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小干扰RNA透皮递送策略研究进展 认领
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作者 陈毓 许诺 胡振林 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期622-631,共10页
小干扰RNA (Small interfering RNA,siRNA)已被用于各种皮肤病的治疗。然而,由于siRNA具有电负性、极性强、易被核酸酶降解以及难以突破皮肤表皮屏障等缺陷,使其应用受限。因此,安全高效的siRNA递送载体是siRNA有效治疗皮肤病的前提。... 小干扰RNA (Small interfering RNA,siRNA)已被用于各种皮肤病的治疗。然而,由于siRNA具有电负性、极性强、易被核酸酶降解以及难以突破皮肤表皮屏障等缺陷,使其应用受限。因此,安全高效的siRNA递送载体是siRNA有效治疗皮肤病的前提。近年来,随着对siRNA研究的不断深入,基于脂质、聚合物、肽和纳米颗粒的递送系统的开发取得了很大进展,一些新的siRNA透皮递送载体应运而生,如类脂质体、树枝状聚合物、细胞穿透肽、球形核酸纳米颗粒等等。文中将重点介绍近年来siRNA透皮递送载体的最新研究进展。 展开更多
关键词 RNA干扰 干扰RNA 递送载体 皮肤病 脂质体 聚合物 纳米颗粒
长非编码RNA lncRNA ADAMTS9-AS2促进唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的研究 认领
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作者 武东辉 朱韵莹 +2 位作者 梁坚强 林钊宇 李劲松 《口腔疾病防治》 2020年第4期214-218,共5页
目的检测不同转移能力的唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞中差异表达的长非编码RNA(lncRNA),探讨lncRNA在唾液腺腺样囊性癌侵袭转移中的作用。方法以腺样囊性癌高转移细胞株SACC-LM为实验组,低转移... 目的检测不同转移能力的唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞中差异表达的长非编码RNA(lncRNA),探讨lncRNA在唾液腺腺样囊性癌侵袭转移中的作用。方法以腺样囊性癌高转移细胞株SACC-LM为实验组,低转移细胞株SACC83为对照组,采用lncRNA芯片初步筛选差异表达的lncRNA,通过qRT-PCR进一步验证差异表达的lncRNA。通过侵袭迁移实验检测转染差异表达的lncRNA siRNAs前后腺样囊性癌细胞株侵袭迁移能力的变化。并对差异表达的lncRNA与SACC患者的临床病理特征和预后进行分析。结果芯片筛选出ADAMTS9-AS2在高转移细胞系(SACC-LM)中高表达,实时定量RT-PCR进一步验证了其在高转移细胞系(SACC-LM)显著上调,通过侵袭迁移实验发现在转染后下调ADAMTS9-AS2的表达水平后侵袭迁移能力明显降低(P<0.001)。临床病理资料分析表明,ADAMTS9-AS2在SACC组织中高度表达。高表达的ADAMTS9-AS2与SACC患者预后不良和肿瘤转移率高有关。结论高表达ADAMTS9-AS2促进SACC细胞迁移和侵袭,ADAMTS9-AS2在SACC组织中上调,并且与高转移率和不良预后相关。 展开更多
关键词 长非编码RNA lncRNA ADAMTS9-AS2 唾液腺腺样囊性癌 腺样囊性癌高转移细胞系 lncRNA表达谱芯片 侵袭 转移 RNA干扰 表观遗传学
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短发卡RNA对细胞及小鼠体内甲型流感病毒抑制作用研究 认领
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作者 史亮 尹沈慧 +5 位作者 任浩 高荣 赵俭 马壮 孙文武 曹建平 《临床军医杂志》 CAS 2020年第1期1-4,共4页
目的探讨短发卡RNA(shRNA)对细胞及小鼠体内甲型流感病毒(IVA)抑制作用。方法合成12种针对IVA保守区域的shRNA,观察这些shRNA对IVA在细胞中复制的影响。将转染了shRNA的质粒以气溶胶形式雾化吸入小鼠,然后以流感病毒感染小鼠并检测小鼠... 目的探讨短发卡RNA(shRNA)对细胞及小鼠体内甲型流感病毒(IVA)抑制作用。方法合成12种针对IVA保守区域的shRNA,观察这些shRNA对IVA在细胞中复制的影响。将转染了shRNA的质粒以气溶胶形式雾化吸入小鼠,然后以流感病毒感染小鼠并检测小鼠肺组织流感病毒载量。结果转染了质粒PLKD-M-121、PLKD-M-935、PLKD-NP-391、PLKDNP-1291、PLKD-PA-1365、PLKD-PA-1645的犬肾细胞中IVA载量均显著低于对照组及空质粒组(P <0. 05)。染PLKD-NP-391小鼠肺部IAV载量明显低于对照组和空质粒组(P <0. 05)。结论针对流感病毒基质蛋白(M2)、核壳体蛋白(NP)和聚合酶A(PA)片段的shRNA可以抑制流感病毒的产生,以气溶胶形式吸入聚乙烯亚胺/PLKD-NP-391复合物可以抑制小鼠肺部流感病毒的产生。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 RNA干扰 基质蛋白2 核壳体蛋白 聚合酶A 短发卡RNA
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蜚蠊目RNA干扰的应用研究进展及展望 认领
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作者 马云峰 李绍斌 +1 位作者 杨松 黎玄钢 《科技视界》 2020年第12期173-175,共3页
蜚蠊目昆虫的一些成员是世界公认的害虫,严重影响人类生活健康,采用RNA干扰(RNAi)技术可以减少蜚蠊目昆虫的数量以及疾病的传播。RNA干扰是外源性或内源性双链RNA经过Dicer酶加工处理为小干扰RNA(siRNA)与标靶基因结合,使相应标靶基因... 蜚蠊目昆虫的一些成员是世界公认的害虫,严重影响人类生活健康,采用RNA干扰(RNAi)技术可以减少蜚蠊目昆虫的数量以及疾病的传播。RNA干扰是外源性或内源性双链RNA经过Dicer酶加工处理为小干扰RNA(siRNA)与标靶基因结合,使相应标靶基因沉默的现象,从而阻止某一基因功能在细胞或整体水平上的表达,具有高效性和特异性等优势。RNAi技术作为研究基因功能的研究工具被广泛运用,并显示出开发新型有害生物管理策略的巨大潜力。近年来,此技术已被广泛成功应用于多种昆虫中,目前为止,只有较少文献关于蜚蠊目昆虫RNAi的报道。本文综述了RNAi在蜚蠊目中的应用研究进展,并展望了今后的研究方向。 展开更多
关键词 蜚蠊目 基因 RNA干扰 双链RNA 研究进展
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靶向柯萨奇病毒B3 siRNA的设计与筛选 认领
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作者 代海丽 王艳 +1 位作者 孙权 时连瑞 《济宁医学院学报》 2020年第1期14-18,共5页
目的针对柯萨奇病毒B3(CVB3)基因筛选抑制效率较高的siRNA新序列,同时探究顺式作用复制元件(CRE)以外的2C区是否是设计siRNA序列的有效靶点。方法在CVB3的基因组中以3D、3C、2C、2A、VP3、VP2和VP1区为靶点设计新的siRNA序列,在He La细... 目的针对柯萨奇病毒B3(CVB3)基因筛选抑制效率较高的siRNA新序列,同时探究顺式作用复制元件(CRE)以外的2C区是否是设计siRNA序列的有效靶点。方法在CVB3的基因组中以3D、3C、2C、2A、VP3、VP2和VP1区为靶点设计新的siRNA序列,在He La细胞中转染siRNA序列,转染12h后,进行CVB3感染。感染病毒36h后收毒,用TCID50、MTT、Western blot和real-time RT-PCR 4种方法从不同水平上检测本研究设计筛选的siRNA序列在CVB3复制方面的抑制效果。结果设计的siRNA序列共11条,其中5条对CVB3的复制在细胞的死亡率、病毒的相关致病性、RNA分子水平和蛋白表达水平4个方面均表现出了较好抑制效果。其中siRNA-5对CVB3复制的抑制率达到了84%,本序列是针对2C区CRE以外的部分设计的。结论本文发现了5条新的抑制率较高的siRNA靶序列,同时首次证明CRE以外2C区也是设计siRNA序列的有效靶点。 展开更多
关键词 柯萨奇B3病毒 RNA干扰 SIRNA
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肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基2基因沉默对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和凋亡的影响 认领
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作者 白熠洲 刘安阳 +3 位作者 季午阳 罗斌 田金翌 霍东方 《肿瘤研究与临床》 CAS 2020年第2期73-78,共6页
目的探讨沉默肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基2(ARPC2)基因对甲状腺乳头状癌(PTC)TPC-1细胞生物学特性的影响。方法采用无义短发夹RNA(shRNA)序列慢病毒(shCtrl)感染的TPC-1细胞作为对照组,采用含有ARPC2 shRNA干扰序列慢病毒(shARPC2)... 目的探讨沉默肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基2(ARPC2)基因对甲状腺乳头状癌(PTC)TPC-1细胞生物学特性的影响。方法采用无义短发夹RNA(shRNA)序列慢病毒(shCtrl)感染的TPC-1细胞作为对照组,采用含有ARPC2 shRNA干扰序列慢病毒(shARPC2)感染的TPC-1细胞作为实验组。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术、蛋白质印迹法以及克隆形成实验检测抑制ARPC2表达对TPC-1细胞增殖、细胞周期及其相关蛋白表达、克隆形成的影响;利用流式细胞术和蛋白质印迹法检测抑制ARPC2基因对TPC-1细胞凋亡及相关蛋白的影响。结果shARPC2可以高效感染TPC-1细胞,72 h后感染效率达到85%以上。MTT法检测显示,与对照组相比,实验组TPC-1细胞的增殖被抑制。实验组S期细胞比例较对照组低[(14.79±0.21)%比(21.13±0.33)%,t=27.77,P<0.05],实验组G1与G2/M期细胞比例较对照组增高[G1期:(67.57±0.08)%比(62.06±0.36)%,t=25.56,P<0.05;G2/M期:(17.64±0.12)%比(16.91±0.17)%,t=6.154,P<0.05]。实验组细胞周期相关蛋白CDK2、CyclinE和CyclinD的表达均降低。实验组形成克隆数低于对照组,差异有统计学意义[(10±2)个比(161±6)个,t=9.011,P<0.05]。实验组细胞凋亡率高于对照组[(8.60±0.77)%比(4.08±0.40)%,t=9.011,P<0.05]。对照组抗凋亡因子p21与bcl-2蛋白表达降低,促凋亡因子bax蛋白表达上调。结论shRNA干扰ARPC2基因的表达可以抑制PTC TPC-1细胞的增殖,并促进细胞凋亡。ARPC2可能是PTC治疗的生物学新靶标。 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 RNA干扰 细胞增殖 细胞凋亡
飞蝗核受体基因LmE75的分子特性和功能分析 认领
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作者 刘晓健 郭俊 +2 位作者 张学尧 马恩波 张建珍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2219-2231,共13页
【目的】核受体(nuclear receptor,NR)是一类配体依赖型的转录因子,在昆虫生长发育过程中发挥重要作用,本文以重要农业害虫飞蝗(Locusta migratoria)为研究对象,分析核受体基因LmE75的分子特性以及功能,为害虫防治提供新分子靶标。【方... 【目的】核受体(nuclear receptor,NR)是一类配体依赖型的转录因子,在昆虫生长发育过程中发挥重要作用,本文以重要农业害虫飞蝗(Locusta migratoria)为研究对象,分析核受体基因LmE75的分子特性以及功能,为害虫防治提供新分子靶标。【方法】基于飞蝗转录组数据库获得3条LmE75的cDNA序列,运用Blast和ExPASy网站中相关软件分析各个基因的开放阅读框、预测氨基酸序列、理化特性及保守结构域;使用MEGA 6.0软件中邻接法(neighbor-joining,NJ)与其他昆虫同源序列进行聚类分析。利用Primer 3.0软件设计3个LmE75亚型的特异性表达引物,运用reverse transcription-quantitative PCR(RT-qPCR)技术分析3个LmE75亚型在5龄若虫不同组织及4—5龄不同发育日龄的表达特性。体内注射蜕皮激素(20-hydroxyecdysone,20E)诱导和干扰20E受体基因LmEcR的表达后,RT-qPCR检测LmE75的表达,明确LmE75是否受20E调控。利用RNAi(RNA interference)技术,将体外合成的LmE75亚型共同区域的dsRNA注射至5龄飞蝗若虫体内,48 h后提取体壁RNA,反转录为cDNA,运用RT-qPCR技术检测LmE75亚型的沉默效率并观察表型;之后进一步利用H&E(hematoxylin and eosin)染色方法观察LmE75对飞蝗表皮结构的影响。【结果】基于飞蝗转录组数据库获得3条LmE75的cDNA序列,根据其结构特征命名为LmE75A、LmE75B和LmE75C,GenBank登录号分别为MN584732、MN584733和MN584734。3个LmE75亚型均具有典型的核受体结构域,其中DBD(DNA binding domain)和LBD(ligand binding domain)在各昆虫中高度保守;E75聚类分析结果显示不同目的昆虫类群E75亚型优先聚为一支;RT-qPCR结果显示3个LmE75亚型具有不同的组织和发育表达特性。LmE75A在体壁和肌肉中高表达;LmE75B在体壁中高表达,其次是前肠;LmE75C特异性在体壁高表达;LmE75A在4龄和5龄期均呈现先升高后降低的表达趋势;LmE75B在N4D3和N5D5表达量最高,蜕皮前后表达量均较低;LmE75C在4龄和5� 展开更多
关键词 飞蝗 核受体 LmE75 蜕皮激素 RNA干扰
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miRNA-106b下调后抑制人喉鳞状细胞癌Hep-2和TU212细胞侵袭能力的机制研究 认领
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作者 蔡克敏 郭青 +2 位作者 王菲 杨波 孔旭辉 《肿瘤研究与临床》 CAS 2020年第2期85-89,共5页
目的探讨miRNA-106b(miR-106b)对人喉鳞状细胞癌Hep-2和TU212细胞的作用及其机制。方法将Hep-2和TU212细胞分为转染miR-106b抑制序列组(实验组)、转染miR-106b竞争性阴性序列组(阴性对照组)、未进行任何干预组(空白组)。采用反转录定量... 目的探讨miRNA-106b(miR-106b)对人喉鳞状细胞癌Hep-2和TU212细胞的作用及其机制。方法将Hep-2和TU212细胞分为转染miR-106b抑制序列组(实验组)、转染miR-106b竞争性阴性序列组(阴性对照组)、未进行任何干预组(空白组)。采用反转录定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证miR-106b抑制序列对细胞miR-106b表达的抑制效应。应用生物信息学及荧光素酶报告载体分析磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)是否为miR-106b的靶基因。利用PTEN小干扰RNA(siRNA)抑制Hep-2和TU212细胞中PTEN的表达。Transwell实验和蛋白质印迹法分别检测miR-106b沉默后和(或)PTEN干扰后Hep-2和TU212细胞侵袭能力的变化及PTEN、上皮性钙黏蛋白和波形蛋白表达变化。结果实验组Hep-2和TU212细胞miR-106b相对表达量分别为0.110±0.037、0.074±0.009,较阴性对照组(1.013±0.059、1.035±0.062)均降低(均P<0.05)。Transwell实验中,实验组Hep-2和TU212细胞较阴性对照组每个视野侵袭细胞数少[(37.09±4.02)个比(95.65±4.77)个,(29.16±2.49)个比(103.19±6.08)个,均P<0.05]。生物信息学分析显示PTEN mRNA的3'-UTR区与miR-106b的3'-UTR区域互补;双荧光素酶报告系统分析显示,转染miR-106b的野生型PTEN基因的荧光素酶报告子的活性降低至(22.84±2.68)%,转染miR-106b的突变型PTEN基因的荧光素酶报告子的活性几乎未改变[(92.08±3.44)%],二者差异有统计学意义(P<0.001)。实验组Hep-2和TU212细胞PTEN蛋白表达水平较阴性对照组高。Transwell实验检测显示,抑制PTEN表达的实验组Hep-2和TU212细胞比未抑制PTEN表达的实验组每个视野侵袭细胞数增加[(65.08±3.57)个比(26.72±2.58)个,(57.38±4.96)个比(31.81±2.97)个,均P<0.05]。蛋白质印迹实验显示,抑制PTEN表达的实验组Hep-2和TU212细胞上皮性钙黏蛋白表达水平上调,波形蛋白表达水平下调。结论人喉鳞状细胞癌Hep-2和TU212细胞中miR-106b可能通过靶向调节PTEN的表达,影响PTEN下游侵袭相关 展开更多
关键词 喉肿瘤 鳞状细胞 肿瘤侵润 RNA干扰 miRNA-106b 磷酸酶和张力蛋白同源物
Survivin对分流型肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖作用及机制研究 认领
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作者 黄静林 劳金泉 庞玉生 《广西医科大学学报》 CAS 2020年第5期837-842,共6页
目的:通过RNA干扰抑制分流型肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中survivin的表达,探索survivin基因对PASMCs增殖作用的影响及其机制。方法:将30只SD大鼠随机分为正常组、假手术组和分流组,正常组大鼠不做处理,假手术组大鼠开腹后... 目的:通过RNA干扰抑制分流型肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中survivin的表达,探索survivin基因对PASMCs增殖作用的影响及其机制。方法:将30只SD大鼠随机分为正常组、假手术组和分流组,正常组大鼠不做处理,假手术组大鼠开腹后予夹闭腹主动脉10 min,分流组用腹主动脉-下腔静脉分流术建立肺动脉高压大鼠模型。术后饲养11周后,通过测定大鼠右心室压力、右心室肥厚指数及肺小动脉苏木精-伊红(HE)染色评估模型建立情况。提取各组大鼠肺动脉进行PASMCs原代培养,并通过siRNA干扰技术将分流组大鼠PASMCs在细胞层面上分为分流组、分流+空载病毒组和分流+慢病毒干扰组。用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、Western blot分别检测survivin mRNA及蛋白在5组细胞中的表达;CCK-8法检测5组细胞的增殖水平。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中caspase-9、caspase-3浓度。结果:分流组大鼠的右心室压力、右心室肥厚指数均较正常组和假手术组明显增高(P<0.05),分流组大鼠肺动脉较正常组和假手术组明显增厚。正常组和假手术组的PASMCs均未见survivin mRNA及蛋白表达,分流组为阳性表达。分流+慢病毒干扰组survivin mRNA及蛋白表达水平较分流组、分流+空载病毒组明显下降(P<0.05),分流组、分流+空载病毒组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8法分析,分流组PAMSCs在接种48 h及之后较正常组和假手术组吸光度值明显增加(P<0.05),正常组和假手术组在各个时间节点比较,差异无统计学意义(P>0.05),分流+慢病毒干扰组PASMCs在接种48 h及之后吸光度值较分流组、分流+空载病毒组明显下降(P<0.05),分流组和分流+空载病毒组在各个时间节点比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA法显示分流+慢病毒干扰组caspase-9、caspase-3浓度较分流组、分流+空载病毒中显著增高(P<0.05),分流组与分流+空载病毒组� 展开更多
关键词 肺动脉高压 SURVIVIN RNA干扰 增殖 大鼠
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shRNA SIVA1慢病毒载体的构建及其对胃癌细胞耐药性的影响 认领
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作者 王晓通 吴锟 +2 位作者 李雷 麦威 钟晓刚 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2020年第3期282-287,共6页
目的构建shRNA SIVA1慢病毒表达载体,研究其对胃癌SGC 7901/DDP细胞耐药性和增殖的影响以及可能的机制。方法根据GenBank数据库提供的SIVA1基因序列,设计3条SIVA1靶点干扰序列;引物退火形成双链DNA,与经过双酶切的线性化GV493载体连接... 目的构建shRNA SIVA1慢病毒表达载体,研究其对胃癌SGC 7901/DDP细胞耐药性和增殖的影响以及可能的机制。方法根据GenBank数据库提供的SIVA1基因序列,设计3条SIVA1靶点干扰序列;引物退火形成双链DNA,与经过双酶切的线性化GV493载体连接并转化;在293T细胞中进行病毒包装并测定病毒滴度;将重组慢病毒转染人胃癌SGC 7901/DDP细胞,qRT PCR和Western blot检测细胞SIVA1 mRNA和蛋白表达水平,CCK 8法检测细胞对顺铂(DDP)的敏感性变化以及细胞增殖的情况,Western blot检测细胞Bcl 2和Bcl xL蛋白表达情况。结果测序结果显示,设计的干扰序列正确插入GV493载体,成功构建shRNA SIVA1重组载体;慢病毒载体在293T细胞完成包装,病毒滴度为2×109 TU/mL;qRT PCR和Western blot结果显示,慢病毒载体转染SGC 7901/DDP细胞后,能显著降低SIVA 1的mRNA和蛋白表达水平(P<0.005);CCK 8实验结果显示,沉默SIVA1后,细胞对DDP的敏感性显著下降(P<0.005),同时细胞的增殖活性显著升高(P<0.01),并且凋亡抑制分子Bcl 2和Bcl xL的蛋白表达增加。结论成功构建了靶向人SIVA1基因的shRNA SIVA1慢病毒表达载体,干扰胃癌细胞的SIVA1表达可增强细胞对DDP的抵抗并促进细胞增殖活性,这一现象可能与凋亡抑制分子Bcl 2和Bcl xL的表达升高有关。 展开更多
关键词 胃癌 SIVA1 耐药 慢病毒载体 RNA干扰 凋亡
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RNA干扰技术防治新型冠状病毒肺炎的思考和展望 认领
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作者 刘鹏飞 马文静 +3 位作者 赵爱华 谭天浩 赵倩 俞作仁 《同济大学学报:医学版》 CAS 2020年第2期141-146,共6页
新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019, COVID-19)对社会和人类健康造成严重了的危害。除了要严格控制病毒传播外,当务之急是探索新的治疗策略,开发新的治疗药物,努力提高患者生存率和生存质量。本文回顾了当前抗病毒药物研发的途... 新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019, COVID-19)对社会和人类健康造成严重了的危害。除了要严格控制病毒传播外,当务之急是探索新的治疗策略,开发新的治疗药物,努力提高患者生存率和生存质量。本文回顾了当前抗病毒药物研发的途径,并结合此次新型冠状病毒(SARS-CoV-2)基因组特点和RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术在相关领域中的研究进展,分析了将RNAi技术应用于COVID-19防治的可行性、优势与需要克服的问题。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 RNA干扰 新药研发 综述
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牛HSL基因shRNA干扰载体的构建及筛选 认领
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作者 靳子康 房希碧 +5 位作者 高振 潘子意 刘娟 姜平 杨润军 赵志辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期568-574,共7页
HSL基因所编码的激素敏感性脂酶对脂质代谢具有重要的调控作用,不仅能催化水解脂肪组织中的甘油三酯,还能水解不同组织的胆固醇酯,在机体能量供应和类固醇生成中发挥重要作用。为进一步研究HSL基因功能,本试验设计并构建4个HSL基因shRN... HSL基因所编码的激素敏感性脂酶对脂质代谢具有重要的调控作用,不仅能催化水解脂肪组织中的甘油三酯,还能水解不同组织的胆固醇酯,在机体能量供应和类固醇生成中发挥重要作用。为进一步研究HSL基因功能,本试验设计并构建4个HSL基因shRNA干扰载体,并将干扰载体转染到牛胎儿成纤维细胞中以及和设计构建过表达载体共转染到293T细胞中,转染48h后,分别检测细胞内牛HSL基因的mRNA和蛋白质表达水平,筛选出具有较高干扰效率的shRNA表达载体。结果表明,在牛胎儿成纤维细胞中,4个shRNA载体在转染48h后,shRNA-731组细胞中HSL基因的mRNA表达量显著低于shRNA NC对照组(P<0.05),且干扰效率最佳;同时,在shRNA载体与过表达载体共转染293T细胞中,HSL基因的mRNA和蛋白表达水平显著低于shRNA NC对照组(P<0.05)。本研究为进一步探讨HSL基因功能提供了有效工具,也为研究其与牛脂肪代谢相关关系奠定了理论基础。 展开更多
关键词 HSL基因 RNA干扰 过表达 脂肪代谢
日本沼虾血清淀粉样蛋白A(SAA)基因的克隆及其免疫功能 认领
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作者 江红霞 林鑫辉 +2 位作者 李书凯 王洁琛 李学军 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期300-313,共14页
为探索血清淀粉样蛋白A(SAA)在日本沼虾免疫防御系统中的作用,实验利用RACE方法克隆了日本沼虾SAA(MnSAA)基因cDNA全长序列,采用实时荧光定量PCR(QPCR)分析其在日本沼虾不同组织、不同发育时期的表达情况,以及溶壁微球菌、嗜水气单胞菌... 为探索血清淀粉样蛋白A(SAA)在日本沼虾免疫防御系统中的作用,实验利用RACE方法克隆了日本沼虾SAA(MnSAA)基因cDNA全长序列,采用实时荧光定量PCR(QPCR)分析其在日本沼虾不同组织、不同发育时期的表达情况,以及溶壁微球菌、嗜水气单胞菌和白斑综合征病毒(WSSV)感染后MnSAA在血淋巴细胞和肝胰腺中的表达情况,同时还利用RNA干扰(RNAi)技术检测了MnSAA基因沉默后,日本沼虾再感染嗜水气单胞菌后其肝胰腺中激活子蛋白-1(AP-1)和B类清道夫受体(CD36)基因表达变化及虾的累积死亡率变化。结果显示,MnSAA基因cDNA全长649bp(GenBank登录号:MK292888),包含21bp5′非编码区,232bp3′非编码区,369bp开放读码框,编码131个氨基酸残基;氨基酸序列比对及系统进化分析结果显示,MnSAA蛋白属于急性期血清淀粉样蛋白A蛋白(A-SAA),在进化上与无脊椎动物香港牡蛎的亲缘关系最近;mRNA表达分析显示,MnSAA基因在日本沼虾的各组织和各生长阶段均有表达,分别在肝胰腺和成虾阶段中的表达量最高;病原体感染实验表明,在日本沼虾感染溶壁微球菌、嗜水气单胞菌和白斑综合征病毒后12~72h,其血淋巴和肝胰腺中的MnSAA基因表达量与对照组相比均显著升高;RNAi实验显示,MnSAA基因沉默后,日本沼虾肝胰腺中AP-1和CD36基因分别在其感染嗜水气单胞菌后12~72h和6~72h与对照组相比显著下降,日本沼虾累积死亡率在感染嗜水气单胞菌后与对照组相比明显升高。研究表明,MnSAA参与日本沼虾的抗病原体感染的反应,在日本沼虾的免疫防御体系中具有重要的作用。 展开更多
关键词 日本沼虾 血清淀粉样蛋白A 基因克隆 组织表达 病原体感染 RNA干扰
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基于RNA干扰技术分析MCM7在涎腺腺样囊性癌中的作用 认领
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作者 帅旌 宋艺蔚 +2 位作者 朱欣 顾天忆 温庆良 《浙江临床医学》 2020年第3期312-314,318共4页
目的基于RNA干扰技术分析微小染色体维持蛋白7(MCM7)在涎腺腺样囊性癌(SACC)中的作用.方法应用Western-blot检测SACC-83、SACC-LM中MCM7蛋白表达,再将SACC-LM分别转染3个序列的siRNA-MCM7和siRNA-NegativeControl,利用Western-blot验证... 目的基于RNA干扰技术分析微小染色体维持蛋白7(MCM7)在涎腺腺样囊性癌(SACC)中的作用.方法应用Western-blot检测SACC-83、SACC-LM中MCM7蛋白表达,再将SACC-LM分别转染3个序列的siRNA-MCM7和siRNA-NegativeControl,利用Western-blot验证转染效率,选择沉默效率较高的2组进行实验.细胞克隆、CCK-8实验测定细胞增殖情况,Transwell小室验证各组细胞侵袭情况,细胞划痕实验验证细胞迁移情况.结果SACC-LM中MCM7蛋白表达高于其在SACC-83中的表达,干扰组细胞中MCM7蛋白水平低于对照组,与对照组比较,干扰组细胞增殖能力更低、细胞侵袭和迁移数目更少.结论沉默MCM7表达可抑制SACC-LM细胞的增殖、侵袭及迁移能力,MCM7可能作为癌基因促进SACC的进展. 展开更多
关键词 微小染色体维持蛋白7 涎腺腺样囊性癌 RNA干扰
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siRNA干扰Cx43表达抑制膀胱癌细胞侵袭的机制研究 认领
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作者 张媛媛 谢丽娟 聂萃 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期166-168,共3页
目的探讨siRNA干扰Cx43表达抑制膀胱癌细胞侵袭的机制。方法将膀胱癌细胞株5637随机分为A、B、C组。A组未进行任何转染,B组转染空白质粒,C组转染Cx43-siRNA表达载体。转染后,以Transwell法检测细胞侵袭能力,以逆转录聚合酶链式反应(RT-P... 目的探讨siRNA干扰Cx43表达抑制膀胱癌细胞侵袭的机制。方法将膀胱癌细胞株5637随机分为A、B、C组。A组未进行任何转染,B组转染空白质粒,C组转染Cx43-siRNA表达载体。转染后,以Transwell法检测细胞侵袭能力,以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Cx43 mRNA表达,以蛋白质印迹(Western blot)法检测Cx43、P38、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达。结果转染72h后,A、B、C组Cx43 mRNA相对表达量分别为1.00±0.06,0.96±0.08,0.32±0.07,Cx43蛋白相对表达量分别为1.02±0.07,0.99±0.08,0.27±0.06,MMP-2蛋白表达水平分别为0.93±0.07,0.96±0.04和0.25±0.07,MMP-9蛋白表达水平分别为1.07±0.08,1.02±0.05和0.18±0.03,P38蛋白表达水平分别为1.47±0.25,1.32±0.18和0.37±0.08,穿膜细胞数分别为2.05±0.08,2.13±0.14和0.48±0.06。B组与A组比较,上述指标水平差异均有统计学意义(均P<0.05);C组与B组相比较,上述指标水平差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论Cx43表达与膀胱癌细胞的侵袭呈正相关,siRNA干扰Cx43表达可降低膀胱癌的侵袭能力,对进展期膀胱癌的治疗具有潜在前景。 展开更多
关键词 膀胱癌 侵袭 细胞间隙蛋白43 RNA干扰
寄主诱导的基因沉默技术研究和应用进展 认领
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作者 肖瑶 王教瑜 +3 位作者 李玲 王艳丽 张传清 孙国昌 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期11-17,共7页
病原真菌严重威胁着农作物的产量和品质,提高作物抗性是病原真菌病害防控的重要措施。寄主诱导的基因沉默(host induced gene silencing,HIGS)技术是在RNA干扰的基础上发展而来,以病原真菌生长发育和侵染过程中的关键基因为靶标,通过在... 病原真菌严重威胁着农作物的产量和品质,提高作物抗性是病原真菌病害防控的重要措施。寄主诱导的基因沉默(host induced gene silencing,HIGS)技术是在RNA干扰的基础上发展而来,以病原真菌生长发育和侵染过程中的关键基因为靶标,通过在寄主植物中表达这些基因的干扰RNA从而抑制病原真菌中靶标基因的表达,达到抵制病原真菌扩展,提高寄主植物抗病性的目的。近年来,HIGS技术被用于防控多种由病原真菌引起的病害,并取得了明显成效,为植物抗病资源的开发及应用提供了新途径。本文综述了HIGS技术的原理、技术路线、操作方法和国内外的主要研究进展,总结了操作中需要注意的事项,并对该技术的发展趋势和应用前景进行了展望。 展开更多
关键词 病原真菌 RNA干扰 寄主诱导的基因沉默
靶向MSTN基因shRNA表达载体的构建与鉴定 认领
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作者 王丽俊 钮利喜 《医学研究杂志》 2020年第5期165-169,共5页
目的旨在构建靶向MSTN基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,并鉴定其在小鼠体内的抑制效果。方法根据MSTN基因的mRNA序列(NM_010834.3)设计siRNA,并挑选出3条可能具有良好干扰效果的siRNA,设计合成shRNA,构建pSIREN-MSTN-shRNA表达载体... 目的旨在构建靶向MSTN基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,并鉴定其在小鼠体内的抑制效果。方法根据MSTN基因的mRNA序列(NM_010834.3)设计siRNA,并挑选出3条可能具有良好干扰效果的siRNA,设计合成shRNA,构建pSIREN-MSTN-shRNA表达载体。通过肌内注射法将载体递送至小鼠体内,利用实时荧光定量PCR和Western blot法检测干扰后小鼠肌肉组织中MSTN的mRNA表达量和蛋白质表达水平。结果测序鉴定表明pSIREN-MSTN-shRNA表达载体构建成功,3个重组质粒均能够明显降低肌肉组织中MSTN的mRNA和蛋白质水平,其中pSIREN-M819表达载体干扰效果最好,与对照组比较,MSTN的mRNA表达量降低了71%,蛋白水平也明显降低。结论成功构建了pSIREN-MSTN-shRNA表达载体,并在小鼠体内能够有效抑制MSTN基因的表达。 展开更多
关键词 抑肌素 RNA干扰 实时荧光定量PCR 免疫印迹
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富含半胱氨酸蛋白61在寻常型银屑病患者皮损中的表达与作用机制 认领
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作者 张薇 曾波 +1 位作者 王炎 陈雪莲 《西部医学》 2020年第2期268-273,共6页
目的探讨富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)在寻常型银屑病患者皮损中的表达及作用机制。方法收集38例寻常型银屑病患者的皮损组织和18例正常人的皮肤分别作为银屑病组和对照组,分别使用qRT-PCR和Western blot检测皮肤组织中Cyr61 mRNA和蛋白... 目的探讨富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)在寻常型银屑病患者皮损中的表达及作用机制。方法收集38例寻常型银屑病患者的皮损组织和18例正常人的皮肤分别作为银屑病组和对照组,分别使用qRT-PCR和Western blot检测皮肤组织中Cyr61 mRNA和蛋白的表达。在TNF-α刺激HaCaT皮肤细胞的银屑病体外细胞模型中,使用RNA干扰技术将Cyr61基因沉默(siCyr61),设计无关序列作为对照(siControl),依次使用CCK-8、qRT-PCR、Western blot、Elisa检测细胞增殖、炎性因子分泌和NLRP3炎症小体的表达。结果银屑病患者皮损组织中Cyr61 mRNA和蛋白质的表达量显著高于对照组皮肤(P<0.001)。与TNF-α+siControl组细胞相比较,TNF-α+siCyr61组细胞的增殖在干预48h和72h时抑制效应显著(P<0.001),细胞中IL-1β、IL-17、IL-22、CXCL1 mRNA的表达量和细胞上清液中IL-1β、IL-17、IL-22、CXCL1的含量均不同程度的降低(P<0.05),细胞中NLRP3和mature-Caspase-1蛋白的表达量显著降低(P<0.001)。结论Cyr61在寻常型银屑病患者皮损中呈高表达,使用RNA干扰将Cyr61基因沉默后可降低TNF-α诱导的HaCaT皮肤细胞增殖和炎性因子分泌,可能与抑制NLRP3炎症小体过度活化有关。 展开更多
关键词 富含半胱氨酸蛋白61 寻常型银屑病 RNA干扰 HACAT细胞 NLRP3炎症小体
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维生素D受体特异性shRNA慢病毒载体及ASMCs稳转株的构建 认领
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作者 高舒玉 邹淑梅 +2 位作者 柳德灵 赖国祥 宋颖芳 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1096-1099,共4页
目的构建特异性靶向大鼠维生素D受体(VDR)基因的RNA干扰慢病毒载体,并筛选构建VDR基因稳定沉默的ASMCs细胞株。方法设计大鼠VDR的4组短发夹状RNA(shRNA)靶序列,合成的DNA双链与线性化的慢病毒LV3载体相连,构建LV3-sh-VDR重组慢病毒质粒... 目的构建特异性靶向大鼠维生素D受体(VDR)基因的RNA干扰慢病毒载体,并筛选构建VDR基因稳定沉默的ASMCs细胞株。方法设计大鼠VDR的4组短发夹状RNA(shRNA)靶序列,合成的DNA双链与线性化的慢病毒LV3载体相连,构建LV3-sh-VDR重组慢病毒质粒。经酶切及测序鉴定后,进行病毒包装和病毒滴度检测,而后转染大鼠ASMCs,分组为干扰组(转染VDR shRNA)、阴性对照组(仅转染慢病毒载体)和空白对照组(未转染载体)。经嘌呤霉素抗性筛选后,建立ASMCs的VDR-shRNA稳定细胞株,用逆转录聚合酶链反应和Western Blotting法分别检测各组ASMC细胞中VDR mRNA及蛋白的表达水平。结果经酶切和测序鉴定,成功构建4个VDR重组慢病毒载体。慢病毒转染ASMCs后,经嘌呤霉素抗性成功筛选到ASMCs的VDR-shRNA稳定细胞株,干扰组ASMCs的VDR mRNA和蛋白的表达量与阴性对照组及空白对照组相比均明显下降。结论成功构建VDR稳定沉默表达的大鼠ASMCs细胞株,为研究VDR对哮喘生物学行为的影响提供细胞模型。 展开更多
关键词 维生素D受体 基因 RNA干扰 慢病毒 转染 表达
柑橘溃疡病抗性相关转录因子CitMYB20的功能 认领
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作者 姚利晓 范海芳 +7 位作者 张庆雯 何永睿 许兰珍 雷天刚 彭爱红 李强 邹修平 陈善春 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1997-2008,共12页
[目的]了解柑橘不同品种CitMYB20对柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)和外源植物激素的应答情况,评价转基因植株对柑橘溃疡病的抗性,验证CitMYB20的生物学功能.[方法]根据柑橘基因组序列设计引物,PCR法同源克隆柑橘溃疡... [目的]了解柑橘不同品种CitMYB20对柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)和外源植物激素的应答情况,评价转基因植株对柑橘溃疡病的抗性,验证CitMYB20的生物学功能.[方法]根据柑橘基因组序列设计引物,PCR法同源克隆柑橘溃疡病抗性品种金弹金柑(Fortunella japonica)和敏感品种枣阳小叶枳(Poncirus trifoliata)的CitMYB20基因序列和启动子序列,利用在线软件PlantCARE对启动子序列进行顺式作用元件预测.以针刺法对金弹金柑和枣阳小叶枳离体叶片接种柑橘溃疡病菌,用外源激素水杨酸、茉莉酸甲酯和乙烯利处理金弹金柑和枣阳小叶枳的叶片,在处理的不同时期收集材料,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CitMYB20的表达水平.分别构建CitMYB20的过表达载体和抑制表达载体,根癌农杆菌法转化枳上胚轴,随机摘取转基因株系成熟叶片进行柑橘溃疡病离体抗性评价.[结果]金弹金柑和枣阳小叶枳中CitMYB20(GenBank登录号分别为MN689609和MN689608)序列高度保守,相似度达到99%;两者的启动子序列(GenBank登录号分别为MN689611和MN689610)虽然都具有脱落酸和茉莉酸甲酯的响应元件,但金弹金柑中还具有水杨酸响应的顺式作用元件,而枣阳小叶枳中缺少该元件.在体外接种柑橘溃疡病菌5 d时,金弹金柑成熟叶片中CitMYB20表达量显著上升,达到对照的2.5倍;而枣阳小叶枳叶片CitMYB20在整个接菌周期内表达量未发生显著变化.外源激素处理时,CitMYB20对水杨酸和茉莉酸甲酯的响应相似,即在金弹金柑中呈现出先升高后降低的趋势,而在枣阳小叶枳中表达量降低,随后又恢复正常.乙烯利处理时,CitMYB20在金弹金柑中表达量略有下降,在枣阳小叶枳中表达量先升后降.遗传转化共获得7株过表达植株和5株抑制表达植株,转基因植株与对照植株相比在形态发育上未见明显差异.CitMYB20过表达植株能够在一定程度上减弱柑橘溃� 展开更多
关键词 柑橘黄单胞杆菌柑橘亚种 柑橘溃疡病 R2R3-MYB转录因子 过表达 RNA干扰 抗病性
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