cd^2+)处理后‘广林9号桉’(’Eucalyptus Guanglin9’)4个叶绿体基因(Rbcl,Accd,Ndhf,Matk)的表达变化,探究重金属胁迫对叶绿体基因表达的影响。分别用5种重金属离子的低、中、高浓度溶液连续灌根处理‘广林9号桉’3月龄幼苗20 d后,提取总RNA,反转录获得cDNA,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Rbcl、Accd、Ndhf、Matk基因的相对表达水平。Zn^2+、Pb^2+、Hg^2+处理后,基因表达总体表现为:低浓度重金属离子诱导叶绿体基因表达水平略微升高;中高浓度重金属离子则显著抑制基因表达。除低浓度Cd^2+抑制Rbcl表达外,不同浓度Cd^2+对Rbcl、Accd、Ndhf、Matk基因的表达水平均有显著促进作用。高浓度Cu^2+促进Accd和Ndhf的表达,其它Cu^2+浓度则抑制4个叶绿体基因的表达。结果表明:重金属离子对桉树叶绿体基因表达的影响与离子种类和浓度有关。中、高浓度Zn^2+、Pb^2+、Hg^2+抑制基因表达,中、高浓度Cd^2+促进基因表达。本试验结果可为桉树重金属抗性研究提供参考。 展开更多
关键词 桉树(Eucalyptus) 重金属 叶绿体基因 基因表达
巨桉EgrBBX基因家族鉴定及其在非生物逆境处理下的表达分析 认领
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作者 杨宁 从青 +2 位作者 王晓荣 倪晓祥 程龙军 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期658-671,共14页
BBX (B-box)蛋白是锌指结构转录因子蛋白家族的一个亚家族,广泛参与植物的生长和发育,在非生物逆境响应中也具有重要作用。桉树(Eucalyptus)是我国南方用材树种,但其抗逆性较差,限制了桉树栽培范围的扩大和栽培效益提高。为丰富桉树抗... BBX (B-box)蛋白是锌指结构转录因子蛋白家族的一个亚家族,广泛参与植物的生长和发育,在非生物逆境响应中也具有重要作用。桉树(Eucalyptus)是我国南方用材树种,但其抗逆性较差,限制了桉树栽培范围的扩大和栽培效益提高。为丰富桉树抗逆基因资源,给桉树抗逆分子辅助育种提供参考依据,本研究从巨桉(Eucalyptus grandis)全基因组范围内搜寻并鉴定出21个BBX基因家族成员,利用mg2c、Protparam、MEGA和PlantCARE软件进行染色体分布、序列结构特征以及启动子上顺式作用元件的种类和分布等分析,并对EgrBBX家族基因的组织特异性表达及其在低温、干旱及高盐处理下的表达模式进行qRT-PCR检测分析。结果表明,21个EgrBBX基因分别分布在9条染色体上;编码蛋白序列中含有典型的B1、B2和CCT结构域,可分为B1+B2+CCTⅠ和Ⅱ型、B1+B2、B1+CCT以及B1五个类型。启动子元件分析结果表明,EgrBBX家族基因启动子上除含有大量光响应元件,还含有ABRE (ABA-responsive element)、MBS (MYB binding site)、LTR (low-temperature responsiveness)、HSE (heat-stress responsive element)等非生物逆境响应相关元件。以qRT-PCR方法进行根、茎和叶的组织表达分析表明,EgrBBX1、EgrBBX7、EgrBBX9、EgrBBX13和EgrBBX18主要在叶片中表达,EgrBBX3、EgrBBX6和EgrBBX15在茎中具有相对较高的表达量。在不同时间低温、干旱和高盐的非生物逆境胁迫条件下,大部分EgrBBX基因发生响应:低温处理下EgrBBX4、EgrBBX7、EgrBBX8、EgrBBX14、EgrBBX16和EgrBBX17在整个处理时间周期内均表现为强烈的表达抑制;EgrBBX8、EgrBBX11、EgrBBX12和EgrBBX18在干旱处理1 d即出现明显的上调表达,2 d后该诱导效应减弱或消失;高盐处理下,21个EgrBBX基因中13个在12 h后表达达到峰值,然后逐渐回落。本研究可为深入揭示EgrBBX基因家族在非生物逆境胁迫响应中的具体功能,筛选桉树抗逆性EgrBBX基因资源提供参� 展开更多
关键词 巨桉 BBX(B-box)基因家族 转录因子 基因表达 非生物逆境胁迫响应
关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达分析 认领
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作者 周萍 陈伟 +2 位作者 范瑞 秦媛 陈祥 《贵州畜牧兽医》 2020年第3期15-18,共4页
为了研究关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达水平及相关功能,试验以关岭牛为实验动物,分别提取心脏、肝脏、小肠、脂肪、大腿肌、背最长肌组织的总RNA,以不同组织的总RNA为模板,逆转录合成cDNA,以GAPDH基因作为内参,应用实时荧光定... 为了研究关岭牛PPAP2B基因mRNA在不同组织中的表达水平及相关功能,试验以关岭牛为实验动物,分别提取心脏、肝脏、小肠、脂肪、大腿肌、背最长肌组织的总RNA,以不同组织的总RNA为模板,逆转录合成cDNA,以GAPDH基因作为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPAP2B基因mRNA在不同组织中的相对表达量。结果:关岭牛PPAP2B基因mRNA在脂肪中表达量最高,在其他组织中表达量很少甚至几乎不表达。结论:PPAP2B基因可能在牛的脂肪沉积过程中发挥作用。 展开更多
关键词 关岭牛 PPAP2B基因 基因表达 逆转录定量PCR
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忽地笑ABCG5转运蛋白基因(LaABCG5)的克隆和表达分析 认领
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作者 刘彦彤 王蓉 汪仁 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期8-15,27共9页
通过分析忽地笑〔Lycoris aurea(L'Hér.)Herb.〕比较转录组数据,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆到1个ABC转运蛋白基因LaABCG5。LaABCG5基因全长1896 bp,编码631个氨基酸。LaABCG5的理论相对分子质量为70451,理论等电点为p... 通过分析忽地笑〔Lycoris aurea(L'Hér.)Herb.〕比较转录组数据,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆到1个ABC转运蛋白基因LaABCG5。LaABCG5基因全长1896 bp,编码631个氨基酸。LaABCG5的理论相对分子质量为70451,理论等电点为pI 8.37。LaABCG5的二级结构中,α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲的氨基酸所占比例分别为48.81%、13.47%、5.07%和32.65%。聚类分析结果显示:LaABCG5与拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕ABCG5转运蛋白的亲缘关系最近。LaABCG5与海枣(Phoenix dactylifera Linn.)、油棕(Elaeis guineensis Jacq.)、番木瓜(Carica papaya Linn.)、毛果杨(Populus trichocarpa Torr.et Gray)和银白杨(Populus alba Linn.)的ABCG5转运蛋白的同源性在62%~67%之间。qRT-PCR检测结果显示:LaABCG5基因在忽地笑的根、鳞茎、叶片、花瓣和雌蕊中均有表达,其中,在叶片和雌蕊中的相对表达量显著高于其他组织;100μmol·L^-1 MeJA处理后6 h,忽地笑叶片中LaABCG5基因的相对表达量显著高于对照(DMSO处理后6 h)。跨膜结构域和亚细胞定位结果显示:LaABCG5定位于细胞膜。研究结果显示:LaABCG5基因的表达具有组织特异性,且受MeJA调控;LaABCG5的定位与其功能相吻合。 展开更多
关键词 忽地笑 ABC转运蛋白 基因克隆 基因表达 亚细胞定位
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SV2A基因真核表达质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达 认领
14
作者 张晓敏 王培昌 刘静 《国际检验医学杂志》 CAS 2020年第3期274-277,共4页
目的构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定。方法以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2239 bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×... 目的构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定。方法以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2239 bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×Flag-CMV-10多克隆位点区域中,得到真核表达质粒p3×Flag-CMV-10-SV2A,转化后挑取单克隆菌落经双酶切鉴定后送公司测序,将构建成功的重组质粒转染至HEK293T细胞中,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测SV2A基因的表达情况。结果成功构建p3×Flag-CMV-10-SV2A重组质粒,并在转染至HEK293T细胞后,验证了相应蛋白表达。结论利用分子克隆技术成功构建了p3×Flag-CMV-10-SV2A真核表达质粒并在HEK293T细胞中正确表达,为后续实验奠定了基础。 展开更多
关键词 SV2A基因 分子克隆 重组质粒 基因表达
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向日葵MADS-box家族基因HaAGL11的克隆及表达分析 认领
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作者 何卓远 韦小英 +4 位作者 苏周 吴雨 雷豆 杨军 邹建 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期260-268,共9页
花发育是被子植物生命周期史中的重要阶段,直接关系到植物的子代繁殖和物种延续。在植物花发育进程中,MADS-box基因发挥着关键的调控作用。本研究从向日葵转录组数据库中筛选并克隆到了一个MADS-box基因家族新成员HaAGL11基因,并对其进... 花发育是被子植物生命周期史中的重要阶段,直接关系到植物的子代繁殖和物种延续。在植物花发育进程中,MADS-box基因发挥着关键的调控作用。本研究从向日葵转录组数据库中筛选并克隆到了一个MADS-box基因家族新成员HaAGL11基因,并对其进行了系统的分析。系统发育分析结果显示,向日葵HaAGL11基因与拟南芥中的AGL11基因具有较近的同源关系。另外,花发育不同时期的表达模式结果显示,HaAGL11基因在向日葵花器官成熟后期、小花开放期和胚胎发育早期高表达;精细的花器官表达模式结果显示,HaAGL11基因在花器官成熟后期和小花开放期的子房中特异性高表达。本研究结果表明,向日葵HaAGL11基因在向日葵花发育后期子房和果实的发育进程中具有重要的调控作用。本研究结果为初步探究HaAGL11基因在向日葵中的花发育及果实形成的调控作用奠定基础,有助于进一步探究向日葵生长发育的分子调控机制,为向日葵的遗传育种提供了一定的指导线索。 展开更多
关键词 向日葵 花发育 MADS-BOX HaAGL11基因 基因克隆 表达分析
白斑狗鱼FOXL2基因克隆及其表达 认领
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作者 唐露 胡琼 +3 位作者 赵瑞阳 李菁 古丽帕日·艾克拜 张俊杰 《贵州农业科学》 CAS 2020年第5期97-101,共5页
为白斑狗鱼(Esox lucius)性别发育机制和功能分析研究提供基础资料,通过克隆FOXL2基因cDNA序列,对其进行相关生物信息学分析,并进行荧光定量PCR检测FOXL2基因在白斑狗鱼不同时期各组织的表达情况。结果表明:以白斑狗鱼卵巢cDNA为模板克... 为白斑狗鱼(Esox lucius)性别发育机制和功能分析研究提供基础资料,通过克隆FOXL2基因cDNA序列,对其进行相关生物信息学分析,并进行荧光定量PCR检测FOXL2基因在白斑狗鱼不同时期各组织的表达情况。结果表明:以白斑狗鱼卵巢cDNA为模板克隆得1 483bp的FOXL2基因序列,其编码292个氨基酸与鲑形目鱼类的FOXL2氨基酸序列同源性较高;FOXL2基因在白斑狗鱼性腺、鳃和脑中均有不同程度的表达,在其他组织中基本无表达,卵巢表达量是精巢表达量的12倍,呈明显的性别二态性。推测FOXL2基因可能与白斑狗鱼卵巢发育和功能维持相关。 展开更多
关键词 白斑狗鱼 FOXL2基因 基因克隆 荧光定量PCR 组织表达
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蝴蝶兰AP2/ERF家族基因的克隆及在低温下表达特性分析 认领
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作者 崔波 郝平安 +5 位作者 梁芳 张燕 王喜蒙 李俊霖 蒋素华 许申平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期85-97,共13页
用RT-PCR方法从‘大辣椒’蝴蝶兰叶片中克隆得到4个AP2/ERF家族基因,命名为PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4。蛋白结构域和序列比对发现PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4均含有1个AP2结构域,PhAP2/ERF2还含有1个B3结构域。进化树分析表明4个蛋白与兰科AP2/... 用RT-PCR方法从‘大辣椒’蝴蝶兰叶片中克隆得到4个AP2/ERF家族基因,命名为PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4。蛋白结构域和序列比对发现PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4均含有1个AP2结构域,PhAP2/ERF2还含有1个B3结构域。进化树分析表明4个蛋白与兰科AP2/ERF家族成员亲缘关系最近,PhAP2/ERF1属于AP2/ERF家族DREB亚家族中的A1类,PhAP2/ERF2属于RAV亚家族,PhAP2/ERF3属于ERF亚家族的B4类,PhAP2/ERF4属于DREB亚家族中的A2类。用实时荧光定量PCR方法检测低温驯化和低温胁迫条件下PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4在‘大辣椒’和‘富乐夕阳’蝴蝶兰叶片中的表达特性,结果表明:4个基因在‘大辣椒’叶片中的表达趋势一致,表达量在低温胁迫早期达到最高,在胁迫中晚期有所下降;而4个基因在‘富乐夕阳’叶片中的表达趋势有较大差异,PhAP2/ERF1和PhAP2/ERF2的表达在低温处理整个过程中没有被诱导或仅有较小幅度增加,PhAP2/ERF3对低温的响应时间显著晚于‘大辣椒’,PhAP2/ERF4的表达趋势与‘大辣椒’差异较小。蝴蝶兰AP2/ERF在抗冷品种‘大辣椒’和不抗冷品种‘富乐夕阳’叶片中的表达差异暗示AP2/ERF基因家族在蝴蝶兰低温胁迫响应中起重要调控作用。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 低温胁迫 AP2/ERF基因 基因克隆 表达分析
半滑舌鳎甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1基因的克隆及表达分析 认领
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作者 王倩 张雪 +1 位作者 陈亚东 沙珍霞 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2020年第3期49-59,共11页
甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1(Mannan-binding lectin associated serine protease 1,MASP1)是补体凝集素途径中起重要作用的激活蛋白。本研究以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象,应用RACE技术和实时荧光定量qRT-PCR... 甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1(Mannan-binding lectin associated serine protease 1,MASP1)是补体凝集素途径中起重要作用的激活蛋白。本研究以半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象,应用RACE技术和实时荧光定量qRT-PCR技术对半滑舌鳎MASP1基因(Cynoglossus semilaevis MASP1,CsMASP1)进行了克隆和表达模式分析。结果显示,CsMASP1基因c DNA序列全长为2507 bp,5′非编码区长82 bp,3′非编码区长142 bp,开放阅读框长2283 bp,共编码760个氨基酸;CsMASP1基因包含13个外显子和12个内含子,与多数已知鱼类的MASP1基因结构一致;SMART分析显示,CsMASP1包含6个结构域,与哺乳动物、鸟类、其他鱼类的结构域一致;同源比对发现,CsMASP1和鱼类的相似度较高,与金目鲈(Latescalcarifer)的相似性最高,为76%。CsMASP1基因在11种健康组织(血液、脑、鳃、性腺、心脏、头肾、肠、肝、皮肤、脾和后肾)中均有表达,其中,在肝、脾和头肾中表达量较高;鳗弧菌(Vibro anguillarum)感染后,CsMASP1基因在6种免疫组织(血液、鳃、头肾、肠、肝和脾)中呈现不同的表达模式,在6种免疫组织中呈现明显的上调表达,肝的表达峰值出现在感染后24 h;脾和鳃的表达峰值出现在感染后6 h;肠、头肾和血液的表达峰值均出现在感染后12h;随着病原菌感染时间增加,基因表达量逐渐降低并恢复至正常水平。研究表明,CsMASP1基因参与了半滑舌鳎的免疫应答过程,本结果为半滑舌鳎的免疫机理研究奠定了基础。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 MASP1基因 基因克隆 基因表达 免疫应答
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重组人淋巴细胞活化基因-3蛋白胞外段的真核表达及鉴定 认领
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作者 熊镇越 张坤明 +1 位作者 潘勇兵 李策生 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第4期390-394,共5页
目的真核表达重组人淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)蛋白胞外段,并进行鉴定。方法用植物血球凝集素(phytohaemagg lutinin,PHA)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测Jurkat细胞中LAG-3蛋白的表达;提取Jurkat细胞总mRN... 目的真核表达重组人淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)蛋白胞外段,并进行鉴定。方法用植物血球凝集素(phytohaemagg lutinin,PHA)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测Jurkat细胞中LAG-3蛋白的表达;提取Jurkat细胞总mRNA,RT-PCR法扩增人LAG-3蛋白胞外段基因片段,同时在蛋白C-末端引入His标签,将其克隆入载体pcDNA3. 1+,构建重组质粒,转染Expi293F真核细胞,当细胞活率低于50%时收获细胞上清,经镍柱亲合层析纯化。纯化产物进行4%~20%SDS-PAGE、HPLC及Western blot分析,BCA法测定浓度。结果经菌液PCR、双酶切及测序鉴定,表明质粒构建正确。重组表达蛋白的相对分子质量约60 000,纯化后纯度达95%以上,与鼠抗LAG-3单克隆抗体可发生特异性结合,浓度为2. 4 mg/mL。结论成功构建了重组真核表达质粒LAG-3/pcDNA3. 1+,并于Expi293F细胞中表达,纯化获得了纯度较高的LAG-3蛋白,为后期LAG-3蛋白的相关研究及其单抗的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 人淋巴细胞活化基因-3 基因重组 真核表达 Expi293F细胞
水稻OsNCED4基因的克隆及功能初探 认领
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作者 周丽 李梦婷 +6 位作者 朱骞 Sadia Nadir 李伟 郭效琼 冯天 陈丽娟 李东宣 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期2087-2096,共10页
脱落酸(abscisic acid,ABA)是一种抑制植物生长的植物激素,因能促使叶子脱落而得名,在植物逆胁迫中发挥关键作用。由NCED基因编码的9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED),是ABA在高等植物中的关键酶。本研究已成功从水稻Ilmibyeo(O.sativa... 脱落酸(abscisic acid,ABA)是一种抑制植物生长的植物激素,因能促使叶子脱落而得名,在植物逆胁迫中发挥关键作用。由NCED基因编码的9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED),是ABA在高等植物中的关键酶。本研究已成功从水稻Ilmibyeo(O.sativa L.ssp.japonica)基因组中克隆得到Os NCED4,生物信息学分析表明,Os NCED4基因位于水稻第7号染色体上,ORF全长1749 bp,无内含子结构,编码582个氨基酸,具有NCED家族的RPE65保守结构;以该基因和其启动子序列构建组织表达载体pOsNCED4::GUS、pCaMV35S::OsNCED4:EGFP和RNAi干扰载体p Ca MV35S::OsNCED4:RNAi,用于基因表达和功能分析,并利用农杆菌介导的方法,成功获得了相应遗传载体的转基因植株;GUS染色结果表明,该基因在叶片、叶耳、小穗等组织部位均有表达;RT-PCR结果显示,Os NCED4在水稻不同生育期的根、茎、叶、叶鞘和穗子中均有不同程度的表达,但表达量具有明显的差异;亚细胞定位结果显示,OsNCED4基因编码的蛋白定位于细胞核;与野生型植株相比,RNAi植株的花粉育性无明显差异,而结实率显著下降。该研究结果为进一步研究水稻OsNCED4基因表达的调控,以及为水稻生长发育上的功能研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 水稻(Oryza SATIVA L.) OsNCED4 基因克隆 生物信息学分析 基因表达
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