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文章速递日本血吸虫SjGrpE蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备 认领
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作者 肖非 胡智 +1 位作者 谭潇 黄泽智 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期355-360,共6页
目的分析日本血吸虫核苷酸交换因子(SjGrpE)蛋白生物学特性,表达与纯化重组SjGrpE蛋白并测定其免疫原性。方法采用生物信息学方法预测SjGrpE蛋白的氨基酸组成、分子量、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、定位、磷酸化位点、泛素化位点、糖基... 目的分析日本血吸虫核苷酸交换因子(SjGrpE)蛋白生物学特性,表达与纯化重组SjGrpE蛋白并测定其免疫原性。方法采用生物信息学方法预测SjGrpE蛋白的氨基酸组成、分子量、亲/疏水性、跨膜区、信号肽、定位、磷酸化位点、泛素化位点、糖基化位点、二级和三级结构及B细胞表位。以日本血吸虫cDNA为模板,PCR扩增SjGrpE基因,将其双酶切后连接到pET28a载体得到重组质粒pET28a-SjGrpE。将pET28a-SjGrpE转化大肠埃希菌BL21,用IPTG诱导目的蛋白表达,并用镍离子亲和层析法纯化蛋白。将重组SjGrpE蛋白免疫小鼠,分离血清并鉴定获得的抗多克隆抗体。结果SjGrpE蛋白分子量约为24.3 kDa,是一种亲水性蛋白,无跨膜区、无信号肽,定位在线粒体;该蛋白含有18个磷酸化位点和2个泛素化位点,无糖基化位点,含有5个B细胞表位。SjGrpE基因全长为660 bp,成功构建重组质粒pET28a-SjGrpE并纯化获得重组SjGrpE蛋白。重组SjGrpE蛋白能够刺激小鼠分泌高滴度抗体。结论成功制备重组SjGrpE蛋白,该蛋白具有良好免疫原性,为后续研究其作为日本血吸虫病疫苗候选分子的价值奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 GrpE蛋白 免疫原性 生物信息学分析
文章速递溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统C-环组分VscQ的原核表达及免疫原性 认领
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作者 曾福源 伍艳清 +6 位作者 邱明生 武沛文 周诗慧 王俊霖 简纪常 谢妙 庞欢瑛 《安徽农学通报》 2020年第18期101-105,共5页
为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901菌株III型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)胞质环(C-环)组分VscQ作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌vscQ序列(NO.MN862753),设计1对带酶切位点的特异性引物,... 为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY9901菌株III型分泌系统(Type III secretion system,T3SS)胞质环(C-环)组分VscQ作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌vscQ序列(NO.MN862753),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscQ基因,进行序列分析。结果显示,该基因全长969bp,预计分子量35.61kDa。将vscQ基因定向插入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEXvscQ。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,能在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为61.6kDa的VscQ融合蛋白。VscQ蛋白表达的最优条件为:0.4mmol/L IPTG,15℃条件下诱导12h。用纯化后的VscQ融合蛋白免疫白兔,获得高效多克隆抗体,抗体效价为1∶121500。兔抗VscQ血清能与重组VscQ蛋白发生特异性反应,表明T3SS C-环组分VscQ可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 VscQ Ⅲ型分泌系统 原核表达 免疫原性
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PCV2b衣壳蛋白C端连接不同B细胞表位对其免疫原性的影响 认领
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作者 刘晴坤 冯华 +3 位作者 任春晓 魏蔷 刘运超 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期233-238,共6页
为了研制廉价高效的猪圆环病毒2型(PCV2)亚单位疫苗,根据大肠杆菌密码子的偏好性合成PCV2b(GenBank:AY969004.1)cap基因全序列,利用PCR技术,分别将PCV2的2个B细胞表位(226LKDPPLNP233和195HVGLGTAF202)以单独和串联的方式连接到Cap的C端... 为了研制廉价高效的猪圆环病毒2型(PCV2)亚单位疫苗,根据大肠杆菌密码子的偏好性合成PCV2b(GenBank:AY969004.1)cap基因全序列,利用PCR技术,分别将PCV2的2个B细胞表位(226LKDPPLNP233和195HVGLGTAF202)以单独和串联的方式连接到Cap的C端,成功构建至pE-SUMO表达载体,将3个重组载体转化表达菌株BL21(DE3)后诱导表达,经SDS-PAGE分析和Western Blotting鉴定,3种重组蛋白均以可溶形式表达且表达正确。对3种重组蛋白分别进行镍柱亲和层析纯化,再用SUMO蛋白酶除去融合标签,获得无标签的Cap-e1、Cap-e2和Cap-e12蛋白,并分别与相应的弗氏佐剂等体积乳化,将20只6周龄大小的雌性Balb/c小鼠随机分成5组,分别免疫3种重组蛋白,同时设置疫苗组和PBS组作为对照组,并进行免疫评价,比较C末端连接的不同B细胞表位对Cap免疫原性的影响。抗体检测结果表明,除第2周外,各试验组的抗体水平均显著高于PBS组,且连接2个表位的Cap-e12蛋白产生的抗体水平高于只连接1个表位的蛋白(Cap-e1、Cap-e2),而在第6周时,Cap-e12蛋白抗体水平与疫苗组无显著差异。综上Cap的免疫原性与连接表位数量有关,连接2个表位后能显著提高Cap的免疫原性。 展开更多
关键词 猪圆环2型病毒 小分子泛素相关修饰物 衣壳蛋白 B细胞表位 免疫原性
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A群C群脑膜炎球菌结合疫苗安全性和免疫原性 认领
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作者 胡家垒 胡月梅 +4 位作者 梁祁 储凯 李靖欣 孟繁岳 朱凤才 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期765-770,共6页
目的评价A群C群脑膜炎球菌结合疫苗的安全性和免疫原性。方法于2016年5月—2017年9月,选取江苏省淮安市涟水县辖区内1799名3月龄~5岁婴幼儿进行III期临床试验,按照1:1的比例随机接种试验或对照疫苗。其中3~5月龄和6~11月龄试验组受试者... 目的评价A群C群脑膜炎球菌结合疫苗的安全性和免疫原性。方法于2016年5月—2017年9月,选取江苏省淮安市涟水县辖区内1799名3月龄~5岁婴幼儿进行III期临床试验,按照1:1的比例随机接种试验或对照疫苗。其中3~5月龄和6~11月龄试验组受试者在18月龄时进行加强免疫。每针次接种后对受试者进行安全性观察,并采集各年龄组受试者免疫前、基础免疫后28 d以及3~5月龄和6~11月龄组受试者18月龄和加强免疫后28 d的血清样本进行免疫原性观察。结果2~5岁、12~23月龄、6~11月龄和3~5月龄试验组,总体征集性不良反应发生率分别为33.11%,58.28%,75.33%和85.62%,以1级(轻度)不良反应为主,试验组与对照组比较差异均无统计学意义;基础免疫后,各试验组A群抗体阳转率分别为98.60%,100%,100%和96.56%,C群抗体阳转率分别为81.21%,98.52%,96.35%和97.70%,其中6~11月龄试验组与对照组A群抗体阳转率差异有统计学意义(χ^26~11M=11.5546,P=0.0007)其他年龄试验与对照组差异均无统计学意义,试验组均非劣效于对照组。3~5月龄和6~11月龄组加强免疫后,A群和C群阳转率几乎均达100%。结论试验组A群C群脑膜炎球菌结合疫苗在3月龄~5岁易感人群中具有良好的安全性和免疫原性。 展开更多
关键词 A群C群脑膜炎球菌结合疫苗 安全性 免疫原性
昆虫细胞-杆状病毒系统分泌表达的猪瘟病毒E2蛋白及其免疫原性研究 认领
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作者 王遵宝 贺笋 +5 位作者 李俊辉 刘宏 豆智华 郑侃 李森江 寇春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期383-388,共6页
为研制新型、可用于区分野毒感染、助力猪瘟净化的亚单位疫苗,本研究参考了近年来国内猪瘟病毒(CSFV)流行株的E2基因序列,并根据昆虫细胞密码子偏嗜性对其进行优化、合成后,克隆至转移载体中,构建了重组质粒,随后转化至含有穿梭质粒的... 为研制新型、可用于区分野毒感染、助力猪瘟净化的亚单位疫苗,本研究参考了近年来国内猪瘟病毒(CSFV)流行株的E2基因序列,并根据昆虫细胞密码子偏嗜性对其进行优化、合成后,克隆至转移载体中,构建了重组质粒,随后转化至含有穿梭质粒的大肠杆菌DH10Bac,制备了重组杆粒并转染至SF9细胞,获得了表达E2基因的重组杆状病毒。间接免疫荧光试验和western blot检测结果显示该杆状病毒感染昆虫细胞后可正确表达E2蛋白(Bac-E2)。将Bac-E2(50μg/头份)与猪瘟兔化弱毒疫苗[HCLV,7500半数兔体感染剂量(RID50)/头份]分别免疫猪瘟抗体阴性仔猪,3周后用相同的剂量加强免疫。首免后5周Bac-E2组猪CSFV中和抗体均不低于11024,显著高于HCLV组(p<0.01);首免后35 d,利用105.0MLD(最小致死剂量)的CSFV石门强毒经耳后颈部肌肉注射攻毒后,Bac-E2和HCLV组猪的保护率均为100%,阴性对照组猪全部发病、死亡;采用荧光定量PCR检测各组猪口腔和肛门拭子中CSFV的排毒情况,结果显示Bac-E2和HCLV组猪攻毒后0~16 d的咽拭子及肛拭子中均未检测到CSFV核酸。阴性对照组猪攻毒后第4 d至濒死前均可在其拭子中检出高拷贝CSFV核酸。本研究为Bac-E2蛋白作为猪瘟亚单位疫苗的候选抗原蛋白奠定了研究基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 昆虫细胞 杆状病毒 免疫原性
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鸡肠炎沙门氏菌外膜蛋白F的原核表达及免疫原性分析 认领
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作者 徐静怡 高瑶 +1 位作者 周铁忠 李冰 《现代畜牧兽医》 2020年第3期7-12,共6页
根据GenBank中收录的鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌辽宁分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因,用IEDB Analysis Resource在线预测分析,该基因可能存在15个线性B细胞抗原表位;同时将该基因克隆至原... 根据GenBank中收录的鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌辽宁分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因,用IEDB Analysis Resource在线预测分析,该基因可能存在15个线性B细胞抗原表位;同时将该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-OmpF,转入大肠杆菌BL21中,获得OmpF重组蛋白。Western-blot检测结果表明,该重组蛋白的分子质量约为66 kD(含标签蛋白),能被鸡沙门氏菌阳性血清识别,初步证实该蛋白具有免疫原性,为鸡肠炎沙门氏菌亚单位疫苗的进一步研究和开发奠定了理论基础。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 OmpF基因 原核表达 免疫原性
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无针皮内免疫接种Sabin IPV疫苗的安全性及免疫原性研究 认领
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作者 朱文勇 蔡玮 +8 位作者 王东宝 杨伟 孙溢 胡文著 宋绍辉 李卫东 廖国阳 陈洪波 马磊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期394-399,共6页
全球消灭脊髓灰质炎野病毒后,必须全面使用脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)才能维持无脊灰状态,然而IPV成本较高,难以满足全球需要。皮内免疫途径能够降低Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)(Inactivated pol... 全球消灭脊髓灰质炎野病毒后,必须全面使用脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated poliovirus vaccine,IPV)才能维持无脊灰状态,然而IPV成本较高,难以满足全球需要。皮内免疫途径能够降低Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)(Inactivated poliovirus vaccine derived from Sabin strains,sIPV)的抗原量,本研究将评估无针皮内免疫sIPV的安全性及免疫原性。本研究采用中国医学科学院医学生物学研究所生产的sIPV进行1/5(0.1 ml)剂量无针皮内免疫接种Wistar大鼠,并设计全剂量肌肉免疫对照组以及无针皮内免疫阴性对照组,按0月、1月、2月基础免疫程序,于免疫前及每剂免疫后第30 d采血,检测血清中和抗体水平,评价免疫原性,并通过观察大鼠的皮肤刺激反应及豚鼠的全身过敏反应,评价安全性。Wistar大鼠3剂免疫后,1/5剂量皮内免疫组与全剂量肌肉免疫组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型抗体阳转率均达到100%,各型别中和抗体几何平均滴度(Geometric mean titer,GMT)均远高于1∶8保护水平。大白鼠接种疫苗后体重增加,皮肤刺激试验及全身过敏反应试验结果表明无针皮内免疫sIPV具有良好的安全性。本研究结果表明sIPV疫苗无针皮内注射免疫安全、有效,并可降低sIPV的抗原量,可为全球消灭脊髓灰质炎提供可负担得起的疫苗。 展开更多
关键词 Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV) 皮内免疫 安全性 免疫原性
A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗在广东省2~6岁儿童的免疫原性和免疫持久性研究 认领
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作者 范仁锋 汤妍 +5 位作者 苏家立 夏艳辉 黄竹航 李苑 曾培宇 张吉凯 《广东医学》 CAS 2020年第12期1241-1244,共4页
目的评价A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗(Group A and group C meningococcal polysaccharide vaccine,MPV-AC)在广东省2~6岁儿童接种后的免疫原性和免疫持久性。方法选择广东省高州市529例2~6岁儿童作为研究对象,接种1剂次MPV-AC。分别采集... 目的评价A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗(Group A and group C meningococcal polysaccharide vaccine,MPV-AC)在广东省2~6岁儿童接种后的免疫原性和免疫持久性。方法选择广东省高州市529例2~6岁儿童作为研究对象,接种1剂次MPV-AC。分别采集免疫前、免疫后1个月、免疫后2年血清。采用血清杀菌力试验检测血清抗体水平,评价其免疫原性和免疫持久性。结果受试者免疫后1个月A群、C群抗体阳转率分别为89.60%和90.93%;受试者免疫前、免疫后1个月和免疫后2年A群抗体阳性率分别为15.69%、90.36%和19.55%,C群抗体阳性率分别为5.48%、92.25%、20.54%。受试者免疫后1个月A群、C群抗体几何平均滴度(GMT)与免疫前比差异有统计学意义(t=43.583,P<0.001;t=52.732,P<0.001),免疫后2年A群、C群抗体GMT与免疫前比差异有统计学意义(t=2.470,P值=0.014;t=7.126,P<0.001)。结论MPV-AC在2~6岁儿童中接种具有良好的免疫原性,在免疫后1个月能达到较好的保护效果,免疫后2年A群、C群抗体下降明显。 展开更多
关键词 MPV-AC 免疫原性 免疫持久性
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复发缓解型多发性硬化症的治疗用生物制剂临床研究进展 认领
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作者 赵宇晗 张凌凡 +3 位作者 李智慧 杨也 倪娜 陈燕 《世界临床药物》 CAS 2020年第6期479-484,共6页
多发性硬化症(multiple sclerosis)是一种中枢神经系统自身免疫性疾病,属于慢性炎症性脱髓鞘性疾病,在我国属罕见病。目前临床用于治疗复发缓解型多发性硬化症的一线用药主要有干扰素β(interferonβ)、聚乙二醇干扰素-β1a(pegylated i... 多发性硬化症(multiple sclerosis)是一种中枢神经系统自身免疫性疾病,属于慢性炎症性脱髓鞘性疾病,在我国属罕见病。目前临床用于治疗复发缓解型多发性硬化症的一线用药主要有干扰素β(interferonβ)、聚乙二醇干扰素-β1a(pegylated interferon-β1a)、醋酸格拉替雷(glatiramer acetate)、特立氟胺(teriflunomide)及富马酸二甲酯(dimethyl fumarate)。本文对近年来用于治疗复发缓解型多发性硬化症的治疗用生物制剂临床研究进展作一简要概述。 展开更多
关键词 多发性硬化症 治疗用生物制剂 临床研究 安全性 免疫原性
森林脑炎病毒包膜E蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性初步评价 认领
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作者 邴振虹 王兰菊 +8 位作者 周永飞 常东英 张健锋 王伟 韩顺子 常军亮 孙宏亮 曹玉锋 邹勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第5期489-492,497,共5页
目的原核表达及纯化森林脑炎病毒(tick-bome encephalitisvirus,TBEV)包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性。方法采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-TBEV E,转化感受态E.coli BL21(DE3),挑取... 目的原核表达及纯化森林脑炎病毒(tick-bome encephalitisvirus,TBEV)包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性。方法采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-TBEV E,转化感受态E.coli BL21(DE3),挑取阳性克隆,扩增后经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导,表达产物经12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。将鉴定正确的重组蛋白采用镍柱亲和法纯化,铝佐剂吸附后,经小鼠左侧腹腔注射,0.5 mL/只,间隔1周加强免疫1次,末次免疫后7、14、21、28、35、42、49 d,经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法测定小鼠血清抗体水平。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-28a-TBEV E构建正确。表达产物相对分子质量约55000,主要以包涵体形式表达,表达量约22.3%,且可与小鼠抗TBEV血清发生特异反应,纯化后纯度达90%。末次免疫后21 d,小鼠血清抗体效价达最高,为1∶6400。结论经原核表达系统成功表达并纯化了TBEV E蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,本实验为TBEV诊断制剂及基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 森林脑炎病毒 包膜E蛋白 基因重组 原核表达 免疫原性
脊髓灰质炎灭活疫苗(Sabin株)与Ⅰ+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗不同剂次基础免疫的免疫原性和安全性比较 认领
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作者 刘艳 王骏 +5 位作者 许玉洋 章国平 江剑 张学潮 王芳 许二萍 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期453-458,共6页
目的比较Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)与Ⅰ+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)(bOPV)液体剂型作为基础免疫以不同接种序贯接种于≥2月龄婴儿中的免疫原性和安全性。方法2017—2018年,采用随机、盲法、单中心、平行对照设计,... 目的比较Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(sIPV)与Ⅰ+Ⅲ型脊髓灰质炎减毒活疫苗(人二倍体细胞)(bOPV)液体剂型作为基础免疫以不同接种序贯接种于≥2月龄婴儿中的免疫原性和安全性。方法2017—2018年,采用随机、盲法、单中心、平行对照设计,选择杭州市≥2月龄的婴儿为研究对象,将其分为1sIPV+2bOPV组、2sIPV+1bOPV组和3sIPV组,按照2、3、4月龄的免疫程序,共接种3剂。记录受试者接种后发生的不良反应事件;全程免疫后28~35 d,采集排除脱落者和违背试验方案者血样,采用细胞培养微量中和试验测定抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型中和抗体几何平均滴度(GMT),计算抗体阳转率,并对其进行统计学分析。结果1sIPV+2bOPV组、2sIPV+1bOPV组和3sIPV组全部不良反应发生率分别为3.57%、3.61%和1.19%(χ^2=1.190,P=0.552),均为一般反应。全程免疫后,1sIPV+2bOPV组、2sIPV+1bOPV组和3sIPV组Ⅰ型脊髓灰质炎病毒抗体阳转率分别为100%(84/84)、100%(83/83)和100%(84/84),Ⅱ型分别为81%(68/84)、96%(80/83)和99%(83/84)(χ^2=21.469,P<0.001),Ⅲ型分别为100%(84/84)、100%(83/83)和100%(84/84);Ⅰ型脊髓灰质炎病毒抗体GMT分别为1024.00、1015.48和982.61(F=2.742,P=0.066),Ⅱ型分别为16.81、107.94和218.85(F=33.570,P<0.001),Ⅲ型分别为990.75、990.36和613.92(F=37.886,P<0.001)。结论不同脊髓灰质炎基础免疫程序中,sIPV和bOPV在≥2月龄的婴儿中均具有良好的安全性和免疫原性,2sIPV+1bOPV组和3sIPV组较1sIPV+2bOPV组产生更高的Ⅱ型脊髓灰质炎病毒抗体GMT和阳转率,1sIPV+2bOPV组和2sIPV+1bOPV组较3sIPV组产生更高的Ⅲ型脊髓灰质炎病毒抗体GMT。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎 脊髓灰质炎病毒疫苗 免疫原性 安全性
绵羊李斯特菌为载体的结核多阶段T细胞表位疫苗的构建及评价 认领
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作者 刘婷 刘思静 +2 位作者 周玉真 张云雯 汪川 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-6,共6页
目的构建以绵羊李斯特菌(Listerria ivanovii,LI)为载体的表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)特征性抗原蛋白的疫苗候选菌株,并评价其生物安全性和免疫效果。方法将MTB早期感染、潜伏感染和复发阶段的4种抗原基因的细胞... 目的构建以绵羊李斯特菌(Listerria ivanovii,LI)为载体的表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)特征性抗原蛋白的疫苗候选菌株,并评价其生物安全性和免疫效果。方法将MTB早期感染、潜伏感染和复发阶段的4种抗原基因的细胞表位串联形成融合抗原基因,即多阶段结核杆菌抗原基因,命名为msv。将msv插入含有LI同源序列的打靶质粒,利用同源重组技术构建基因组整合msv抗原基因的重组LI菌株。观察重组菌株的体外生长情况,通过Western blot验证靶抗原蛋白的表达情况,测定重组菌株对C57BL/6小鼠的半数致死量(50%lethal dose,LD50),以0.1×LD50为免疫剂量,通过尾静脉接种小鼠,通过接种前及接种后1、2、3、5、7、14 d的血清谷丙转氨酶(ALT)水平、脏器载菌量和脏器病理切片评价疫苗候选株的安全性。为测定疫苗候选株的免疫效果,另取3组小鼠分别尾静脉免疫LI-msv、LI、NS,免疫后第9天制备脾悬液,流式细胞术检测分泌干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-2(IL-2)等细胞因子的CD4+T细胞和CD8+T细胞水平结果成功构建能表达多阶段结核杆菌抗原的疫苗候选株LI-msv。LI-msv对C57BL/6小鼠的LD50为3.3×10^8 CFU/只。通过尾静脉接种小鼠后,LI-msv主要在小鼠肝脏和脾脏内短期繁殖,7d后能被机体清除,对肝、脾的病理损伤时间短且可恢复;流式细胞术检测结果表明接种LI-msv的小鼠脾淋巴细胞分化出了特异的IFN-γ^+CD4^+T细胞和IFN-γ^+CD8^+T细胞,阳性细胞比率较相应载体对照组和生理盐水对照组高(P<0.005);特异性TNF-α^+CD4^+T细胞比率高于相应载体对照组(P<0.01)和生理盐水对照组(P<0.005),TNF-α^+CD8^+T细胞比率高于生理盐水对照组(P<0.005)结论成功构建了一株以LI为载体的表达结核杆菌多阶段抗原的疫苗候选株。该菌株具有生物安全性,且能诱导一定的特异性细胞免疫应答,有望作为结核疫苗� 展开更多
关键词 结核病 多阶段结核疫苗 绵羊李斯特菌 安全性 免疫效果
病毒样颗粒疫苗的研究进展及研发考虑要点 认领
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作者 凌媛 金苏 李敏 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期393-398,共6页
病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)是由病毒的一个或多个结构蛋白在表达系统内重组表达,并自行组装形成不含病毒遗传物质且不能复制、不具有感染能力的病毒样蛋白颗粒。VLP因具有和天然病毒颗粒类似的空间立体结构,可通过和病毒感... 病毒样颗粒(virus-like particles,VLP)是由病毒的一个或多个结构蛋白在表达系统内重组表达,并自行组装形成不含病毒遗传物质且不能复制、不具有感染能力的病毒样蛋白颗粒。VLP因具有和天然病毒颗粒类似的空间立体结构,可通过和病毒感染一样的途径提呈给免疫细胞,有效地诱导机体产生免疫保护反应。本文就目前VLP疫苗在预防疾病方面的研究进展,以及VLP疫苗基于目的基因选择、结构确证、生产质控对免疫原性影响的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 疫苗 目的基因 结构确证 免疫原性
20-49岁成人乙型肝炎疫苗不同免疫程序的免疫原性比较 认领
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作者 万咏梅 王富珍 +4 位作者 郑徽 张国民 张卫 姚军 崔富强 《中国疫苗和免疫》 北大核心 2020年第1期19-24,共6页
目的比较成人三种乙型肝炎疫苗(Hepatitis B vaccine,HepB)—汉逊酵母HepB(HepB-HP)、CHO细胞HepB(HepB-CHO)和酿酒酵母HepB(HepB-BC)不同免疫程序的免疫原性。方法在北京市和浙江省招募20-49岁成人,分为10μgHepB-HP、10μgHepB-CHO、1... 目的比较成人三种乙型肝炎疫苗(Hepatitis B vaccine,HepB)—汉逊酵母HepB(HepB-HP)、CHO细胞HepB(HepB-CHO)和酿酒酵母HepB(HepB-BC)不同免疫程序的免疫原性。方法在北京市和浙江省招募20-49岁成人,分为10μgHepB-HP、10μgHepB-CHO、10μgHepB-BC、20μgHepB-BC四个接种组,每组按HepB不同基础免疫程序接种,检测接种后1-2月乙型肝炎表面抗体(HBsAb),比较抗体阳性率和几何平均浓度(GMC)。结果四个组分别纳入研究对象430名、1513名、1350名、256名。10μgHepB-HP组0-1-2月(month,m)、0-1-3m、0-1-6m、0-1-12m程序HBsAb阳性率分别为71.57%、97.37%、100%、91.58%(x^2=65.89,P<0.001),GMC(mIU/mL)分别为116.70、381.27、915.36、918.23(F=32.01,P<0.001);10μgHepB-CHO组0-1-3m、0-1-6m、0-1-12m程序HBsAb阳性率分别为83.65%、88.55%、88.17%(x^2=6.78,P=0.034),GMC(mIU/mL)分别为144.94、328.37、296.14(H=56.42,P<0.001);10μg HepB-BC组0-1-2m、0-1-3m、0-1-6m、0-1-12m程序HBsAb阳性率分别为81.34%、85.19%、87.07%、79.54%(x^2=8.63,P=0.035),GMC(mIU/mL)分别为114.41、170.65、329.21、475.13(H=71.97,P<0.001);20μgHepB-BC组0-1-2m、0-1-3m、0-1-6m程序HBsAb阳性率分别为83.02%、100%、96.46%(x^2=20.95,P<0.001),GMC(mIU/mL)分别为167.03、949.83、1688.67(F=27.01,P<0.001)。结论20-49岁成人接种HepB具有良好的免疫原性,以0-1-6m、0-1-12m程序较好。 展开更多
关键词 乙型肝炎疫苗 免疫程序 免疫原性
猪细小病毒AV30 VP2基因在昆虫细胞中表达及其免疫原性鉴定 认领
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作者 李茜 代军飞 +4 位作者 丁耀忠 ASHENAFI Kiros Wubshe 李国秀 马炳 张杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期852-860,共9页
本研究选用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统构建含有猪细小病毒AV30未优化、优化后衣壳蛋白VP2基因的重组杆状病毒,感染sf9、HF细胞表达VP2蛋白。首先,扩增PPV AV30得到VP2基因,测序后由公司根据昆虫细胞嗜性进行基因优化。同时构建并... 本研究选用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统构建含有猪细小病毒AV30未优化、优化后衣壳蛋白VP2基因的重组杆状病毒,感染sf9、HF细胞表达VP2蛋白。首先,扩增PPV AV30得到VP2基因,测序后由公司根据昆虫细胞嗜性进行基因优化。同时构建并收获未优化、优化重组杆状病毒r BacVP2。其感染HF细胞后,进行Western-blot及IFA实验分析表明,未优化、优化VP2蛋白在昆虫细胞中正确表达,分子质量约为64 ku,并具有良好的反应原性。电镜观察,未优化、优化VP2蛋白均自我组装成VLP,与PPV AV30病毒粒子大小形状相似。最后,用VP2-VLP免疫BALB/c小鼠,能刺激小鼠产生抗PPV的特异性抗体。免疫后的小鼠脾脏淋巴细胞在PPV AV30病毒的刺激后,出现显著的增殖情况,同时产生了Th1和Th2型相关细胞因子。本研究成功构建了VP2-VLP,并在小鼠实验中显示了良好的免疫效果,为以VP2为表位载体的嵌合型病毒样颗粒疫苗进一步研制奠定了基础。 展开更多
关键词 猪细小病毒 VP2基因 昆虫杆状系统 VLP 免疫原性
BVDV-E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果评价 认领
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作者 时坤 李男 +7 位作者 刁乃超 李健明 冯海峰 姚泽慧 田甜 宗颖 曾范利 杜锐 《动物医学进展》 北大核心 2020年第1期34-38,共5页
为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果,将BVDV抗原抗体阴性牛随机分为rBCG-pMV361-E2-1(1 aa-297aa)、rBCG-pMV361-E2-2(1 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-3(1 aa-374 aa)、rBCG-pMV361-E2-4(45 aa-297 aa)、rB... 为评价牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E2截短基因重组卡介苗对牛的免疫效果,将BVDV抗原抗体阴性牛随机分为rBCG-pMV361-E2-1(1 aa-297aa)、rBCG-pMV361-E2-2(1 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-3(1 aa-374 aa)、rBCG-pMV361-E2-4(45 aa-297 aa)、rBCG-pMV361-E2-5(45 aa-345 aa)、rBCG-pMV361-E2-6(45 aa-374 aa)、BVDV对照组、BCG对照组和PBS对照组,各组牛免疫相应疫苗后通过特异性抗体检测、淋巴细胞增殖试验、淋巴细胞亚群检测和细胞因子检测分析疫苗的免疫效果。结果显示,BVDV E2截短基因重组卡介苗均可诱导BVDV特异性抗体的产生,rBCG-pMV361-E2-1组抗体水平高于其他重组卡介苗试验组和BVDV对照组。淋巴细胞增殖试验结果显示,rBCG-pMV361-E2-2组SI为2.038±0.21,显著高于其他重组卡介苗试验组(P<0.01)。牛外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群检测结果显示,rBCG-pMV361-E2-5组牛外周血中CD4~+和CD8~+ T淋巴细胞亚群含量与PBS组比较,差异极显著(P<0.01)。IFN-γ检测结果显示,rBCG-pMV361-E2-1的IFN-γ水平显著高于其他试验组和对照组(P<0.01)。研究表明,rBCG-pMV361-E2-1可诱导接种牛产生较好的体液免疫应答,rBCG-pMV361-E2-1、rBCG-pMV361-E2-2和rBCG-pMV361-E2-5在诱导细胞免疫应答上效果较好。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 E2截短基因 重组卡介苗 免疫评价
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鹦鹉热衣原体亚单位疫苗免疫原性及免疫保护性研究 认领
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作者 张静 李敏 +5 位作者 刘少蓉 高强 张伟 杨茹 董杰 段跃强 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期869-873,共5页
本研究将鹦鹉热衣原体的MOMP基因经PCR扩增后与pET-22b(+)载体连接构建重组质粒,转化入E.coli,通过IPTG诱导表达MOMP蛋白,鉴定重组蛋白的表达和反应性。结果显示,重组蛋白被成功表达,分子质量大小为40 ku,经溶解、透析纯化后,重组MOMP... 本研究将鹦鹉热衣原体的MOMP基因经PCR扩增后与pET-22b(+)载体连接构建重组质粒,转化入E.coli,通过IPTG诱导表达MOMP蛋白,鉴定重组蛋白的表达和反应性。结果显示,重组蛋白被成功表达,分子质量大小为40 ku,经溶解、透析纯化后,重组MOMP蛋白纯度为91%,能与鼠抗重组MOMP蛋白抗体产生特异性反应,与鹦鹉热衣原体阳性血清呈强阳性反应。重组MOMP蛋白与ISA201佐剂乳化制成鹦鹉热衣原体亚单位疫苗,免疫绵羊后抗体效价高达1∶4222,用强毒株攻毒后保护率达100%,表明此鹦鹉热衣原体亚单位疫苗具有良好的免疫原性和免疫保护性。 展开更多
关键词 鹦鹉热衣原体 重组MOMP蛋白 免疫原性 保护效力
狂犬病疫苗脂质体冻干粉的免疫原性评价 认领
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作者 赵祥月 范宇超 +4 位作者 谢青昕 刘艳红 普梦笛 付围 鲁卫东 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第3期250-253,265共5页
目的评价狂犬病疫苗脂质体冻干粉的免疫原性。方法将狂犬病疫苗原液稀释至15 IU/mL,制备为稀释液冻干粉(Y1组);将该稀释液冻干粉与脂质体冻干粉按5∶3的体积比混合,制成物理混合物(Y2组);同时采用冻融-冻干法将狂犬病疫苗稀释液和脂质... 目的评价狂犬病疫苗脂质体冻干粉的免疫原性。方法将狂犬病疫苗原液稀释至15 IU/mL,制备为稀释液冻干粉(Y1组);将该稀释液冻干粉与脂质体冻干粉按5∶3的体积比混合,制成物理混合物(Y2组);同时采用冻融-冻干法将狂犬病疫苗稀释液和脂质体配制成狂犬病疫苗脂质体冻干粉(Y3组)。将各组疫苗复溶后,分别于0、3、7、14、21 d经小鼠腹腔给药,0. 5 mL/只。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测T淋巴细胞表面标记,ELISA法测定小鼠体液中狂犬病病毒抗体IgG(RV-IgG)浓度。结果与Y1组及Y2组比较,Y3组初次免疫后3 d小鼠脾细胞刺激指数(stimulatingindex,SI)值明显升高(P <0. 01);初次免疫后7、14、21、28 d,CD4~+/CD8~+值明显升高(P <0. 05),初次免疫后7、14、21 d,RV-IgG浓度明显升高(P <0. 05)。结论狂犬病疫苗脂质体冻干粉在小鼠体内具有良好的免疫原性,脂质体能提高疫苗免疫原性,延长疫苗的免疫时间,有望开发成为新一代广泛应用的疫苗佐剂。 展开更多
关键词 狂犬病疫苗 冻干 脂质体 佐剂 免疫原性
草鱼呼肠孤病毒GCRV 096 VP7蛋白的表达及免疫原性 认领
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作者 杨硕 陈静妮 +3 位作者 胡海浩 王雅 闫秀英 简纪常 《广东海洋大学学报》 CAS 2020年第4期1-6,共6页
【目的】研究草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)096 vp7基因的原核和真核表达及其编码蛋白的免疫原性。【方法】应用RT-PCR技术获得GCRV 096 vp7基因,构建GCRV 096 vp7基因原核表达载体pET-VP7,用原核表达的GCRV 096 VP7蛋白... 【目的】研究草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus, GCRV)096 vp7基因的原核和真核表达及其编码蛋白的免疫原性。【方法】应用RT-PCR技术获得GCRV 096 vp7基因,构建GCRV 096 vp7基因原核表达载体pET-VP7,用原核表达的GCRV 096 VP7蛋白免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)15 d后,用GCRV 096和GCRV GD108分离株对其攻毒,检测GCRV 096 VP7的免疫原性。构建GCRV 096 vp7基因真核表达载体p EGFP-N3-VP7,分析其在草鱼CIK细胞中的表达。【结果与结论】GCRV 096 vp7基因的开放阅读框ORF (GenBank登录号为JN206665)为831 bp,编码276个氨基酸。成功构建GCRV 096 vp7基因原核表达载体pET-VP7,并在大肠杆菌BL21中诱导表达成功;最优表达条件是0.2 mm/L IPTG、28℃下表达5 h,通过HisTrap HP柱纯化融合蛋白,Western blot分析结果表明,所表达的蛋白为目的蛋白。经免疫及GCRV攻毒后,GCRV 096(Ⅰ型)免疫组vp7基因的表达水平降低(P <0.05),而GCRV GD108(Ⅱ型)免疫组vp7基因的表达无显著差异,表明GCRV 096 VP7蛋白对GCRV096具有良好的免疫效果,但对GCRVGD108无明显的免疫效果。成功构建GCRV096vp7基因真核表达载体pEGFP-N3-VP7,Western blot分析结果表明,GCRV 096 VP7蛋白在草鱼肾(CIK)细胞中成功表达。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 VP7基因 表达 免疫原性
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基因Ⅰ型乙型脑炎病毒亚单位疫苗候选抗原的免疫原性比较 认领
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作者 于瑞明 田占成 +4 位作者 高闪电 独军政 刘光远 罗建勋 殷宏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1314-1322,共9页
为了筛选出免疫原性最佳的基因Ⅰ型乙型脑炎病毒亚单位疫苗候选抗原,将基因Ⅰ型JEVGS株的prMEIII融合基因、polytope复合表位基因和prMEIII-polytope融合基因分别克隆构建到原核表达载体pET-30a上,经诱导表达纯化获得重组蛋白。将制备... 为了筛选出免疫原性最佳的基因Ⅰ型乙型脑炎病毒亚单位疫苗候选抗原,将基因Ⅰ型JEVGS株的prMEIII融合基因、polytope复合表位基因和prMEIII-polytope融合基因分别克隆构建到原核表达载体pET-30a上,经诱导表达纯化获得重组蛋白。将制备的重组蛋白免疫小鼠,通过ELISA监测体液免疫反应、通过噬斑减少中和试验滴定中和抗体滴度、通过细胞因子表达丰度和淋巴细胞增殖实验分析细胞介导的免疫反应,比较分析制备的乙型脑炎病毒亚单位疫苗候选抗原的免疫原性。结果表明:获得的分子量分别为35kDa(prMEIII)、28kDa(polytope复合表位抗原)和57 kDa(prMEIII-polytope)的重组蛋白均能诱导免疫小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫反应。与prMEIII-polytope和polytope重组蛋白免疫组相比,prMEIII蛋白可诱导免疫小鼠产生更高的IL-2和IFN-γ表达丰度和淋巴细胞增殖水平(P<0.05)。prMEIII蛋白免疫小鼠诱导产生的中和抗体滴度接近于商品化乙脑减毒疫苗SA14-14-2(P>0.05)。上述研究结果表明,prMEIII重组蛋白可以作为乙型脑炎病毒亚单位疫苗的备选蛋白。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎 复合表位 亚单位疫苗 免疫原性
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