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Synthesis of a Wheat/Maize Hybrid CENH3 Gene, the Genetic Transformation of Wheat, Its Chromosomal Localization and Effects on Chromosome Behaviors in Wheat/Maize Somatic Hybrids 预览
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作者 Xiaoyu Yang Jianhui Li Weichang Yu 《农业科学(英文)》 2019年第7期985-1014,共30页
Centromere-specific histone H3 (CENH3) replaces the canonical histone H3 in nucleosomes of functional centromeres, and plays important roles in faithful chromosome segregation during cell division. CENH3 is also impor... Centromere-specific histone H3 (CENH3) replaces the canonical histone H3 in nucleosomes of functional centromeres, and plays important roles in faithful chromosome segregation during cell division. CENH3 is also important in the recognition of alien centromeres and determines the accommodation or elimination of alien chromosomes in interspecific or intergenic hybridization. In this study, a maize full length CENH3 with a yellow fluorescent protein (YFP) tag at C-terminus (ZmCENH3-YFP) and a synthetic hybrid wmCENH3 with the N-terminus from wheat CENH3 and the histone fold domain (HFD) from maize tagged with a red fluorescent protein (RFP) at the C-terminus (wmCENH3-RFP) were transformed to wheat by biolistics transformation. Transgenic wheat plants with both ZmCNEH3-YFP and wmCENH3-RFP genes were identified by PCR. The expression of ZmCENH3-YFP was not observed, while the expression of wmCENH3-RFP could be detected by RT-PCR, direct fluorescence microscopy, and immunostaining with anti-RFP antibody. The expressed wmCENH3-RFP was localized to nuclei as dotted patterns, indicating its targeting to wheat centromeres. Somatic hybridization was performed between wmCENH3-RFP transgenic wheat and transgenic maize that expressed a ZmCENH3-YFP gene to investigate chromosome behaviors in somatic hybrids. Cytological and FISH analyses of somatic hybrid cells showed the formation of micronuclei and lagging chromatin in both somatic hybridizations with or without the wmCENH3-RFP transgene, indicating that ectopically expressed wmCENH3 could not overcome chromosome elimination in wheat/maize somatic hybrids. Immunostaining of wmCENH3-RFP and ZmCENH3-YFP in early stage somatic hybrid cells indicated that both wmCENH3-RFP and ZmCENH3-YFP proteins were expressed, but their binding patterns changed from the commonly observed dotted patterns to diffused ones, suggesting that the inactivation of CENH3 might be a factor for chromosome elimination in wheat/maize somatic hybridization. 展开更多
关键词 Centromeric HISTONE H3 Genetic Transformation Chromosome Elimination SOMATIC HYBRIDIZATION WHEAT MAIZE
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Rol genes enhance content of artemisinin and other secondary metabolites in Shennong hybrid of Artemisia annua
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作者 Sara Zafar Erum Dilshad +2 位作者 Hammad Ismail Chahat Batool Rizvi Bushra Mirza 《中草药:英文版》 CAS 2019年第2期209-215,共7页
Objective: Artemisia annua is the chief source of artemisinin, a potent antimalarial agent, in which other bioactive phytochemicals are also present. Due to low levels of bioactive compounds including artemisinin and ... Objective: Artemisia annua is the chief source of artemisinin, a potent antimalarial agent, in which other bioactive phytochemicals are also present. Due to low levels of bioactive compounds including artemisinin and flavonoids, it is necessary to increase the level of the secondary metabolites by regulating the expression of rol genes in the plant.Methods: A hybrid variety of A. annua(Hyb1209 r, Shennong) developed by the Centre for Novel Agricultural Products, University of York, UK, was selected to produce transgenics of rolB and rolC genes. Genetic transformation was carried out via Agrobacterium tumefaciens GV3101 harboring rolB and rolC genes of Agrobacterium rhizogenes cloned separately. HPLC was used for the qualitative and quantitative analysis of flavonoids and artemisinin. Furthermore, thin layer chromatography(TLC) was also used to analyze artemisinin content.Results: Comparative analysis via HPLC revealed considerable enhancement in the phytochemical content of transgenic A. annua plants as compared to the wild type plant. Transgenics of rolB gene showed an average increase of 321% in rutin, 97.2% in caffeic acid, and 218.4% in myricetin, respectively. In the case of rolC gene transgenics, an average increase of 197.5% in rutin, 76.3% in caffeic acid, and 209.3%in myricetin was observed. Transgenics of rolB and rolC genes showed a 14.3%–28.6% and 2.8%–12.7% increase in artemisinin content respectively by HPLC analysis. TLC analysis showed that an average 142.2%and 110.2% enhancement in artemisinin for rolB and rolC transgenics respectively, compared with the wild type. An enhanced production of total flavonoids(average 30.2% and 25.5% increase in rolB and rolC transgenics, respectively) and total phenolics(average 34.3% and 25.8% increase in rolB and rolC transgenics, respectively) was observed as a result of transformation. Transformed A. annua plants showed improved free radical scavenging activity(average 46.5% and 29.1% increase in rolB and rolC transgenics,respectively) and total reducing po 展开更多
关键词 ARTEMISIA annua L. ARTEMISININ genetic transformation Hyb1209r ROL GENES
pBAR载体构建及其转化罗汉果的分析
3
作者 宁弋珍 郝庆林 +5 位作者 李刚 李正文 莫燕梅 胡姗姗 辛佳佳 裴艳艳 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期3910-3916,共7页
为了创制可免除人工授粉的转基因罗汉果雌性品系,利用植物双元表达载体pBI121-Gus,构建幼果实特异启动子2A11与单性结实相关基因rolB的嵌合基因表达载体pBAR (pBI121-2A11-rolB)。以罗汉果雌株叶盘为材料,以EHA105农杆菌介导遗传转化,经... 为了创制可免除人工授粉的转基因罗汉果雌性品系,利用植物双元表达载体pBI121-Gus,构建幼果实特异启动子2A11与单性结实相关基因rolB的嵌合基因表达载体pBAR (pBI121-2A11-rolB)。以罗汉果雌株叶盘为材料,以EHA105农杆菌介导遗传转化,经PCR扩增,鉴定出阳性植株,对阳性雌株进行扩繁、生根,最后移栽大田,并观察转基因植株的单性结实性状表现。结果显示,成功构建了单性结实相关基因的pBAR嵌合双元表达载体;转化感受态根癌农杆菌EHA105后,进一步转化雌株叶片,经过对叶片分化苗的检测,得到7株阳性植株,转化率为14.29%。为提高成活率,扩繁7株阳性植株,获得37株转基因单性结实植株株系,其中有8株正常开花,占总数的21.62%,正常开花的植株,未经人工授粉,发育成幼果,表现出单性结实性状。本实验在克隆单性结实相关基因和果实特异启动子的基础上,构建嵌合基因载体,通过根癌农杆菌介导的叶盘转化法,获得了转基因罗汉果单性结实雌株系,为后续研究罗汉果单性结实性的遗传、生理、品种综合改良和深入利用提供了基础。 展开更多
关键词 罗汉果(Siraitia grosvenorii) 单性结实基因 果实特异启动子 载体构建 遗传转化
根癌农杆菌介导观赏羽衣甘蓝遗传转化体系优化 预览
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作者 王欢 付小蕾 +1 位作者 毛洪玉 祝朋芳 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期543-549,共7页
为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系’Mark 10’,’W02-7’和’Curly 6’为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体... 为建立稳定的羽衣甘蓝遗传转化体系,以羽衣甘蓝自交系’Mark 10’,’W02-7’和’Curly 6’为试材,通过单因子试验,比较羽衣甘蓝子叶、子叶柄、子叶片、下胚轴4种外植体的再生能力,筛选培养基中的适宜激素浓度,优化了羽衣甘蓝不同外植体的再生体系。将播种后6d的子叶于最适再生培养基上进行黑暗预培养,以根瘤农杆菌为介导侵染子叶后,于黑暗条件下进行农杆菌与植物材料的共培养。随后转入含有头孢霉素的抑菌培养基中进行抑菌培养,再将子叶移入含有卡那霉素浓度的筛选培养基中进行抗性芽选择,并提取植物基因组DNA进行目的基因的PCR验证,从而建立高效的羽衣甘蓝遗传转化体系。结果表明:最佳的外植体是羽衣甘蓝的子叶,在培养基MS+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1上,不定芽分化率可达100%;子叶经2~3d预培养,将OD600值为0.3~0.5的携带DFR基因表达载体的农杆菌菌液离心,以50mL MS重悬液重悬,侵染外植体5min,共培养2d;采用头孢霉素300mg·L^-1,抑菌培养3d后,采用10mg·L^-1卡那霉素进行抗性芽选择。在播种后30~40d共获得了24个抗性芽,以抗性芽的基因组DNA为模板进行PCR扩增,9株呈DFR阳性,显示外源基因已经成功整合到羽衣甘蓝基因组中,平均转化率为37.5%。本研究结果可以为羽衣甘蓝重要性状基因的遗传转化提供依据。 展开更多
关键词 根癌农杆菌 羽衣甘蓝 遗传转化 外植体
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川乌头F3′5′H基因在矮牵牛中的遗传转化及功能分析
5
作者 马璐琳 崔光芬 +4 位作者 贾文杰 王祥宁 段青 杜文文 王继华 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期2892-2898,共7页
类黄酮3’,5’羟基化酶(flavonid-3’, 5’-hydroxylase, F3’5’H)是花色素苷合成途径中催化蓝色花色素飞燕草色素合成的关键酶。为验证川乌头(Aconitum carmichaeli Debx.) Ac-F3′5′H基因的催化功能,构建了该基因的植物过表达载体,... 类黄酮3’,5’羟基化酶(flavonid-3’, 5’-hydroxylase, F3’5’H)是花色素苷合成途径中催化蓝色花色素飞燕草色素合成的关键酶。为验证川乌头(Aconitum carmichaeli Debx.) Ac-F3′5′H基因的催化功能,构建了该基因的植物过表达载体,利用农杆菌介导法将Ac-F3′5′H遗传转化矮牵牛。通过抗性筛选共得到6株在潮霉素抗性培养基上可正常生长的矮牵牛植株,经PCR和RT-PCR验证共得到5株转基因阳性植株,其中2株中目标基因表达量相对较高。相比对照,这2株转基因矮牵牛阳性植株花色变化较明显,由粉色变为紫蓝色,表明该基因可催化合成一定的蓝色花色素。该结果将为观赏植物蓝色花色分子育种工作提供一定的科学依据。 展开更多
关键词 川乌头 Ac-F3′5′H基因 遗传转化 功能验证
抗旱调控基因DREB2A转化辽荞5号的研究
6
作者 丰明 陈庆富 +1 位作者 葛维德 薛仁风 《东北农业科学》 北大核心 2019年第4期29-36,共8页
通过农杆菌介导,将来源于干旱诱导下拟南芥的干旱调控基因DREB2A导入辽宁甜荞品种辽荞5号中,以提高其耐旱性。通过正交试验分析影响农杆菌转化的相关因素,建立并优化了转化体系。结果表明:(1)愈伤组织诱导过程中,选择子叶作为愈伤组织... 通过农杆菌介导,将来源于干旱诱导下拟南芥的干旱调控基因DREB2A导入辽宁甜荞品种辽荞5号中,以提高其耐旱性。通过正交试验分析影响农杆菌转化的相关因素,建立并优化了转化体系。结果表明:(1)愈伤组织诱导过程中,选择子叶作为愈伤组织诱导受体,诱导愈伤培养基激素的配比为:2,4-D浓度为2 mg/L;6-BA浓度为1 mg/L;(2)农杆菌转化过程中,最适农杆菌OD600为0.5、侵染时间3 min、共培养3 d,乙酰丁香酮浓度100 mg/L、筛选培养羧苄霉素浓度50mg/L,草丁膦浓度100 mg/L;(3)通过对转化植株的PCR检测,印证了DREB2A基因已转化到辽荞5号中;(4)通过对转化植株的生理检测初步表明转基因荞麦比非转基因荞麦具有更高的抗旱性。 展开更多
关键词 荞麦 农杆菌 遗传转化 DREB2A基因 正交设计 耐旱性
番茄再生体系优化以及ProDH干扰载体的遗传转化 预览
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作者 王美玲 吴巧玲 张喜春 《中国农学通报》 2019年第21期125-131,共7页
为了进一步对番茄再生体系进行优化,筛出最优体系,同时将ProDH干扰表达载体遗传转化,抗生素筛选获得再生植株。以‘耐运2000’和‘O-33-1’番茄品种的下胚轴和子叶为试验材料,以MS为基本培养基,分别加入1.0、2.0、3.0mg/L的6-BA和0.1、... 为了进一步对番茄再生体系进行优化,筛出最优体系,同时将ProDH干扰表达载体遗传转化,抗生素筛选获得再生植株。以‘耐运2000’和‘O-33-1’番茄品种的下胚轴和子叶为试验材料,以MS为基本培养基,分别加入1.0、2.0、3.0mg/L的6-BA和0.1、0.2、0.3mg/L的IAA,筛选合适的浓度组合。结果表明:最适的愈伤培养基为MS+2mg/L6-BA+0.2mg/LIAA,最适分化培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.1mg/LIAA,最适生根培养基为MS+0.2mg/LIAA;最适培养基浓度下,子叶的出愈率、分化率和生根率较下胚轴分别高25%、42%和20%,所以外植体选择子叶为宜。而在2个品种间也有差异,‘O-33-1’总体比‘耐运2000’再生率高。利用筛选出的最优再生体系,将脯氨酸脱氢酶的干扰表达载体对‘O-33-1’遗传转化,获得抗性植株。 展开更多
关键词 番茄 再生体系 遗传转化 抗性植株
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BpMYB4基因在白桦中的遗传转化及低温胁迫应答反应
8
作者 张宇 陈肃 +1 位作者 高源 黄海娇 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期25-31,共7页
【目的】为了研究Bp MYB4基因在冷胁迫反应中的功能,对其进行了白桦转化试验。【方法】采用定量PCR技术对Bp MYB4基因在白桦的根、茎、叶、木质部、芽、茎段等18个组织部位的表达模式进行分析,然后克隆构建PGWB2-Bp MYB4植物过表达载体... 【目的】为了研究Bp MYB4基因在冷胁迫反应中的功能,对其进行了白桦转化试验。【方法】采用定量PCR技术对Bp MYB4基因在白桦的根、茎、叶、木质部、芽、茎段等18个组织部位的表达模式进行分析,然后克隆构建PGWB2-Bp MYB4植物过表达载体,通过农杆菌介导法进行白桦合子胚的遗传转化,采用PCR和荧光定量PCR技术检测转基因白桦株系中Bp MYB4基因的相对表达量,最后采用分光光度计法对Bp MYB4转基因白桦进行了8项生理指标的测定。【结果】相对于芽的表达量,Bp MYB4基因在第3片叶的叶脉和第1片叶与第2片叶之间嫩茎的表达量最高;白桦的遗传转化总共获得了13个过表达株系,且Bp MYB4基因已经成功整合到白桦基因组上,定量结果发现MYB-8、MYB-11、MYB-12转基因白桦中Bp MYB4基因的表达量相对于非转基因对照株系(NT)上调幅度最大;在低温胁迫下,过量表达Bp MYB4基因提高了白桦的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、花青素(OPC)含量、过氧化氢酶活性(CAT)、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量和脯氨酸(PRO)含量,同时降低了转基因白桦的丙二醛(MDA)的含量。【结论】Bp MYB4转基因白桦在低温胁迫下能够产生具有保护作用的物质,具有一定的抵抗低温的能力,因此,可以将其培育成抗冻优选株系。 展开更多
关键词 白桦 BpMYB4 遗传转化 低温胁迫 抗寒
白桦BpBEE2基因的遗传转化及抗逆性分析 预览
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作者 颜斌 武丹阳 李慧玉 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期287-293,共7页
Brassinolide Enhanced Expression2(BEE2)基因属于bHLH转录因子家族,是调控油菜素内酯信号转导的上游调控因子。本研究通过RT-PCR技术克隆BpBEE2基因的全长cDNA序列,构建植物过表达及抑制表达载体,并通过农杆菌介导法进行白桦的遗传转... Brassinolide Enhanced Expression2(BEE2)基因属于bHLH转录因子家族,是调控油菜素内酯信号转导的上游调控因子。本研究通过RT-PCR技术克隆BpBEE2基因的全长cDNA序列,构建植物过表达及抑制表达载体,并通过农杆菌介导法进行白桦的遗传转化,对获得的转基因株系进行生长量及盐、旱胁迫分析,结果表明:获得了长度为1 080 bp的全长cDNA序列,成功构建了该基因的过表达及抑制表达载体,并获得了过表达和抑制表达的白桦株系。BpBEE2基因过表达白桦株系的苗高高于对照株系,而抑制表达株系的苗高低于对照株系。同时发现BEE2基因对盐、旱胁迫后对植株的鲜重也产生了影响。说明Bp BEE2可能参与了植物的生长发育过程,并且改善了植物的抗旱、耐盐性。 展开更多
关键词 白桦 BpBEE2基因 载体构建 遗传转化 抗旱耐盐
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苹果异戊烯基转移酶基因启动子调控特性研究 预览
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作者 杜传慧 付艳 +3 位作者 王利敏 仇占南 李晨辉 朱元娣 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期455-463,共9页
异戊烯基转移酶(IPT)是细胞分裂素合成途径的第一限速酶,过表达苹果MdIPT3a的转基因烟草表现出典型的细胞分裂素特异的生长表型,可作为苹果同源转基因的潜在筛选标记。为阐明MdIPT3a自主启动子对基因表达的调控作用,本试验克隆了富士苹... 异戊烯基转移酶(IPT)是细胞分裂素合成途径的第一限速酶,过表达苹果MdIPT3a的转基因烟草表现出典型的细胞分裂素特异的生长表型,可作为苹果同源转基因的潜在筛选标记。为阐明MdIPT3a自主启动子对基因表达的调控作用,本试验克隆了富士苹果MdIPT3a基因上游启动子序列,分别构建不同长度的MdIPT3a启动子驱动GUS基因的植物表达载体,以CaMV35S驱动GUS基因的表达载体作为对照,遗传转化烟草W38,并对转基因植株进行GUS定性和定量分析,探讨不同长度的MdIPT3a启动子对GUS表达的影响。结果表明,转基因植株的各组织均有GUS染色,不同长度的MdIPT3a启动子均能驱动GUS基因表达,最小的有效启动子长446 bp,且含MdIPT3a启动子的转基因植株GUS表达水平显著低于含35S启动子的对照植株。本试验结果为Md IPT3a的同源转基因技术研究提供了一定的理论参考。 展开更多
关键词 MdIPT3a启动子 GUS基因 转基因表达 遗传转化
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根癌农杆菌介导山葡萄VaCBF3基因转化欧美杨111的研究 预览
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作者 冯连荣 矫丽曼 +4 位作者 王占斌 赵继梅 尹杰 宋立志 梁德军 《西南林业大学学报》 CAS 北大核心 2019年第5期21-27,共7页
以欧美杨111为受体材料,利用农杆菌介导的叶盘法进行了山葡萄VaCBF3基因的遗传转化,分析了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间对转化效率的影响,并对获得抗性植株进行PCR检测。结果表明:欧美杨111遗传转化过程中适宜的预培养... 以欧美杨111为受体材料,利用农杆菌介导的叶盘法进行了山葡萄VaCBF3基因的遗传转化,分析了预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间对转化效率的影响,并对获得抗性植株进行PCR检测。结果表明:欧美杨111遗传转化过程中适宜的预培养时间为3 d,适宜菌液浓度为OD600为0.3~0.4,适宜侵染时间为2~4 min,适宜共培养时间为3 d。经过对转化子的PCR鉴定,获得4株阳性转基因植株,初步说明外源山葡萄CBF3基因已导入至欧美杨111号中,转化体系已成功建立。 展开更多
关键词 欧美杨111 农杆菌介导法 遗传转化 山葡萄 CBF3基因
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小麦TaSPLs的载体构建和遗传转化 预览
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作者 魏云韬 《生物化工》 2019年第4期104-106,110共4页
小麦是世界三大作物之一,对于小麦的研究一直是生命科学研究的热点。普通小麦是异源六倍体,对其基因组序列的研究较为困难,目前仍没有得到足够精细的基因组序列,对于功能基因组学的研究也进展缓慢。因此,研究异源六倍体小麦的功能基因... 小麦是世界三大作物之一,对于小麦的研究一直是生命科学研究的热点。普通小麦是异源六倍体,对其基因组序列的研究较为困难,目前仍没有得到足够精细的基因组序列,对于功能基因组学的研究也进展缓慢。因此,研究异源六倍体小麦的功能基因家族对于小麦的功能基因组学研究和分子设计有重要意义。通过提取中国春小麦总RNA,反转录为cDNA,采用RT-PCR克隆得到两个SPL家族基因,命名为TaSPL11和TaSPL16,构建TaSPL11和TaSPL16真核表达载体,将上述两个质粒进行水稻转化。经过诱导、侵染、继代培养、筛选、分化和生根培养之后得到转基因再生苗,得到T0代植株,对T0代水稻植株进行检测,确定转基因阳性材料。 展开更多
关键词 小麦 SPL基因家族 基因克隆 遗传转化 阳性鉴定
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农杆菌介导薄皮甜瓜遗传转化体系建立 预览
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作者 栾非时 白晶 +5 位作者 朱子成 高鹏 刘识 吴川 樊超 吕双雪 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期11-18,共8页
以薄皮甜瓜“M15”和“M43”子叶节为外植体,研究激素浓度、卡那霉素浓度和消毒时间等对甜瓜子叶节再生及农杆菌介导遗传转化的影响。结果表明,诱导甜瓜子叶节不定芽分化最佳激素组合为0.5mg·L^-1 6-BA+0.05mg·L^-1 IAA,芽伸... 以薄皮甜瓜“M15”和“M43”子叶节为外植体,研究激素浓度、卡那霉素浓度和消毒时间等对甜瓜子叶节再生及农杆菌介导遗传转化的影响。结果表明,诱导甜瓜子叶节不定芽分化最佳激素组合为0.5mg·L^-1 6-BA+0.05mg·L^-1 IAA,芽伸长激素为0.05mg·L^-1 6-BA,生根激素为0.1mg·L^-1 IAA。农杆菌介导甜瓜转化最佳条件为预培养48h,OD600=0.6农杆菌菌液侵染15min,黑暗条件下共培养48~72h,头孢抑菌浓度500mg·L^-1,卡那霉素浓度75mg·L^-1。PCR检测卡那霉素抗性苗,验证外源基因已整合进入甜瓜基因组,“M15”和“M43”抗性植株阳性率分别为84.2%和77.4%。 展开更多
关键词 薄皮甜瓜 子叶节 再生 遗传转化
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红曲霉LovD基因的克隆及转基因高产洛伐他汀菌株筛选 预览
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作者 沈小瑞 王钰 陈达伟 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期23-25,共3页
通过紫外诱变筛选出的高产洛伐他汀红曲霉菌株M120-1为出发菌株,提取红曲霉菌株总RNA,通过RT-PCR技术克隆LovD基因,构建表达载体,对红曲霉进行遗传转化;通过高效液相色谱法筛选高产洛伐他汀转化菌株。结果表明:提取红曲霉总RNA并建立表... 通过紫外诱变筛选出的高产洛伐他汀红曲霉菌株M120-1为出发菌株,提取红曲霉菌株总RNA,通过RT-PCR技术克隆LovD基因,构建表达载体,对红曲霉进行遗传转化;通过高效液相色谱法筛选高产洛伐他汀转化菌株。结果表明:提取红曲霉总RNA并建立表达载体,随机挑选出12个转化子,经PCR鉴定,有10株成功得到转化。对其进行培养并通过HPLC法测定洛伐他汀产量,其中一株转化菌株的洛伐他汀产量为0.55mg/mL,比出发菌株产量高63%。对该菌株进行传代培养,具有良好的遗传稳定性。 展开更多
关键词 红曲霉 洛伐他汀 根癌农杆菌 遗传转化
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千里光组织培养体系的构建与遗传转化
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作者 王丽平 谌琴琴 +2 位作者 梁瑾 杨攀攀 王强 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第18期6000-6005,共6页
传统药材千里光化学成分复杂,富含生物碱、黄酮和萜类等化合物,极具药用价值。为了提高千里光次生代谢产物的含量,增加千里光药用价值,实现千里光资源的科学利用,本研究进行了千里光组织培养体系的构建和遗传转化初探。本实验以千里光... 传统药材千里光化学成分复杂,富含生物碱、黄酮和萜类等化合物,极具药用价值。为了提高千里光次生代谢产物的含量,增加千里光药用价值,实现千里光资源的科学利用,本研究进行了千里光组织培养体系的构建和遗传转化初探。本实验以千里光幼嫩茎叶为外植体,通过不同浓度6-BA和NAA的组合,得到最佳愈伤组织诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂粉,出愈率达92%;得到最佳分化培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂粉,出芽率为88%;得到最佳不定芽诱导生根的培养基是MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.0 g/L琼脂粉,生根率为67%。采用农杆菌介导法,将外源报告基因GUS (β-glucuronidase)转入愈伤组织,经组织化学染色法鉴定了GUS的表达,表明GUS基因成功转入了千里光愈伤组织。本实验通过诱导千里光幼嫩茎叶形成愈伤组织,进而分化形成再生植株,同时经农杆菌浸染愈伤组织探索了千里光遗传转化方法,为后续的研究提供了依据。 展开更多
关键词 千里光(Senecio scandens) 组织培养 遗传转化 农杆菌介导法 GUS基因
农杆菌介导黄瓜Tril基因转化及体系优化 预览
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作者 肖婷婷 杜慧 +7 位作者 潘健 孙敬贤 陈岳 张乐钰 潘俊松 王刚 何欢乐 蔡润 《上海交通大学学报:农业科学版》 2019年第3期17-22,28共7页
采用农杆菌介导法将黄瓜表皮毛基因Tril转入黄瓜‘新泰密刺’品种,并研究了6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和卡那霉素(Kan)分别对再生和转化苗筛选效果的影响。结果表明,在黄瓜‘新泰密刺’转化中,Kan抗性苗出芽率为9.67%,生根率为3.67%,转化株... 采用农杆菌介导法将黄瓜表皮毛基因Tril转入黄瓜‘新泰密刺’品种,并研究了6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和卡那霉素(Kan)分别对再生和转化苗筛选效果的影响。结果表明,在黄瓜‘新泰密刺’转化中,Kan抗性苗出芽率为9.67%,生根率为3.67%,转化株阳性率为0.33%;分化培养基中6-BA适宜浓度为0.5mg/L,出芽率最高(76.33%),平均出芽天数最短(19.66d);生根培养基中Kan浓度为60mg/L时筛选效果最好。3种筛选方式的研究表明,仅在生根培养基中添加Kan(60mg/L)筛选,其转化周期最短(45d),阳性率最高(达4.0%)。 展开更多
关键词 黄瓜 6-苄氨基腺嘌呤 卡那霉素 遗传转化
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枣树遗传转化研究进展 预览
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作者 周义杰 姜梦嫣 +3 位作者 闫希焕 高亭豪 杨明峰 马兰青 《北京农学院学报》 2019年第1期107-112,共6页
【目的】枣树是中国第一大干果树种,具有重要的经济价值和生态价值。枣树长期面临着病害严重、育种缓慢等问题,急需定向培育优良品种。【方法】枣树遗传转化一般使用农杆菌介导法,通过对遗传转化过程中的各因素进行优化,可以有效提高遗... 【目的】枣树是中国第一大干果树种,具有重要的经济价值和生态价值。枣树长期面临着病害严重、育种缓慢等问题,急需定向培育优良品种。【方法】枣树遗传转化一般使用农杆菌介导法,通过对遗传转化过程中的各因素进行优化,可以有效提高遗传转化效率。得到转基因植株后要验证目的基因是否整合到植物基因组并能够发挥预期的功能,验证通过后再进行后续的炼苗移栽等工作。【结果】通过枣树遗传转化试验,可以定向改良枣树品种,缩短育种年限,培育出符合实际需求的新品种。【结论】综述中国枣树遗传转化的方法和成果,总结比较枣树遗传转化过程中各个影响因素的作用,为利用基因工程手段进行枣树品种改良提供借鉴。 展开更多
关键词 枣树 遗传转化 转化验证
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杉木 ClLAR 基因的克隆及遗传转化拟南芥 预览
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作者 王培 张家君 +4 位作者 吕蒙蒙 理挪 马志慧 陈宇 林思祖 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期1-9,共9页
为探究杉木种子发育过程中无色花青素还原酶(LAR)基因在类黄酮生物合成途径中对原花青素(PA)合成的分子调控机制,以杉木种子为试验材料,通过RT-PCR结合RACE的方法成功克隆到杉木ClLAR基因全长,该基因的cDNA全长为1625bp,具有1个1242bp... 为探究杉木种子发育过程中无色花青素还原酶(LAR)基因在类黄酮生物合成途径中对原花青素(PA)合成的分子调控机制,以杉木种子为试验材料,通过RT-PCR结合RACE的方法成功克隆到杉木ClLAR基因全长,该基因的cDNA全长为1625bp,具有1个1242bp的开放阅读框(ORF),编码413个氨基酸。构建pCambia3301-ClLAR植物表达载体,运用冻融法将重组质粒转至农杆菌GV3101,通过花序侵染法获得拟南芥转基因植株,利用Basta溶液和PCR验证筛选出阳性苗,确定目的基因ClLAR已整合至拟南芥基因组中。研究结果为深入分析杉木ClLAR基因调控PA合成的分子机制和ClLAR蛋白功能奠定了基础。 展开更多
关键词 杉木 ClLAR 基因克隆 序列分析 载体构建 遗传转化
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油菜农杆菌介导转化体系的优化 预览
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作者 张姗姗 耿思宇 +1 位作者 徐培林 王景雪 《山西农业科学》 2019年第8期1295-1299,共5页
以甘蓝型油菜湘油15号为试验材料,对农杆菌转化体系中外植体预培养时间、培养基中AgNO3浓度、农杆菌侵染时的菌液浓度、共培养基pH值等进行了优化研究,确立了优化的遗传转化条件。结果表明,外植体在农杆菌侵染和共培养前预培养3d,可明... 以甘蓝型油菜湘油15号为试验材料,对农杆菌转化体系中外植体预培养时间、培养基中AgNO3浓度、农杆菌侵染时的菌液浓度、共培养基pH值等进行了优化研究,确立了优化的遗传转化条件。结果表明,外植体在农杆菌侵染和共培养前预培养3d,可明显提高子叶外植体和下胚轴外植体出愈率和抗性芽苗分化率,有利于获得较高的转化效率;在基因转化中,AgNO3的最佳使用浓度为30μmol/L,最佳的农杆菌侵染菌液OD600为0.4,共培养基pH值5.4是油菜农杆菌介导转化中优化的转化条件。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 农杆菌 遗传转化 预培养
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中国野生毛葡萄芪合成酶基因表达与抗白粉病分析 预览
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作者 刘梦琦 吴凤颖 王跃进 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期2436-2449,共14页
【目的】葡萄是世界性重要果树,欧洲葡萄品种因其优质高产被广泛栽培,但其突出缺点是抗病性弱,尤其易受白粉病危害。葡萄中芪合成酶(stilbene synthase,STS)的代谢产物白藜芦醇是植物体内具有抗病功能的植保素,果实中的白藜芦醇对人具... 【目的】葡萄是世界性重要果树,欧洲葡萄品种因其优质高产被广泛栽培,但其突出缺点是抗病性弱,尤其易受白粉病危害。葡萄中芪合成酶(stilbene synthase,STS)的代谢产物白藜芦醇是植物体内具有抗病功能的植保素,果实中的白藜芦醇对人具有保健作用。中国野生毛葡萄‘丹凤-2’抗病性强且白藜芦醇含量高。论文旨在研究中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因(STS)及其功能,应用于抗病育种来提高欧洲葡萄抗病性及果实中芪类物质含量。【方法】同源克隆中国野生毛葡萄‘丹凤-2’芪合成酶基因VqSTS26和VqSTS32,构建pCAMBIA35S::VqSTSs::GFP过表达载体;以器官发生途径诱导的无核白分生愈伤组织作为受体材料,采用农杆菌介导法进行遗传转化,获得转基因葡萄植株;分别从转录水平和代谢产物水平比较转基因与野生型无核白在自然生长条件与人工接种葡萄白粉病菌(Uncinula necator)诱导下STS表达及芪类物质产生与积累的差异;通过显微观察白粉病菌在转基因与野生型无核白叶片上的生长发育进程,统计孢子萌发、菌丝生长与分生孢子梗形成数目,对转基因植株进行抗病性分析。【结果】通过PCR检测和Western blot鉴定,获得了稳定转化VqSTS26植株8株和稳定转化VqSTS32植株5株。在自然生长条件下实时荧光定量PCR分析表明VqSTS26、VqSTS32转基因无核白STS的表达量显著提高,芪合成酶上游基因PAL与下游基因RSGT的表达量上调,而与芪合成酶存在底物竞争关系的CHS表达下调;液相色谱分析表明芪类物质主要以糖苷的反式云杉新苷形式存在,VqSTS26、VqSTS32转基因无核白芪类物质的含量极显著高于野生型无核白。STS的表达及其产物合成受白粉病菌诱导,随白粉病菌诱导,STS表达量在1—2 dpi时显著升高,至7 dpi时表达量达最高;诱导表达产生的芪类物质由原来的反式云杉新苷新增加了反式白藜芦 展开更多
关键词 中国野生毛葡萄 芪合成酶基因 白藜芦醇 白粉病 抗病性 遗传转化
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