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CRISPR/Cas9技术在人类重要病毒性传染病中的应用
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作者 张珊 胡康洪 +2 位作者 魏艳红 孙鸽 孙殿兴 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期491-496,F0003共7页
近年来,CRISPR/Cas9作为一种新型的基因编辑工具,具备特异性强、使用广泛、操作相对简便等特点。通过对病毒基因组进行基因编辑从而干扰病毒复制和清除感染,以及在重要宿主因子、受体靶蛋白等方面应用都具有明显优势。本文着重以CRISPR/... 近年来,CRISPR/Cas9作为一种新型的基因编辑工具,具备特异性强、使用广泛、操作相对简便等特点。通过对病毒基因组进行基因编辑从而干扰病毒复制和清除感染,以及在重要宿主因子、受体靶蛋白等方面应用都具有明显优势。本文着重以CRISPR/Cas9技术在一些导致人类重要传染性疾病的病毒如乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、Epstein-Barr病毒(EBV)、单纯疱疹病毒(HSV)、寨卡病毒(ZIKV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)中的应用、面临的技术瓶颈问题和解决方案及治疗前景进行讨论。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 乙型肝炎病毒(HBV) 丙型肝炎病毒(HCV) Epstein-Barr病毒(EBV) 单纯疱疹病毒(HSV) 寨卡病毒(ZIKV) 人类免疫缺陷病毒(HIV) 综述
冀南地区HLA-B等位基因多态性与慢性丙型肝炎的相关性 预览
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作者 杨志明 马思思 李艳艳 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第1期6-10,共5页
目的从基因水平了解冀南地区慢性丙型肝炎与HLA-B位点等位基因频率的相关性,初步探索慢性丙型肝炎的保护性基因和易感性基因,为慢性丙型肝炎治疗策略的制定、预后的评估及疫苗的研制提供科学依据。方法应用PCR-序列特异性引物技术(PCR-s... 目的从基因水平了解冀南地区慢性丙型肝炎与HLA-B位点等位基因频率的相关性,初步探索慢性丙型肝炎的保护性基因和易感性基因,为慢性丙型肝炎治疗策略的制定、预后的评估及疫苗的研制提供科学依据。方法应用PCR-序列特异性引物技术(PCR-sequence primers,PCR-SSP)进行HLA-B等位基因分型测定,采用病例对照研究,比较冀南地区慢性丙型肝炎患者219例与健康对照者212例之间HLA-B等位基因频率分布的差异,进一步采用卡方检验分析HLA-B等位基因频率在HCV感染后自发清除组和持续感染组之间是否有差异,从而获得丙型肝炎病毒感染与HLA-B基因多态性的关联性。结果冀南地区丙型肝炎患者的HLA-B*15/35/55等位基因频率明显高于健康对照组(P<0.05);丙型肝炎患者的HLA-B*40/58等位基因频率明显低于健康对照组(P<0.05),其他各等位基因在两组间的表达频率差异均无统计学意义;HCV感染后自发清除组患者的HLA-B*15/40等位基因频率明显高于HCV持续感染组患者(P<0.05),HCV感染后自发清除组患者的HLA-B*55等位基因频率明显低于HCV持续感染组患者(P<0.05);其他各等位基因在两组间的表达频率差异均无统计学意义。结论HLA-B*15/35/55等位基因可能为HCV感染的易感基因,HLA-B*40/58等位基因可能为HCV感染的保护性基因;携带HLA-B15/40等位基因的人群感染HCV后容易发生自发清除,而携带HLA-B*55等位基因的人群可能更易转为慢性丙型肝炎。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) HLA-B 慢性丙型肝炎 自然转归
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HCV阴性者外周血单核细胞的染色体外环状DNA中与HCV同源的DNA序列
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作者 Reinhard H. Dennin Jian-Er Wo 《浙江大学学报:B卷英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第8期637-646,共10页
目的:研究与丙型肝炎病毒(HCV)基因RNA序列同源的人染色体外环状DNA(eccDNA)序列.创新点:首次从HCV阴性者eccDNA中检测到HCV 5’-非编码区(5’-NCR)基因组RNA序列,验证了我们的假设: HCV同源DNA序列存在于人的外周血单核细胞的eccDNA组... 目的:研究与丙型肝炎病毒(HCV)基因RNA序列同源的人染色体外环状DNA(eccDNA)序列.创新点:首次从HCV阴性者eccDNA中检测到HCV 5’-非编码区(5’-NCR)基因组RNA序列,验证了我们的假设: HCV同源DNA序列存在于人的外周血单核细胞的eccDNA组分中.方法:用分离的eccDNA进行HCV特异的聚合酶链反应(PCR),采用核苷酸序列同源性搜索分析软件(BLASTn)对测序结果进行比对分析,并检测其甲基化模式.结论:实验结果证实了我们的假设:即部分HCV 5’-NCR基因组RNA序列存在于外周血单核细胞的eccDNA组分.同时,甲基化分析结果显示了个体间的甲基化模式所代表的受遗传调控的表观遗传特征. 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 5'-非编码区 人类基因组 染色体外DNA 环状DNA 甲基化模式
献血感染丙型肝炎病毒人群的T细胞免疫及与肝损伤的相关性研究
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作者 纪伟 张勇 +3 位作者 周吉坤 郑欢伟 高福 刘军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期357-363,共7页
丙型肝炎是由感染丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)引起的,至今仍是世界公共卫生的严重威胁。为研究HCV感染者的T细胞免疫状态及其对疾病进展的影响,我们招募了62位研究对象,包括20位健康对照、42位HCV感染者。我们通过HCV主要的T... 丙型肝炎是由感染丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)引起的,至今仍是世界公共卫生的严重威胁。为研究HCV感染者的T细胞免疫状态及其对疾病进展的影响,我们招募了62位研究对象,包括20位健康对照、42位HCV感染者。我们通过HCV主要的T细胞免疫原非结构蛋白3(NS3蛋白)多肽库体外刺激外周血淋巴细胞,利用流式细胞方法检测CD8^+T细胞和CD4^+T细胞的γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平。同时,我们检测了研究对象血清中白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的水平。结果表明,HCV感染者外周血中仍持续存在针对NS3的特异性CD8^+T细胞和CD4^+T细胞。感染者血清中IL-6、IL-10显著高于对照人群。相关性分析显示,HCV感染者外周血中分泌IFN-γ和TNF-α的HCV特异性CD8^+T细胞水平及血清中IL-10水平与血清中的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)呈现正相关。本研究表明,HCV感染者体内针对病毒的特异性细胞免疫持续保持一定的水平,并且可能与病人的肝损伤有关,该研究对于了解HCV感染的细胞免疫特征及研发相应的免疫干预策略具有一定的意义。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) T细胞免疫 白介素-10(IL-10) 白介素-6(IL-6) 谷丙转氨酶(ALT) 谷草转氨酶(AST)
2016年德宏州新报告HIV/HCV合并感染者中HCV基因型分布特征
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作者 王译葵 马洁琼 +10 位作者 王继宝 周素娟 段星 杨锦 杨涛 叶润华 杨跃诚 杨世江 姚仕堂 蒋岩 段松 《中国艾滋病性病》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期671-675,共5页
目的了解2016年云南省德宏傣族景颇族自治州(德宏州)新报告艾滋病病毒(HIV)感染者合并丙型肝炎病毒(HCV)感染人群的HCV基因型分布特征。方法选取HIV/HCV合并感染者血浆量为200μL以上的样本,经聚合酶链式反应(PCR)扩增HCV核心蛋白结合... 目的了解2016年云南省德宏傣族景颇族自治州(德宏州)新报告艾滋病病毒(HIV)感染者合并丙型肝炎病毒(HCV)感染人群的HCV基因型分布特征。方法选取HIV/HCV合并感染者血浆量为200μL以上的样本,经聚合酶链式反应(PCR)扩增HCV核心蛋白结合包膜蛋白(Core/E1)基因与非结构蛋白(NS5B)基因区并测序,通过HCV序列数据库的HCV blast及Mega 7.0软件构建分子系统进化树确定HCV基因型。并按照不同人口学特征对HIV/HCV合并感染者的HCV基因亚型流行特点进行统计学分析。结果 336例HIV/HCV合并感染者中,血浆量>200μL的样本318例,其中有267例(84.0%)成功扩增HCV基因片段并分型,中国籍51例(19.1%),缅甸籍216例(80.9%)。基因分型结果显示:中国籍和缅甸籍的感染者HCV基因亚型均以3b为主,分别占39.2%(20/51)、31.0%(67/216);6n与6u基因亚型次之,在中国籍中分别占15.7%(8/51)、19.6%(10/51),在缅甸籍中分别占19.0%(41/216)、14.8%(32/216)。中国籍感染者的HCV亚型在性别、职业分布上差异有统计学意义(P<0.05);缅甸籍的感染者HCV亚型仅在文化程度分布上差异有统计学意义(P<0.05)。结论 2016年德宏州新报告的HIV感染者合并HCV感染人群的HCV基因亚型复杂多样,中国籍和缅甸籍感染者的HCV基因亚型分布特征一致,均以3b亚型为主要流行优势株,6n、6u次之。 展开更多
关键词 艾滋病病毒感染者 丙型肝炎病毒 基因型 中国籍 缅甸籍
不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒抗体检测试剂性能评估
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作者 谷金莲 刘艳 +2 位作者 于洋 张瑾 周诚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期420-423,427共5页
目的评估不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体检测试剂性能。方法采用HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准验证方式,应用国内外市场占有较大份额及方法有代表性的9种试剂,对HCV抗体国家参考品的6... 目的评估不同化学发光免疫分析法的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体检测试剂性能。方法采用HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准验证方式,应用国内外市场占有较大份额及方法有代表性的9种试剂,对HCV抗体国家参考品的65份[HCV抗体阴性参考品30份(编号N1~30)、阳性参考品30份(编号P1~30)、最低检出限参考品4份(编号L1~4)和重复性参考品1份]血浆样本进行检测,通过分析HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项性能要求,评估不同化学发光免疫分析方法的HCV抗体试剂性能。结果 9种试剂检测阴、阳性参考品符合率均为96.7%(29/30)~100%(30/30),仅有3种试剂检测参考品符合率均为100%(30/30);最低检出限均检出L1、L2、L3阳性,检出L4阴性;重复性检测S/CO值的变异系数(CV)在1.6%~11.1%之间,化学发光免疫分析的双抗原夹心法比间接法试剂对同一阳性样本检测的S/CO值高;相同项目同一试剂的稳定性试验与常温条件下检测结果基本一致,对每种试剂检测3个批号的批间精密度,S/CO值的CV在2.3%~12.5%之间。结论 9种试剂对HCV抗体检测试剂(化学发光免疫分析法)行业标准各项指标验证显示,不同化学发光免疫分析法的HCV抗体检测试剂性能基本一致。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗体 试剂 性能 化学发光免疫分析法
广西两市2014—2015年新发现HIV/AIDS病例的流行病学研究 被引量:1
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作者 王学燕 张振开 +6 位作者 韦兴强 陈钦艳 周芸 杨庆利 王超 李开文 胡莉萍 《中国热带医学》 CAS 2018年第4期365-369,共5页
目的 了解桂林、河池两市2014—2015年新发现HIV/AIDS病例,特别是HIV/AIDS合并感染HBV和HCV流行病学特征,为广西HIV/AIDS患者合并HBV、HCV感染的防治提供科学依据。方法 收集广西桂林、河池市2014—2015年新发现HIV/AIDS病例资料,采用... 目的 了解桂林、河池两市2014—2015年新发现HIV/AIDS病例,特别是HIV/AIDS合并感染HBV和HCV流行病学特征,为广西HIV/AIDS患者合并HBV、HCV感染的防治提供科学依据。方法 收集广西桂林、河池市2014—2015年新发现HIV/AIDS病例资料,采用描述流行病学方法,分析其流行病学特征。结果 广西桂林、河池两市2014—2015年新发现HIV/AIDS病例共2 980例,合并HBV、HCV和HIV+HBV+HCV感染率分别为13.02%、2.17%和0.26%,合并HBV或HCV双重感染均为男性高于女性,差异无统计学意义(P〉0.05),汉族、初中文化程度者双重感染率较高。HIV+HBV双重感染率40-49岁年龄组、公共场所服务员合并感染率较高;合并HCV感染率则以20-29岁组较高。HIV传播途径是静脉吸毒者合并HCV感染率较高。HIV合并HBV或HCV双重感染、HIV+HBV+HCV三重感染者ALT水平均显著高于HIV单纯感染者,差异有统计学意义(P=0.000)。结论 桂林、河池新发现HIV/AIDS病例合并HBV、HCV感染较常见,提示应加强对新发现HIV/AIDS病例的HBV、HCV筛查检测工作,及时给予干预、治疗,防止合并感染,延缓HIV感染后疾病进程。 展开更多
关键词 艾滋病病毒 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 合并感染 流行病学
纤维介素2在慢性病毒性肝炎患者中的表达水平及临床意义 预览
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作者 陈云茹 孙阳阳 +6 位作者 邸莹 唐甜甜 杨雪亮 张曦 刘小静 叶峰 蔺淑梅 《西安交通大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第6期876-879,884共5页
目的 探讨可溶性纤维介素2(sFgl2)检测对预测慢性病毒性肝炎患者临床转归和预后的价值。方法 采用ELISA法分别检测85例慢性肝炎患者(42例乙型肝炎和43例丙型肝炎)、108例肝硬化患者(35例乙型肝炎和73例丙型肝炎)及72例健康对照者外周血s... 目的 探讨可溶性纤维介素2(sFgl2)检测对预测慢性病毒性肝炎患者临床转归和预后的价值。方法 采用ELISA法分别检测85例慢性肝炎患者(42例乙型肝炎和43例丙型肝炎)、108例肝硬化患者(35例乙型肝炎和73例丙型肝炎)及72例健康对照者外周血sFgl2的水平,并与Child-Pugh分级及肝功能指标进行Spearman相关性分析。结果 血清sFgl2水平在肝硬化组显著高于非肝硬化组及健康对照组,且在肝硬化患者中,随Child-Pugh评分升高,外周血sFgl2水平逐渐升高。Spearman相关性分析显示,不考虑病原学,sFgl2水平与TBIL呈正相关,与ALB呈负相关。但与病毒载量、ALT或AST无相关性。结论 证实了外周血sFgl2在肝硬化患者中明显升高,同时发现sFgl2水平与肝硬化患者Child-Pugh分级呈正相关,提示sFgl2水平与肝病严重程度相关,可能成为评估肝硬化患者预后的因素之一。 展开更多
关键词 可溶性纤维介素2 肝硬化 丙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒
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Hepatitis C in Laos: A 7-Year Retrospective Study on 1765 Patients
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作者 Phimpha Paboriboune Thomas Vial +7 位作者 Philavanh Sitbounlang Stephane Bertani Christian Trepo Paul Deny Francois-Xavier Babin Nicolas Steenkeste Pascal Pineau Eric Deharo 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2018年第4期295-303,共9页
丙肝病毒(HCV ) 是一颗全球健康担心,尤其是在东南亚洲,并且在老挝,导致 HCV 的肝疾病的演讲糟糕被知道。我们的目的这样是描述一个全面 HCV 感染模式以便指导国家健康政策。先前健康中心的快速的测试诊断的一组 1765 个病人上的研... 丙肝病毒(HCV ) 是一颗全球健康担心,尤其是在东南亚洲,并且在老挝,导致 HCV 的肝疾病的演讲糟糕被知道。我们的目的这样是描述一个全面 HCV 感染模式以便指导国家健康政策。先前健康中心的快速的测试诊断的一组 1765 个病人上的研究在万象在 Infectiology 老挝人的 Christophe Merieux 的中心被进行。病人的人口统计的信息,他们的感染地位(病毒的负担:VL ) ,肝功能(aminotransferases ) 和治疗被分析。结果证明感染的人的性分发被平衡;与为男人的 53.8 的中部的年龄并且 51.6 ? 为女人的年(13-86 ? 年) 。病人(72%) 的多数被证实积极(VL > 50 ? IU/mL ) 并且他们中的 28% 个有高 VL (> 6log <sub>10</sub>) 。大约 23% 病人有肝损坏指示的 aminotransferases 的水平(> 40 ? IU/mL ) ;但是不到 20% 病人接受了治疗。病人们很少收到了第二采样或医药成像。调查也证明 cycloferon, pegylated 干扰素和 ribavirin 是医药职员优先地开的药,没有跟随任何国际建议计划。在结论,我们建议屏蔽政策和病人的更好的管理的一张人口应该着急地在这个国家被实现,尊重正式指南。然而,生物分析和治疗的费用是必须被移开的重要障碍。公共健康分辨率应该立即在在 2030 遇见 WHO HCV 消除截止时间的观点被强制。 展开更多
关键词 丙肝病毒 老挝 公共健康 人口统计 测试诊断 国际建议 生物分析 截止时间
IL-28B对慢性丙型肝炎抗病毒疗效影响的研究 预览
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作者 孙亚臣 王瑶 《临床医药文献电子杂志》 2018年第104期8-8,14共2页
目的探讨干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎患者临床疗效的相关影响因素。方法对110例慢性丙型肝炎患者进行PEG-IFNα-2a180μg/周联合RBV800~1200mg/日的标准治疗,并完成了治疗后24周随访,同时分析宿主IL-28B基因多态性对持续病毒学... 目的探讨干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎患者临床疗效的相关影响因素。方法对110例慢性丙型肝炎患者进行PEG-IFNα-2a180μg/周联合RBV800~1200mg/日的标准治疗,并完成了治疗后24周随访,同时分析宿主IL-28B基因多态性对持续病毒学应答(SVR)的影响。应用罗氏试剂检测丙肝病毒定量,应用逆转录-套式聚合酶链反应(PT-PCR)法检测HCV基因型,应用焦磷酸测序的方法检测IL-28B基因多态性。结果在110例进行标准联合治疗、并完成了治疗后24周随访的慢性丙型肝炎患者中,68例患者获得持续性病毒应答(SVR)。IL28B基因型CC型患者SVR率为68.9%(62/90),N-CC型患者SVR率为30.0%(6/20)。结论IL-28BCC基因型SVR率高于IL-28B非CC基因型。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) IL-28B基因型 疗效
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聚乙二醇干扰素治疗IL28B rs 12979860 C/C基因型慢性丙型肝炎的远期疗效评价 预览
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作者 张立婷 张璨 +5 位作者 李俊峰 程小龙 王珊 陈红 王琼 王兰 《西安交通大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第4期609-612,共4页
目的探讨IL28B单核苷酸多态性(SNPs)rs12979860C/C型的慢性丙肝(CHC)患者在不同HCV基因型中进行聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)α-2a联合利巴韦林(RBV)抗病毒治疗的远期疗效。方法采用前瞻性研究,观察兰州大学第一医院感染科2011年3月... 目的探讨IL28B单核苷酸多态性(SNPs)rs12979860C/C型的慢性丙肝(CHC)患者在不同HCV基因型中进行聚乙二醇干扰素(PEG-IFN)α-2a联合利巴韦林(RBV)抗病毒治疗的远期疗效。方法采用前瞻性研究,观察兰州大学第一医院感染科2011年3月-2015年9月接受PEG-IFN联合RBV治疗48周并停药后随访42个月的CHC患者38例,以肝功能、脂代谢、持续病毒学应答(SVR)作为疗效的主要评价指标。结果在纳入的IL28BSNP rs12979860C/C型的CHC患者中,基因1b型的SVR率为73.33%,基因2a型SVR率为95.65%,两种基因型的SVR率可能无差异。抗病毒治疗后,两组肝功能指标ALT、AST、TBIL、TC、TG、HDL较治疗前均明显下降(P〈0.05);但两种基因型之间生化指标(转氨酶、GGT、胆红素、血脂)均无统计学差异(P〉0.05)。结论IL28BSNP rs12979860C/C型的CHC患者在以IFN为基础的抗病毒治疗中具有较高的SVR率,以IFN为基础的抗病毒治疗后肝功能、脂代谢可得到明显改善,其远期疗效良好。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 基因型 IL28B 远期疗效
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广州市番禺区丙型肝炎患者病毒基因分型研究 预览 被引量:1
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作者 吴普昭 何金花 +1 位作者 郭廷学 韩泽平 《海南医学》 CAS 2018年第4期494-497,共4页
目的了解广州市番禺区丙型肝炎(丙肝)患者丙肝病毒的基因型构成状况,分析丙肝病毒基因型与相关临床指标的相关性,为个体化抗病毒治疗方案提供参考依据。方法收集广州市番禺中心医院2016年共125例丙肝携带患者血清,采用PCR-反向斑点杂... 目的了解广州市番禺区丙型肝炎(丙肝)患者丙肝病毒的基因型构成状况,分析丙肝病毒基因型与相关临床指标的相关性,为个体化抗病毒治疗方案提供参考依据。方法收集广州市番禺中心医院2016年共125例丙肝携带患者血清,采用PCR-反向斑点杂交法检测丙肝病毒基因型;同时检测血清丙肝病毒RNA(HCV-RNA)水平、肝功能水平及外周血T淋巴细胞亚群;另随机抽取15例健康人群体检标本作为T淋巴细胞亚群正常对照组。结果 125例患者检测出5种基因型,构成比为1b占48.0%、2a占8.0%、3a占10.4%,3b占6.4%,6a占27.2%;1b型病毒患者血清HCV-RNA载量、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBil)水平与非1b型比较,1b型病毒患者高于非1b型,差异均有统计学意义(P〈0.05);1b型、非1b型病毒患者外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞绝对值均低于正常对照组,且1b型低于非1b型,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论番禺区丙肝患者感染以丙肝病毒lb型为主,其血清病毒载量、主要肝功能指标1b型高于非1b型,1b型外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞绝对值低于非1b型及正常人群。 展开更多
关键词 丙肝病毒 基因型 丙肝病毒RNA T淋巴细胞亚群
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一种改进型基于荧光蛋白重定位系统的丙型肝炎病毒滴度检测方法的建立
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作者 毕研伟 李智华 +5 位作者 龙琼 张辉 陈晨 李亚东 李育中 寸韡 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第2期181-187,共7页
目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素B启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulatot-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位... 目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis Cvirus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素B启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulatot-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位氨基酸(C462-540)的基因序列及含有SV40核定位信号的IPS.1(C462.540)基因序列,插入经同样酶切的慢病毒表达载体LV-CAG-EGFP-WPRE、LV-CAG--mCherry(RFP)-WPRE,构建表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-NLS-IPS-1(C462-540)的慢病毒重组表达质粒;在此基础上构建含有IPS.1(C462-540)-2A-EGFP-puro、IPS-1(C462-540)-IRES-EGFP-puro的慢病毒重组表达质粒;利用293T细胞包装含有IPS-1(C462-540)蛋白的重组慢病毒;感染Huh7-5细胞,流式细胞仪筛选稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的Huh7.5细胞,或用puromycin筛选稳定表达EGFP的Huh7-5细胞;利用10倍系列稀释的HCV感染上述细胞,检测HCV的滴度。结果测序表明4种慢病毒表达质粒构建正确;收获的慢病毒感染Huh7-5细胞48h后,可见EGFP或RFP表达,经流式细胞仪分选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-IPS-1(C462-540)的细胞系,经puromycin筛选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462.540)的细胞系;经10倍系列稀释的HCV感染后,弥散在细胞质中的点状EGFP、RFP会扩散到整个细胞或定位到细胞核中,在甲基纤维素的限制下形成明显的荧光噬斑点,通过计算荧光噬斑点数得到用Huh7-5-EGFP-IPS-1(462-540)-IRES-PURO、Huh7.5两种细胞检测的HCV滴度分别为(5.6±0.2)×10^5和(5.5±0.2)×10^5PFU/mL,二者无显著差异。结论成功构建了含有绿色荧光或红色荧光报告系统的细胞系,建立了一种简单、快速检测HCV滴度的新方法。 展开更多
关键词 干扰素β启动刺激因子-l 丙型肝炎病毒 病毒滴度 慢病毒 荧光蛋白 Huh7.5细胞
丙型肝炎病毒抑制剂达拉他韦中国专利申请情况解析
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作者 蒋君好 邓萍 《中国新药杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期385-389,共5页
达拉他韦是百时美施贵宝公司研发的一种丙型肝炎病毒NS5A蛋白抑制剂。本文通过专利文献检索,对达拉他韦相关的中国专利申请情况进行了分析,重点解析原研公司百时美施贵宝在中国的专利布局,旨在为国内药物研发机构和制药企业在达拉他韦... 达拉他韦是百时美施贵宝公司研发的一种丙型肝炎病毒NS5A蛋白抑制剂。本文通过专利文献检索,对达拉他韦相关的中国专利申请情况进行了分析,重点解析原研公司百时美施贵宝在中国的专利布局,旨在为国内药物研发机构和制药企业在达拉他韦的后期开发、专利保护策略以及知识产权布局等方面提供有益的参考。 展开更多
关键词 达拉他韦 丙型肝炎 病毒抑制剂 专利分析 NS5A
丙型肝炎病毒人源单克隆抗体的初步筛选
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作者 岳磊 李华 +5 位作者 杨婷 谢天宏 宋霞 孟华清 张也 谢忠平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期251-256,共6页
目的构建天然人源噬菌体抗体库,初步筛选人源抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)多肽抗原的单克隆重组噬菌体抗体。方法以健康成人外周血淋巴细胞cDNA为模板,采用PCR技术扩增轻(VL)、重链(VH)可变区基因;重叠PCR法拼接生成单... 目的构建天然人源噬菌体抗体库,初步筛选人源抗丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)多肽抗原的单克隆重组噬菌体抗体。方法以健康成人外周血淋巴细胞cDNA为模板,采用PCR技术扩增轻(VL)、重链(VH)可变区基因;重叠PCR法拼接生成单链抗体可变区基因片段(single chain fragment variable,scFv),并克隆至噬菌体载体p CANTAB5e,得到初级抗体库;使用HCV多肽混合抗原,经3轮淘筛富集噬菌体抗体;Phage ELISA法初步筛选HCV重组噬菌体抗体。结果成功构建了天然人源噬菌体抗体库。scFv(VH-κ)库的库容为6.0×10~7 PFU/mL,scFv(VH-λ)库的库容为4.28×10~9 PFU/m L;经初步淘筛,成功获得HCV三级抗体库;Phage ELISA得到了3株候选重组噬菌体抗体。结论初步得到HCV多肽抗原重组噬菌体抗体,为今后进一步筛选高亲和力噬菌体抗体和可溶抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 人源单克隆抗体 噬菌体抗体库
丙型肝炎病毒抗体分片段检测方法的建立
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作者 杨青 买制刚 易俊波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第12期1373-1375,1382共4页
目的建立丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体分片段检测方法。方法以葡聚糖T500为骨架,将亲和素和HRP标记于葡聚糖的不同位置上,再分别与含有生物素标签的HCV的核心抗原、NS3、NS4B、NS5反应(亲和素及HRP与HCV抗原的摩尔比均为1∶... 目的建立丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体分片段检测方法。方法以葡聚糖T500为骨架,将亲和素和HRP标记于葡聚糖的不同位置上,再分别与含有生物素标签的HCV的核心抗原、NS3、NS4B、NS5反应(亲和素及HRP与HCV抗原的摩尔比均为1∶10),制备HCV抗原聚合物,同时结合免疫层析技术建立HCV抗体分片段检测方法。采用建立的方法检测100份正常人和100份HCV感染者的血清样本,分析层析膜上不同抗原条带组合出现的比例,计算特异度和灵敏度,根据特异度和灵敏度指标来确定阴阳性的判定标准。分别采用本实验建立的方法及商业化的蛋白芯片法检测196份临床血清样本,计算两种方法的符合率。结果 HCV抗体分片段检测方法检测200份临床标本的灵敏度为100. 0%,特异性为100. 0%,检测结果的判定标准为:2条带显色为阳性,1条带显色为可疑,需进一步确认。该方法与蛋白芯片法对196份临床血清样本的4种抗体片段检测结果符合率均达98. 0%以上。结论本研究成功建立了HCV抗体分片段检测方法,该方法具有良好的灵敏度及特异度,可用于HCV感染的诊断。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗体分片段检测 免疫层析 多功能聚合物
丙型肝炎病毒对高尔基体蛋白73表达的影响 预览
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作者 刘兴晖 徐凤霞 +3 位作者 陈飒利 宋惠 李龙宣 刘芳 《海南医学》 CAS 2018年第5期657-659,共3页
目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)对高尔基体蛋白73 (GP73)表达的影响。方法 选取2015年3月至2016年12月期间上海市浦东新区公利医院收治的68例HCV患者为研究对象,以同期74例健康体检者为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两... 目的 探讨丙型肝炎病毒(HCV)对高尔基体蛋白73 (GP73)表达的影响。方法 选取2015年3月至2016年12月期间上海市浦东新区公利医院收治的68例HCV患者为研究对象,以同期74例健康体检者为对照组,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组受检者血清中GP73的含量,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测Huh7.5.1细胞中GP73 mRNA和蛋白的表达情况,ELISA检测细胞上清中GP73的含量,用SPSS19.0软件进行统计学分析。结果 HCV组患者的GP73血清含量为(146.5±12.8) ng/mL,明显高于健康对照组的(45.2±2.7) ng/mL,差异有统计学意义(P〈0.05);感染HCV的Huh7.5.1细胞中GP73 mRNA和蛋白相对表达量分别为(1.204±0.143)和(1.174±0.136),明显高于对照细胞的(0.306±0.019)和(0.298±0.015),差异均具有统计学意义(P〈0.05);HCV感染的细胞上清中GP73含量为(85.6±10.3) ng/mL,明显高于对照细胞的(39.5±8.3) ng/mL,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论 HCV可能通过上调GP73的表达来参与HCC的形成,但HCV调节GP73表达的具体分子机制尚待进一步研究。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 高尔基体蛋白73 表达
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谁是丙型病毒性肝炎的传染源 预览
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作者 张海莹 饶慧瑛 《中国血液净化》 2017年第10期657-660,共4页
丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染及所致疾病已成为全球的一个严重的社会公共卫生问题。HCV感染的流行率在不断增加,HCV感染没有有效的疫苗。抗-HCV是HCV初筛指标,但不是保护性抗体。HCV RNA是HCV感染的确诊指标,使用敏感性... 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染及所致疾病已成为全球的一个严重的社会公共卫生问题。HCV感染的流行率在不断增加,HCV感染没有有效的疫苗。抗-HCV是HCV初筛指标,但不是保护性抗体。HCV RNA是HCV感染的确诊指标,使用敏感性高的试剂可以提高检测的准确性对患者的诊断及治疗至关重要。当HCV治愈或病毒自发清除后,高敏试剂检测不到HCV RNA,不存在传染性,但是抗-HCV可以终生阳性。直接作用抗病毒药物(direct-acting antiviral agents,DAA)对HCV治疗安全有效,包括肾功能损害患者。HCV基因分型检测对指导个体化抗病毒方案治疗有重要临床价值。 展开更多
关键词 丙型病毒性肝炎 HCV感染 传染源 基因分型检测 抗-HCV 丙型肝炎病毒 公共卫生问题 保护性抗体
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HCV多中和抗原表位嵌合病毒样颗粒免疫获得血清内中和抗体评价 预览
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作者 王晓岩 张海 +5 位作者 雷迎峰 林芳 崔颖 李斌 张惠中 韦三华 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期707-711,720共6页
目的:纯化的HCV多中和抗原表位及HCV包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用。方法:纯化的HCV多中和抗原表位及包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒(... 目的:纯化的HCV多中和抗原表位及HCV包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用。方法:纯化的HCV多中和抗原表位及包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒(VLPs-MEp S、VLPs-E2S)10μg皮下接种新西兰兔,间隔2周共免疫3次,采集不同时间免疫兔血清,ELISA方法测定血清内的抗体,PBS组作为对照;制备1b型HCVpp,观察血清抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用,对免疫血清保护性进行初步评价。结果:免疫后血清中产生一定水平的中和抗体,血清中和抗体测定VLPs-MEp S明显高于VLPs-E2S(P〈0.05)。VLPs-MEp S与VLPs-E2S组均显著高于对照PBS组(P〈0.01)。对HCVpp抑制作用,VLPs-MEp S高于VLPs-E2S组(P〈0.05),最高中和率可达61.49%,二者均高于对照组(P〈0.01)。结论:嵌合病毒样颗粒免疫新西兰兔后产生一定水平中和抗体,该中和抗体具有保护作用,为研发中和抗体表位疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 表位 病毒样颗粒 中和抗体 免疫
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PEG-IFN-α联合利巴韦林治疗丙型肝炎病毒和乙型肝炎病毒共同感染患者疗效观察 预览 被引量:2
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作者 黄新造 柯文炳 +2 位作者 纪丹 赛君 戴列军 《海南医学》 CAS 2017年第7期1061-1063,共3页
目的观察聚乙二醇干扰素α-2a(PEG-IFN-α)治疗丙型肝炎病毒/乙型肝炎病毒(HBV/HCV)共同感染患者的临床疗效。方法选取2011年4月至2015年12月鄂东医疗集团市中医医院收治的HBV/HCV共同感染患者40例作为HBV/HCV组,HCV感染患者45例为... 目的观察聚乙二醇干扰素α-2a(PEG-IFN-α)治疗丙型肝炎病毒/乙型肝炎病毒(HBV/HCV)共同感染患者的临床疗效。方法选取2011年4月至2015年12月鄂东医疗集团市中医医院收治的HBV/HCV共同感染患者40例作为HBV/HCV组,HCV感染患者45例为HCV组,两组患者均给予PEG-IFN-α联合利巴韦林治疗,比较两组患者的HCV RNA转阴情况及肝功能变化。结果 HCV组患者治疗后的转阴率为55.6%,明显高于HBV/HCV组的32.5%,差异有统计学意义(P〈0.05);HCV组患者的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、透明质酸(HA)及HBV/HCV组患者的ALT、AST治疗后明显优于治疗前,差异均有统计学意义(P〈0.05);HCV组患者的Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及HBV/HCV组患者的PCⅢ、HA在治疗前后比较差异均无统计学意义(P〉0.05),治疗后两组患者的ALT、AST、HA、PCⅢ比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。结论聚乙二醇干扰素α-2a治疗HBV/HCV单一病毒感染疗效优于共同感染。 展开更多
关键词 聚乙二醇干扰素Α-2A 丙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒 共同感染 疗效
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