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羊口疮病毒OV-HLJ05株及其VEGF毒力因子的遗传特征
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作者 于永忠 段旭阳 +6 位作者 刘圆圆 赵蕊 李岩 马金柱 宋佰芬 连正兴 崔玉东 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期622-632,共11页
羊口疮在我国呈区域流行态势,各地分离株基因型混杂不清,严重制约该病的区域性防控。本研究针对黑龙江大庆地区某小型私营羊场出现的疑似羊口疮病例,采集发病的波尔山羊痂皮病料,通过病毒的分离、电镜形态学观察、本体动物回归试验、血... 羊口疮在我国呈区域流行态势,各地分离株基因型混杂不清,严重制约该病的区域性防控。本研究针对黑龙江大庆地区某小型私营羊场出现的疑似羊口疮病例,采集发病的波尔山羊痂皮病料,通过病毒的分离、电镜形态学观察、本体动物回归试验、血清学检测和分子生物学鉴定,获得一株羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),命名为OVHLJ05株。进而,病毒分子遗传学研究发现,OV-HLJ05在其主要的囊膜蛋白编码基因F1L上,与近年来国内众多分离株相差不大;同源性达95%~98.5%。而在其毒力因子编码基因VEGF方面,OV-HLJ05与9个国内外代表毒株相比,则出现了较大分歧。OV-HLJ05株与OV-SA00(USA)、OV-GO(China)和OV-SJ1(China)等3个毒株亲缘关系密切;同源性分别是93.2%、91.9%和87.2%。而与NZ2(New Zealand)、IA82(USA)、B029(Germany)、D1701(Germany)OV-YX(China)和OV-NA-1-11(China)距离较远。但是,VEGF分子同源建模及其功能性结构域VHD分析表明,各毒株毒力因子仅在Loop3处差别明显,Loop3多态性是否决定ORFV毒力的多样性有待于进一步比较研究。本研究结果说明ORFV不同基因型在我国南北分布的复杂性,这为羊口疮分子流行病学和羊口疮的区域防控研究提供了参考。 展开更多
关键词 羊传染性脓疱(orf) 羊口疮病毒(ORFV) 分离鉴定 F1L基因 VEGF基因 遗传特征
羊口疮病毒对树突状细胞成熟和功能的影响及转录组学分析
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作者 冯倩 吴锦艳 +4 位作者 李玲霞 杜国玉 尚佑军 刘永生 刘湘涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期935-947,共13页
羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)感染机体后能够引起强烈的免疫应答反应。为了探究ORFV对小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)成熟及未成熟的CD4~+T细胞(Na?ve CD4~+T细胞)极化作用,并且寻找ORFV感染BMDC后... 羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)感染机体后能够引起强烈的免疫应答反应。为了探究ORFV对小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)成熟及未成熟的CD4~+T细胞(Na?ve CD4~+T细胞)极化作用,并且寻找ORFV感染BMDC后与免疫相关的差异表达基因。本研究用不同感染复数(Multiplicity of infection,MOIs)的ORFV感染BMDC,检测ORFV的感染是否能够促进BMDC成熟,即通过测定其表面共刺激分子表达情况、细胞因子的分泌情况以及细胞的吞噬功能判断BMDC是否能够成熟。使用流式方法检测该细胞对Na?ve CD4~+T细胞刺激能力的影响,并对1 MOI ORFV作用后的BMDC进行高通量测序。结果表明1 MOI ORFV能够促进BMDC的成熟,并且能诱导Na?ve CD4~+T细胞向Th1细胞分化。高通量测序共检测到有8241个差异表达基因,其中上调基因4 205个,下调基因4036个。这些差异表达基因主要参与抗原递呈与加工过程、T细胞受体信号通路、T细胞激活与细胞因子分泌途径以及细胞凋亡信号通路中等。荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)对部分差异表达基因进行验证,结果与RNA-seq测序结果一致。本研究为进一步阐明ORFV与免疫细胞的相互作用机制奠定基础。 展开更多
关键词 羊口疮 羊口疮病毒(ORFV) 树突状细胞 转录组 差异表达基因(DEGs)
烟草NtPP2C37-like基因的克隆及表达分析
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作者 何晓健 张柳 +2 位作者 程亚东 杨焕文 毛自朝 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期4973-4977,共5页
2C型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP2C-type protein phosphatases, PP2C)是ABA信号转导途径中的关键组分,在植物生长发育、细胞周期调节及应对逆境胁迫的过程中发挥重要的作用。本研究利用本实验室构建的‘云烟87’转录组数据库,从‘云烟8... 2C型丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP2C-type protein phosphatases, PP2C)是ABA信号转导途径中的关键组分,在植物生长发育、细胞周期调节及应对逆境胁迫的过程中发挥重要的作用。本研究利用本实验室构建的‘云烟87’转录组数据库,从‘云烟87’烟草中克隆到一个NtPP2C37-like基因,该基因开放阅读框为1 275 bp,编码425个氨基酸残基。通过对NtPP2C37-like蛋白质进行相关分析,该蛋白不存在信号肽,可能属于非分泌蛋白;不具有跨膜结构,不属于跨膜蛋白。同源性分析结果显示,说明NtPP2C37-like蛋白与茄科植物有高度同源性。本研究获得了烟草NtPP2C37-like基因完整ORF,这为将来深入研究烟草NtPP2C37-like基因功能提供了科学依据。 展开更多
关键词 烟草(Nicotiana L.) NtPP2C37-Like ORF 生物信息学
羊口疮的免疫防治研究进展 预览
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作者 陈勇 陈小云 《中国兽药杂志》 2019年第5期74-79,共6页
羊口疮是由羊口疮病毒感染所引起的一种人兽共患病,在世界范围内广泛流行,不仅给全球畜牧业造成巨大经济损失,而且危害相关从业人员的健康。目前免疫防治羊口疮的方法主要是疫苗接种。从传统疫苗与新型疫苗的角度对羊口疮疫苗研制现状... 羊口疮是由羊口疮病毒感染所引起的一种人兽共患病,在世界范围内广泛流行,不仅给全球畜牧业造成巨大经济损失,而且危害相关从业人员的健康。目前免疫防治羊口疮的方法主要是疫苗接种。从传统疫苗与新型疫苗的角度对羊口疮疫苗研制现状进行综述,以期为该病毒疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 羊口疮 免疫防治 疫苗
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2015年中国典型对虾养殖区WSSV流行株高变异区序列的分析比较 预览 被引量:2
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作者 秦梦雪 孙新颖 +2 位作者 万晓媛 刘庆慧 黄倢 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2018年第2期128-137,共10页
为了解我国白斑综合征病毒(WSSV)流行变异特征,本研究对2015年4~10月期间在山东、江苏、天津、浙江、海南和广东6省市采集到的57份WSSV阳性的样本,通过特异性的扩增目的片段,根据测序结果分析比较不同地区、不同分离株之间在ORF14/15、O... 为了解我国白斑综合征病毒(WSSV)流行变异特征,本研究对2015年4~10月期间在山东、江苏、天津、浙江、海南和广东6省市采集到的57份WSSV阳性的样本,通过特异性的扩增目的片段,根据测序结果分析比较不同地区、不同分离株之间在ORF14/15、ORF23/24上的缺失变异情况,以及ORF75、ORF94和ORF125上的重复单元(Repeat unit,RU)数目差异。结果显示,在ORF14/15扩增中,分别有6530、5908和5725 bp的片段缺失,而在ORF23/24扩增中均有12070 bp大片段的缺失,ORF75的45 bp的RU数目分别为1、2和3,102 bp的RU数目均为1,而ORF94的RU数目分别为4、5、10和12不等,ORF125的RU数目为3、5和6。结果表明,WSSV在部分开放型阅读框上表现出明显的变异差异,而在某些开放型阅读框上的缺失情况则有显著的稳定性。 展开更多
关键词 WSSV ORF 缺失 变异
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贵州省PCV2流行株的分型及遗传变异分析 预览
6
作者 吴好叶 徐国 +8 位作者 梁海英 曾智勇 汤德元 王彬 黄涛 张爱琼 何小莉 咸文 陈娟 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第7期12-15,19共5页
为了解贵州省猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行病学及遗传变异情况,本文收集2012-2016年间16株贵州PCV2流行毒株和NCBI上报道登录的35株PCV2序列作生物信息学分析。分析结果显示,在本次所分析的各PCV2毒株之间核苷酸变异率较大的分别为O... 为了解贵州省猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行病学及遗传变异情况,本文收集2012-2016年间16株贵州PCV2流行毒株和NCBI上报道登录的35株PCV2序列作生物信息学分析。分析结果显示,在本次所分析的各PCV2毒株之间核苷酸变异率较大的分别为ORF6(32. 22%)、ORF10(29. 63%)、ORF2(24. 11%)、ORF5(21. 60%)、ORF7(20. 00%);遗传进化表明,贵州省16株PCV2序列中3株为PCV2a型,5株为PCV2b型,8株为PCV2d型;其中PCV2d型已经逐渐过渡成为贵州省的主要流行毒株,且同种基因型之间ORF2所编码的氨基酸序列保守性相对较高。表明PCV2流行毒株之间由于基因型的不同,可能会导致免疫力或致病力的改变。该结果以期为贵州省PCV2的防控、流行病学的研究提供一定的参考。 展开更多
关键词 PCV2d 基因型 ORF 生物信息学
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苋菜WRKY13基因克隆与生物信息学分析 被引量:1
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作者 赵梅 赵芳 +4 位作者 彭丽云 潘君飞 张梓浩 赖钟雄 刘生财 《分子植物育种》 CSCD 北大核心 2018年第12期3830-3835,共6页
以苋菜试管苗为材料,利用实验室构建的苋菜转录组数据库,筛选出WRKY13基因cDNA序列,对其开放阅读框(ORF)进行克隆验证和生物信息学分析。结果表明,WRKY13基因ORF长度为675 bp,编码224个氨基酸。通过生物信息学预测,该蛋白属于疏水性蛋... 以苋菜试管苗为材料,利用实验室构建的苋菜转录组数据库,筛选出WRKY13基因cDNA序列,对其开放阅读框(ORF)进行克隆验证和生物信息学分析。结果表明,WRKY13基因ORF长度为675 bp,编码224个氨基酸。通过生物信息学预测,该蛋白属于疏水性蛋白,有44个氨基酸位点存在磷酸化修饰;是WRKY蛋白超级家族(WRKY superfamily)的一个成员,存在1个WRKY结合位点;其二级结构由无规则卷曲结构、β折叠组成和α螺旋;蛋白系统进化树分析表明苋菜WRKY13蛋白独立形成一个分支,但与拟南芥、芜菁、烟草、葡萄聚类到一起,说明WRKY13蛋白在生物进化过程中还是比较保守的。本研究获得了苋菜WRKY13基因完整ORF,这为将来深入研究苋菜WRKY13基因功能提供了科学依据,也为研究其调控甜菜红素代谢过程的影响提供参考。 展开更多
关键词 苋菜 WRKY13 ORF 克隆 生物信息学
猪流行性腹泻流行病学研究进展 预览 被引量:6
8
作者 牛江婷 伊淑帅 +4 位作者 胡桂学 郭衍冰 张双 郭梦茹 董国英 《中国兽医杂志》 北大核心 2018年第1期69-71,共3页
猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的一种以急性腹泻、呕吐、严重脱水为主要临床症状的急性、高度传染性、高致死性病毒性肠道传染病。PEDV可感染各年龄段的猪,以哺乳仔猪最易感,经口鼻感染后病毒直接进入小肠,... 猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染引起的一种以急性腹泻、呕吐、严重脱水为主要临床症状的急性、高度传染性、高致死性病毒性肠道传染病。PEDV可感染各年龄段的猪,以哺乳仔猪最易感,经口鼻感染后病毒直接进入小肠,在肠绒毛上皮细胞增殖进而对细胞器造成损伤,导致的细胞功能障碍引起肠黏膜细胞坏死、肠绒毛脱落,从而引起腹泻,脱水,小肠臌气、扩张、积液等临床症状,严重者可导致仔猪死亡。 展开更多
关键词 ORF 病原学 基因组 猪流行性腹泻 流行毒株 分子流行病学 哺乳仔猪
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红茂草治疗羊口疮试验研究 被引量:1
9
作者 马志宏 党岩 +3 位作者 苟想珍 容维中 张莉敏 贾凌 《中兽医医药杂志》 2017年第5期42-44,共3页
将50只健康羊只随机分为10组,每组5只。用羊口疮强毒感染试验羊,建立羊口疮病理模型。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别用浓度7.5 mg/m L、15.0 mg/m L、30.0 mg/m L、60.0 mg/m L、120.0 mg/m L的红茂草乙醇制剂进行治疗。试验Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ... 将50只健康羊只随机分为10组,每组5只。用羊口疮强毒感染试验羊,建立羊口疮病理模型。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别用浓度7.5 mg/m L、15.0 mg/m L、30.0 mg/m L、60.0 mg/m L、120.0 mg/m L的红茂草乙醇制剂进行治疗。试验Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ组分别用浓度5.0 mg/m L、10.0 mg/m L、20.0 mg/m L、40.0 mg/m L的红茂草总生物碱盐酸盐制剂进行治疗,Ⅹ组为对照。结果表明,Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组羊口疮愈合率分别与Ⅰ组、Ⅱ组之间均存在极显著差异(P〈0.01);Ⅰ组与Ⅱ组之间也存在极显著差异(P〈0.01);Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组之间相互差异不显著(P〉0.05),剂量与溃疡面愈合率之间的回归方程为:y=1.675 6x+3.488,R2=0.958 3,其EC50=7.986 6mg/m L。盐酸盐制剂羊口疮愈合率除了Ⅷ组和Ⅸ组之间差异不显著(P〉0.05)外,其余各组两两之间均存在极显著差异(P〈0.01),剂量与溃疡面愈合率之间的回归方程为:y=1.709 3x+3.547 7,R2=0.977 2,其半数效应浓度EC50=7.073 7 mg/m L。 展开更多
关键词 红茂草 羊口疮 最适治疗浓度
Application of fusion PCR to the amplification of full-length ORF sequences of different splicing variants of NuMA 1 from HeLa cells
10
作者 Jin WU Guanting Lu +4 位作者 Jianwei Wu Hua Yang Zhicao Yu Shijie Mu Hongmei Zhang 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第10期962-965,共4页
关键词 MRNA序列 NUMA HeLa细胞 变异体 PCR ORF 剪接 应用
白斑综合征病毒2014年中国毒株变异区的序列比较 预览 被引量:6
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作者 孙新颖 万晓媛 +1 位作者 刘庆慧 黄倢 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2016年第2期127-133,共7页
为研究白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)在中国不同地区的分子流行病学变异特征,对2014年1-8月期间在病害暴发区采集到的48份PCR检测阳性样本,用ORF75、ORF94和ORF125引物扩增目的片段,连接转化已克隆目的片段,测序分... 为研究白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)在中国不同地区的分子流行病学变异特征,对2014年1-8月期间在病害暴发区采集到的48份PCR检测阳性样本,用ORF75、ORF94和ORF125引物扩增目的片段,连接转化已克隆目的片段,测序分析不同样本ORF75、ORF94和ORF125重复序列数目的差异。结果显示,不同地区毒株ORF75的重复单元数目有4、10、11、12、13不等,ORF94的重复单元数目有4和14,而ORF125的重复单元数目有0、3、5、6、7不等。结果表明,流行在中国大部分地区的WSSV存在一定程度变异,毒株间的变异在ORF75、ORF94和ORF125上比较明显。 展开更多
关键词 WSSV 流行病 ORF VNTR
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2013年中国典型对虾养殖区白斑综合征病毒流行株高变异区序列的分析比较 预览 被引量:4
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作者 孙新颖 万晓媛 +1 位作者 刘庆慧 黄倢 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期693-703,共11页
为了解中国不同地区白斑综合征病毒的流行变异情况,本研究取用2013年3—12月从7个省市发病地区采集到的64份WSSV阳性样本,以特异的引物扩增目的片段,通过测序分析不同样本的缺失及变异差异。结果显示,在开放阅读框ORF14/15的扩增中,分别... 为了解中国不同地区白斑综合征病毒的流行变异情况,本研究取用2013年3—12月从7个省市发病地区采集到的64份WSSV阳性样本,以特异的引物扩增目的片段,通过测序分析不同样本的缺失及变异差异。结果显示,在开放阅读框ORF14/15的扩增中,分别有6530 bp、6533 bp和5138 bp的片段缺失,而在ORF23/24扩增中有12070bp大片段的缺失,不同地区样本中未能成功扩增ORF75,而ORF94的重复单元数目分别为0、3、4、12不等,ORF125的重复单元数目为0、7。SNP分析表明,含有3个重复单元的ORF94在48位的碱基为T、T、T,重复单元数为4的在48位的碱基为T、T、T、T,重复单元数为12的在48位的碱基分别为T及11个A。而ORF125所有重复单元数为7的情况在8、18、25、66、69位置的碱基均为G、G、G、G、A,在9、50、53、61位的碱基也普遍出现了变异。结果表明,WSSV在中国不同地区存在一定程度的变异,其在序列中的缺失、重复单元数目以及SNP的差异较为明显。 展开更多
关键词 WSSV ORF 缺失 变异 PCR
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不同浓度红茂草总生物碱盐酸盐制剂治疗羊口疮试验研究
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作者 贾凌 马志宏 +3 位作者 党岩 苟想珍 容维中 张莉敏 《中兽医医药杂志》 2016年第1期44-46,共3页
将25只健康羊只随机分为5组,每组5只。用羊口疮强毒感染试验羊只建立羊口疮病理模型,用不同浓度的红茂草总生物碱盐酸盐制剂进行对比治疗试验,以确定最适药物浓度。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别用浓度5 mg/m L、10 mg/m L、20 mg/m L、40 m... 将25只健康羊只随机分为5组,每组5只。用羊口疮强毒感染试验羊只建立羊口疮病理模型,用不同浓度的红茂草总生物碱盐酸盐制剂进行对比治疗试验,以确定最适药物浓度。试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别用浓度5 mg/m L、10 mg/m L、20 mg/m L、40 mg/m L的红茂草总生物碱盐酸盐制剂进行治疗,Ⅴ组为对照组。结果表明,除了Ⅲ组和Ⅳ组之间羊只溃疡面愈合率差异不显著(P〉0.05)外,其余各组两两之间均存在极显著性差异(P〈0.01)。红茂草总生物碱盐酸盐制剂剂量与溃疡面愈合率之间的回归方程为:y=1.709 3 x+3.547 7,R~2=0.977 2,其半数效应浓度EC_(50)=7.073 7 mg/m L。 展开更多
关键词 红茂草 羊口疮 最适浓度
A Case of Orf Identified by Transmission Electron Microscopy
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作者 Fen Peng Zhou Chen +3 位作者 Shu-Ying Zheng Hou-Min Li Juan Du Jian-Zhong Zhang 《中华医学杂志:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第1期108-109,共2页
To the Editor: A 20-year-old woman complained of two painful pruritic lesions on her left index finger.She had been bitten by a lamb on her index finger a month earlier;the lamb died 2 days later.Five days after havin... To the Editor: A 20-year-old woman complained of two painful pruritic lesions on her left index finger.She had been bitten by a lamb on her index finger a month earlier;the lamb died 2 days later.Five days after having been bitten, she noticed two papules on her left index finger that enlarged gradually.Physical examination revealed two indurated nodules 8-mm and 10-mm in diameter, each with central umbilication and surrounded by a reddish halo [Figure la].The patient had no fever, respiratory symptoms,or lymphadenopathy.The informed consent was written. 展开更多
关键词 透射电镜 ORF 案例 鉴定 呼吸道症状 淋巴结肿大 体格检查 左手
南方水稻黑条矮缩病毒湖南分离物S9片段ORF序列分析 预览 被引量:1
15
作者 凌晓曦 刘勇 +4 位作者 张松柏 匡炜 彭静 周灏明 张德咏 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期138-142,共5页
本文克隆了湖南省2011-2013年水稻的15个SRBSDV分离物S9两个基因,并测定了其核苷酸序列,序列分析与比较表明,S9两个ORF序列同源性均大于99.5%.突变位点分析表明,S9编码的两个ORF有3~9个突变位点,但大部分的核酸突变为无义突变.系统发... 本文克隆了湖南省2011-2013年水稻的15个SRBSDV分离物S9两个基因,并测定了其核苷酸序列,序列分析与比较表明,S9两个ORF序列同源性均大于99.5%.突变位点分析表明,S9编码的两个ORF有3~9个突变位点,但大部分的核酸突变为无义突变.系统发育分析表明,S9编码的两个ORF高度同源,处于相同的的系统发育分支. 展开更多
关键词 南方水稻黑条矮缩病 ORF S9片段 序列分析
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FMDV全ORF编码基因的克隆及其腺病毒载体的构建 预览 被引量:2
16
作者 高鹏 李志勇 柳纪省 《生物技术进展》 2014年第2期107-112,F0003共7页
为研制O型口蹄疫病毒(FMDV)复制缺陷型腺病毒活载体疫苗毒株,通过lit-PCR方法获得了O型FMDV的开放阅读框(ORF)基因,并定向克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack.CMV—ORF,经PCR、酶切及测序... 为研制O型口蹄疫病毒(FMDV)复制缺陷型腺病毒活载体疫苗毒株,通过lit-PCR方法获得了O型FMDV的开放阅读框(ORF)基因,并定向克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒pAdTrack.CMV—ORF,经PCR、酶切及测序鉴定,克隆得到的ORF编码基因序列与原始强毒株O型FMDV的ORF编码基因相似性达99.8%。将含有目的基因的穿梭质粒线性化后和腺病毒骨架载体pAdeasy-2共同电转化入大肠杆菌BJ5183感受态细胞中,得到重组腺病毒质粒pAd—ORF,经PCR和酶切鉴定正确。本研究成功获得了含有现代O型疫苗用FMDV毒株的全ORF编码基因的阳性克隆,并成功构建了含有完整编码基因表达盒的重组腺病毒穿梭质粒及其腺病毒骨架质粒。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 开放阅读框 腺病毒载体
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T7噬菌体表达载体的组氨酸改造及应用 预览
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作者 樊江平 钟理 +2 位作者 董晓民 张旭朏 王志强 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期179-183,共5页
利用基因重组技术,对已有载体T7Select10-3b进行改造,得到被组氨酸标签标记(His-Tag)的新型表达载体,并利用该载体构建cDNA文库,为后期开放阅读框的筛选提供更为简便有效的方法。以T7Select10-3b载体为出发材料,将复性得到组氨酸标签... 利用基因重组技术,对已有载体T7Select10-3b进行改造,得到被组氨酸标签标记(His-Tag)的新型表达载体,并利用该载体构建cDNA文库,为后期开放阅读框的筛选提供更为简便有效的方法。以T7Select10-3b载体为出发材料,将复性得到组氨酸标签表达序列插入其多克隆位点处。再利用包装蛋白包装重组DNA,得到有侵染活性的重组T7噬菌体。用该载体构建乳腺癌cDNA文库,过镍柱,筛选开放阅读框(openreading frame,ORF),计算ORF重组率。测序结果显示该标签已经成功插入,化学发光免疫检测显示该标签在T7中表达。重组T7噬菌体文库的ORF筛选率由筛选前的5.6%提高到82%。T7噬菌体中插入的His标签对提高cDNA文库中ORF的重组率具有重要意义。 展开更多
关键词 His标签 T7噬菌体 CDNA文库 ORF
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贵州省羊口疮的调查研究 预览 被引量:17
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作者 鲜思美 胡廷帅 +2 位作者 熊朝丽 向智龙 陈秀华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第11期73-76,共4页
对贵州省的5个养羊大县羊只发生的羊口疮进行了确诊。流行病学调查显示,任何年龄的黑马羊、沿河黑山羊、麻江黄羊和波尔山羊均可感染羊口疮,发病率为2.2%~17.7%。病死率为0~51.4%;发病部位可分为唇形、乳房型、外阴型和混合型,其中以... 对贵州省的5个养羊大县羊只发生的羊口疮进行了确诊。流行病学调查显示,任何年龄的黑马羊、沿河黑山羊、麻江黄羊和波尔山羊均可感染羊口疮,发病率为2.2%~17.7%。病死率为0~51.4%;发病部位可分为唇形、乳房型、外阴型和混合型,其中以唇形较为常见;患病皮肤在光学显微镜下可见细胞发生"气球样变";电子显微镜观察到卵圆形的线团样病毒粒子;PCR扩增出507bp的特异性条带。通过流行病学调查、临床症状、病理剖检变化可对该病作出初步诊断,经病理组织切片镜检、电镜负染和PCR方法确诊为羊口疮。 展开更多
关键词 羊口疮 诊断 贵州省
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鳡胰岛素样生长因子1基因的克隆及其组织特异性表达分析 预览 被引量:3
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作者 郁建锋 李建林 +3 位作者 徐建荣 卢祥云 柏洁 顾志良 《扬州大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期32-39,共8页
为克隆鱤(Elopichthys barnbusa)的胰岛素样生长因子1(IGF1)全长cDNA和启动子序列及明确其组织表达特征,采用反转录PCR(RT—PCR)、cDNA末端快速扩增(RACE)和染色体步移等技术,从鱤肌肉中获得了IGF1基因的全长cDNA(844bp)和... 为克隆鱤(Elopichthys barnbusa)的胰岛素样生长因子1(IGF1)全长cDNA和启动子序列及明确其组织表达特征,采用反转录PCR(RT—PCR)、cDNA末端快速扩增(RACE)和染色体步移等技术,从鱤肌肉中获得了IGF1基因的全长cDNA(844bp)和上游启动子部分序列(627bp)。结果表明:IGF1基因包含218bp的5’端非翻译区、140bp的3’端非翻译区和486bp的开放性阅读框(ORF),编码161个氨基酸,包含前44个氨基酸残基为信号肽、70个氨基酸残基的4个功能结构域和C端47个氨基酸残基的延伸肽结构域。启动子无TATA框,但含有一成肌分化抗原(MyoD)结合位点。氨基酸同源性和系统发育分析发现,鱤IGF1与鲤形目其他鱼类的同源性较高(94.41%~99.38%),亲缘关系最近。半定量RT—PCR结果显示,IGF1在鱤的肝脏中表达最高,而心脏中未见其明显表达。该研究为明确IGF1参与鱤生长发育的机制研究及其在鳃的繁殖育种中的应用奠定了基础。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子1 启动子 开放性阅读框 表达
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怀地黄基因片段及其中转座酶基因的克隆与序列分析 预览 被引量:5
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作者 周延清 姚换灵 +4 位作者 段红英 周春娥 张永华 陈艳梅 张喻 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第1期 106-109,共4页
根据已知裂叶牵牛花PNZIP启动子碱基序列的相关信息设计引物,采用PCR方法,从怀地黄基因组中扩增出5个基因片段,回收和克隆出其中一个1 096bp的基因片段。经过NCBI对比分析,发现它是一个类似转座子的相关蛋白基因序列,含有一个完整的开... 根据已知裂叶牵牛花PNZIP启动子碱基序列的相关信息设计引物,采用PCR方法,从怀地黄基因组中扩增出5个基因片段,回收和克隆出其中一个1 096bp的基因片段。经过NCBI对比分析,发现它是一个类似转座子的相关蛋白基因序列,含有一个完整的开放阅读框,大小为450bp,编码由150个氨基酸组成的转座酶。然后,基于该开放阅读框的碱基序列,设计另一对引物,用PCR方法,从中扩增出该完整开放阅读框的序列片段。 展开更多
关键词 怀地黄 转座酶基因 基因克隆 开放阅读框 序列分析
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