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MGMT is down-regulated independently of promoter DNA methylation in rats with all-trans retinoic acidinduced spina bifida aperta 预览
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作者 He-Nan Zhang Yi Guo +3 位作者 Wei Ma Jia Xue Wei-Lin Wang Zheng-Wei Yuan 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第2期361-368,共8页
O6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT), a DNA repair enzyme, has been reported in some congenital malformations, but it is less frequently reported in neural tube defects. This study investigated MGMT mRNA expr... O6-methylguanine DNA methyltransferase (MGMT), a DNA repair enzyme, has been reported in some congenital malformations, but it is less frequently reported in neural tube defects. This study investigated MGMT mRNA expression and methylation levels in the early embryo and in different embryonic stages, as well as the relationship between MGMT and neural tube defects. Spina bifida aperta was induced in rats by a single intragastric administration of all-trans retinoic acid on embryonic day (E) 10, whereas normal control rats received the same amount of olive oil on the same embryonic day. DNA damage was assessed by detecting γ-H2A.X in spina bifida aperta rats. Real time-polymerase chain reaction was used to examine mRNA expression of MGMT in normal control and spina bifida aperta rats. In normal controls, the MGMT mRNA expression decreased with increasing embryonic days, and was remarkably reduced from E11 to E14, reaching a minimum at E18. In the spina bifida aperta model, γ-H2A.X protein expression was increased, and mRNA expression of MGMT was markedly decreased on E14, E16, and E18. Bisulfite sequencing polymerase chain reaction for MGMT promoter methylation demonstrated that almost all CpG sites in the MGMT promoter remained unmethylated in both spina bifida aperta rats and normal controls, and there was no significant difference in methylation level between the two groups on either E14 or E18. Our results show that DNA damage occurs in spina bifida aperta rats. The mRNA expression of MGMT is downregulated, and this downregulation is independent of promoter DNA methylation. 展开更多
关键词 nerve REGENERATION NEURAL tube defects spina bifida aperta spinal cord ALL-TRANS retinoic acid O6-methylguanine DNA methyltransferase gene expression DNA methylation PROMOTER BISULFITE sequencing polymerase chain reaction NEURAL REGENERATION
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正调控元件拷贝数对黑曲霉PglaA启动子的影响 预览
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作者 李杰 丁纯洁 +3 位作者 鄢健楠 安欣 刘天奇 张会 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期28-35,共8页
为获得转录水平更高的强启动子,提高黑曲霉中重组蛋白表达量,研究在黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因启动子PglaA基础上,构建分别含2、4、6个拷贝的正调控元件片段PglaA2R、PglaA4R、PglaA6R启动子。以黑曲霉木聚糖酶基因xynB为目的基因,研究正... 为获得转录水平更高的强启动子,提高黑曲霉中重组蛋白表达量,研究在黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因启动子PglaA基础上,构建分别含2、4、6个拷贝的正调控元件片段PglaA2R、PglaA4R、PglaA6R启动子。以黑曲霉木聚糖酶基因xynB为目的基因,研究正调控元件拷贝数对PglaA启动子的影响。构建黑曲霉表达载体pSZHG2R-xynB、pSZHG4R-xynB、pSZHG6R-xynB,采用农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462。获得目的基因表达框整合在葡萄糖淀粉酶基因位点的纯合黑曲霉重组菌株PglaA2R-xynB、PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB。经SDS-PAGE检测观察到重组菌株分泌约24.0ku木聚糖酶蛋白条带。经酶活检测表明,木聚糖酶活力在第8天达最高,重组菌株PglaA4R-xynB(7705.36U mL^-1)、PglaA6R-xynB(8466.32U mL^-1)比PglaA2R-xynB(5890.77U mL^-1)分别提高1.31倍和1.44倍。荧光定量PCR结果表明,重组菌株PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB的xynB基因mRNA比PglaA2R-xynB分别提高2.2倍和5.3倍。可知,PglaA启动子正调控元件多拷贝显著提高木聚糖酶表达。 展开更多
关键词 黑曲霉 启动子 多拷贝 木聚糖酶
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启动子对枯草芽孢杆菌表达环糊精葡萄糖基转移酶的影响
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作者 李云菲 宿玲恰 吴敬 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期3540-3547,共8页
以质粒pHY300PLK为骨架构建Bacillus stearothermophilus来源的α/β-环糊精葡萄糖基转移酶(α/β-CGTase)在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表达系统的表达质粒。为了提高α/β-CGTase的表达量,考察了9个单启动子(PamyQ, PamyQ’, Pap... 以质粒pHY300PLK为骨架构建Bacillus stearothermophilus来源的α/β-环糊精葡萄糖基转移酶(α/β-CGTase)在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表达系统的表达质粒。为了提高α/β-CGTase的表达量,考察了9个单启动子(PamyQ, PamyQ’, Papr E, Pgsi B, Phpa Ⅱ, Pnpr E, Psrf, Pxyl, Pxyl’)对α/β-CGTase表达量的影响,摇瓶发酵表明最优单启动子为PamyQ’,α/β-CGTase表达量为6.52 U/mL,其次为Phpa Ⅱ和Pnpr E,分别对应酶活5.80 U/mL和5.73 U/mL。用PamyQ’与PamyQ’、Phpa Ⅱ、Pnpr E两两组合,构建双启动子PamyQ’-PamyQ’、Phpa Ⅱ-PamyQ’、Pnpr E-PamyQ’,摇瓶发酵表明最优双启动子为Phpa Ⅱ-PamyQ’,α/β-CGTase表达量为11.15 U/mL,是用单启动子PamyQ’表达时的1.7倍。测定Phpa Ⅱ-PamyQ’、PamyQ’-PamyQ’、PamyQ’-PamyQ’、PamyQ’、Pgsi B、Phpa Ⅱ为启动子时,α/β-CGTase m RNA转录水平,结果表明α/β-CGTase表达量随m RNA转录水平的提高而提高。使用含有启动子Phpa Ⅱ-PamyQ’的表达质粒进行3 L罐发酵,培养96 h时,α/β-CGTase酶活达到最高110.4 U/mL。 展开更多
关键词 环糊精葡萄糖基转移酶 枯草芽孢杆菌 启动子 MRNA
厚藤脱水素基因IpDHN启动子IpDHN-Pro的克隆和调控转录活性分析 预览
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作者 苏华香 郑洁旋 +5 位作者 张会 何金实 简曙光 夏快飞 陈建通 张美 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期415-422,共8页
为了解厚藤(Ipomoea pes-caprae)脱水素基因IpDHN (GenBank登录号:KX426069)启动子的转录活性和对非生物胁迫和植物激素ABA的响应,通过染色体步移法克隆了IpDHN的上游启动子序列IpDHN-Pro,长度为974 bp。构建IpDHN-Pro调控下GUS转基因载... 为了解厚藤(Ipomoea pes-caprae)脱水素基因IpDHN (GenBank登录号:KX426069)启动子的转录活性和对非生物胁迫和植物激素ABA的响应,通过染色体步移法克隆了IpDHN的上游启动子序列IpDHN-Pro,长度为974 bp。构建IpDHN-Pro调控下GUS转基因载体,转化拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株获得IpDHN-Pro::GUS转基因植株并进行GUS染色,验证IpDHN-Pro启动转录活性以及在氯化钠、甘露醇、ABA处理后拟南芥GUS基因表达变化。结果表明,扩增获得的IpDHN-Pro序列包含多个顺式作用元件,包括1个ABRE、3个Myb转录因子结合位点、富含TC的重复序列以及Skn-1基序等。转基因拟南芥GUS染色及qRT-PCR表明该序列可驱动GUS基因在拟南芥稳定表达,且表达受高盐、渗透压及ABA的诱导。这表明IpDHN-Pro是一个盐旱、ABA诱导的启动子序列,可应用于相关的植物抗逆遗传工程研究。 展开更多
关键词 启动子 盐旱诱导 ABA诱导 脫水素 厚藤
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启动子探针载体的构建及橡胶树白粉菌启动子筛选鉴定 预览
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作者 徐良向 刘耀 +6 位作者 廖小淼 王义 M.J.N.Rajaofera 何其光 刘文波 林春花 缪卫国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期51-57,共7页
旨在构建适于快速检测橡胶树白粉病菌(Oidium heveae)HO-73启动子的探针载体。以卡那霉素抗性基因Kan作为报告基因,在pUC19骨架载体,构建获得启动子探针载体pUC19-K,连入CaMV35S启动子做启动子探针载体功能验证;利用启动子探针载体pUC1... 旨在构建适于快速检测橡胶树白粉病菌(Oidium heveae)HO-73启动子的探针载体。以卡那霉素抗性基因Kan作为报告基因,在pUC19骨架载体,构建获得启动子探针载体pUC19-K,连入CaMV35S启动子做启动子探针载体功能验证;利用启动子探针载体pUC19-K对预测的启动子片段LY1、LY2、LY3、LY4进行筛选鉴定。将CaMV35S启动子连入到启动子探针载体中,得到可检测启动子活性的启动子探针载体pUC19-K;应用生物信息学软件对部分橡胶树白粉菌HO-73全基因组数据预测,得到4个理论上具有活性的启动子序列LY1、LY2、LY3、LY4,利用构建的启动子活性探针载体进行活性比较,卡那耐受性实验检测发现含LY2和LY3的菌株随卡那霉素浓度的升高耐受性更强,最终得到2个活性较强的启动子LY2和LY3。以上结果表明,构建的启动子活性探针载体可以有效、灵敏地用于HO-73强启动子的筛选和启动子活性检测。 展开更多
关键词 橡胶树白粉菌 启动子 探针载体
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Core pluripotency factors promote glycolysis of human embryonic stem cells by activating GLUT1 enhancer
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作者 Lili Yu Kai-yuan Ji +7 位作者 Jian Zhang Yanxia Xu Yue Ying Taoyi Mai Shuxiang Xu Qian-bing Zhang Kai-tai Yao Yang Xu 《蛋白质与细胞:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第9期668-680,共13页
Human embryonic stem cells (hESCs) depend on glycolysis for energy and substrates for biosynthesis. To understand the mechanisms governing the metabolism of hESCs, we investigated the transcriptional regulation of glu... Human embryonic stem cells (hESCs) depend on glycolysis for energy and substrates for biosynthesis. To understand the mechanisms governing the metabolism of hESCs, we investigated the transcriptional regulation of glucose transporter 1 (GLUT1, SLC2A1), a key glycolytic gene to maintain pluripotency. By combining the genome-wide data of bin ding sites of the core pluripotency factors (SOX2, OCT4, NANOG, denoted SON), chromosomal interaction and histone modification in hESCs, we identified a potential enhancer of the GLUT1 gene in hESCs, de noted GLUT1 enhancer (GE) element GE interacts with the promoter of GLUT1, and the deletion of GE significantly reduces the expression of GLUT1, glucose uptake and glycolysis of hESCs, confirming that GE is an enhancer of GLUT1 in hESCs. In addition, the mutation of SON binding motifs within GE reduced the expression of GLUT1 as well as the interaction between GE and GLUT1 promoter, indicating that the binding of SON to GE is important for its activity. Therefore, SON promotes glucose uptake and glycolysis in hESCs by inducing GLUT1 expression through directly activating the enhancer of GLUT1. 展开更多
关键词 human embryonic stem cell PLURIPOTENCY factors metabolism Glutl ENHANCER promoter epigenetics chromosome interaction
通过优化表达元件及培养基组分提高地衣芽胞杆菌中碱性丝氨酸蛋白酶产量
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作者 饶忆 师璐 +4 位作者 王豪 熊世颉 蔡冬波 陈守文 李顺意 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1327-1335,共9页
【背景】碱性丝氨酸蛋白酶(Subtilisin)是一种具有广泛用途的工业酶制剂。【目的】旨在通过优化启动子、信号肽及培养基组分来提高地衣芽胞杆菌中碱性丝氨酸蛋白酶产量。【方法】以地衣芽胞杆菌BL10为出发菌株,构建了含有4种不同类型启... 【背景】碱性丝氨酸蛋白酶(Subtilisin)是一种具有广泛用途的工业酶制剂。【目的】旨在通过优化启动子、信号肽及培养基组分来提高地衣芽胞杆菌中碱性丝氨酸蛋白酶产量。【方法】以地衣芽胞杆菌BL10为出发菌株,构建了含有4种不同类型启动子(PbacA、P43、PaprE和PsrfA)及4种不同类型信号肽(SPVpr、SPSacB、SPSacC和SPAprE)的碱性丝氨酸蛋白酶表达菌株,并在获得高产菌株的基础上进行培养基优化。【结果】4种启动子的表达水平为PbacA>PaprE>P43>PsrfA,4种信号肽的分泌效率为SPAprE>SPSacC>SPSacB>SPVpr。其中,菌株BL10/pPbacA-aprE产生最高的碱性丝氨酸蛋白酶酶活(275.21 U/mL),相比于出发菌株BL10/pHY-aprE (167.98 U/mL)提高了64%。随后,通过对发酵培养基成分进行优化并结合正交优化,获得了一种高产碱性丝氨酸蛋白酶的培养基(g/L):玉米淀粉40.0,豆粕50.0,(NH4)2SO4 4.0,K2HPO4 3.0,CaCO3 1.0。最后,碱性丝氨酸蛋白酶酶活提高到747.37 U/mL,是初始酶活的4.45倍。【结论】为工业化高产碱性丝氨酸蛋白酶提供了一种有效策略。 展开更多
关键词 地衣芽胞杆菌 碱性丝氨酸蛋白酶 启动子 信号肽 培养基优化
Cloning and expression analysis of the FvNCED3 gene and its promoter from ash(Fraxinus velutina) 预览
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作者 Tian Li Jingkuan Sun +2 位作者 Chuanrong Li Zhaohua Lu Jiangbao Xia 《林业研究:英文版》 CAS CSCD 2019年第2期471-482,共12页
The 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase(NCED)gene is rate-limiting in abscisic acid(ABA)biosynthesis.In this study,an NCED gene,designated FvNCED3(KY008746),was cloned from velvet ash(Fraxinus velutina Torr.)with a RACE... The 9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase(NCED)gene is rate-limiting in abscisic acid(ABA)biosynthesis.In this study,an NCED gene,designated FvNCED3(KY008746),was cloned from velvet ash(Fraxinus velutina Torr.)with a RACE method.The full length cDNA of FvNCED3 encodes a 573-amino acid polypeptide.Sequencing analysis showed that the FvNCED3 protein was highly homologous to other NCED proteins.The expression patterns of FvNCED3 in different ash organs were analyzed by real-time PCR which revealed that FvNCED3 expression levels were highest in leaves and lowest in roots.The gene expression patterns of FvNCED3 under abiotic stress indicated that its expression increased under drought,salt and ABA stress and decreased due to high and low temperatures.There were no obvious changes under ultraviolet light.The 1094-bp upstream sequence 5'flank regulation region of the FvNCED3 gene was also cloned from ash using the Genome Walking method.To assess the activity of the FvNCED3 promoter,a pFvNCED3p::GUS plant expression vector was constructed for tobacco transformation.GUS expression of the FvNCED3 GUS enzyme activity was detected in almost all transgenic tobacco tissues,especially in the young leaves,stigma,anther,ovule and ovary.After treating the transgenic tobacco with NaCl and placing it under drought stress,GUS staining of tobacco leaves increased compared with that under normal growth conditions.This result indicates that gene expression driven by the FvNCED3 promoter can be induced by salt and drought stress. 展开更多
关键词 ASH FUNCTION ANALYSIS NCED GENE PROMOTER TOBACCO
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胡杨DREB2A和WRKY19基因启动子逆境响应元件及其功能分析
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作者 王叶利 唐文思 王华芳 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期428-436,共9页
胡杨(Populus euphratica Oliv.)是唯一适应沙漠环境的高大乔木树种,抗逆性极强。其抗逆机制对植物抗性育种极为重要,国内外极为关注。本研究以生物信息学和转GUS基因烟草瞬时表达等手段解析胡杨PeDREB2A和PeWRKY19基因启动子序列顺式... 胡杨(Populus euphratica Oliv.)是唯一适应沙漠环境的高大乔木树种,抗逆性极强。其抗逆机制对植物抗性育种极为重要,国内外极为关注。本研究以生物信息学和转GUS基因烟草瞬时表达等手段解析胡杨PeDREB2A和PeWRKY19基因启动子序列顺式作用元件。结果表明,两个启动子均有干旱、NaCl、4℃、ABA响应顺式作用元件,CANNTG (N=A/T/C/G)、GRWAAW (R=G/A, W=A/T)、ACGT和CACATG等,增强GUS基因表达。PeDREB2A基因启动子序列1 886 bp,分别含干旱、盐、低温、ABA响应顺式作用元件等9个、11个、9个和5个;-888~-1 271 bp为盐负调控区,-1 271~-1 738 bp为干旱正调控区和ABA负调控区,-1 738~-1 878 bp为盐正调控区和干旱负调控区。PeWRKY19基因启动子序列为1 734 bp,分别含干旱、盐、低温和ABA响应顺式作用元件16个、5个、11个和4个;-176~-417 bp为盐负调控和ABA负调控区,-417~-696 bp为干旱负调控区和低温正调控区,-696~-849 bp为盐正调控区。本研究为阐释胡杨抗逆分子机制提供基础。 展开更多
关键词 胡杨(Populus euphratica) 启动子 顺式作用元件 DREB2A WRKY19
miR403分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期的表达模式分析 预览
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作者 苏立遥 蒋梦琦 +5 位作者 黄倏祺 徐小萍 厉雪 陈旭 赖钟雄 林玉玲 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期846-856,共11页
【目的】探究miR403的分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期中的表达模式。【方法】根据龙眼转录组数据库结合miRBase数据库下载得到植物miR403成熟体(miRNA,MicroRNA)和前体(pre-miRNA,Precursor MicroRNA)序列,对其构建系统发育树、序... 【目的】探究miR403的分子进化特性及其在龙眼体胚发生早期中的表达模式。【方法】根据龙眼转录组数据库结合miRBase数据库下载得到植物miR403成熟体(miRNA,MicroRNA)和前体(pre-miRNA,Precursor MicroRNA)序列,对其构建系统发育树、序列多重比对、前体二级结构分析;并克隆龙眼miR4035’末端cDNA序列,比较miR403启动子顺式作用元件。利用qPCR(Quantitative real time-PCR)探究龙眼体胚发生早期miR403和pre-miR403的表达模式。【结果】龙眼及其他17个物种中miR403的36个前体和42成熟体序列的系统发育树以及序列多重比对显示,植物miR403高度保守且主要来源于pre-miR403的3臂,而pre-miR403分歧较大,序列仅在miRNA生成区域保守;不同物种之间miR403成员数量差异不大;pre-miR403最小折叠自由能为-35.70~-55.50kal·mol^-1。克隆获得龙眼primiR403(miR403初级体)5’末端cDNA序列,确认其第一个碱基A为转录起始位点(TSS,transcription start site)。龙眼等5种植物MIR403启动子中具有大量光、激素和逆境胁迫等元件。龙眼早期体胚发生过程中miR403和pre-miR403整体为显著下调趋势。【结论】龙眼miR403与其他植物miR403具有高度的保守性以及物种之间的特异性,miR403和pre-miR403下调表达可能有利于促进龙眼早期体胚发生。 展开更多
关键词 龙眼 microRNA403 进化特性 启动子 体胚发生 表达分析
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NTF3基因与公猪繁殖性能相关性研究进展
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作者 罗琰 高博 董和 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第4期121-125,共5页
神经营养因子3(neurotrophin 3,NTF3)是一种由靶细胞分泌合成并经神经突起逆向转运至胞体而发挥作用的小分子蛋白质,主要在神经系统的发育和生理功能维持中发挥重要作用。但近年来的研究表明,NTF3及其受体与睾丸的发育、成熟和精子发生... 神经营养因子3(neurotrophin 3,NTF3)是一种由靶细胞分泌合成并经神经突起逆向转运至胞体而发挥作用的小分子蛋白质,主要在神经系统的发育和生理功能维持中发挥重要作用。但近年来的研究表明,NTF3及其受体与睾丸的发育、成熟和精子发生过程等密切相关,同时,NTF3基因对公猪性机能发育、性成熟、生精调节等方面具有重要调控功能。本文简介NTF3的分子结构、分布、受体及作用机制、生物学功能,重点阐述NTF3基因的启动子、转录因子及其与公猪繁殖性能相关性的研究状况,以期为今后开展更多、更深入的科学研究提供参考。 展开更多
关键词 NTF3基因 启动子 转录因子 公猪 繁殖性能
启动子优化提高重组大肠杆菌PHA产量
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作者 黄津伟 高阳 +3 位作者 李道凡 丁骁 寇嘉宾 吴弘 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期3090-3096,共7页
聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类由微生物合成的高分子聚酯的统称,具有生物可降解性、生物可再生性和良好的生物相容性,应用前景广阔。PHA具有类似塑料的材料学性能,倍受到科学界和工业界的关注,但是生产成本较高等原因极大地限制了其大规模... 聚羟基脂肪酸酯(PHA)是一类由微生物合成的高分子聚酯的统称,具有生物可降解性、生物可再生性和良好的生物相容性,应用前景广阔。PHA具有类似塑料的材料学性能,倍受到科学界和工业界的关注,但是生产成本较高等原因极大地限制了其大规模应用。本研究通过筛选优化在微氧条件下能够高效调控基因表达的启动子,能有效提高生产菌株在微氧条件下积累PHA的能力,减少生产能耗,降低成本。首先,在大肠杆菌基因表达库中筛选出5个在微氧条件下高效调控基因表达的启动子,与编码红色荧光蛋白的RFP报告基因相连,通过酶标仪检测RFP的荧光信号值,对5个不同的微氧启动子的表达强度进行评估,比较得到其中最高效的启动子Pslp。为进一步提高生产PHA的效率,将2个Pslp序列采用串联的方式构建得到一个新启动子P2slp,利用其调控PHA代谢合成途径中3个关键基因phbC、phbA和phbB的表达。通过发酵扩大生产,在启动子P2slp的调控下,重组大肠杆菌的细胞干重由22 g/L提高至29 g/L,PHA的产量由49.1%提高至81.3%。本研究通过筛选优化启动子提高了重组大肠杆菌生产PHA的产量,为PHA的产业化应用提供了一种有效的提高PHA产量的方法,具有实际价值。 展开更多
关键词 PHA 启动子 发酵过程 大肠杆菌
猪Nrf2基因克隆、生物信息学分析及启动子区转录活性分析 预览
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作者 刘宗立 陈涛 +4 位作者 杨丹丹 崔景香 李川皓 曾勇庆 陈伟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1328-1339,共12页
旨在了解猪Nrf2基因的结构和功能,研究Nrf2基因的转录调控机制。本研究选取6头90 kg左右的健康大蒲莲猪为试验动物,采用cDNA末端快速克隆技术(RACE)和染色体步移技术获得大蒲莲猪Nrf2基因完整的cDNA序列和启动子区域,利用生物信息学软... 旨在了解猪Nrf2基因的结构和功能,研究Nrf2基因的转录调控机制。本研究选取6头90 kg左右的健康大蒲莲猪为试验动物,采用cDNA末端快速克隆技术(RACE)和染色体步移技术获得大蒲莲猪Nrf2基因完整的cDNA序列和启动子区域,利用生物信息学软件分析Nrf2基因及其启动子区域的生物学特征。结果,Nrf2基因cDNA全长2 358 bp,包括87 bp的5′UTR,495 bp的3′UTR序列,CDS区大小为1 776 bp,编码591个氨基酸。对预测蛋白质序列进行生物信息学分析,蛋白分子量为66.402 7 ku,理论等电点(pI)为4.66,大部分二级结构为α-螺旋。采用染色体步移技术扩增得到5′侧翼序列2 091 bp的片段。Nrf2基因5′侧翼区经预测含有典型的TATA-box,不含CpG岛。构建不同长度启动子片段的pGL3-Basic表达载体,转染293T细胞后经双荧光素酶活性检测,提示在-903~-710 bp区域内可能存在正调控区或增强子,生物信息学预测其中含有多个转录因子结合位点,可能参与Nrf2基因转录调控。本研究成功获得了Nrf2基因完整的cDNA序列和启动子区域,并且发现-903~-710 bp为核心启动子,本研究为猪抗氧化应激的遗传改良提供一定理论基础。 展开更多
关键词 Nrf2基因 基因克隆 启动子 双荧光素酶
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大鼠Neuritin基因启动子区克隆、鉴定及生物信息学分析 预览
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作者 李琼琼 王立民 +5 位作者 徐梦思 万科幸 黄瑾 王成坦 毛福秀 高蕊 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2019年第2期244-250,共7页
目的本研究旨在了解大鼠Neuritin基因启动子区特征,为明确神经受损后的再生中Neuritin基因在体内转录水平的调控提供理论依据。利用比较基因组学获取较为可靠的置信序列并设计上、下游引物克隆大鼠Neuritin基因5′调控区片段。方法采用... 目的本研究旨在了解大鼠Neuritin基因启动子区特征,为明确神经受损后的再生中Neuritin基因在体内转录水平的调控提供理论依据。利用比较基因组学获取较为可靠的置信序列并设计上、下游引物克隆大鼠Neuritin基因5′调控区片段。方法采用生物信息学方法分析扩增片段序列特征,并采用多款转录因子预测软件预测大鼠Neuritin基因启动子主要调控区的转录因子结合位点。结果研究结果表明成功克隆出3447 bp大鼠 Neuritin 5′调控区序列,大鼠 Neuritin 5′调控区序列与小鼠同源率为91.1%。生物信息学方法分析发现距大鼠Neuritin基因CDS区上游740~1012 bp位置处有一个CpG岛,224 bp处有一个TATA-Box,初步推测大鼠Neuritin基因CDS区上游1100 bp为主要核心启动子区域。利用生物信息学软件预测主要调控区域含有AP-1,AP-2,AP-4和CREB等八个重要的转录因子结合位点。结论本研究大鼠Neuritin基因启动子的鉴定和相关转录因子结合位点的发现为进一步研究大鼠 Neuritin 基因的表达调控奠定了数据基础。 展开更多
关键词 大鼠 NEURITIN 5′调控区 启动子 转录因子
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桂花扩展蛋白基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1启动子克隆及活性分析 预览
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作者 高晓月 董彬 +4 位作者 张超 付建新 胡绍庆 赵宏波 梁立军 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期23-29,共7页
为研究扩展蛋白基因在桂花花开放过程中的作用机制,利用染色体步移法,从桂花(Osmanthus fragrans)中克隆得到花开放相关基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1起始密码子上游1108、808、945bp的启动子序列。利用在线数据库Plantcare预测启动子... 为研究扩展蛋白基因在桂花花开放过程中的作用机制,利用染色体步移法,从桂花(Osmanthus fragrans)中克隆得到花开放相关基因OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1起始密码子上游1108、808、945bp的启动子序列。利用在线数据库Plantcare预测启动子中的顺式作用元件,发现这3个启动子序列中均存在基本元件TATA盒和CAAT盒,还含有脱落酸、生长素、水杨酸等激素诱导元件及响应干旱、高温等多个与植物非生物胁迫相关的元件,如MBS、HSE。分别将这3个启动子与β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)报告基因融合进行瞬时表达,结果显示:OfEXPA2、OfEXPA4和OfEXLA1的启动子均能够驱动GUS基因在转基因烟草叶片中的表达。 展开更多
关键词 桂花 扩展蛋白基因 启动子 β-葡萄糖苷酸酶基因
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中华根瘤菌NP1中反硝化基因启动子分析及荧光定量PCR验证 预览
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作者 张宇 王森 +1 位作者 陈度宇 许雷 《生物技术进展》 2019年第2期178-184,共7页
目前,在污水脱氮过程中N2O的释放量逐年上升,造成温室效应,引起酸雨并破坏臭氧层。为了研究在反硝化过程中N2O释放的机制,利用生物信息学软件在线预测了中华根瘤菌NP1反硝化过程中4个关键酶基因的启动子信息。经预测,反硝化过程所需的4... 目前,在污水脱氮过程中N2O的释放量逐年上升,造成温室效应,引起酸雨并破坏臭氧层。为了研究在反硝化过程中N2O释放的机制,利用生物信息学软件在线预测了中华根瘤菌NP1反硝化过程中4个关键酶基因的启动子信息。经预测,反硝化过程所需的4个关键酶基因的表达并非传统观念上认为的使用同一个启动子,而是4个不同的启动子。同时还发现,硝酸盐还原酶和亚硝酸盐还原酶的启动子转录活性较强,而一氧化氮还原酶和氧化亚氮还原酶的启动子则转录活性较弱。为进一步探究上述预测结果,我们利用荧光定量PCR检测中华根瘤菌NP1中以KNO3为唯一氮源培养时,反硝化4个关键酶基因转录水平上的差异,以及测量反硝化过程中产生的代谢产物含量。发现硝酸盐还原酶基因和亚硝酸盐还原酶基因的转录水平明显高于一氧化氮还原酶基因和氧化亚氮还原酶基因,在反硝化过程中确实有一定量的N2O气体积累,推测可能与不同启动子的强弱有关。因此,可通过改造操纵子等基因工程手段调节反硝化关键酶的表达,使N2O全部还原为N2后再释放到空气中,构建更加高效绿色的污水脱氮菌株,具有深远的社会意义。 展开更多
关键词 反硝化 N2O 荧光定量PCR 启动子 转录活性
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肾蕨LEAFY基因和启动子的克隆及序列分析
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作者 阚诗卓 徐琪 +4 位作者 赵芮 王琦 伍冉 李映 鄢波 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期4623-4630,共8页
以孢子植物肾蕨叶片为材料,采用RT-PCR、RACE和Tail-PCR相结合的方法克隆得到肾蕨LEAFY(简写为LFY)基因的完整片段,该基因DNA全长为1912bp,包含3个外显子和2个内含子序列,有一个1170bp的完整开放阅读框,编码389个氨基酸。经过对该基因... 以孢子植物肾蕨叶片为材料,采用RT-PCR、RACE和Tail-PCR相结合的方法克隆得到肾蕨LEAFY(简写为LFY)基因的完整片段,该基因DNA全长为1912bp,包含3个外显子和2个内含子序列,有一个1170bp的完整开放阅读框,编码389个氨基酸。经过对该基因片段的核苷酸序列分析表明,与荚果蕨的LFY基因在结构上有高度的相似性,同源率高达94%。通过Tail-PCR技术克隆得到1521bp的肾蕨LFY基因的启动子序列。用PlantCARE在线启动子预测工具分析表明:该序列含有启动子的特定结构,如TATAbox,CAAT-box等,还有一些其它的调控元件。本研究以肾蕨为材料,通过对肾蕨LFY基因的克隆,为探讨LFY基因在不开花植物的原始功能奠定基础,进一步阐释了LFY基因的结构和功能。 展开更多
关键词 肾蕨(Nephrolepis auriculata) LFY基因 启动子 克隆
Identification of a germline-expression promoter for genome editing in Bombyx mori
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作者 Jun Xu Rong-Mei Chen +7 位作者 Shu-Qing Chen Kai Chen Lin-Meng Tang De-Hong Yang Xu Yang Yong Zhang Hong-Sheng Song Yong-Ping Huang 《昆虫科学:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期991-999,共9页
Identification of stage- and tissue-specific cis-regulatory elements will enable more precise genomic editing. In previous studies of the silkworm Bombyx mori, we identified and characterized several tissue- and sex-s... Identification of stage- and tissue-specific cis-regulatory elements will enable more precise genomic editing. In previous studies of the silkworm Bombyx mori, we identified and characterized several tissue- and sex-specific cisregulatory elements using transgenic technology, including a female- and fat body-specific promoter, vitellogenin, testis-specific promoters, Radial spoke head 1 (BmRl) and beta-tubulin 4 (Bmp4). Here we report a c/5-regulatory element specific for a somatic and germ cell-expressed promoter, nanos (Bmnos). We investigated activities of three truncated promoter sequences upstream of the transcriptional initiation site sequences of Bmnos in vitro (nos-0.6kb, nos-1 kb and nos-2kb) and in vivo (nos-2kb). In BmN cultured cells, all three lengths drove expression of the gene encoding enhanced green fluorescence protein (EGFP), although nos-2kb had the highest fluorescence activity. In transgenic silkworms, nos-2kb drove EGFP expression at the early embryonic stage, and fluorescence was concentrated in the gonads at later embryonic stages. In addition, this cisregulatory element was not sex differentiated. The fluorescence intensity gradually weakened following the larval developmental stage in the gonads and were broadly expressed in the whole body. The nos-2kb promoter drove the Cas9 system with efficiency comparable to that of the broad-spectrum strong IE1 promoter. These results indicate that Bmnos is an effective endogenous cisregulatory element in the early embryo and in the gonad that can be used in applications involving the clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 system. 展开更多
关键词 Bombyx mori NANOS PROMOTER TRANSGENIC CRISPR/Cas9
结直肠癌组织miR34a启动子区甲基化状态的临床意义探讨 预览
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作者 袁航 屠世良 《浙江医学》 CAS 2019年第18期1952-1955,共4页
目的探讨结直肠癌组织miR34a启动子区甲基化状态的临床意义。方法收集48例行根治性切除术的结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测miR-34a启动子区CpG岛甲基化状态,分析其与患者临床特征及预后的关系。结... 目的探讨结直肠癌组织miR34a启动子区甲基化状态的临床意义。方法收集48例行根治性切除术的结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测miR-34a启动子区CpG岛甲基化状态,分析其与患者临床特征及预后的关系。结果结直肠癌组织与癌旁正常组织中miR-34a启动子区甲基化率分别为47.9%、43.8%,差异无统计学意义(P>0.05)。结直肠癌组织miR-34a启动子区甲基化状态与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤最大直径、远处转移等均无关(均P>0.05);与淋巴结转移、TNM分期等均有关(均P<0.05)。结直肠癌组织miR-34a启动子区甲基化患者总生存率、无病生存率均低于非甲基化患者(均P<0.05)。远处转移是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素(P<0.05),但miR-34a启动子区甲基化状态不是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素(P>0.05)。结论结直肠癌组织miR-34a启动子区甲基化状态与患者淋巴结转移、TNM分期及预后有关,可能参与肿瘤进展转移过程的调控。 展开更多
关键词 结直肠癌 MIR-34A 启动子区 CPG岛 甲基化
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CsWRKY22启动子的克隆及响应柑橘溃疡病菌侵染的表达特征
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作者 王丽娟 龙俊宏 +6 位作者 谢竹 吴柳 彭爱红 何永睿 龙琴 陈善春 邹修平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期677-690,共14页
由柑橘黄单胞杆菌致病变种(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)引起的柑橘溃疡病严重危害着柑橘产业的健康可持续发展。前期研究表明,CsWRKY22可能是溃疡病感病基因。从‘晚锦橙’(Citrus sinensis Osbeck)中克隆了CsWRKY22的两个等... 由柑橘黄单胞杆菌致病变种(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)引起的柑橘溃疡病严重危害着柑橘产业的健康可持续发展。前期研究表明,CsWRKY22可能是溃疡病感病基因。从‘晚锦橙’(Citrus sinensis Osbeck)中克隆了CsWRKY22的两个等位启动子pCsWRKY22-1和pCsWRKY22-2,长度分别为1 428和1406bp。序列分析表明两个等位启动子序列一致性为91.76%。两个等位启动子含有多种参与植物防御反应和生长发育的顺式作用元件,相同元件的数量和位置基本一致,不同的是,在TATA-box下游,pCsWRKY22-1含有2个22 bp长的TA-rich转录增强序列,而pCsWRKY22-2只含有1个。构建CsWRKY22启动子控制GUS报告基因的植物表达载体pC sW RKY22::GUS,并用农杆菌介导法转化‘晚锦橙’,经GFP活性检测和PCR鉴定获得pCsWRKY22-1::GUS和pCsWRKY22-2::GUS转基因植株各8株和4株。GUS组织化学染色、GUS酶活性及定量PCR分析表明,CsWRKY22启动子具有较强的机械伤诱导活性和柑橘溃疡病病原菌诱导活性,同时具有一定水平的基础表达特性。pCsWRKY22-1机械伤诱导活性高于pCsWRKY22-2,而pCsWRKY22-2溃疡病菌诱导活性高于pCsWRKY22-1。 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 CsWRKY22 启动子 诱导 GUS
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