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甲状腺乳头状癌STR基因座突变分析 预览
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作者 李璐 刘晓龙 +3 位作者 张晗 刘奇 王业全 崔文 《济宁医学院学报》 2019年第3期185-188,195共5页
目的应用显微切割技术探讨甲状腺乳头状癌(papillarythyroidcancer,PTC)常染色体STR基因座的突变类型及突变规律,为PTC肿瘤组织在法医学组织身源鉴定中的应用提供理论基础。方法收集2011年1月至8月济宁医学院附属医院41例PTC患者的甲状... 目的应用显微切割技术探讨甲状腺乳头状癌(papillarythyroidcancer,PTC)常染色体STR基因座的突变类型及突变规律,为PTC肿瘤组织在法医学组织身源鉴定中的应用提供理论基础。方法收集2011年1月至8月济宁医学院附属医院41例PTC患者的甲状腺手术切除组织,制作冰冻切片,应用激光捕获显微切割技术分离肿瘤细胞与肿瘤旁正常间质细胞,分别提取两种细胞的DNA,采用华夏白金PCR试剂盒及Goldeneye20A试剂盒对上述样本进行PCR扩增,扩增产物进行电泳和基因分型,最后对比分析肿瘤细胞与正常间质细胞STR分型结果。结果41例标本中有15例发生STR基因座突变(共计22个),分别为:增加等位基因(1个)、新等位基因的出现(7个)、杂合性完全丢失(3个)以及杂合性部分丢失(11个)。vWA、D16S539、D8S1179、D21S11、D5S818、D13S317、D10S1248和D1S1656基因座均未发现突变。结论PTC肿瘤组织存在STR基因座突变,在应用PTC肿瘤组织的实际检案中需谨慎;本研究筛选出的8个未发生突变的STR基因座可作为PTC肿瘤组织身源鉴定的备选基因座。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 短串联重复序列 激光捕获显微切割技术 基因突变
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不同免疫学检验方法对混合精斑的检测及应用 预览
2
作者 董敏安 李美丽 蔡铭升 《法医学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期324-327,共4页
目的利用免疫学检验方法对混合精斑进行分离确证,寻找更有效的混合精斑检测方法。方法将3名志愿者的精液混合后,分别用前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)胶体金免疫试纸条法、免疫磁珠法以及激光捕获显微切割技术对混合... 目的利用免疫学检验方法对混合精斑进行分离确证,寻找更有效的混合精斑检测方法。方法将3名志愿者的精液混合后,分别用前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)胶体金免疫试纸条法、免疫磁珠法以及激光捕获显微切割技术对混合精斑进行处理和检测,对分型结果进行统计,并与单一精斑结果进行比较。结果经PSA胶体金免疫试纸条法测试,各样品在测试区和控制区内均出现一条紫红色条带;经免疫磁珠法处理后,检出更完整有效的短串联重复(short tandem repeat,STR)分型;应用激光捕获显微切割技术对混合精斑进行处理并经低体积扩增后,将结果汇总、叠加获得完整的单一分型,与单一精斑分型相匹配,分型成功率为84.00%。把上述方法应用于实际案件中,获得了单一的嫌疑人Y-STR分型,为案件的快速破获提供了证据基础。结论联合应用PSA胶体金免疫试纸条法、免疫磁珠法以及激光捕获显微切割技术可快速对混合精斑进行分离检验。 展开更多
关键词 法医遗传学 短串联重复 Y染色体 混合精斑 免疫胶体金 免疫磁珠 激光捕获显微切割
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基于角点检测的激光显微切割轨迹规划 预览
3
作者 刘云 胡舜迪 +3 位作者 洪欢欢 史振志 郭荣 闻路红 《传感器与微系统》 CSCD 2019年第4期22-25,29共5页
为提高激光显微切割系统大面积切割精度,设计了一种基于角点检测的切割轨迹规划方法。研究型值点选取对轨迹规划的影响,改进了曲率尺度空间(CSS)角点检测算法,构建了基于角点和电机转向点的自动B样条轨迹规划方法,结合移动系统数学模型... 为提高激光显微切割系统大面积切割精度,设计了一种基于角点检测的切割轨迹规划方法。研究型值点选取对轨迹规划的影响,改进了曲率尺度空间(CSS)角点检测算法,构建了基于角点和电机转向点的自动B样条轨迹规划方法,结合移动系统数学模型及电机约束参数优化,给出了无累积误差及加速度突变的系统误差补偿控制策略。仿真与实验结果表明:所提方法精度优于等比例轨迹规划算法,具有二阶连续性,运算效率高等优势,且无累计误差。方法适用于无特定曲线模型,且对精度要求较高的轨迹规划领域。 展开更多
关键词 激光显微切割 曲率尺度空间(CSS)角点检测 B样条 轨迹规划 绳索
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核苷类似物对小鼠肝细胞线粒体DNA ND1和ND4的影响 预览
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作者 张维 乔录新 +2 位作者 丁渭 陈德喜 张玉林 《中国医药导报》 CAS 2018年第21期8-13,共6页
目的探讨长期使用核苷类似物(NAs)是否导致小鼠肝脏线粒体DNA(mtDNA)ND1和ND4区损伤。方法7周龄雌性Balb/c小鼠25只,采用简单随机分组法分为5组,对照组和4种核苷类似物组,每组各5只。实验组司他夫定(D4T)50 mg/kg,齐多夫定(AZT)100 mg/... 目的探讨长期使用核苷类似物(NAs)是否导致小鼠肝脏线粒体DNA(mtDNA)ND1和ND4区损伤。方法7周龄雌性Balb/c小鼠25只,采用简单随机分组法分为5组,对照组和4种核苷类似物组,每组各5只。实验组司他夫定(D4T)50 mg/kg,齐多夫定(AZT)100 mg/kg,拉米夫定(3TC)50 mg/kg和去羟肌苷(DDI)50 mg/kg,对照组为双蒸水,分别腹腔内注射,每周5次,连续3个月。留取各组肝组织,应用激光捕获显微技术获取肝细胞,对mtDNA ND1和ND4区克隆和测序。结果其余各组肝细胞的mtDNA ND4序列距离与参考序列的平均距离与对照组比较,差异均有高度统计学意义(P<0.01);AZT组肝细胞的mtDNA ND4平均dN与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);肝细胞mtDNA ND1的序列距离与参考序列的平均距离,AZT组和3TC组序列距离与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);DDI组肝组织mtDNA ND1的平均dS与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);AZT组和3TC组肝细胞mtDNA ND1的平均dS与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论长期暴露于NAs可导致小鼠肝细胞mtDNA ND1和ND4区病变。 展开更多
关键词 MTDNA ND1 MTDNA ND4 激光捕获显微切割 线粒体毒性 核苷类似物
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组织单腺体内单细胞的基因变异分析方法 预览
5
作者 周彦 王超杰 +4 位作者 朱纯超 陈江荣 程酩 邓宇亮 郭妍 《遗传》 CSCD 北大核心 2017年第8期753-762,共10页
从单细胞尺度进行细胞异质性的分析是深度理解细胞群体关系的关键。组织中的单细胞由于细胞类型不同,尺寸往往相差很大,但是目前常用的基于微孔板和Fluidigm公司的微流控的单细胞组学研究方法,需要入口的单细胞大小相近。本研究以胃组... 从单细胞尺度进行细胞异质性的分析是深度理解细胞群体关系的关键。组织中的单细胞由于细胞类型不同,尺寸往往相差很大,但是目前常用的基于微孔板和Fluidigm公司的微流控的单细胞组学研究方法,需要入口的单细胞大小相近。本研究以胃组织为例,建立了一种组织单细胞的基因变异分析方法,实现了尺寸差异较大的单细胞的基因变异分析。在该方法中,先将胃组织裂解获得单个腺体,再将单个腺体酶解得到不同大小的腺体内单细胞,然后把这些单细胞铺在聚乙烯萘膜载玻片上,进行激光显微切割分选、全基因组放大,最后测其微卫星的长度。利用该方法,成功在肠上皮化生腺体内部检测到微卫星长度的变化,并灵活地对尺寸差异大的组织细胞以及肠化生腺体细胞进行了精细分析。此外,这种单细胞分析方法还可以对带有不同标记的细胞进行低通量和高通量的基因组分析,为单细胞尺度上的组织异质性研究提供了一种高度灵活的分析方法。 展开更多
关键词 单细胞分析方法 全基因组放大 激光显微切割 胃组织 微卫星
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激光捕获显微切割纯化的人结肠癌组织的定量蛋白质组学研究
6
作者 李国庆 李园园 +7 位作者 李茂玉 梁旭俊 肖哲锋 邵美英 彭芳 张鹏飞 陈永恒 陈主初 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第8期3358-3367,共10页
为分析结肠上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选结肠癌诊断候选标志物,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常结肠组织和结肠癌组织,再采用同位素标记对蛋白质进行相对和绝对定量(i TRAQ),然后结合强阳离子柱分离和反相液质... 为分析结肠上皮癌变进程中的差异表达蛋白质,筛选结肠癌诊断候选标志物,先采用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化人正常结肠组织和结肠癌组织,再采用同位素标记对蛋白质进行相对和绝对定量(i TRAQ),然后结合强阳离子柱分离和反相液质联用(2D-LC-MS/MS)鉴定差异表达蛋白质。试验共鉴定了1 042个非冗余蛋白,筛选出与人结肠癌变相关的差异蛋白162个,其中在结肠癌中表达上调的蛋白质68个,表达下调的蛋白质94个,功能分析表明,这些差异蛋白质涉及内质网蛋白质加工、糖酵解/糖原异生、黏着斑细胞连接、调节微丝组装和细胞外基质受体相互作用等分子功能。进一步采用Western blotting及免疫组织化学技术(IHC)验证了其中差异蛋白S100A9的表达,证实了定量蛋白质组学结果的可靠性。研究表明:差异表达蛋白质与结肠癌变相关,并有可能成为结肠癌诊断的候选分子标志物,为进一步深入研究这些蛋白质在结肠癌发生和发展进程中的分子机制,为结肠癌的发病机制研究提供新线索。 展开更多
关键词 结肠癌 生物标志物 激光捕获显微切割技术 同位素标记相对和绝对定量
应用全外显子测序和显微切割技术识别1例肺癌患者高频突变基因的异质性探索
7
作者 俞莎莎 谢会君 +2 位作者 张乐乐 宋怀东 郑翠侠 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第4期606-610,620共6页
目的:通过对一例肺鳞癌患者全外显子测序来识别这例肺癌的可能致病基因,并通过显微切割初步探索这例肺癌肿瘤细胞的起源与演化。方法:利用全外显子测序技术对肺癌肿瘤组织和相应癌旁组织测序;用COSMIC肿瘤数据库比较分析统计出肺癌可... 目的:通过对一例肺鳞癌患者全外显子测序来识别这例肺癌的可能致病基因,并通过显微切割初步探索这例肺癌肿瘤细胞的起源与演化。方法:利用全外显子测序技术对肺癌肿瘤组织和相应癌旁组织测序;用COSMIC肿瘤数据库比较分析统计出肺癌可能致病基因;用激光显微切割技术提取五个不同部位肿瘤细胞;巢式PCR扩增,一代测序验证基因分型。结果:发现了这例肺癌病人的7个高频突变基因:LPHN2、TP53、MYH2、TGM2、C10orf137、MS4A3和EP300;这些基因在10×镜下和20×镜下经显微切割的肺癌组织的5个不同部位上的基因分型不同。结论:我们通过全外显子测序发现了这例肺癌的7个可能致病基因,并初步探索了这例肺癌肿瘤细胞是多克隆起源的。 展开更多
关键词 肺癌 异质性 全外显子测序 显微切割
用于激光捕获显微切割的组织冰冻切片制作方法探讨 预览 被引量:2
8
作者 段仁杰 林爱琴 +2 位作者 汪根莲 李铁臣 孙青 《皖南医学院学报》 CAS 2016年第1期16-17,21共3页
目的:探讨经样本保存液处理的组织用于激光捕获显微切割技术冰冻切片的制作技术与方法。方法:以手术中切取的子宫内膜组织为标本。经样本保存液处理后,置于冰箱冷冻保存,经切片、染色,用于激光捕获显微切割。结果:在传统切片的基础上... 目的:探讨经样本保存液处理的组织用于激光捕获显微切割技术冰冻切片的制作技术与方法。方法:以手术中切取的子宫内膜组织为标本。经样本保存液处理后,置于冰箱冷冻保存,经切片、染色,用于激光捕获显微切割。结果:在传统切片的基础上,改良后的切片更适用于激光捕获显微切割及相关实验。结论:改良的切片满足了激光捕获显微切割技术的要求和组织学观察的精确性。 展开更多
关键词 激光捕获显微切割 冰冻切片 切片染色
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奶牛圆形、长形、成熟精子细胞微量RNA制备和含量分析 预览 被引量:2
9
作者 任小霞 陈晓丽 +3 位作者 李秀岭 王艳 秦彤 王栋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1546-1554,共9页
本研究旨在探究奶牛变形精子细胞获取方法、建立稳定奶牛精子RNA提取体系及分析单个生精细胞RNA含量变化。采用激光显微捕获技术结合冰冻切片,采集奶牛圆形、长形精子细胞样品,利用附睾尾精子浮游法获得成熟精子,通过对已报道的小鼠、... 本研究旨在探究奶牛变形精子细胞获取方法、建立稳定奶牛精子RNA提取体系及分析单个生精细胞RNA含量变化。采用激光显微捕获技术结合冰冻切片,采集奶牛圆形、长形精子细胞样品,利用附睾尾精子浮游法获得成熟精子,通过对已报道的小鼠、奶牛及人类精子RNA制备方法的尝试和比较,获得RNeasy Kit最佳奶牛精子RNA制备方法,并用PicoPure RNA Isolation Kit对圆形和长形精子细胞进行RNA制备,筛选去除白细胞、上皮细胞等体细胞污染及基因组DNA污染的反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,并对生精细胞RNA含量进行单因素方差分析。结果表明,激光显微切割技术可有效捕获圆形、长形精子细胞;通过RNeasy Kit获得的牛精子RNA纯度高、质量好,单个精子RNA含量为0.023~0.025pg;同时,随精子细胞变形,其RNA含量显著降低,其中圆形精子到成熟精子RNA含量降低75倍。本研究从复杂样品取样、微量RNA细胞转录本制备与检测等方面,为精子发生与变形机理研究提供重要参考。 展开更多
关键词 生精细胞 转录本 激光显微切割 附睾 表达
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导向激光捕获显微切割纯化的贲门腺癌细胞蛋白质表达图谱的建立 预览
10
作者 程妍 张军 +3 位作者 刘冬 伍洁 宋亚华 龚均 《山西医科大学学报》 CAS 2015年第8期740-746,共7页
目的 建立高分辨率的贲门腺癌细胞双向凝胶电泳图谱,为构建贲门腺癌的蛋白质表达数据库奠定基础. 方法 应用导向激光捕获显微切割技术(NLCM)获取贲门腺癌细胞,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术对贲门腺癌细胞蛋白进行分析,建立贲门腺癌... 目的 建立高分辨率的贲门腺癌细胞双向凝胶电泳图谱,为构建贲门腺癌的蛋白质表达数据库奠定基础. 方法 应用导向激光捕获显微切割技术(NLCM)获取贲门腺癌细胞,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术对贲门腺癌细胞蛋白进行分析,建立贲门腺癌细胞的蛋白质表达图谱,并通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱肽质量指纹技术(MALDI-TOF MS)和数据库对部分蛋白质点进行鉴定. 结果 获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的NLCM分离的贲门腺癌细胞双向凝胶电泳图谱;鉴定出了72个贲门腺癌相关蛋白质;蛋白质大部分位于细胞质和线粒体,其次位于细胞膜、细胞核、细胞骨架、内质网、高尔基体、核糖体等.蛋白质涉及细胞代谢、增殖和分化、RNA转录和翻译、信号转导、氧化还原、蛋白质分子伴侣等. 结论 首次建立了分辨率高、重复性好的导向激光捕获显微切割分离的贲门腺癌细胞的双向凝胶电泳图谱,并鉴定出了72个贲门腺癌相关蛋白,为进一步构建贲门腺癌的蛋白质组学数据库奠定了基础. 展开更多
关键词 贲门腺癌 激光捕获显微切割 蛋白质组 分子标志物
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核苷类似物对小鼠皮层神经元线粒体DNAD-loop区突变的影响
11
作者 张维 乔录新 +3 位作者 刘远志 郭向华 陈德喜 张玉林 《北京医学》 CAS 2015年第9期860-863,共4页
目的探讨长期使用核苷类似物是否产生皮层神经元线粒体DNAD—loop区损伤。方法7周龄Balb/C小鼠50只,分为5组(对照组和4个实验组),每组10只。对照组腹腔内注射双蒸水,实验组腹腔内分别注射司他夫定(D4T)50mg/kg、齐多夫定(AZT... 目的探讨长期使用核苷类似物是否产生皮层神经元线粒体DNAD—loop区损伤。方法7周龄Balb/C小鼠50只,分为5组(对照组和4个实验组),每组10只。对照组腹腔内注射双蒸水,实验组腹腔内分别注射司他夫定(D4T)50mg/kg、齐多夫定(AZT)100mg/kg、拉米夫定(3TC)50mg/kg和去羟肌苷(DDI)50mg/kg,每周5次,连续6周。应用激光捕获显微切割技术捕捉小鼠大脑皮层神经元,对其线粒体D-loop区PCR扩增子克隆和测序。结果与对照组相比,实验组小鼠神经元线粒体D—loop区序列突变增加,与参考序列的平均距离,AZT组为0.0021,D4T组为0.0047,3TC组为0.0024和DDI组为0.0053,对照组为0.0012。D4T组和DDI组的核苷酸距离明显高于对照组(P〈0.001)。D—loop序列单碱基的转换率AZT组为0.0018,D4T组为0.0033,3TC组为0.0021,DDI组为0.0037,显著高于对照组(P〈0.001)。4种核苷类似物诱导的D—loop区序列点突变主要类型是转换,特别是“A→G”和“T→C”的转换。结论长期暴露于核苷类似物可导致小鼠皮层神经元线粒体DNAD—loop区实变。 展开更多
关键词 D—loop区 激光捕获显微切割 线粒体毒性 神经毒性 核苷类似物
NLCM纯化的不同分化程度贲门腺癌细胞差异蛋白质组学研究 预览
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作者 程妍 李阳 +3 位作者 刘冬 宋亚华 张军 龚均 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期682-686,714共6页
目的联合导向激光捕获显微切割技术(NLCM)及蛋白质组学技术比较分析高分化贲门腺癌细胞和低分化贲门腺癌细胞的蛋白质表达图谱差异,寻找与贲门腺癌恶性程度和预后有关的分子标志物。方法应用导向激光捕获显微切割技术分别获取高分化... 目的联合导向激光捕获显微切割技术(NLCM)及蛋白质组学技术比较分析高分化贲门腺癌细胞和低分化贲门腺癌细胞的蛋白质表达图谱差异,寻找与贲门腺癌恶性程度和预后有关的分子标志物。方法应用导向激光捕获显微切割技术分别获取高分化和低分化贲门腺癌细胞,提取蛋白质,应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离蛋白质,选定差异点,胶内酶解后,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)鉴定差异蛋白质,并用免疫组化方法验证差异蛋白的表达。结果 1NLCM分别分离纯化了高分化和低分化贲门腺癌细胞;2建立了高分化和低分化贲门腺癌细胞的蛋白质表达图谱,两组分别检测到(846±52)个和(923±84)个蛋白质点,两组的匹配率为85.4%;3对高分化和低分化的贲门腺癌蛋白质表达谱进行比较分析,鉴定出10种差异蛋白,其中6个蛋白质在低分化贲门腺癌细胞中表达上调,4个蛋白质在低分化贲门腺癌细胞中表达下调;4差异蛋白质涉及细胞间信号转导、细胞代谢、凋亡及迁移等;5进一步通过免疫组化方法验证了差异蛋白HSP27的表达与蛋白质组学研究结果一致。结论高分化和低分化贲门腺癌间存在蛋白质表达的差异,这些差异表达的蛋白质可能与贲门腺癌的恶性程度和预后有关。 展开更多
关键词 贲门腺癌 激光捕获显微切割 蛋白质组学 分子标志物
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激光捕获显微切割技术纯化的乳腺癌上皮细胞和间质比较蛋白质组学研究 预览
13
作者 徐学清 刘叔文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期697-703,共7页
目的:研究乳腺癌上皮细胞和间质间蛋白表达的差异。方法用改良HE染色法对临床侵润性导管内原位癌患者的石蜡包埋样品进行染色,用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化分离癌变的乳腺上皮细胞和其周围间质后分别进行质谱分析。结果质谱总... 目的:研究乳腺癌上皮细胞和间质间蛋白表达的差异。方法用改良HE染色法对临床侵润性导管内原位癌患者的石蜡包埋样品进行染色,用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化分离癌变的乳腺上皮细胞和其周围间质后分别进行质谱分析。结果质谱总共检测了431种蛋白,上皮细胞和间质中分别检测到384和298种蛋白。251种共同表达的蛋白中,69种间质蛋白的含量比在上皮细胞中高,60种比在上皮细胞中低。所检测到蛋白的上皮细胞和间质定位及表达水平和它们在肿瘤发生、发展过程中的作用一致。结论在上皮细胞和间质中差异表达蛋白可以是疾病的筛选、诊断和预后判断的蛋白标志。 展开更多
关键词 乳腺癌 肿瘤微环境 间质 激光捕获显微切割 乳腺上皮细胞 质谱
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应用单细胞cDNA扩增技术鉴定循环肿瘤细胞 预览
14
作者 王玲兄 潘飞 +1 位作者 李晶晶 卜芳芳 《解放军医学院学报》 CAS 2015年第12期1222-1226,共5页
目的建立单细胞cDNA扩增技术,实现在分子水平鉴定循环肿瘤细胞。方法建立结肠癌循环肿瘤细胞模型,通过免疫荧光染色和显微切割技术分离出单个血细胞和肿瘤细胞;裂解细胞后利用碱基修饰的P1(dT)24引物反转录出cDNA第一链,并给第一链cDN... 目的建立单细胞cDNA扩增技术,实现在分子水平鉴定循环肿瘤细胞。方法建立结肠癌循环肿瘤细胞模型,通过免疫荧光染色和显微切割技术分离出单个血细胞和肿瘤细胞;裂解细胞后利用碱基修饰的P1(dT)24引物反转录出cDNA第一链,并给第一链cDNA加上PolyA尾后利用碱基修饰的P2(dT)24引物合成第二链cDNA,然后利用P1(dT)24和P2(dT)24引物扩增分别得到血细胞和肿瘤细胞的全长cDNA;最后通过PCR检测细胞特异的标记物CD45、EpCAM和CK19。结果改良后的单细胞cDNA扩增方法能够获得高质量的全长cDNA,并能显著增加PCR检测效率;利用扩增得到的cDNA通过PCR检测细胞表面标记物CD45、EpCA M和CK19的表达,能有效鉴定出外周血中混杂的肿瘤细胞。结论通过单细胞cDNA扩增技术在基因水平识别肿瘤细胞,建立了一种新的循环肿瘤细胞的鉴定方法。 展开更多
关键词 单细胞cDNA扩增技术 循环肿瘤细胞 激光捕获显微切割 聚合酶链式反应
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利用激光捕获和高效液相色谱质谱对石蜡包埋口腔黏膜癌变组织的蛋白组学分析 预览
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作者 耿宁 王睿男 +8 位作者 周玉乔 张敦房 张乐薇 吉宁 周敏 梁新华 陈宇 李敬 陈谦明 《口腔生物医学》 2015年第4期188-192,共5页
目的:对口腔黏膜癌变的蛋白组学分析和分子标志物筛选可能为早期诊断、预防和分子治疗提供依据和帮助。方法:对3例石蜡包埋口腔黏膜癌变组织样本,利用激光显微切割技术捕获口腔黏膜癌变上皮和癌旁正常黏膜上皮,抽提组织样本蛋白,利用... 目的:对口腔黏膜癌变的蛋白组学分析和分子标志物筛选可能为早期诊断、预防和分子治疗提供依据和帮助。方法:对3例石蜡包埋口腔黏膜癌变组织样本,利用激光显微切割技术捕获口腔黏膜癌变上皮和癌旁正常黏膜上皮,抽提组织样本蛋白,利用高效液相色谱-质谱联用进行口腔黏膜癌变组织的蛋白组学分析。结果:激光显微切割-高效液相色谱质谱联用可以分析400~700个多肽序列,鉴定出100~200个蛋白,涉及到细胞骨架、细胞代谢、信号转导、细胞周期等各个方面。结合文献,对其中的角蛋白表达变化进行了分析和验证。结论:显微切割结合高效液相色谱质谱可以实现对石蜡包埋组织的蛋白组学研究,具有较高的重复性和可靠性。角蛋白表达谱的变化验证了该平台的作用和价值,也可作为口腔黏膜癌变的潜在标志物。 展开更多
关键词 口腔癌 石蜡包埋组织 蛋白组学 质谱 激光显微切割
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导向激光捕获显微切割技术在贲门腺癌差异蛋白质组学的应用研究 预览 被引量:4
16
作者 程妍 张军 +4 位作者 张蓉 刘冬 陈晓黎 谢丹红 龚均 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期557-561,564共6页
目的 建立一套适用于贲门腺癌差异蛋白质组学研究的导向激光捕获显微切割技术(navigated laser capture microdissection,NLCM)方法,并探讨其可行性.方法 比较染色剂和固定剂对蛋白质影响的差异,探讨不同处理条件下贲门腺癌和癌旁组... 目的 建立一套适用于贲门腺癌差异蛋白质组学研究的导向激光捕获显微切割技术(navigated laser capture microdissection,NLCM)方法,并探讨其可行性.方法 比较染色剂和固定剂对蛋白质影响的差异,探讨不同处理条件下贲门腺癌和癌旁组织切片的镜下组织学特点,改进常规LCM,建立在染色切片指引下分离细胞的NLCM技术,并通过双向凝胶电泳分析对该技术进行评价.结果 染色剂对蛋白质的影响大于700 mL/L乙醇固定剂;光镜下在不染色的组织切片上,贲门腺癌细胞、肠化生细胞和正常柱状上皮细胞都有其各自的形态特异性,易于辨认;NLCM可以准确纯化贲门腺癌细胞、肠化生细胞和正常柱状细胞;LCM的苏木素染色贲门腺癌细胞(A组)、NLCM的无染色贲门腺癌细胞(B组)和未切割的新鲜贲门腺癌组织(C组)的双向电泳表达图谱非常相似.各组蛋白质点的数量之间差异无统计学意义(P>0.05).A组碱性端蛋白等点聚焦较差,部分蛋白质点的表达量减低或消失,B组双向电泳表达图谱蛋白质点分离较好.结论 NLCM不但可以快速、准确地将贲门腺癌及其癌前病变细胞进行分离,而且有效避免了染色剂对蛋白质提取质量的影响,是一项适用于贲门腺癌蛋白质组学研究的样品制备方法. 展开更多
关键词 贲门腺癌 激光捕获显微切割 蛋白质组 双向凝胶电泳
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大肠癌肝转移相关的间质差异表达基因的筛选 预览 被引量:4
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作者 程家乐 姚敬 +1 位作者 彭佳远 汪昱 《医学综述》 2014年第5期903-907,F0003共6页
目的 联合应用激光捕获显微切割和基因芯片技术,构建伴有肝转移的大肠癌原发灶间质组织和不伴肝转移的大肠癌间质组织基因表达谱,从间质中筛选与大肠癌肝转移相关的基因.方法 分别对上海市第六人民医院于2008年7月至2010年7月收集的4例... 目的 联合应用激光捕获显微切割和基因芯片技术,构建伴有肝转移的大肠癌原发灶间质组织和不伴肝转移的大肠癌间质组织基因表达谱,从间质中筛选与大肠癌肝转移相关的基因.方法 分别对上海市第六人民医院于2008年7月至2010年7月收集的4例伴有肝转移的大肠癌原发灶组织和4例不伴肝转移的大肠癌组织行激光捕获显微切割,获取各自的间质组织.提取微量RNA,结合安捷伦人全基因组表达谱芯片(4×44 K 2.0)技术,构建8例间质组织标本全基因组表达谱,筛选出大肠癌肝转移间质相关基因;选择显著上调及下调的前2位基因行实时定量PCR验证.结果 在4对新鲜标本的芯片杂交检测中共筛选出1948条基因发生差异表达,其中上调的有1266条,下调的有682条.对骨膜蛋白(Periostin)/胰岛素样生长因子2(IGF-2)/过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子(PGC-1)/趋化因子配体21(CCL21)这4个基因的实时定量PCR检测结果与基因芯片筛选的检测结果基本一致.结论 联合应用激光捕获显微切割和基因芯片技术成功筛选出大肠癌肝转移间质相关基因,为寻找大肠癌肝转移临床早期诊断的分子标志物和靶向治疗提供坚实的理论基础. 展开更多
关键词 大肠癌肝转移 激光捕获显微切割 基因芯片 间质 基因表达谱
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16S rDNA-变性梯度凝胶电泳技术与临床培养方法对比分析儿童阑尾炎组织菌群多样性 预览 被引量:6
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作者 杨静丽 余加林 +3 位作者 王政力 艾青 刘东 唐小丽 《中国循证儿科杂志》 CSCD 2014年第1期23-27,共5页
目的 从分子生物学的角度初步探讨儿童阑尾炎组织的菌群多样性,为全面认识儿童阑尾炎病原菌提供新的视角.方法 对10例阑尾炎组织标本和4例正常阑尾组织标本病理切片后,行革兰染色观察菌群情况,采用激光捕获显微切割技术(LCM)直视下分... 目的 从分子生物学的角度初步探讨儿童阑尾炎组织的菌群多样性,为全面认识儿童阑尾炎病原菌提供新的视角.方法 对10例阑尾炎组织标本和4例正常阑尾组织标本病理切片后,行革兰染色观察菌群情况,采用激光捕获显微切割技术(LCM)直视下分离组织中的细菌,经DNA提取、PCR扩增后,进行变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析并与临床培养结果对比.结果 ①临床培养法:阳性率为70%,共检测到4个菌属,以大肠埃希菌最多见,各标本菌属0~2种,且均可由DGGE检出.②DGGE方法:共检测到14个菌属,包括可培养菌属和无法培养的菌属,以革兰阴性菌为主;10例阑尾炎标本包含的细菌种类和数目均有差异,各标本菌属平均9.6(6~12)种;变形菌门比例为73.9%.在正常阑尾组织中,各标本菌属数在2~7种,变形菌门比例为52.9%,且发现假单胞菌属、不动杆菌属等7个菌属仅在阑尾炎病灶中检出.结论 阑尾炎病灶区是以革兰阴性菌为主的多种细菌混合感染,检测到的细菌种类较正常阑尾多.应用LCM联合PCR-DGGE技术病原菌检出率较高,可为组织病原学研究提供新的思路. 展开更多
关键词 阑尾炎 激光捕获显微切割技术 变性梯度凝胶电泳 菌群多样性
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激光捕获显微分离技术分离多人混合精斑 被引量:1
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作者 杨帆 曾宪海 +4 位作者 丰蕾 徐程 赵禾苗 李彩霞 胡兰 《中国法医学杂志》 CSCD 2014年第4期304-307,共4页
目的利用激光捕获显微分离技术(LCM)分离多供体混合精斑。方法将3名自愿者供给的精液混合后,制备成混合精斑,并涂于覆膜玻片上。用PALM激光捕获显微分离系统切割并捕获样本中的单个精子,利用低体积扩增技术(LV-PCR)扩增并进行检... 目的利用激光捕获显微分离技术(LCM)分离多供体混合精斑。方法将3名自愿者供给的精液混合后,制备成混合精斑,并涂于覆膜玻片上。用PALM激光捕获显微分离系统切割并捕获样本中的单个精子,利用低体积扩增技术(LV-PCR)扩增并进行检测,并对分型结果进行统计。结果联用LCM和低体积扩增技术捕获样本中单个精子细胞进行扩增,可获得每位自愿者的Y-STR分型,分型成功率为73.15%。结论激光捕获显微分离联用低体积扩增技术可完成多供体混合精斑的分离检验。 展开更多
关键词 法医物证学 激光捕获显微分离技术 多人混合精斑
FISH联用激光捕获显微分离技术对混合斑进行分离检验 预览 被引量:1
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作者 杨帆 黄江平 +6 位作者 丰蕾 赵禾苗 徐程 贾竟 韩俊萍 李彩霞 胡兰 《刑事技术》 2014年第6期14-16,19共4页
目的 建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法.方法 收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEP(R)XSpectrumOrangeTMy SpectrumGreenTM试... 目的 建立荧光原位杂交(FISH)联用激光捕获显微分离技术(LCM)精确分离男女混合斑中精子的检验方法.方法 收集健康志愿者精子和女性阴道上皮细胞制备模拟混合斑,经过预处理后用Vysis CEP(R)XSpectrumOrangeTMy SpectrumGreenTM试剂盒进行荧光原位杂交,并用PALM激光捕获显微分离系统分离男、女性细胞,使用Identifiler试剂盒结合低体积扩增技术分别对男女成分进行STR扩增.结果 荧光原位杂交后,可清晰分辨混合斑中的男女细胞.捕获20个精子细胞可以得到完整的STR分型,检出率为80%.随着精子数目增多,检出率提高而等位基因丢失率降低.30个精子检出率最高,为95%.结论 激光捕获显微分离联用FISH技术可用于混合斑中男女细胞DNA的分离检验. 展开更多
关键词 法医物证学 混合斑分离检验 荧光原位杂交 激光捕获显微分离
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