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发菜1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)的基因克隆及其对干旱胁迫的响应
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作者 李晓旭 丁苗苗 +6 位作者 王猛 严奉坤 张筝 梁文裕 徐婷婷 王俊 王玲霞 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期6305-6313,共9页
由glgB基因编码的1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)是催化调控α(1-6)糖苷键分支合成的关键酶。本研究从发菜中克隆获得1,4-α-葡聚糖分支酶glgB基因全长2 292 bp(GeenBank登录号:KX679395),编码763个氨基酸。原核表达得到88.6 kD的glgB基因外... 由glgB基因编码的1,4-α-葡聚糖分支酶(GBE)是催化调控α(1-6)糖苷键分支合成的关键酶。本研究从发菜中克隆获得1,4-α-葡聚糖分支酶glgB基因全长2 292 bp(GeenBank登录号:KX679395),编码763个氨基酸。原核表达得到88.6 kD的glgB基因外源蛋白,MALDI-TOF-TOF/MS质谱分析表明外源蛋白为GBE。发菜glgB与点形念珠藻的glgB序列相似性为94%,氨基酸序列相似性为97%;GBE在第747位的甘氨酸疏水性最强,第168位的组氨酸亲水性最强;Thr有15个磷酸化位点,Tyr有12个磷酸化位点、Ser有27个磷酸化位点;GBE二级结构及三级结构由α螺旋、β折叠、随机卷曲和β转角构成。发菜glgB在干旱胁迫下转录水平的表达量逐渐增加,GBE含量增加,糖原合成酶活性和糖原含量均先增加后降低。研究结果为认识glgB基因信息和发菜响应干旱胁迫的糖原代谢和调控机制提供了依据。 展开更多
关键词 发菜(Nostoc flagelliforme) 1 4-α-葡聚糖分支酶 克隆 干旱胁迫 差异表
发状念珠藻NfwspA3基因的克隆及其耐旱能力分析
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作者 范红丽 冯翠娥 +4 位作者 吴佳月 周丽 郑蕊 苏建宇 岳思君 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期451-458,共8页
水分胁迫蛋白(WSP,Water stress protein,)在植物耐干旱过程中起着重要作用。发状念珠藻具有极强的耐旱、耐盐和抗辐射等能力。本研究以发状念珠藻基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆到一个发状念珠藻水分胁迫蛋白基因的开放阅读框(ORF)序... 水分胁迫蛋白(WSP,Water stress protein,)在植物耐干旱过程中起着重要作用。发状念珠藻具有极强的耐旱、耐盐和抗辐射等能力。本研究以发状念珠藻基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆到一个发状念珠藻水分胁迫蛋白基因的开放阅读框(ORF)序列,命名为NfwspA3,其序列全长1017 bp。生物信息学预测表明,该基因可编码338个氨基酸残基,预测等电点为4.85,分子量为37.48 kD,为亲水性稳定蛋白,分布在细胞质中。构建了NfwspA3基因的重组表达菌株pET32aNfwspA3,以聚乙二醇-6000(PEG-6000)对其模拟干旱胁迫,发现重组菌株最高可忍耐60%浓度的PEG-6000,表现出较强的耐旱性,且具有较高的半乳糖苷酶活性。研究结果为探知发状念珠藻WSP蛋白逆境响应机制及其遗传改良提供了理论依据和基因元件。 展开更多
关键词 发状念珠藻 水分胁迫蛋白 基因克隆 NfwspA3 PEG-6000
发菜固氮基因nifD和nifK克隆及其失水条件下的差异表达
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作者 吴诗杰 严奉坤 +4 位作者 丁苗苗 李晓旭 刘阳 王玲霞 梁文裕 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期239-250,共12页
nifD和nifK编码钼铁固氮酶中的钼铁蛋白。为了解发菜nifD和nifK分子信息及对水分胁迫的响应机制,该研究设计了简并性引物克隆发菜nifD和nifK全长,进行原核表达和生物信息学分析,并对不同失水状态下发菜nifD和nifK在转录水平的差异表达... nifD和nifK编码钼铁固氮酶中的钼铁蛋白。为了解发菜nifD和nifK分子信息及对水分胁迫的响应机制,该研究设计了简并性引物克隆发菜nifD和nifK全长,进行原核表达和生物信息学分析,并对不同失水状态下发菜nifD和nifK在转录水平的差异表达和固氮酶活性的变化进行分析。结果表明,发菜nifD和nifK全长分别为1 443 bp和1 536 bp (登陆号为分别为KU886164和KU886165);将nifD和nifK在大肠杆菌中表达,分别获得一个约57 kD和58 kD的外源蛋白;生物信息学分析表明,nifD和nifK核苷酸序列和推译的氨基酸序列均与点形念珠藻(Nostoc punctiforme PCC 73102)高度一致性;nifD和nifK的二级结构主要有α-螺旋、β-折叠、β-转角和随机卷曲。此外,随着藻体含水量的逐渐降低,发菜nifD和nifK在转录水平上的表达量逐渐增加,但固氮酶活性呈现先增加后下降的趋势。研究结果为深入全面研究发菜固氮酶基因结构及其响应水分胁迫的固氮机理及氮代谢途径提供了基础。 展开更多
关键词 发菜 nifD nifK 克隆与表达 序列分析
发菜GPR基因(proA)克隆及其干旱胁迫下的差异表达
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作者 丁苗苗 刘阳 +6 位作者 李晓旭 王猛 田姣 王玲霞 徐婷婷 纳小凡 梁文裕 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期4648-4655,共8页
proA编码的γ-谷氨酰磷酸还原酶(GPR)是脯氨酸合成途径的关键酶。该研究通过设计特异性引物克隆获得全长1 308 bp的发菜proA基因(GenBank登录号为KX553954)。与点形念珠藻的proA基因及其推译的氨基酸序列相似性分别为91%和93%;氨基酸序... proA编码的γ-谷氨酰磷酸还原酶(GPR)是脯氨酸合成途径的关键酶。该研究通过设计特异性引物克隆获得全长1 308 bp的发菜proA基因(GenBank登录号为KX553954)。与点形念珠藻的proA基因及其推译的氨基酸序列相似性分别为91%和93%;氨基酸序列中第123位的Leu疏水性最强,第80位的Lys亲水性最强;Thr、Ser和Tyr分别有19、12、4个磷酸化位点;proA编码的蛋白为膜外蛋白,其二级结构由α螺旋、β折叠、无规卷曲和β转角构成。将proA基因在大肠杆菌表达,获得一个47.22 kD的外源蛋白,MALDI-TOF-TOF/MS分析证明该外源蛋白为γ-谷氨酰磷酸还原酶。随着干旱胁迫程度的增加,发菜proA在转录水平的差异表达及脯氨酸含量均呈现增加的趋势。研究结果对深入研究发菜proA的分子功能及阐明其在干旱胁迫下的调控机制具有重要意义。 展开更多
关键词 干旱胁迫 发菜 γ-谷氨酰磷酸还原酶 基因克隆 差异表达
发菜多糖絮凝纯化及体外清除自由基分析 预览 被引量:1
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作者 张喜峰 杨光 郑雪 《牡丹江师范学院学报:自然科学版》 2018年第1期60-64,共5页
采用天然高分子絮凝剂壳聚糖对发菜多糖水提液进行絮凝处理,以蛋白质去除率和多糖保留率为指标,通过单因素试验分析壳聚糖用量、絮凝时间、多糖提取液pH、温度对发菜多糖絮凝纯化效果的影响.实验结果表明:在pH为7的提取液中加入1.5 mg/m... 采用天然高分子絮凝剂壳聚糖对发菜多糖水提液进行絮凝处理,以蛋白质去除率和多糖保留率为指标,通过单因素试验分析壳聚糖用量、絮凝时间、多糖提取液pH、温度对发菜多糖絮凝纯化效果的影响.实验结果表明:在pH为7的提取液中加入1.5 mg/mL壳聚糖,在温度为40℃条件下絮凝处理60 min,多糖保留率为90.3%,蛋白质去除率为75.1%;壳聚糖絮凝纯化后的多糖清除DPPH-和-OH的能力优于醇沉后多糖. 展开更多
关键词 发菜 多糖 絮凝
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类火星环境的低气压和水对发状念珠藻复苏的影响 预览
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作者 褚亚东 刘颖慧 +2 位作者 陆洪斌 曹旭鹏 薛松 《载人航天》 CSCD 北大核心 2018年第3期411-417,共7页
为了考察发状念珠藻(发菜)在类火星表面半开放体系复苏的可行性,搭建了在线监测模拟类火星环境密闭体系内发菜复苏时放氧速率的试验装置,并考察了水对发菜光合放氧复苏的影响。结果显示,在气压超过5℃、15℃、25℃所对应的水饱和蒸气压... 为了考察发状念珠藻(发菜)在类火星表面半开放体系复苏的可行性,搭建了在线监测模拟类火星环境密闭体系内发菜复苏时放氧速率的试验装置,并考察了水对发菜光合放氧复苏的影响。结果显示,在气压超过5℃、15℃、25℃所对应的水饱和蒸气压时,发菜放氧最高速率分别为5、7和10μmolO2·h-1·g-1(DW),分别是发菜最大放氧速率的1%、2%和3%;而在气压低于相应的水饱和蒸气压时,发菜放氧平均速率分别下降为1、2和3μmolO2·h-1·g-1(DW),且随着反应时间的延长,发菜在5℃放氧速率下降为0;然而,在5℃,气压为1.7~1.9kPa,加入10mLBG11时,发菜放氧速率最高上调至12μmolO2·h-1·g-1(DW)。以上结果显示,水对发菜在类火星表面半开放体系复苏的影响大于气压。 展开更多
关键词 发菜 低气压 放氧 复苏
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干旱胁迫下发菜蔗糖合成酶基因Sus2克隆与差异表达 被引量:1
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作者 李晓旭 丁苗苗 +6 位作者 刘阳 王猛 严奉坤 梁文裕 徐婷婷 王俊 王玲霞 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第20期6662-6669,共8页
蔗糖合成酶(Sus2)是调控蔗糖代谢的关键酶。为了解发菜Sus2分子信息及其对干旱胁迫的响应,设计特异性引物克隆发菜Sus2全长并进行序列分析和原核表达,分析干旱胁迫下发菜Sus2在转录水平上表达变化和蔗糖含量变化。结果表明,发菜Sus... 蔗糖合成酶(Sus2)是调控蔗糖代谢的关键酶。为了解发菜Sus2分子信息及其对干旱胁迫的响应,设计特异性引物克隆发菜Sus2全长并进行序列分析和原核表达,分析干旱胁迫下发菜Sus2在转录水平上表达变化和蔗糖含量变化。结果表明,发菜Sus2基因全长312bp(GeenBank登录号为MG598619),与点形念珠藻的Sus2基因及其推译氨基酸的序列相似性分别为94%和93%。推译氨基酸在第8l位的Ile疏水性最强,在第27位的Gln亲水性最强。Thr有3个磷酸化位点,Ser有12个磷酸化位点,Tyr有3个磷酸化位点。Sus2蛋白二级结构及三级结构由OL螺旋、B折叠、随机卷曲和13转角共同构成。将Sus2基因进行原核表达,得到一个12.29kD的外源蛋白,LC-MS/MS分析证明该外源蛋白为蔗糖合成酶。干旱胁迫下发菜Sus2在转录水平的表达量和蔗糖含量均逐渐增加。研究结果为进一步认识发菜Sus2的分子信息以及干旱胁迫下发菜蔗糖代谢的分子机理提供了科学依据。 展开更多
关键词 发菜 蔗糖合成酶 克隆 差异表达 干旱胁迫
发菜中GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因的克隆及原核表达 预览 被引量:1
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作者 蔡国强 陈雪峰 +2 位作者 范华 刘欢 赵圆圆 《食品与发酵工业》 CSCD 北大核心 2018年第1期31-36,共6页
前期采用RNA-Seq技术对高盐胁迫下的发菜样品进行转录组测序,发现GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因转录水平较正常培养条件上调2.18倍。基于转录组测序结果,通过同源相比对分析设计引物,以发菜基因组为模板克隆GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因,获得... 前期采用RNA-Seq技术对高盐胁迫下的发菜样品进行转录组测序,发现GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因转录水平较正常培养条件上调2.18倍。基于转录组测序结果,通过同源相比对分析设计引物,以发菜基因组为模板克隆GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因,获得长度为1 080 bp的核酸序列。通过生物信息学分析表明,该基因具有较高保守性,蛋白质二级结构主要构成方式为随机卷曲和α螺旋,是亲水性蛋白,酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸磷酸化位点个数分别为13、15、17,蛋白质分子质量为41.08 ku,等电点为5.73。正负电荷氨基酸残基数分别为38和46。随后,将该基因插入质粒p ET-28a中成功构建重组表达质粒,然后转化至BL21大肠杆菌感受态中进行原核表达。在OD值为0.8时,用1 mmol/L IPTG在16℃下诱导表达20 h后,获得预期大小重组蛋白(41.08 ku)。该研究首次成功克隆得到发菜GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因,并成功构建重组表达质粒于大肠杆菌高效表达。 展开更多
关键词 发菜 盐胁迫 GDP-甘露糖 4 6-脱水酶基因 克隆 原核表达
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药食两用念珠藻生物活性成分的研究进展 预览 被引量:1
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作者 王红雨 李海峰 黄泽波 《广东药科大学学报》 CAS 2017年第4期561-564,共4页
地木耳、葛仙米、发菜等念珠藻食用和药用历史悠久,具有除疲劳、利肠胃、降脂明目等功效,外用也可以治疗烫伤等症.近年来的研究表明,念珠藻含有多种营养和活性成分,其中多糖类、蛋白类、脂类、色素类等成分具有抗氧化、抗感染、免疫调... 地木耳、葛仙米、发菜等念珠藻食用和药用历史悠久,具有除疲劳、利肠胃、降脂明目等功效,外用也可以治疗烫伤等症.近年来的研究表明,念珠藻含有多种营养和活性成分,其中多糖类、蛋白类、脂类、色素类等成分具有抗氧化、抗感染、免疫调节、抗肿瘤等生物学和药理学活性.本文以药食两用念珠藻为主,综述念珠藻生物活性成分的研究进展,以期为念珠藻在生物医药领域的开发和应用提供参考. 展开更多
关键词 念珠藻 地木耳 葛仙米 发菜 生物活性
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干旱胁迫条件下发菜cphB差异表达与基因克隆
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作者 王淑萍 刘阳 +4 位作者 严奉坤 吴诗杰 王玲霞 徐婷婷 梁文裕 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第6期2472-2479,共8页
发菜是一种分布在干早、半干旱荒漠草原地区的陆生固氮蓝藻,对干旱具有极强的适应性。采用qRT—PCR技术,对干旱胁迫条件下发菜cphB的差异表达进行了分析,发现干旱胁迫条件下发菜cphB在转录水平上呈逐渐增加的趋势。根据发菜同源物种... 发菜是一种分布在干早、半干旱荒漠草原地区的陆生固氮蓝藻,对干旱具有极强的适应性。采用qRT—PCR技术,对干旱胁迫条件下发菜cphB的差异表达进行了分析,发现干旱胁迫条件下发菜cphB在转录水平上呈逐渐增加的趋势。根据发菜同源物种设计简并性引物克隆cphB基因,获得长度为864bp的DNA(GenBank登陆号为KX092456)。同源性比较发现发菜cphB基因具有较高的保守性,二级结构预测表明发菜CphB由α螺旋,β折叠和随机卷曲构成。三级结构预测表明CphB具有一个由α螺旋和β折叠组成的5股的结构域和由7个β折叠连成三明治结构的7股的结构域。将cphB基因在大肠杆菌中表达,获得符合预期的外源重组蛋白,CphB亚细胞定位于细胞质中。研究成果为进一步研究干旱胁迫条件下发菜cphB表达调控、藻蓝素的代谢机制及能量代谢机制方面奠定了基础。 展开更多
关键词 发菜 CphB 差异表达 基因克隆 原核表达
发菜RNA-seq转录组分析及耐旱相关基因筛选
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作者 梁文裕 杨佳 +3 位作者 王玲霞 王淑萍 刘阳 吴诗杰 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第9期3783-3794,共12页
发菜是一种陆生耐旱固氮蓝藻,具有重要的生态和资源价值,但目前发菜的基因组和转录组信息还比较缺乏。本研究采用Illumina Hi Seq TM 2500高通量测序平台对充分吸水和失水后的发菜藻体进行转录组分析,经过拼接组装共获得30 013 560条cle... 发菜是一种陆生耐旱固氮蓝藻,具有重要的生态和资源价值,但目前发菜的基因组和转录组信息还比较缺乏。本研究采用Illumina Hi Seq TM 2500高通量测序平台对充分吸水和失水后的发菜藻体进行转录组分析,经过拼接组装共获得30 013 560条clean reads,3 100个Unigene,序列平均长度854 nt。将Unigene序列与NR、NT、Swiss-Port、PFAM、GO、COG、KEGG(E-value〈1.0E~(-5))等数据库进行比对,共有2 874个Unigene获得了注释。通过GO功能分类,917个Unigene映射到GO不同功能节点上;通过Unigene与COG数据库的比对,可将有COG功能的514个Unigene分为20类;通过KEGG pathway分析,有1 220个编码基因参与了135条已知的代谢通路。提示谷胱甘肽、类胡萝卜素、淀粉和蔗糖、ABC转运体等代谢途径的部分基因在失水藻体上调表达,说明这些通路与发菜耐旱性关系密切。因此这些注释信息为今后发菜耐旱基因的挖掘提供了重要依据,同时也为发菜分子生物学的进一步研究提供了试验基础。 展开更多
关键词 发菜 转录组 RNA-SEQ 基因注释 耐旱基因筛选
盐胁迫对发菜胞外多糖抗肿瘤活性以及免疫活性的影响
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作者 范华 陈雪峰 +1 位作者 路苗 孙玉姣 《食品科技》 CAS 北大核心 2017年第1期198-203,共6页
对液体培养的发菜细胞进行盐胁迫处理,研究盐胁迫对发菜胞外多糖抗肿瘤活性以及免疫活性的影响。醇沉法提取0.1 mol/L Na Cl、0.3 mol/L Na Cl盐胁迫培养的发菜胞外多糖0.1M-YEPS、0.3 M-YEPS,研究其对人结肠癌细胞HT-29、Lo Vo增殖的... 对液体培养的发菜细胞进行盐胁迫处理,研究盐胁迫对发菜胞外多糖抗肿瘤活性以及免疫活性的影响。醇沉法提取0.1 mol/L Na Cl、0.3 mol/L Na Cl盐胁迫培养的发菜胞外多糖0.1M-YEPS、0.3 M-YEPS,研究其对人结肠癌细胞HT-29、Lo Vo增殖的抑制活性,以及对小鼠巨噬细胞RAW 264.7增殖、中性红吞噬能力和超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活力的影响。结果表明,相比于无盐胁迫的发菜胞外多糖(NEPS),0.1 M-YEPS、0.3 M-YEPS对肿瘤细胞的增殖抑制作用显著提高,并且呈剂量依赖性。此外,0.1 M-YEPS、0.3 M-YEPS能有效促进RAW 264.7细胞的增殖,增强巨噬细胞吞噬中性红能力,提高RAW 264.7细胞内的SOD活力。与NEPS和0.1 M-YEPS相比,0.3 M-YEPS对肿瘤细胞的抑制作用、对巨噬细胞的增殖作用、吞噬中性红能力以及SOD活力的提高更为显著。 展开更多
关键词 发菜 胞外多糖 盐胁迫 抗肿瘤活性 免疫活性
极端低气压处理后低温高温交替对发状念珠藻的光合生理活性的影响 预览 被引量:1
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作者 刘颖慧 褚亚东 +2 位作者 陆洪斌 曹旭鹏 薛松 《载人航天》 CSCD 2017年第6期829-834,共6页
为考察发状念珠藻在类地行星环境中生存的可行性,搭建了模拟类地行星环境的极端低气压实验装置,并研究极端低气压与低温-高温交替作用对发状念珠藻光合生理活性的影响。结果显示,在气体组成为C02和N2(体积比为95:5)的氛围中,在-20丈... 为考察发状念珠藻在类地行星环境中生存的可行性,搭建了模拟类地行星环境的极端低气压实验装置,并研究极端低气压与低温-高温交替作用对发状念珠藻光合生理活性的影响。结果显示,在气体组成为C02和N2(体积比为95:5)的氛围中,在-20丈、100Pa、600Pa和1200Pa气压下,分别处理发菜4天、7天、15天、30天和60天,发菜的呼吸和光合放氧速率与未处理样品没有差别。此外,不同气压下,-20丈到25丈交替处理发菜10天、20天和30天,发菜的光合及呼吸速率与正常相比也没有差异。以上结果表明,发菜能够生存在极端低气压下的低温-高温交替环境。通过分析样品的脂肪酸组成和游离脯氨酸含量发现,处理后样品的游离脯氨酸含量升高,脂肪酸组成也发生了相应的变化,这些变化是维持发菜耐受极端低气压和低温-高温交替的物质基础。 展开更多
关键词 发菜 低气压 光合 呼吸 脯氨酸
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发菜G6PDH基因(GND)克隆及其干旱胁迫下的差异表达分析 预览 被引量:2
14
作者 刘阳 严奉坤 +4 位作者 丁苗苗 李晓旭 王玲霞 岳思君 梁文裕 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2017年第7期1263-1270,共8页
由GND编码的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)是戊糖磷酸途径的关键酶.为了解发菜GND分子信息以及对干旱胁迫的响应机制,该研究设计了特异性引物克隆发菜GND全长,进行序列分析、原核表达和MALDI-TOF-TOF/MS鉴定,并对干旱胁迫下发菜GND的差... 由GND编码的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)是戊糖磷酸途径的关键酶.为了解发菜GND分子信息以及对干旱胁迫的响应机制,该研究设计了特异性引物克隆发菜GND全长,进行序列分析、原核表达和MALDI-TOF-TOF/MS鉴定,并对干旱胁迫下发菜GND的差异表达水平和G6PDH活性进行分析.结果表明:(1)发菜GND全长1 431 bp(GenBank登录号为KX553955),与点形念珠藻(73102)的GND核苷酸序列相似性为96%,G6PDH氨基酸相似性为98%;氨基酸序列中第26和27位的Ile疏水性最强,在第302位的Arg亲水性最强,Thr有19个磷酸化位点,Ser有18个磷酸化位点,Tys有5个磷酸化位点,二级结构和三级结构主要由α螺旋、β折叠、β转角和随机卷曲构成.(2)将GND基因进行原核表达,获得47.23 kD的外源表达蛋白G6PDH.(3)随干旱胁迫程度加剧,GND在转录水平的表达量和G6PDH活性均逐渐增加.研究结果为进一步探讨干旱胁迫条件下发菜GND表达调控奠定了基础. 展开更多
关键词 发菜 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 克隆 差异表达
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盐胁迫对发菜胞外多糖结构及其理化性质的影响 预览 被引量:1
15
作者 路苗 陈雪峰 +3 位作者 赵秀霞 王宁 王贵春 孙玉姣 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期119-124,共6页
对液体培养的发菜细胞进行盐胁迫处理,研究盐胁迫对发菜胞外多糖结构及其部分理化性质的影响。提取纯化正常及盐胁迫培养下的发菜胞外多糖(分别命名为NEPS、YEPS),测定糖含量、单糖组成、糖苷键类型、保湿性、吸湿性、热稳定性等,分... 对液体培养的发菜细胞进行盐胁迫处理,研究盐胁迫对发菜胞外多糖结构及其部分理化性质的影响。提取纯化正常及盐胁迫培养下的发菜胞外多糖(分别命名为NEPS、YEPS),测定糖含量、单糖组成、糖苷键类型、保湿性、吸湿性、热稳定性等,分析发菜胞外多糖对盐胁迫的响应。结果表明:NEPS与YEPS单糖组成种类一致,但含量发生明显变化;红外光谱、高碘酸氧化分析可知,两者特征吸收峰基本一致,均有β-D-吡喃葡萄糖及糖醛酸,糖苷键键型主要以1—6为主,可能存在1—2、1—4键;原子力显微镜观察显示NEPS与YEPS的分子微观结构存在明显差异,NEPS呈尖锥状结构,YEPS呈棒状结构;YEPS的吸湿性及热稳定性均高于NEPS。 展开更多
关键词 发菜 胞外多糖 盐胁迫 化学结构 理化性质
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发状念珠藻醛酮还原酶基因NfAKR的克隆与表达 预览
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作者 岳思君 李治学 +3 位作者 范红丽 周娟 梁文裕 郑蕊 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2370-2375,共6页
以发状念珠藻细胞为试材,采用PCR技术克隆了醛酮还原酶基因的开放阅读框(ORF)序列,命名为NfAKR。对基因序列特征进行了生物信息学分析,根据其编码氨基酸序列预测了NfAKR蛋白的三维结构,同时探讨了PEG-6000胁迫下NfAKR的表达特性。结... 以发状念珠藻细胞为试材,采用PCR技术克隆了醛酮还原酶基因的开放阅读框(ORF)序列,命名为NfAKR。对基因序列特征进行了生物信息学分析,根据其编码氨基酸序列预测了NfAKR蛋白的三维结构,同时探讨了PEG-6000胁迫下NfAKR的表达特性。结果表明:NfAKR基因的编码序列长912bp,编码304个氨基酸,预测其编码蛋白的相对分子量为33.51kD,理论等电点为4.94,具有醛酮还原酶超家族保守结构域。NfAKR蛋白主要由10个α-螺旋和11β-折叠组成,中间形成一个疏水穴,作为酶的催化活性中心。NfAKR与点形念珠藻处在同一进化枝上,具有较近的亲缘关系。qRT-PCR分析显示,PEG-6000胁迫下NfAKR基因上调表达,当PEG-6000浓度为8%时,其相对表达量为5.66并达到峰值。依据NfAKR基因响应干旱胁迫上调表达的特性,推测醛酮还原酶可能参与发状念珠藻抵御干旱胁迫过程。 展开更多
关键词 发状念珠藻 醛酮还原酶 基因克隆 干旱胁迫 表达分析
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发菜胞外多糖硫酸化条件的优化及红外光谱分析 预览
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作者 郭金英 朱蓓茹 +4 位作者 任国艳 吴影 王萍 崔国庭 李政军 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第24期61-67,共7页
液体培养发菜细胞,发菜细胞经去藻体、浓缩、透析、脱蛋白、醇沉、DEAE-52离子交换柱层析分级、Sephadex-100葡聚糖凝胶柱分级处理得到发菜胞外精多糖。以硫酸根的取代度为指标,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken设计进行响应面试验... 液体培养发菜细胞,发菜细胞经去藻体、浓缩、透析、脱蛋白、醇沉、DEAE-52离子交换柱层析分级、Sephadex-100葡聚糖凝胶柱分级处理得到发菜胞外精多糖。以硫酸根的取代度为指标,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken设计进行响应面试验,建立因素与响应值之间的数学模型,确定适宜的发菜胞外多糖硫酸化条件。结果表明,发菜胞外多糖硫酸化修饰最佳条件为反应温度71℃、反应时间3 h、氯磺酸-吡啶体积比1∶7,在此条件下,硫酸化取代度为5.05。红外光谱检测表明,硫酸基团已与多糖分子结合。 展开更多
关键词 发菜 多糖 硫酸化 红外光谱
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发状念珠藻过氧化物还原酶NfPrx基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 岳思君 周娟 +2 位作者 郑蕊 范红丽 苏建宇 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1287-1294,共8页
过氧化物还原酶(peroxiredoxin,Prx)属抗氧化蛋白超家族,为了探究Prx在发状念珠藻抗逆过程中所具有的生物学功能,从发状念珠藻细胞中克隆了NfPrx基因的完整开放阅读框(ORF),并对基因序列特征进行了生物信息学分析,根据氨基酸序列预... 过氧化物还原酶(peroxiredoxin,Prx)属抗氧化蛋白超家族,为了探究Prx在发状念珠藻抗逆过程中所具有的生物学功能,从发状念珠藻细胞中克隆了NfPrx基因的完整开放阅读框(ORF),并对基因序列特征进行了生物信息学分析,根据氨基酸序列预测了该蛋白的三维结构,在此基础上构建了基因的融合表达载体并诱导其表达,同时探讨了PEG-6000胁迫下NfPrx的表达特性。结果表明,NfPrx包含612 bp的ORF,编码203个氨基酸,NfPrx具有PRXTyp2cys结构域,属于硫氧还蛋白超基因家族,与点形念珠藻、丝状蓝藻7507、微毛藻7126、池生念珠藻CENA21等物种的Prx氨基酸序列一致性高达94%以上。NfPrx与点形念珠藻处在同一进化枝上,具有较近的亲缘关系。利用所构建的原核表达载体,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳,证实诱导表达的NfPrx蛋白与预期结果大小一致。qRT-PCR分析结果显示,NfPrx的表达随干旱胁迫程度的增加先增后降,PEG-6000浓度为8%时,表达量达到峰值,根据表达特性,推测过氧化物还原酶可能参与响应发状念珠藻逆境胁迫过程。 展开更多
关键词 发状念珠藻 过氧化物还原酶 基因克隆 表达分析
发状念珠藻干旱胁迫响应基因NfGR的克隆与鉴定 预览 被引量:1
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作者 岳思君 范红丽 +2 位作者 郑蕊 周娟 苏建宇 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1955-1961,共7页
该研究采用PCR技术,从发状念珠藻细胞中克隆了谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)基因,命名为NfGR,其开放阅读框长1 374bp,编码458个氨基酸,蛋白相对分子量为49.42kD,理论等电点为5.49。氨基酸序列分析表明,NfGR蛋白具有NADPH... 该研究采用PCR技术,从发状念珠藻细胞中克隆了谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)基因,命名为NfGR,其开放阅读框长1 374bp,编码458个氨基酸,蛋白相对分子量为49.42kD,理论等电点为5.49。氨基酸序列分析表明,NfGR蛋白具有NADPH结合位点超家族(NADB-Rossmann superfamily)和吡啶氧化还原酶二聚体超家族(Pyr_redox_dim superfamily)2个结构域,与点形念珠藻(Nostoc punctiforme)的相似性达93%。系统进化树分析表明,NfGR与点形念珠藻处在同一进化枝上,亲缘关系较近。qRT-PCR表达分析表明,在不同浓度PEG-6000处理下,NfGR基因均保持上调表达,其中,PEG-6000浓度为8%时,NfGR基因的相对表达量达到峰值(32.69)。研究推测,谷胱甘肽还原酶可能参与了发状念珠藻对干旱胁迫过程的响应。 展开更多
关键词 发状念珠藻 谷胱甘肽还原酶 基因克隆 荧光定量PCR
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发菜细胞培养的研究进展 预览
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作者 韩培培 贾士儒 《天津科技大学学报》 CAS 北大核心 2016年第2期1-5,12共6页
传统食材发菜是一种受国家一级保护的珍稀陆生蓝细菌,具有较高的营养价值、药用价值和重要的生态学作用,为了实现发菜生物资源的可持续利用,发菜的人工培养研究已广泛开展.本文对近年来发菜细胞培养的研究,从发菜细胞的分离、不同模式... 传统食材发菜是一种受国家一级保护的珍稀陆生蓝细菌,具有较高的营养价值、药用价值和重要的生态学作用,为了实现发菜生物资源的可持续利用,发菜的人工培养研究已广泛开展.本文对近年来发菜细胞培养的研究,从发菜细胞的分离、不同模式的液体培养、发菜细胞的规模化培养以及发菜细胞的固态培养等方面进行了综述,并提出了进一步的研究思路. 展开更多
关键词 发菜 细胞培养 液体培养
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