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4株禽腺病毒hexon基因片段序列分析 预览
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作者 刘畅 李磊 +3 位作者 徐慧娟 赵磊 路振香 胡倩倩 《畜牧与饲料科学》 2019年第9期17-22,共6页
[目的]验证购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心(China Veterinary Culture Collection Center,CVCC)的4株禽腺病毒(FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211、FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218)的血清型。[方法]采用PCR的方法对4株FAdV hexon基因片段... [目的]验证购自中国兽医微生物菌种保藏管理中心(China Veterinary Culture Collection Center,CVCC)的4株禽腺病毒(FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211、FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218)的血清型。[方法]采用PCR的方法对4株FAdV hexon基因片段进行特异性扩增、克隆与测序,并与GenBank上公布的FAdV各血清型进行亲缘性分析。[结果]hexon基因片段核苷酸及其编码Hexon蛋白氨基酸亲源性分析结果表明,FAdV-1 AV208为禽腺病毒A血清1型;FAdV-4 AV211为禽腺病毒C中的血清4型;FAdV-8 AV215为禽腺病毒E中的血清8b型;FAdV-11 AV218为禽腺病毒C中的血清10型。[结论]FAdV-1 AV208、FAdV-4 AV211的血清型与CVCC标注一致;FAdV-8 AV215为FAdV-8b,相比CVCC该研究进一步细化了其血清型;而FAdV-11 AV218为FAdV-10,与CVCC标注的血清型不一致。该研究为今后正确使用CVCC标准毒株FAdV-8 AV215、FAdV-11 AV218提供了参考。 展开更多
关键词 禽腺病毒 标准毒株 hexon基因 Hexon蛋白
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Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法的建立 预览
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作者 张启龙 孙丹 +4 位作者 韦海涛 宋彦军 周德刚 冯小宇 王林 《中国兽药杂志》 2019年第8期1-7,共7页
利用纯化的 Ⅰ 群禽腺病毒4型重组Hexon蛋白,通过各反应条件筛选,建立了 Ⅰ 群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL;最佳封闭液为1% 牛血清白蛋白;待检血清最佳作用浓度是400倍稀释,37℃孵育60 min... 利用纯化的 Ⅰ 群禽腺病毒4型重组Hexon蛋白,通过各反应条件筛选,建立了 Ⅰ 群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL;最佳封闭液为1% 牛血清白蛋白;待检血清最佳作用浓度是400倍稀释,37℃孵育60 min;酶标抗体的最佳作用条件为稀释度1:8000,37℃孵育60 min;最佳显色时间为10 min.用所建方法对160只临床鸡只进行检测,同时与拭子PCR检测对比,一致性较好,表明该方法可有效用于临床检测. 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒4型 Hexon蛋白 间接ELISA 检测
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鸭源血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达与初步应用
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作者 粟元文 王怀禹 魏玲 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第9期77-80,共4页
为了获得鸭源血清4型禽腺病毒(FAdV-4)重组Hexon蛋白,并掌握重组蛋白的免疫学活性和应用前景,试验采用PCR方法、原核表达技术、Western-blot检测和间接ELISA方法对鸭源FAdV-4 Hexon蛋白的主要抗原区域进行截短表达、鉴定与初步应用研究... 为了获得鸭源血清4型禽腺病毒(FAdV-4)重组Hexon蛋白,并掌握重组蛋白的免疫学活性和应用前景,试验采用PCR方法、原核表达技术、Western-blot检测和间接ELISA方法对鸭源FAdV-4 Hexon蛋白的主要抗原区域进行截短表达、鉴定与初步应用研究。结果表明:PCR方法扩增得到大小为1 011 bp的FAdV-4 Hexon主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-30a(+)原核表达载体,经IPTG诱导获得以包涵体形式表达的重组蛋白;重组蛋白变性纯化后进行Western-blot检测,其可与FAdV-4阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫学活性;以纯化蛋白为包被抗原,初步建立检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法,用该方法进行检测,FAdV-4灭活疫苗免疫鸭场的免疫合格率为96.46%,FAdV-4感染鸭场的阳性感染率为99.46%,无FAdV-4免疫史和感染史鸭场的阳性感染率为0。说明试验获得了具有良好生物学活性的FAdV-4 Hexon重组蛋白。 展开更多
关键词 血清4型Ⅰ亚群禽腺病毒 Hexon蛋白 原核表达 初步应用
禽腺病毒4型hexon基因克隆与原核表达分析 预览
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作者 王许航 王林 +6 位作者 经美 陈萍 王金凤 孙继国 刘聚祥 王建昌 袁万哲 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第7期29-32,共4页
应用PCR方法扩增禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAd V-4) Hexon基因,将其克隆至原核表达载体pQE1中,获得重组质粒pQE1-hexon。将重组质粒经诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析。结果,Hexon蛋白在25℃经诱导4 h、IPTG浓度为0.... 应用PCR方法扩增禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAd V-4) Hexon基因,将其克隆至原核表达载体pQE1中,获得重组质粒pQE1-hexon。将重组质粒经诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析。结果,Hexon蛋白在25℃经诱导4 h、IPTG浓度为0. 8 mmol/L时可获得最大诱导表达量,表达蛋白的相对分子质量约为107 kD,主要以不溶性包涵体形式存在。纯化复性后,可得到浓度为5. 165 mg/mL及纯度为97%的Hexon蛋白。本研究获得的重组菌pQE1-hexon以及高纯度的Hexon蛋白,为进一步研究FAd V-4检测方法和新型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 Hexon蛋白 原核表达
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Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用 预览 被引量:1
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作者 张曼 韩飞 +1 位作者 高睿 何亚鹏 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期634-640,共7页
旨在原核表达Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的Hexon蛋白,并以Hexon蛋白为包被抗原建立血清的间接ELISA检测方法。将FAVⅠ群Hexon基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组Hexon蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯... 旨在原核表达Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus groupⅠ,FAVⅠ)的Hexon蛋白,并以Hexon蛋白为包被抗原建立血清的间接ELISA检测方法。将FAVⅠ群Hexon基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组Hexon蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化,并进行Westernblot鉴定;纯化后的Hexon蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清的间接ELISA检测方法,并进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后对临床样品进行检测。结果表明,原核表达获得大小约为37.4ku的重组Hexon蛋白;Westernblot结果表明重组蛋白有良好的特异性和抗原反应性。FAVⅠ间接ELISA法优化反应条件为:抗原最佳包被质量浓度为5.0mg/L,封闭条件为37℃作用1h,血清以1∶200倍稀释作用1h,酶标二抗以1∶5 000倍稀释作用1h,TMB显色时间为10min。在该优化条件下,OD450≥0.322为阳性,反之为阴性;特异性试验结果表明,对鸡新城疫、禽流感、沙门菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌阳性血清检测均为阴性;对阳性血清的敏感性可达1∶1 200,70份阳性血清的阳性率为97.1%;重复性试验结果表明,批内和批间OD450值的变异系数分别为1.2%-3.5%和5.1%-8.3%;用此方法对临床279份鸡血清样品检测的阳性率为51.3%。表明建立的ELISA检测方法可用于FAVⅠ抗体水平的检测。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 Hexon蛋白 原核表达 间接ELISA
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4型禽腺病毒抗体间接hexon-ELISA检测方法的建立 预览 被引量:1
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作者 朱庆贺 张鹏宇 +5 位作者 崔红玉 王观悦 王爽 陈曦 刘力威 史同瑞 《中国兽药杂志》 2018年第8期7-11,共5页
以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感... 以4型禽腺病毒(FAdV-4)的DNA为模板,扩增其六邻体(hexon)部分基因并进行重组表达,以重组hexon蛋白为包被抗原,优化ELISA检测条件,建立了FAdV-4的ELISA抗体检测方法。该方法对FAdV-4阳性血清检测为阳性,对于其他鸡常见病毒,如禽流感病毒5、7、9型,新城疫病毒以及鸡传染性支气管炎病毒阳性血清检测均为阴性;与PCR方法的阳性符合率为83.3%。试验表明,建立的以重组hexon蛋白为包被抗原检测FAdV-4血清抗体的ELISA方法可以用于检测FAdV-4的感染及相关流行病学调查。 展开更多
关键词 4型禽腺病毒 hexon蛋白 原核表达 间接ELISA
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Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的截短表达与鉴定 预览 被引量:6
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作者 罗思思 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢志勤 谢丽基 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期 550-555,共6页
本研究利用PCR方法扩增出Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠhexon基因主要抗原区,连接于表达载体pGEX-4T-1中,构建成重组质粒pGEX-hexon,并转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的Hexon蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果显示,试验成功... 本研究利用PCR方法扩增出Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠhexon基因主要抗原区,连接于表达载体pGEX-4T-1中,构建成重组质粒pGEX-hexon,并转化大肠杆菌DH5α,用IPTG诱导表达,对表达的Hexon蛋白进行SDS-PAGE电泳和Western-blot分析。结果显示,试验成功扩增获得hexon基因主要抗原区序列,大小为1020bp。重组蛋白主要以包涵体形式存在,融合蛋白大小为63.1ku,与预测值相符。经Western-blot分析,表明重组蛋白与FAVⅠ的阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性,为FAVⅠ诊断试剂盒的研制奠定基础。 展开更多
关键词 Ⅰ群禽腺病毒 Hexon蛋白 克隆 表达
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肉桂醛抗腺病毒作用研究 预览 被引量:8
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作者 刘蕾 曲章义 +2 位作者 王淑秋 魏凤香 高虹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期 1467-1471,共5页
目的:研究肉桂醛抗腺病毒(ADV)作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和病毒增殖抑制实验观测肉桂醛抗ADV作用;免疫荧光法检测肉桂醛对ADV六邻体(hexon)蛋白表达的影响。结果:(1)MTT和病毒增殖抑制实验结果表明肉桂醛在3种作用... 目的:研究肉桂醛抗腺病毒(ADV)作用。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法和病毒增殖抑制实验观测肉桂醛抗ADV作用;免疫荧光法检测肉桂醛对ADV六邻体(hexon)蛋白表达的影响。结果:(1)MTT和病毒增殖抑制实验结果表明肉桂醛在3种作用方式(除细胞保护作用方式)下能够增强宿主细胞存活率,降低病毒滴度,且细胞存活率与药物浓度呈正相关,肉桂醛对宿主细胞无保护作用,不能阻断病毒进入细胞。(2)肉桂醛(除细胞保护作用方式)组与病毒组比较hexon蛋白的表达明显降低(P〈0.05)。结论:肉桂醛有抗ADV作用,但却对宿主细胞无保护作用,肉桂醛抗ADV作用可能与调节hexon蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 腺病毒 肉桂醛 Hexon蛋白
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