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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4切割IKKα抑制β干扰素产生的研究 预览 被引量:2
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作者 李长尧 王胜男 +2 位作者 李江南 黄丽 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期425-428,共4页
IKK复合体由IKKα、IKKβ和IKKγ3个亚基组成。早期研究结果表明催化亚基IKKα在调节β干扰素(IFNβ)产生方面发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染及其非结构蛋白4(NSP4)表达能够显著抑制宿主的天然免疫反应。本研... IKK复合体由IKKα、IKKβ和IKKγ3个亚基组成。早期研究结果表明催化亚基IKKα在调节β干扰素(IFNβ)产生方面发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染及其非结构蛋白4(NSP4)表达能够显著抑制宿主的天然免疫反应。本研究结果显示PRRSV NSP4可以与IKKα结合,并能够切割IKKα。而且,丝氨酸蛋白酶活性是PRRSV NSP4切割IKKα所必需的,其中NSP4中的3个蛋白酶活性位点(His^39、Asp^64和Ser^118)中任何一个发生突变均无法切割IKKα。进一步研究证明,NSP4通过切割IKKα抑制了NF-κB和IFNβ启动子的活性。本研究结果表明,PRRSV NSP4除了通过切割NEMO和MAVS抑制NF-κB和IFNβ启动子活性以外,也可以通过切割IKKα抑制机体NF-κB的激活和IFNβ的表达。这些研究结果为阐明PRRSV逃逸宿主天然免疫提供了一个新的证据,为深入研究PRRSV的致病机理奠定了基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4 IKKα IFNβ NF-ΚB信号通路
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干扰素刺激基因在鸡传染性支气管炎病毒感染雏鸡气管黏膜中表达的动态变化 预览 被引量:2
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作者 谢智文 曹艳杰 +6 位作者 何怡宁 李和鸣 戴锦龙 张志鹏 韦平 韦天超 磨美兰 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期19-24,共6页
为了解鸡干扰素刺激基因(ISG)在鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染雏鸡气管黏膜中的表达情况,采用实时荧光定量PCR检测IBV M41株感染SPF鸡后不同时相气管黏膜中β干扰素(IFN-β)和干扰素刺激基因mRNA转录水平和IBV病毒载量变化。结... 为了解鸡干扰素刺激基因(ISG)在鸡传染性支气管炎病毒(IBV)感染雏鸡气管黏膜中的表达情况,采用实时荧光定量PCR检测IBV M41株感染SPF鸡后不同时相气管黏膜中β干扰素(IFN-β)和干扰素刺激基因mRNA转录水平和IBV病毒载量变化。结果显示,鸡气管黏膜中IFN-β和干扰素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5mRNA转录水平在感染后(DPI)第1~14天显著(P〈0.05)或极显著(P〈0.01)上调,且均在5DPI达到峰值;鸡气管黏膜中IBV病毒载量在1DPI急剧升高,在5DPI达到峰值,14DPI病毒载量急剧下降。结果表明,IFN-β、干扰素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5mRNA转录水平与IBV病毒载量变化趋势一致,提示IFN-β、干扰素刺激基因Mx、PKR、OAS、Viperin、IFITM3和IFIT5在抵御IBV入侵、抑制IBV复制、增殖以及病毒清除中发挥重要作用。试验结果丰富了宿主抗IBV感染的固有免疫应答机制,为IBV感染的预防和控制提供了理论依据。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 气管黏膜 干扰素刺激基因 Β干扰素 病毒载量
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口蹄疫病毒O/CHN/Mya98/33-P株前导蛋白对病毒感染性的影响 被引量:1
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作者 张萌 白兴文 +7 位作者 李平花 范朋举 包慧芳 孙普 卢曾军 曹轶梅 陈应理 刘在新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期2052-2060,共9页
【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya9... 【目的】研究口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)前导蛋白对于病毒感染性的影响。【方法】利用反向遗传操作技术,以O/CHN/93现用疫苗株的感染性克隆为骨架,分别构建了含口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P和O/CHN/Mya98/HN1前导蛋白的两株嵌合全长cDNA感染性克隆,采用实时荧光定量PCR检测两株不同的嵌合病毒感染猪肾原代细胞后细胞内IFNβ和OAS mRNA的转录情况。【结果】嵌合病毒rOHN1Lab增殖能力较弱,其对应诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较高,而嵌合毒rO33Lab相对于rOHN1Lab增殖能力较强,他们诱导产生的IFNβ和OAS mRNA含量较低。【结论】研究表明口蹄疫病毒中国分离株O/CHN/Mya98/33-P前导蛋白具有更强的抗IFNβmRNA转录的能力,该研究能够为进一步鉴定FMDV前导蛋白抗宿主先天性免疫的关键性位点奠定基础。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 嵌合病毒 前导蛋白 IFNβ 转录 影响
猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4切割天然免疫分子NEMO抑制I型干扰素的产生 预览 被引量:2
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作者 张利杰 李江南 +7 位作者 胡亮 张泉 王岩 于会彬 黄丽 李曦 蔡雪辉 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期169-173,共5页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞后能够强烈抑制宿主天然免疫反应。早期研究表明,PRRSV4个非结构蛋白NSP1、NSP2、NSP4和NSP11均可以抑制I型干扰素(IFN-I)的产生,但NSP4抑制IFN-I的机理尚无相关报道。本研究显示PRRSV... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞后能够强烈抑制宿主天然免疫反应。早期研究表明,PRRSV4个非结构蛋白NSP1、NSP2、NSP4和NSP11均可以抑制I型干扰素(IFN-I)的产生,但NSP4抑制IFN-I的机理尚无相关报道。本研究显示PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)导致宿主蛋白NEMO(NF-κBessentialmodulator)被切割,产生一条约40ku的蛋白条带。通过检测PRRSV编码蛋白酶的切割功能,进一步表明其NSP4是切割NEMO的关键蛋白酶。免疫共沉淀试验表明NSP4与NEMO具有特异性相互作用;激光共聚焦试验结果表明两者在细胞浆中共定位。通过双荧光素酶报告基因试验显示,NSP4过表达可以显著抑制仙台病毒(SeV)和NEMO诱导的IFNB启动子的激活,导致IFNβ表达量显著下降(p〈0.01)。本研究结果表明,PRRSVNSP4可以切割宿主蛋白NEMO,从而显著抑制rFNβ启动子的激活,从分子水平解释了PRRSVNSP4抑制IFNβ产生的机理。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4蛋白 NEMO蛋白 IFNβ
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多发性硬化症的药物治疗进展 被引量:5
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作者 程睿 徐飞虎 +1 位作者 周胜军 孙汉栋 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期2748-2752,共5页
多发性硬化症(MS)是一种复杂、致残的慢性神经系统疾病,全球MS患者超过210万。从1993年首个专门治疗RRMS药物获得美国FDA批准上市以来,全球已陆续批准12个疾病修饰药物(DMAs)上市。医疗专业人员需判断药物收益风险比,以确定每个... 多发性硬化症(MS)是一种复杂、致残的慢性神经系统疾病,全球MS患者超过210万。从1993年首个专门治疗RRMS药物获得美国FDA批准上市以来,全球已陆续批准12个疾病修饰药物(DMAs)上市。医疗专业人员需判断药物收益风险比,以确定每个患者的最佳治疗方案。本文综述了已上市的多发性硬化症的治疗药物,为临床用药提供参考。 展开更多
关键词 多发性硬化 干扰素Β 醋酸格拉替雷 那他珠单抗 芬戈莫德 富马酸二甲酯
人β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白的表达及纯化 被引量:5
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作者 张琦 雷楗勇 +4 位作者 丁月娣 陈蕴 屈琳 陈淑娴 金坚 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1746-1752,共7页
为开展人β干扰素-人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HAS)的临床前研究,本研究采用免疫学方法对毕赤酵母转化子进行筛选,得到高产菌株8株。在5L发酵罐上对高产菌株进行诱导表达,产量达500mg/L。发酵液经超滤浓缩、染料亲和层析、镍离子螯... 为开展人β干扰素-人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HAS)的临床前研究,本研究采用免疫学方法对毕赤酵母转化子进行筛选,得到高产菌株8株。在5L发酵罐上对高产菌株进行诱导表达,产量达500mg/L。发酵液经超滤浓缩、染料亲和层析、镍离子螯合亲和层析和DEAE离子交换层析纯化后,融合蛋白纯度达到96%。Westernblotting杂交表明融合蛋白具有人血清白蛋白和人β干扰素的抗原性,细胞病变抑制法测定IFNβ-HSA比活性为1.96×107IU/mg。建立了融合蛋白的生产工艺,为IFNβ-HSA的临床前研究奠定了基础。 展开更多
关键词 Β干扰素 融合蛋白 毕赤酵母
干扰素β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎脊髓中趋化因子MCP-1表达的影响 被引量:5
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作者 徐全刚 王晓辉 +2 位作者 任晓暾 黄德晖 吴卫平 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期 290-292,共3页
目的研究干扰素(IFN)β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统(CNS)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,从趋化因子角度探讨IFNβ治疗多发性硬化(MS)的机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35~55多肽加福... 目的研究干扰素(IFN)β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统(CNS)中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响,从趋化因子角度探讨IFNβ治疗多发性硬化(MS)的机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35~55多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,干预组(n=12)在免疫当天至免疫后第16天隔日一次皮下注射10000单位IFNβ-1b,对照组(n=12)则同时予1mL PBS皮下注射。比较两组EAE小鼠的临床表现,并用免疫组织化学及原位杂交技术比较两组EAE脊髓中MCP-1表达及MCP-1mRNA水平的差异。结果与对照组相比,IFNβ-1b干预组小鼠发病明显延迟,症状明显减轻,同时脊髓中MCP-1的表达及MCP-1mRNA的水平显著下调。结论IFNβ-1b可抑制EAE小鼠CNS中趋化因子MCP-1的表达,这可能是其治疗MS的机制之一。 展开更多
关键词 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 干扰素B 趋化因子 单核细胞 趋化蛋白-1
多媒体健康教育模式对应用IFNβ治疗的多发性硬化症患者护理满意度的影响 预览
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作者 刘丹 《中国数字医学》 2019年第11期115-117,共3页
目的:分析多媒体健康教育模式对应用IFNβ治疗的多发性硬化症患者护理满意度的影响。方法:自2017年2-10月期间,在哈尔滨医科大学附属第一医院神经内科选取应用IFNβ治疗的多发性硬化症患者68例,把这些患者随机分为对照组和研究组各34例... 目的:分析多媒体健康教育模式对应用IFNβ治疗的多发性硬化症患者护理满意度的影响。方法:自2017年2-10月期间,在哈尔滨医科大学附属第一医院神经内科选取应用IFNβ治疗的多发性硬化症患者68例,把这些患者随机分为对照组和研究组各34例,对照组的患者给予常规健康教育,研究组的患者则给予多媒体健康教育模式,1个月后,采用调查问卷方式对这68例患者护理满意度的调查,同时观测两组患者在治疗护理中的依从性和护理疗效,并对比两组患者的调查结果。结果:对照组的患者护理满意度的平均得分为(78.2±4.6)分,护理依从性的平均得分为(83.2±2.2)分,治疗护理有效的患者有21例;研究组的患者护理满意度的平均得分为(91.3±4.2)分,护理依从性的平均得分为(97.0±2.1)分,治疗护理有效的患者有30例。结论:给予应用IFNβ治疗的多发性硬化症患者多媒体健康教育模式来进行健康教育能够有效提高患者护理满意度、护理依从性和临床护理疗效,此种健康教育的模式应在临床上得到推广使用。 展开更多
关键词 多媒体健康教育 IFNβ治疗 多发性硬化症 护理满意度
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重组人干扰素β1b中ox-IFN β1b含量测定
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作者 于雷 韩春梅 +3 位作者 李永红 陶磊 裴德宁 饶春明 《药物分析杂志》 CSCD 北大核心 2018年第11期1881-1886,共6页
目的:建立重组人干扰素β1b(IFN β1b)中氧化型干扰素(ox-IFN β1b)的测定方法。方法:RP-HPLC色谱条件:RP-C8色谱柱(Grace Vydac,4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40℃,0.1%TFA-10%乙腈-水溶液为流动相A,0.1%TFA-乙腈溶液为流动... 目的:建立重组人干扰素β1b(IFN β1b)中氧化型干扰素(ox-IFN β1b)的测定方法。方法:RP-HPLC色谱条件:RP-C8色谱柱(Grace Vydac,4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40℃,0.1%TFA-10%乙腈-水溶液为流动相A,0.1%TFA-乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min~(-1),检测波长214 nm。结果:ox-IFN β1b峰与峰3的分离度约为4.0,理论塔板数大于20 000;6次进样的RSD小于5.0%;2个厂家共6批IFN β1b原液中均检出ox-IFN β1b,用面积归一化法计算百分含量为0.47%~0.96%。结论:新建方法可有效分离和测定不同厂家IFN β1b原液中的ox-IFN β1b,对IFN β1b质量标准的提高具有重要意义。 展开更多
关键词 相关蛋白 重组人干扰素β1b 氧化型干扰素β1b 反相高效液相色谱法 质量控制
驯鹿干扰素β1基因的克隆及遗传进化分析 预览
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作者 翟健程 王强辉 +1 位作者 夏彦玲 李和平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2017年第12期3570-3577,共8页
试验旨在从驯鹿鹿茸顶端组织中克隆干扰素β1(interferonbeta1,IFNβ1)基因全长序列,分析其分子特性,为研究其生物学活性及实际应用奠定基础。根据GenBank数据库中牛、羊等近缘物种IFNβ1基因的保守序列设计1对引物,以驯鹿鹿茸顶... 试验旨在从驯鹿鹿茸顶端组织中克隆干扰素β1(interferonbeta1,IFNβ1)基因全长序列,分析其分子特性,为研究其生物学活性及实际应用奠定基础。根据GenBank数据库中牛、羊等近缘物种IFNβ1基因的保守序列设计1对引物,以驯鹿鹿茸顶端间充质层组织基因组DNA为模板,采用PCR技术扩增得到驯鹿IFNβ1基因并克隆、测序,利用相关生物信息学软件对该序列进行分析。结果发现,驯鹿IFNβ1基因全长561bp,共编码186个氨基酸,含有3个糖基化位点;其编码蛋白含有4个α螺旋、4个β折叠区、7个β转角。将驯鹿IFNβ1基因推导的氨基酸序列与其他14种哺乳动物进行遗传进化分析发现,其同源性为45.1%~92.0%;驯鹿与其他动物IFNβ1基因序列分析和系统进化树分析表明,IFNβ1基因存在种属差异性,亲缘关系越近,同源性越高。本研究结果为驯鹿IFNβ1基因的进一步研究和应用提供了基础试验数据。 展开更多
关键词 驯鹿 IFNβ1基因 序列分析 遗传进化
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基于TRIF-IFNβ信号通路补阳还五汤抗气虚血瘀证脑缺血损伤作用 被引量:4
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作者 潘琳娜 杨旸 +1 位作者 樊萍 黄坤 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2119-2121,共3页
目的观察补阳还五汤对气虚血瘀证小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及其机制。方法采用饥饿、劳累、高脂饮食等多因素复合制作出气虚血瘀证模型,然后用线栓法在左侧大脑中动脉栓塞2h复灌24h诱导小鼠的脑缺血再灌注损伤模型。实验动物随机... 目的观察补阳还五汤对气虚血瘀证小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及其机制。方法采用饥饿、劳累、高脂饮食等多因素复合制作出气虚血瘀证模型,然后用线栓法在左侧大脑中动脉栓塞2h复灌24h诱导小鼠的脑缺血再灌注损伤模型。实验动物随机分为正常对照组、假手术组、模型组、Poly I:C(Polyinosinic polycytidylic acid)组、补阳还五汤低剂量组、补阳还五汤中剂量组、补阳还五汤高剂量组。脑组织切片TTC染色测定脑梗死体积;ELISA检测小鼠脑组织匀浆炎性因子TNF-ɑ、IL-6、IFN-β、IL-10的含量。Western-blot方法检测缺血侧半脑脑组织TRIF蛋白表达。结果采用饥饿、劳累、高脂、饮食控制多因素复合制作出气虚血瘀证模型,不同组别动物造模后出现不同程度气虚血瘀证症状,补阳还五汤能改善气虚血瘀症状。左侧大脑中动脉栓塞2h复灌24h能稳定地制作小鼠气虚血瘀型脑缺血再灌注损伤模型,小鼠出现明显的脑组织梗死,缺血复灌24h缺血侧脑组织TNF-ɑ、IL-6表达升高。予0.3mg/kg Poly I:C及补阳还五汤均能减少梗死面积,改善神经缺陷,提高小鼠缺血侧脑组织TRIF蛋白的表达,降低缺血再灌24h缺血侧脑组织TNF-ɑ和IL-6的含量并升高IFN-β及IL-10水平。结论补阳还五汤对气虚血瘀证小鼠脑缺血有保护作用,保护机制与激动TLR3下游TRIF-IFNβ信号通路,进而增加抗炎因子分泌及减少致炎因子产生及有关。 展开更多
关键词 补阳还五汤 气虚血瘀型 脑缺血 TRIF-IFNβ信号通路 炎性因子
共表达蛋白质折叠辅助因子对毕赤酵母分泌表达IFNβ-HSA融合蛋白质的影响 预览 被引量:1
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作者 陈凤祥 关波 +3 位作者 陈蕴 段作营 金坚 李华钟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1246-1250,共5页
探索共表达蛋白质折叠辅助因子Ero1、PDI和BiP对毕赤酵母GS115分泌表达融合蛋白质IFNβ-HSA的影响.将构建的蛋白质折叠辅助因子表达载体pGAP-Ero1、pGAP-PDI、pGAP-BiP和空载对照线性化后,电击转化重组毕赤酵母GS115/IFNβ-HSA细胞,用含... 探索共表达蛋白质折叠辅助因子Ero1、PDI和BiP对毕赤酵母GS115分泌表达融合蛋白质IFNβ-HSA的影响.将构建的蛋白质折叠辅助因子表达载体pGAP-Ero1、pGAP-PDI、pGAP-BiP和空载对照线性化后,电击转化重组毕赤酵母GS115/IFNβ-HSA细胞,用含有400 μg/mLzeocin的YPD平板筛选阳性转化子,并采用PCR和Western blot法进一步鉴定.阳性转化子进行摇瓶发酵后,采用SDS-PAGE及Western blot法分析共表达Ero1、PDI和BiP对IFNβ-HSA表达水平的影响.结果表明,Ero1、PDI和BiP成功地在胞内过量表达,且不影响宿主细胞的正常生长;共表达Ero1和PDI分别使IFNβ-HSA的表达量提高了80%和90%,而共表达BiP则对IFNβ-HSA的表达水平无明显影响. 展开更多
关键词 蛋白质折叠辅助因子 融合蛋白质IFNβ-HSA 毕赤酵母 内质网氧化还原酶 二硫键异构酶 分子伴侣BiP
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重组人干扰素β1a生物学活性MTS/PMS检测方法的建立
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作者 张慧娟 王军 +1 位作者 慕彩梅 王妍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第10期1373-1377,1382共6页
目的建立重组人干扰素β1a(Recombimant human interferon betala,rhIFNβ1a)生物学活性MTS/PMS检测方法。方法将MTS和PMS偶联作为染色液,建立IFNIMa生物学活性检测方法,对细胞浓度、细胞病变时间、MTS工作浓度和染色时间进行优... 目的建立重组人干扰素β1a(Recombimant human interferon betala,rhIFNβ1a)生物学活性MTS/PMS检测方法。方法将MTS和PMS偶联作为染色液,建立IFNIMa生物学活性检测方法,对细胞浓度、细胞病变时间、MTS工作浓度和染色时间进行优化,并绘制效应曲线。对建立的方法进行重复性、准确性验证,并与结晶紫染色法进行比较。结果优化后的MTS/PMS法的最佳反应条件为:细胞浓度1×10^5个/ml,细胞病变时间24-36h,MTS工作浓度2mg/ml,染色时间40min;A570/630值与IFNβ1a保护Wish细胞S型效应曲线的相关系数(R。)均达0.99以上。不同检测板、相同加样位置的变异系数在6%-20%之间;相同检测板、不同加样位置的变异系数在13%-17%之间;检测IFNβ1a细胞收集液的回收率在86%-121%之间。该法检测rhlFNβ1a生物学活性效应曲线呈反“S”型,线型较好,R^2值均在0.99以上,均比结晶紫染色法的R^2值高,且比结晶紫染色法更稳定。结论已建立了rhlFNβ1a生物学活性MTS/PMS检测方法,适用于常规定量测定rhlFNβ1a的生物学活性。 展开更多
关键词 干扰素β1a 生物学活性 MTS PMS染色法
重组人干扰素β表达体系及其适应证的研究进展 被引量:4
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作者 黄志斌(综述) 党建章(综述) 王妍(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期117-120,共4页
干扰素β(Interferon β,IFNβ)具有抗病毒、抗增殖及免疫调节活性等生物学功能。重组人干扰素β(rhIFNβ)产品在临床上的应用极为广泛,但国内目前尚无自主研制的rhIFNβ药物上市。有两项临床研究为以大肠杆菌为表达体系,国内目前... 干扰素β(Interferon β,IFNβ)具有抗病毒、抗增殖及免疫调节活性等生物学功能。重组人干扰素β(rhIFNβ)产品在临床上的应用极为广泛,但国内目前尚无自主研制的rhIFNβ药物上市。有两项临床研究为以大肠杆菌为表达体系,国内目前正在进行用CHO细胞表达rhIFNβ1a的研究。本文对rhIFNβ的生物活性、结构、表达体系、临床治疗多发性硬化症(Multiple selerosis,MS)及新增适应证作一综述。 展开更多
关键词 干扰素Β 表达体系 多发性硬化 适应证
提高重组表达体系相对活性促进外源蛋白表达:人干扰素毕赤酵母表达体系研究 预览 被引量:1
15
作者 窦文芳 张旦旦 +4 位作者 许泓瑜 金坚 许正宏 史劲松 陆震鸣 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期 11-15,共5页
以毕赤酵母KM71/IH的hIFNβ-HAS表达体系为研究对象,较为系统地研究了不同因素引起的细胞相对活性变化与毕赤酵母外源蛋白表达的相关性。结果表明:(1)细胞相对活性变化与外源蛋白的表达成正相关;(2)处在对数生长中后期的细胞相对... 以毕赤酵母KM71/IH的hIFNβ-HAS表达体系为研究对象,较为系统地研究了不同因素引起的细胞相对活性变化与毕赤酵母外源蛋白表达的相关性。结果表明:(1)细胞相对活性变化与外源蛋白的表达成正相关;(2)处在对数生长中后期的细胞相对活性最高,更适合用于外源蛋白的表达;(3)诱导阶段的环境因素直接影响诱导期细胞相对活性,合适的甲醇浓度、诱导pH及温度是维持细胞高活性,促进外源蛋白高表达的关键。对于hIFNβ-HAS表达体系最佳诱导条件为:以培养21~24h的细胞为诱导种子,初始甲醇浓度为2%(V/V),pH6.0,25℃,细胞活性维持在98%以上,hIFNβ-HSA表达量高达45.6mg/L,较优化前提高了62.3%。 展开更多
关键词 毕赤酵母 细胞相对活性 外源蛋白表达 β干扰素
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双抗体夹心ELISA定量检测IFNβ-HSA融合蛋白方法的建立 预览 被引量:6
16
作者 张立操 张莲芬 +6 位作者 雷楗勇 陈其亮 陈蕴 许泓瑜 许正宏 张雁云 金坚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期 121-125,共5页
为了建立β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HSA)的酶联免疫定量分析方法,以抗IFNβ单克隆抗体为包被抗体,IFNβ—HSA融合蛋白为夹心抗原,辣根过氧化酶(HRP)标记抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定IFNβ—HSA融... 为了建立β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HSA)的酶联免疫定量分析方法,以抗IFNβ单克隆抗体为包被抗体,IFNβ—HSA融合蛋白为夹心抗原,辣根过氧化酶(HRP)标记抗HSA单克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定IFNβ—HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法。并进行了检测限、精密度、准确度和稳定性等方法学考核。结果表明,包被抗体和检测抗体的最佳工作浓度均为2μg/ml,抗原浓度在51.88-3320ng/ml范围内呈良好线性关系,相关系数R^2〉0.99.检测限为10ng/ml。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为4.86%和8.08%,回收率为91.9%~110.4%,与IFN—β、IFN—α、HSA、IFNα2b—HSA基本无交叉反应,健全性分析表明发酵液稀释倍数对该方法无影响,8d连续检测标准曲线表明稳定性良好。这种定量检测IFNβ—HSA融合蛋白的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为当前融合蛋白发酵优化、分离纯化研究提供了定量检测的方法,并为后期药代动力学、临床研究提供了思路和备选方法。 展开更多
关键词 双抗体夹心 酶联免疫分析 Β干扰素 人血清白蛋白 融合蛋白 定量分析
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重组毕氏酵母中降解hIFNβ-HSA蛋白酶的鉴定及其活性控制 预览 被引量:1
17
作者 宋一丹 窦文芳 +3 位作者 许泓瑜 金坚 陆茂林 许正宏 《生物加工过程》 CAS CSCD 2008年第5期 50-54,共5页
研究了重组毕赤酵母KM71/pPIC9K—IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ—HSA过程中产物降解的问题。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和Western—Blotting分析结果表明,发酵液中除了9.0×10^4的目的融合蛋白hIFNβ-HSA... 研究了重组毕赤酵母KM71/pPIC9K—IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ—HSA过程中产物降解的问题。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和Western—Blotting分析结果表明,发酵液中除了9.0×10^4的目的融合蛋白hIFNβ-HSA外,同时还出现了6.5×10^4的降解带,进一步结合HPLC分析证实该降解发生在融合蛋白hIFNβ—HSA的HSA区域。在此基础上,采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)活性电泳的方法,确定在融合蛋白hIFNβ-HSA表达的过程中,引起融合蛋白hIFNβ-HSA降解的蛋白酶为蛋白酶B(Proteinase B,PrB)。最后,确定了可以抑制融合蛋白hIFNβ-HSA降解的最佳的蛋白酶抑制剂EDTA,通过在诱导表达阶段添加不同浓度的蛋白酶抑制剂EDTA,使融合蛋白的表达量达到22.18mg/mL,与空白对照组相比增加了61%。 展开更多
关键词 毕赤酵母 蛋白酶 SDS—PAGE 高效液相色谱 β干扰素-血清白融合蛋白 抑制剂
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提高重组毕赤酵母表达hIFNβ-HSA的碳源控制策略 预览 被引量:2
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作者 张宏斌 窦文芳 +3 位作者 许泓瑜 金坚 李华钟 许正宏 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期 1181-1186,共6页
研究了重组毕赤酵母KM71/IH菌体生长阶段饥饿培养对其细胞相对活性及人β干扰素-血清白蛋白融合蛋(hIFNβ-HSA)表达的影响.结果表明,在以甘油为唯一碳源的细胞培养后期进行饥饿培养以耗尽培养基中的甘油会导致重组细胞相对活性的... 研究了重组毕赤酵母KM71/IH菌体生长阶段饥饿培养对其细胞相对活性及人β干扰素-血清白蛋白融合蛋(hIFNβ-HSA)表达的影响.结果表明,在以甘油为唯一碳源的细胞培养后期进行饥饿培养以耗尽培养基中的甘油会导致重组细胞相对活性的降低,进而减少hIFNβ-HSA的表达量.在此基础上,提出了菌体培养后期,即过渡阶段流办甘露醇碳源h代替饥饿培养的策略,不仅可以消除培养液中甘油残留对甲醇诱导表达hIFNβ-HSA的不利影响,而且劁够保持重组细胞培养物较高的相对活性(〉97%),从而可以提高甲醇诱导表达hIFNβ-HSA的水平,表达量可达37.3mg/L,最大生产强度为0.78mg/(L-h),较对照分别提高了92.3%和44.4% 展开更多
关键词 巴斯德毕赤酵母 细胞相对活性 非抑制表达碳源 β干扰素-血清白融合蛋白
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Interferon β-1a alone or in combination with ribavirin: A randomized trial to compare efficacy and safety in chronic hepatitis C 预览
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作者 Rinaldo Pellicano Antonio Craxi +12 位作者 Piero Luigi Almasio Mario Valenza Giovanna Venezia Alfredo Alberti Silvia Boccato Luigi Dernelia Orazio Sorbello Antonino Picclotto Francesco Torre Gaetano Ideo Carlo Cattaneo Mara Berrutti Mario Rizzetto 《世界胃肠病学杂志:英文版(电子版)》 SCIE CAS CSCD 2005年第29期4484-4489,共6页
AIM: To compare the efficacy and safety of recombinant human IFN β-1a alone or in combination with ribavirin in treatment-na(i)ve subjects with chronic hepatitis C.METHODS: Open, randomized trial was performed in 6 I... AIM: To compare the efficacy and safety of recombinant human IFN β-1a alone or in combination with ribavirin in treatment-na(i)ve subjects with chronic hepatitis C.METHODS: Open, randomized trial was performed in 6 Italian tertiary centers: 102 of the 108 patients screened were randomized to receive 6 MIU of recombinant human IFN β-1a subcutaneously daily for 24 wk, alone (Group 1, n = 51) or in combination with ribavirin 1 000 to 1 200 mg/d (Group 2, n = 51).RESULTS: The end-of-treatment virologic response rate was 29.4% in Group 1 and 41.2% in Group 2 (non-significant). Twenty-four weeks after stopping therapy,sustained virologic response rate was 21.6% in Group 1 and 27.4% in Group 2 (non-significant). All subjects in Group 1 completed treatment, while two subjects in Group 2 stopped therapy due to treatment-related adverse events.CONCLUSION: Recombinant human IFN β-1a, alone or in combination with ribavirin, has an excellent safety profile and, may represent an alternative for chronic hepatitis C patients who are unable to tolerate pegylated α-interferon. 展开更多
关键词 干扰素β-1a 化合物 病毒唑 慢性乙型肝炎
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IFNβ基因编码序列在SV40早期启动子控制下在中国地鼠卵细胞中表达 预览 被引量:3
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作者 王晓鸣 吴淑华 《遗传学报》 SCIE CAS CSCD 1989年第4期 312-317,共6页
含有人成纤维细胞干扰素(IFNβ)基因编码序列的HindⅡ片段,去掉了IFNβ基因5′全部侧翼调控序列,与SV40早期区RNA起始部位下游60个bp处连接,与可选择标记二氢叶酸还原酶(dhfr)基因一道共转化dhfr缺陷的中国地鼠卵(CHO)细胞,经过初步筛选... 含有人成纤维细胞干扰素(IFNβ)基因编码序列的HindⅡ片段,去掉了IFNβ基因5′全部侧翼调控序列,与SV40早期区RNA起始部位下游60个bp处连接,与可选择标记二氢叶酸还原酶(dhfr)基因一道共转化dhfr缺陷的中国地鼠卵(CHO)细胞,经过初步筛选,在未经病毒等诱导条件下,在转化细胞株中测到构成性表达水平为852U/2×10~6细胞·ml·48小时的IFNβ干扰素活性。 展开更多
关键词 IFNβ基因 启动子 组成性表达
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