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HIV/HBV合并感染者HBV Pre-S/S区抗原表位变异分析
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作者 聂源 廖宝林 +7 位作者 胡凤玉 邓西子 兰芸 唐小平 蔡卫平 李凌华 高鸣 李锋 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期131-135,共5页
目的分析HIV/HBV合并感染者外周血中HBV Pre-S/S区抗原表位变异特征,为研究合并感染致病机制提供实验依据。方法收集广州市第八人民医院感染病中心2009年1月份至2011年12月份收治慢性HBV感染者的基本信息和实验室检查资料,按治疗前HIV... 目的分析HIV/HBV合并感染者外周血中HBV Pre-S/S区抗原表位变异特征,为研究合并感染致病机制提供实验依据。方法收集广州市第八人民医院感染病中心2009年1月份至2011年12月份收治慢性HBV感染者的基本信息和实验室检查资料,按治疗前HIV抗体检测结果分为HIV/HBV合并感染组、HBV单一感染组,采集患者外周血,提取血清中HBV DNA,采用巢式PCR法扩增HBV DNA的Pre-S/S基因,将获得的PCR产物进行序列测定(直接测序法)后,采用ContigExpress软件进行序列拼接、BioEdit软件进行序列比对,参照相应基因型HBV的标准序列,分析比较HIV/HBV合并感染和HBV单一感染两组的HBV Pre-S/S区抗原表位变异。统计学处理采用χ^2检验,软件为SPSS19.0。结果成功扩增HBV Pre-S/S基因的患者共150例,其中HIV/HBV合并感染者90例,HBV单一感染者60例,两组患者性别、年龄、基因型、HBeAg状态、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)比较无统计学差异;HBV Pre-S/S各表位变异分析结果:HIV/HBV合并感染组所有的细胞毒性T细胞(CTL细胞)表位变异发生率均偏高,其中Pre-S2 aa1-15表位变异发生率比较有统计学意义(χ^2=6.964,P=0.008);PreS2 aa1-15表位变异中缺失发生率合并感染组(11.1%)高于HBV单一感染组(3.3%)(χ^2=2.959,P=0.085)。B细胞表位中,Pre-S2 aa1-26 HIV/HBV合并感染组的变异发生率显著高于HBV单一感染组,差异有统计学意义(χ^2=6.924,P=0.010),其余B细胞表位在两组间比较无统计学意义(P值均>0.05);两组间辅助性T细胞(Th细胞)表位变异发生率比较均无统计学意义(P值均>0.05)。结论合并HIV感染可增加HBV Pre-S/S区CTL细胞表位变异,尤其是Pre-S2区5′端表位变异,提示HBV变异与宿主免疫状态相关,为进一步研究HIV/HBV合并感染的致病机制提供了可靠资料。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 肝炎病毒 乙型 Pre-S/S基因 抗原表位 变异
慢性乙型肝炎感染者HBV Pre-S/S基因变异特征分析 被引量:1
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作者 李东 潘伟毅 +4 位作者 张苏晗 杨秀惠 陈致飞 郑凝旋 周勇 《中国热带医学》 CAS 2017年第12期1167-1172,共6页
目的探讨慢性乙型肝炎感染者HBV Pre-S/S基因序列特征及不同抗原表位氨基酸的变异情况。方法采用巢式PCR法分片段扩增HBV-DNA阳性的慢性乙型肝炎感染者HBV的Pre-S/S基因,并对扩增产物进行测序,将测序结果与Gen Bank中的标准序列比对分... 目的探讨慢性乙型肝炎感染者HBV Pre-S/S基因序列特征及不同抗原表位氨基酸的变异情况。方法采用巢式PCR法分片段扩增HBV-DNA阳性的慢性乙型肝炎感染者HBV的Pre-S/S基因,并对扩增产物进行测序,将测序结果与Gen Bank中的标准序列比对分析。结果 120例HBV感染者中B基因型78例,C基因型42例。序列分析发现,B基因型中有2例出现Pre-S1基因序列缺失;C基因型中有1例出现Pre-S2基因序列缺失。Pre-S/S蛋白区抗原表位变异分析可知,除CTL的3个抗原表位(CTL-7、8、9)外,其它检测的抗原表位均出现变异。相关性分析发现,除B细胞4、5表位,CTL 4、5表位及Th细胞1表位的变异与样品的基因型具有一定的相关性(P〈0.05),其它表位的变异与样品基因型无统计学意义。抗原表位具体氨基酸变异分析发现,Pre-S1/S2基因位点如27、45、46、48等氨基酸变异可导致多个抗原表位同时发生变异;在"a"决定簇中还发现126、129、131、133、144、145等热门位点的变异,B基因型中有2例发生G145R经典逃逸株的变异;C基因型中发现7例与严重肝病有一定相关性的I126T位点变异。结论慢性乙型肝炎感染者HBV Pre-S/S基因上也普遍存在基因变异,其中包括G145R、I126T等热门突变位点,这些位点的氨基酸突变可导致Pre-S/S蛋白区一个或多个抗原表位的改变,进而影响其免疫原性,并导致HBV逃避宿主的免疫监视而引起持续感染。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 Pre-S/S基因 抗原表位 变异
扶绥县肝癌高发区HBV流行株基因参照序列建立
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作者 高煜欣 李曦亮 +3 位作者 黄天壬 邓伟 郑丹 李召发 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期687-690,共4页
目的 建立广西扶绥县乙型肝炎病毒(HBV)流行株Pre—S、S、Pre-C/BCP基因参照序列。方法选取2013年扶绥县乙肝慢性携带者(AsC)89例,测定其Pre—S、S、Pre—C/BCP基因,采用同源性分析等方法确定基因型,并按基因型在MEGA软件中进... 目的 建立广西扶绥县乙型肝炎病毒(HBV)流行株Pre—S、S、Pre-C/BCP基因参照序列。方法选取2013年扶绥县乙肝慢性携带者(AsC)89例,测定其Pre—S、S、Pre—C/BCP基因,采用同源性分析等方法确定基因型,并按基因型在MEGA软件中进行序列比对,建立参照序列。结果扶绥县参照序列与GenBank收录的中国其他地区同基因型HBV序列(CDQ448627、EU439006)相比差异较大,最高可达2.07%;扶绥县不同基因型间参照序列的差异程度大于不同地区同基因型序列间的差异,最小为2.87%,最大者可达9.65%。结论初步建立扶绥县HBV流行株Pre—S、S、Pre—C/BCP基因参照序列,为扶绥县HBV基因突变的研究奠定基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 Pre—S基因 S基因 Pre—C/BCP基因 参照序列
乙型肝炎病毒Pre-S基因变异及其生物学特性研究进展 被引量:3
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作者 陈杰 李杰 庄辉 《中国病毒病杂志》 2012年第1期 67-71,共5页
乙型肝炎(乙肝)是全球性的公共卫生问题,全球大约有3.5亿~4亿人为乙型肝炎病毒(HBV)慢性感染者,且80%以上原发性肝细胞癌(HCC)与HBV感染相关,但HBV致HCC的发病机制迄今尚不十分清楚。
关键词 乙型肝炎病毒 Pre-S基因 变异 生物学特性
低水平HBsAg表达的慢性无症状HBV携带者Pre-S基因序列分析
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作者 王童 宋蕊 +5 位作者 李倩 戴玉柱 车飞虎 周华君 孙长贵 成军 《中华临床感染病杂志》 CSCD 2019年第2期93-100,共8页
目的探讨低水平HBsAg表达的慢性无症状HBV携带者(Asymptomatic chronic HBV carriers,ASCs)Pre-S基因序列特征及持续表达的分子机制。方法收集2015年2月至2016年12月浙江大学医学院附属第一医院、杭州市第六人民医院、解放军第九〇三医... 目的探讨低水平HBsAg表达的慢性无症状HBV携带者(Asymptomatic chronic HBV carriers,ASCs)Pre-S基因序列特征及持续表达的分子机制。方法收集2015年2月至2016年12月浙江大学医学院附属第一医院、杭州市第六人民医院、解放军第九〇三医院的654份ASCs血清标本和临床资料,根据HBsAg水平分为低水平HBsAg组(≤10 IU/mL)和高水平HBsAg组(>10 IU/mL),并且在与低水平HBsAg组年龄匹配的基础上,从高水平组血清标本中随机抽样100份,对138例低水平HBsAg患者和100例高水平HBsAg患者进行Pre-S/S基因组扩增与测序,构建系统进化树确定基因亚型,以高水平HBsAg组的HBV Pre-S基因成功测序结果为基础建立中国东部地区ASCs主要基因型的Pre-S基因参考序列,并对低水平HBsAg组的ASCs Pre-S基因序列进行对比分析。采用SPSS 12.01统计软件对数据进行分析。结果138例低水平HBsAg组Pre-S/S成功测序63例,其中B基因型52例,C基因型11例;100例高水平HBsAg组标本中Pre-S/S成功测序94例,其中B基因型48例,C基因型46例。通过序列比较分析发现,B基因型中,低水平HBsAg组Pre-S蛋白共发现81个氨基酸突变位点,其中有意义突变4个,分别为Pre-S1区F56I/V、T76A/N/P,Pre-S2区P15L/S/T、Y21T/F/H/N;高水平HBsAg组Pre-S蛋白发现47个氨基酸突变位点,其中有意义突变3个,为Pre-S1区L34F、V49A和P59S/L;B基因型中低水平HBsAg组的Pre-S蛋白氨基酸突变位点总数高于高水平HBsAg组,差异具有统计学意义(χ2=14.008,P<0.05)。C基因型中,低水平HBsAg组Pre-S蛋白发现19个氨基酸突变位点,其中有意义突变3个,分别为Pre-S1区W66V/G和A79V,Pre-S2区V32A;高水平HBsAg组Pre-S蛋白发现39个氨基酸突变位点,其中有意义突变2个,为Pre-S1区A79V和Pre-S2区T49I;C基因型中Pre-S蛋白氨基酸突变位点总数在两组间差异有统计学意义(χ2=7.571,P<0.05)。结论ASCs Pre-S基因存在有意义的突变,这些突变可能与低水平HBsAg持续表达相关� 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 慢性无症状HBV携带者 低水平HBsAg Pre-S基因参考序列
大连地区无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染pre-S/S区基因分析 被引量:11
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作者 王东 邓雪莲 +4 位作者 周璐 方琳琳 宋浏伟 袁权 安万新 《中国输血杂志》 CAS 北大核心 2015年第1期26-31,共6页
目的了解大连地区无偿献血者隐匿性肝炎乙型病毒感染(OBI)的情况和pre-S/S区基因的变异情况。方法对大连市血液中心2010年12月2日-2013年5月31目的无偿献血者血液标本进行常规ELISA(HBs Ag、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP)和HIV/HBV/HCV联... 目的了解大连地区无偿献血者隐匿性肝炎乙型病毒感染(OBI)的情况和pre-S/S区基因的变异情况。方法对大连市血液中心2010年12月2日-2013年5月31目的无偿献血者血液标本进行常规ELISA(HBs Ag、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP)和HIV/HBV/HCV联合NAT筛查,对于单独核酸检测反应性的献血者加以跟踪或回溯,结合乙型肝炎血清学标志物的试验、鉴别试验、病毒定量试验和半巢式PCR来确定OBI,同时对OBI的pre-S/S区基因序列与对照组(HBs Ag+序列,Genbank)做比对分析。结果共筛查158 232份血液标本,确定了其中的69份OBI,流行率为1∶2 293(69/158 232)。41例OBI获得pre-S/S区基因序列:B型6例、C型34例、D型1例;与对照组相比,OBI在S区的氨基酸序列的变异明显(PB=0.013;PC=0.003),主要变异位点为B型的V14G/A、Y161F/S、V168A、P217L和C型的E2G/A/V、T118R/K/A/M、P127T/L/H/S、E164D/G、L175S、S174N。结论大连地区献血者OBI在HBV基因组S区的氨基酸序列存在多个位点的变异,这些变异与OBI的产生存在某种关系,且这种关系受基因型的影响。 展开更多
关键词 隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI) pre-S/S区基因 氨基酸序列变异 乙型肝炎病毒 无偿献血者 大连
携改良rHBVpre-S1基因酵母表达载体的构建及其免疫原性鉴定 被引量:1
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作者 夏冬 甘云辉 +1 位作者 姚晖 徐亮 《现代医学》 2013年第4期221-225,共5页
目的:构建携改良rHBVpre—S1基因的酵母表达载体,探讨rHBVpre—S1蛋白的免疫原性。方法:以我国HBV流行株adr的DNA为模板,PCR法扩增HBVpre—S1基因,再应用PCR定点突变技术对HBVpre—S1的抗原决定簇氨基酸的编码基因作无免疫原性修... 目的:构建携改良rHBVpre—S1基因的酵母表达载体,探讨rHBVpre—S1蛋白的免疫原性。方法:以我国HBV流行株adr的DNA为模板,PCR法扩增HBVpre—S1基因,再应用PCR定点突变技术对HBVpre—S1的抗原决定簇氨基酸的编码基因作无免疫原性修饰,酶切后与酵母穿梭表达载体pGBKT7连接,测序后命名为pGBKT7-rHBVpre—S1,提取转化质粒的酵母蛋白行免疫蛋白印迹分析。蛋白纯化后,以蛋白颗粒行腹腔内注射免疫昆明小鼠,间接ELISA法检测小鼠血清中抗pre-S1抗体的阳性率。结果:成功地构建了携改良rHBVpre-S1基因的酵母表达载体,免疫印迹检测出人rHBVpre—S1蛋白的表达,昆明小鼠经目的抗原免疫5次后其抗体阳性率显著性低于对照组。结论:构建的pGBKT7-rHBVpre—S1基因酵母表达载体兼具嗜肝性及无免疫原性的优势,可为肝病的靶向基因治疗提供理想的载体。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pre-S1基因 免疫原性 酵母表达载体
Construction of exogenous multiple epitopes of helper T lymphocytes and DNA immunization of its chimeric plasmid with HBV pre-S2/S gene 预览
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作者 Wen-JunGao Xiao-MouPeng +4 位作者 Dong-YingXie Qi-FengXie Zhi-LiangGao Ji-LuYao Wen-JunGao 《世界胃肠病学杂志:英文版(电子版)》 SCIE CAS CSCD 2004年第20期2979-2983,共5页
AIM: To design and construct an exogenous multiple epitope of helper T lymphocytes (HTL), and to evaluate its effect on anti-HBs response through DNA immunization. METHODS: Artificial HTL epitope, PADRE and four other... AIM: To design and construct an exogenous multiple epitope of helper T lymphocytes (HTL), and to evaluate its effect on anti-HBs response through DNA immunization. METHODS: Artificial HTL epitope, PADRE and four other HTL epitopes from different proteins were linked together using splicing by overlap extension to generate exogenous multiple epitopes of HTL, MTE5. pcMTE5 and pcHB were generated by cloning MTE5 and fragments of HBV pre-S2/S gene into mammalian expression plasmid pcDNA3. Four chimeric plasmids were constructed by cloning MTE5 into the region of pre-S2 gene (Barn HI), 5' terminal of S gene (HincII, Xba I) and 3' terminal of S gene (Acc I) of pcHB respectively. BALB/c mice were used in DNA immunization of the recombinant plasmids. Anti-HBs was detected using Abbott IMx AUSAB test kits.RESULTS: The sequences of MTE5 and the 6 constructs ofrecombinant plasmids were confirmed to be correct by DNA sequencing. The anti-HBs response of the coinoculation of pcHB and pcMTE5 was much higher than that of the inoculation of pcHB only (136.7+69.1 mIU/mL vs 27.6+17.3 mIU/mL, P<0.01, t =-6.56). Among the 4 chimeric plasmids, only the plasmid in which MTE5 was inserted into the pre-S2 region had good anti-HBs response (57.54±7.68 mIU/mL), and had no significant difference compared with those of pcHB and the co-inoculation of pcHB and pcMTE5. CONCLUSION: Exogenous multiple epitopes of HTL had immune enhancement when they were co-inoculated with pre-S2/S gene or inoculated in the chimeric form at a proper site of pre-S2/S gene of HBV. It might suggest that it was possible to improve hepatitis B vaccine using exogenous multiple epitopes of HTL. The antibody responses were very low using DNA immunization in the study. Thus, the immune enhancement effect of exogenous multiple epitopes of HTL has to be confirmed and the effect on overcoming the drawback of the polymorphism of HLA II antigens should also be evaluated after these chimeric plasmids are expressed in mammalian cell lines. 展开更多
关键词 外生性 多发性 抗原 辅助机车T 淋巴细胞 DNA 免疫学 质粒 HBV pre-S2/S基因 HTL 基因表达
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