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2010-2012年广州地区人冠状病毒分子进化分析
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作者 庹玖玲 黄旭斌 +6 位作者 杨权 罗洪娇 周凯 张素粉 张甜 曹开源 徐霖 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第3期212-217,共6页
目的 了解2010-2012年广州地区发热呼吸道感染患者的人冠状病毒各亚型分子进化情况.方法 采用RT-PCR法扩增HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-NL63阳性标本的NP、RdRp和S基因部分片段,构建载体后进行测序,利用Bio-edit、Mega4.0、Clustal1.83... 目的 了解2010-2012年广州地区发热呼吸道感染患者的人冠状病毒各亚型分子进化情况.方法 采用RT-PCR法扩增HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-NL63阳性标本的NP、RdRp和S基因部分片段,构建载体后进行测序,利用Bio-edit、Mega4.0、Clustal1.83等生物信息学软件对测序成功的基因序列进行比对和分析,建立HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-NL63不同基因区域的分子进化树.结果 2010-2012年期间,HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-NL63亚型在广州均未检测到重大变异株或重组株.HCoV-OC43与Belgium和中国香港来源流行株亲缘关系较近(GenBank登录号JN129834和AY903460);HCoV-229E与Amsterdam来源的病毒株亲缘关系最近(GenBank登录号JX503060);HCoV-NL63与中国北京和Amsterdam来源的流行株亲缘关系较近(GenBank登录号JX104161和DQ445911).各亚型NP和RDRp为保守基因,S基因变异较大.结论 2010-2012年期间,广州至少存在3种HCoV-OC43、HCoV-229E和HCoV-NL63流行株,没有发现重大变异株或重组株.各亚型NP和RDRp均为保守基因,可用于病毒的检测,S基因变异较大,适用于对分子变异规律的研究. 展开更多
关键词 呼吸道感染 人冠状病毒0C43 人冠状病毒NL63 人冠状病毒229E 分子进化
两种新型人冠状病毒HCoV-NL63和HCoV-HKU1的研究进展 预览 被引量:2
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作者 陈云欢(综述) 伍严安(审校) 《医学综述》 2010年第17期 2596-2598,共3页
人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)和HCoV-HKU1是近年新发现的两种与呼吸道疾病有关的病毒。二者均属于单股正链RNA,分属于冠状病毒1群和2群。HCoV-NL63感染有季节性,主要在冬春季,会加重哮喘患者的症状,与喉气管炎和川崎病有关。HCoV-HKU... 人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)和HCoV-HKU1是近年新发现的两种与呼吸道疾病有关的病毒。二者均属于单股正链RNA,分属于冠状病毒1群和2群。HCoV-NL63感染有季节性,主要在冬春季,会加重哮喘患者的症状,与喉气管炎和川崎病有关。HCoV-HKU1发病高峰在晚秋、冬季发病率低,感染患儿惊厥、热性癫痫的发生率相对较高。目前HCoV-NL63和HCoV-HKU1感染的检测方法多用普通聚合酶链反应、荧光定量聚合酶链反应等。 展开更多
关键词 人冠状病毒NL63 人冠状病毒HKU1 呼吸道感染
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五株人冠状病毒NL63的基因型鉴定及S1domain基因特征分析
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作者 何佩 崔爱利 +5 位作者 徐瑾 高立冬 余鹏博 孙凯旋 许文波 许晓光 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期202-210,共9页
为阐明我国部分地区人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)NL63基因特征,本研究对2013年陕西省、2018年河南省和湖南省送检的5株HCoV-NL63核酸检测阳性的呼吸道样本进行HCoV-NL63基因型别鉴定及S1 do-main基因特征分析。通过对HCoV-NL63... 为阐明我国部分地区人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)NL63基因特征,本研究对2013年陕西省、2018年河南省和湖南省送检的5株HCoV-NL63核酸检测阳性的呼吸道样本进行HCoV-NL63基因型别鉴定及S1 do-main基因特征分析。通过对HCoV-NL63棘突蛋白(Spike glycoprotein,S)基因的S1 domain区域进行基因扩增和序列测定,同时结合GenBank数据库下载的1983~2018年其他国家74条HCoV-NL63代表株序列和2007~2010年中国流行的12条HCoV-NL63代表株序列,构建基因亲缘性关系树,并对S蛋白的S1 domain区域进行核苷酸序列比对分析。结果提示全球HCoV-NL63流行株可划分为A和B两个基因型;A基因型可进一步划分为A0,A1,A2和A3四个基因亚型,其中本研究将GenBank中2008年中国流行的2株HCoV-NL63毒株划分为新基因亚型(A3);B基因型可进一步划分为B0,B1和B2三个基因亚型。A和B基因型的HCoV-NL63代表株序列在地域分布上无明显差异,但A基因型不同基因亚型的HCoV-NL63序列在年代分布上呈现出一定的时间进化趋势。在我国A和B基因型HCoV-NL63均已被检测到,但主要以A基因型流行为主,且主要集中在A1和A2基因亚型。不同基因型HCoV-NL63序列在S1 domain区域核苷酸和氨基酸序列上存在特征性差异。本研究通过对五株HCoV-NL63基因型鉴定及S1 domain基因特征分析,初步阐明了我国部分地区流行的HCoV-NL63基因型/基因亚型分布情况及基因特征,丰富了我国本土流行的HCoV-NL63基因数据库,为我国HCoV-NL63分子流行病学研究及分子检测和监测技术的改进和验证提供了基础基因数据。 展开更多
关键词 人冠状病毒NL63(HCoV-NL63) 基因型 基因特征 分子流行病学
人冠状病毒NL63受体结合区蛋白的原核表达纯化与鉴定 被引量:2
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作者 常慧 伊瑶 +7 位作者 赵敏 周为民 赵国霞 王慧娟 毕胜利 高基民 刘冰 谭文杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期106-111,共6页
人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密... 人冠状病毒NL63受体结合区蛋白是其免疫学诊断和疫苗研究的主要靶点,在受体吸附、病毒进入细胞及膜融合中起关键作用。本研究在E.coli系统中进行人冠状病毒NL63受体结合区(RBD)大、小蛋白的表达纯化,并对其进行免疫学鉴定。首先密码子优化设计合成了HCoV-NL63的RBD 大片段(RL: 232-684aa)与小片段(RS:476-616aa)的编码基因,并将其克隆进硫氧还蛋白表达载体pM48,构建了人冠状病毒NL63的受体结合区蛋白(RBD)大(RL)、小(RS)片段与硫氧还蛋白的融合表达质粒;转化E.coli BL21pLys S,利用IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析对蛋白进行纯化,并以表达HCoV-NL63 RL与RS蛋白的重组痘苗病毒免疫小鼠血清对重组蛋白进行免疫印迹鉴定。结果表明在37℃,0.8mM IPTG诱导4h时,蛋白表达量达到最高,融合蛋白主要以包涵体形式表达,纯化后纯度可达95%以上。Western blot显示,两个融合蛋白均与痘苗病毒(天坛株)表达的HCoV-NL63 RL与RS蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应。本研究首次在国内用原核系统表达纯化并鉴定了人冠状病毒NL63受体结合区大小蛋白(RL和RS),为人冠状病毒NL63感染的免疫学检测与疫苗研究提供了基础。 展开更多
关键词 HCoV NL63 受体结合区蛋白 重组蛋白 表达 大肠杆菌
人冠状病毒HCoV—NL63的研究进展 预览
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作者 吴方波 伍严安 《现代检验医学杂志》 CAS 2012年第3期6-9,共4页
类冠状病毒NL63(human coronavirus NL63,HCoV—NL63)是2004年荷兰学者首先发现报道的一种与呼吸道疾病有关的新型人冠状病毒。感染后可以引起上、下呼吸道感染,在儿童及免疫力低下的人群中的感染率较高。该文对HCoV—NL63的病毒学... 类冠状病毒NL63(human coronavirus NL63,HCoV—NL63)是2004年荷兰学者首先发现报道的一种与呼吸道疾病有关的新型人冠状病毒。感染后可以引起上、下呼吸道感染,在儿童及免疫力低下的人群中的感染率较高。该文对HCoV—NL63的病毒学、流行病学、临床特征、细胞受体、病原学检测和可能的抗病毒治疗作一综述。 展开更多
关键词 呼吸道感染 人冠状病毒HCoV—NL63 进展
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表达人冠状病毒NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒的制备与表达分析 被引量:1
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作者 赵国霞 周为民 +6 位作者 陆柔剑 王惠娟 赵敏 张庭瑛 邓瑶 高基民 谭文杰 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期250-256,共7页
HCoV-NL63是新近发现的人冠状病毒,对其外膜糖蛋白-棘突蛋白的表达及功能的研究仍有待深入。本研究利用天坛株痘苗病毒载体,克隆构建可表达HCoV-NL63棘突蛋白四个片段(N端棘突蛋白:S1;C端棘突蛋白:S2;受体结合区大片段:RL;受体结合... HCoV-NL63是新近发现的人冠状病毒,对其外膜糖蛋白-棘突蛋白的表达及功能的研究仍有待深入。本研究利用天坛株痘苗病毒载体,克隆构建可表达HCoV-NL63棘突蛋白四个片段(N端棘突蛋白:S1;C端棘突蛋白:S2;受体结合区大片段:RL;受体结合区小片段:RS)的重组痘苗病毒(vJSC1175-S1;vJSC1175-S2;vJSC1175-RL;vJSC1175-RS),酶切测序证实表达载体构建正确,免疫荧光分析(IFA)各重组痘苗病毒中棘突蛋白不同片段的表达与定位,Western-Blot分析表明各种重组蛋白表达正确。分析结果显示:4种重组蛋白均能有效表达,S1、RL及RS蛋白的荧光主要分布在细胞膜上,而S2蛋白的荧光则主要分布于细胞浆,各个片段的分子量大小与文献报道相同,并可进行正确的翻译修饰(糖基化)。本研究首次采用痘苗病毒天坛株载体构建制备了表达HCoV-NL63棘突蛋白不同片段的重组痘苗病毒,为进一步分析人冠状病毒HCoV-NL63棘突蛋白的结构功能及探索其抗原性和免疫原性奠定了基础。 展开更多
关键词 人冠状病毒NL63 棘突蛋白 受体结合区 重组痘苗病毒 表达
急性呼吸道感染患儿人冠状病毒NL63检测与分析
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作者 陈云欢 伍严安 《中国实用儿科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第12期916-919,共4页
目的建立人冠状病毒NL63(human coronavirus NL63)的实时荧光定量PCR(real-time fluorescentquantitative PCR,FQ-PCR)方法,了解呼吸道疾病患儿感染人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的情况。方法收集2008年10月至2009年4月因急性呼吸道... 目的建立人冠状病毒NL63(human coronavirus NL63)的实时荧光定量PCR(real-time fluorescentquantitative PCR,FQ-PCR)方法,了解呼吸道疾病患儿感染人冠状病毒NL63(HCoV-NL63)的情况。方法收集2008年10月至2009年4月因急性呼吸道感染(ARTI)而就诊于福建医科大学省立临床医学院患儿的咽拭子、鼻咽抽吸物、痰标本共151份,设计多聚酶蛋白1a基因的引物和Taqman探针,扩增1a基因片段,并将其克隆到PMD18-T载体上,构建质粒标准品,建立FQ-PCR检测方法,进行敏感性、特异性试验。扩增核衣壳蛋白N基因,对其序列进行初步分析。结果所建立的FQ-PCR方法特异性好,线性范围为101~1010copies/μL,变异系数小于5%。151份临床标本中共检测到2份HCoV-NL63阳性,阳性率为1.3%(2/151)。结论采用FQ-PCR方法可以检测急性呼吸道疾病患儿感染HCoV-NL63的情况。 展开更多
关键词 人冠状病毒NL63(HCoV-NL63) 急性呼吸道感染(ARTI) 实时荧光定量PCR N基因
人冠状病毒NL63核壳蛋白和棘突蛋白的表达及其在血清学检测中的初步应用 预览 被引量:5
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作者 周为民 张陵林 +3 位作者 陆柔剑 王慧娟 谭文杰 阮力 《生物技术通讯》 CAS 2010年第2期 154-157,共4页
目的:重组表达人冠状病毒NL63(HCoV—NL63)的核壳蛋白(N蛋白)及棘突蛋白(S蛋白),用于检测血清中的相应抗体。方法:用原核表达系统表达HCoV—NL63的N蛋白,建立检测N抗体的Werstern印迹法;用真核表达系统表达HCoV—NL63的S蛋... 目的:重组表达人冠状病毒NL63(HCoV—NL63)的核壳蛋白(N蛋白)及棘突蛋白(S蛋白),用于检测血清中的相应抗体。方法:用原核表达系统表达HCoV—NL63的N蛋白,建立检测N抗体的Werstern印迹法;用真核表达系统表达HCoV—NL63的S蛋白,建立检测S抗体的间接免疫荧光(IFA)法。结果:经Werstern印迹检测,重组S蛋白和N蛋白表达正确;初步建立了N蛋白纯化方法。利用建立的检测方法,检测了100份正常成人血清,总阳性率为81%。其中S抗体阳性率为66%,N抗体阳性率为38%,S抗体和N抗体均为阳性的占总数的22%,双抗体均为阴性的占总数的19%;S抗体的检出率明显高于N抗体。结论:重组HCoV—NL63N蛋白及S蛋白表达成功;S抗体和N抗体共同检测可获得较好的检测结果,减少漏检。 展开更多
关键词 人冠状病毒NL63 核壳蛋白 棘突蛋白 表达 血清学检测
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人类冠状病毒NL63的研究进展
9
作者 曾秀雅 伍严安 《国际呼吸杂志》 2008年第2期115-118,共4页
人类冠状病毒NL63(human coronavirus NL63,HCoV-NL63)是2004年荷兰学者首先报道发现的一种与呼吸道疾病有关的新的人冠状病毒。感染后可以引起上、下呼吸道感染,在儿童及免疫力低下的人群中的感染率较高。
关键词 呼吸道感染 人冠状病毒NL63(HCoV-NL63) 进展
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